一种1,5-脱水葡糖醇的氧化酶法测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种1，5-脱水葡糖醇的氧化酶法测定方法，可广泛应用在医学及生物化学【技术领域】。其特点是：通过葡萄糖激酶(GK)和磷酸葡萄糖异构酶(PGI)将样品中葡萄糖(Glu)转化为果糖-6-磷酸(Fru-6-P)，并通过系统中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸盐(PEP)，建立ATP再生系统，确保Glu向Fru-6-P转化。样品中1，5-AG经吡喃糖氧化酶(PROD)作用生成1，5-脱水果糖(1，5-AF)和H2O2，后者借Trinder’s系统显色定量。
【专利说明】一种1 ’ 5-脱水葡糖醇的氧化酶法测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及1，5-脱水葡糖醇(1，5-AG)的氧化法测定方法，可广泛应用在医学及生物化学【技术领域】。
【背景技术】
[0002]血清中1，5_脱水葡糖醇浓度不受即时的饮食、葡萄糖摄食量影响，能快速、灵敏的反映3-5天内总血糖变化情况。糖尿病患者血清1，5-AG显著降低，当糖尿病得到良好控制时，血清1，5-AG的日回升率十分稳定，不受冶疗方法、性别、年龄、体重、患病时间和血清中1，5-AG起初的浓度影响，回升幅度和对糖尿病诊断的敏感性及特异性均明显大于常用的糖尿病诊断指标糖化血红蛋白(HbAlc)和果糖胺(GSP)。
[0003]文献报道测定1，5_AG的方法有阴离子交换层析法、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱质谱法(LC-MS)、全自动酶分析法等，前三种方法需要对1，5-AG进行衍生和复杂的样品前处理，同时需特殊、昂贵仪器，不适合临床常规分析。全自动酶法虽好，但易受血清中高浓度葡萄糖干扰，如Fukumura Y (Clin Chem, 1994,40:2013-2016.)、陈国军等(中华医学检验杂志，1999，22 (6):358-361.)在测定1，5-AG时，将葡萄糖通过葡萄糖激酶(GK)转化为6-磷酸葡萄糖，然后用吡喃糖氧化酶(PROD)将1，5-AG氧化产生过氧化氢并偶联TrindreJ s反应显色定量。由于PROD酶的底物特异性不佳，反应中生成的6-磷酸葡萄糖在丙酮酸激酶等含量不足时易重新转化为葡萄糖，生成的葡萄糖被PROD酶氧化后参与Trindre^ s反应并显色，从而引起1，5_AG的测定结果假性升高。
[0004]本发明的目 的是为了解决上述技术的不足，将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖后，进一步利用磷酸葡萄糖异构酶的催化作用将6-磷酸葡萄糖转化为不与PROD酶作用的6-磷酸果糖，并通过系统中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸盐(PEP)，建立ATP再生系统，确保葡萄糖向6-磷酸葡萄糖转化，该法测定试剂4°C开瓶稳定性达27d，对1，5-AG具有良好的选择性，高达85.0mol/L的葡萄糖不干扰本法测定。
【发明内容】
[0005]本发明提供了 1，5_脱水葡糖醇(1，5-AG)的氧化酶法测定方法，用于血清1，5_脱水葡糖醇的测定。该测定体系主要是通过葡萄糖激酶(GK)和磷酸葡萄糖异构酶(PGI)将样品中葡萄糖(Glu)转化为果糖-6-磷酸(Fru-6-P)，并通过系统中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸盐(PEP)，建立ATP再生系统，确保Glu向Fru-6-P转化。样品中1，5-AG经吡喃糖氧化酶(PROD)作用生成1，5-脱水果糖(1，5-AF)和H2O2，后者借Trinder’s系统显色定量。
[0006]为了达到理想的检测效果，本发明还特别提供了 1，5_脱水葡糖醇(1，5-AG)的氧化酶法测定试剂，分为A、B 二个组份。两个组份的具体成份组成可表述如下。
[0007]A 组份:
[0008]
【权利要求】
1.一种1，5-脱水葡糖醇的氧化酶法测定方法，其特征是通过葡萄糖激酶(GK)将主要干扰物葡萄糖转化为葡萄糖-6磷酸(Glu-6-P)，葡萄糖-6磷酸(Glu-6-P)再经磷酸葡萄糖异构酶(PGI)转化为果糖-6-磷酸(Fru-6-P)，并通过系统中的丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸盐(PEP)，建立ATP再生系统，确保Glu向Fru-6-P转化。样品中1，5-AG经吡喃糖氧化酶(PROD)作用生成1，5_脱水果糖(1，5-AF)和H2O2，后者借Trinder’s系统显色定量。
2.根据权利要求1所述的一种1，5_脱水葡糖醇的氧化酶法测定方法，其特征是在将主要干扰物葡萄糖转化为果糖-6-磷酸(Fru-6-P)的同时，必须建立ATP再生系统。
3.根据权利要求1所述的一种1，5_脱水葡糖醇的氧化酶法测定方法，其特征是在将主要干扰物葡萄糖转化为葡萄糖-6磷酸(Glu-6-P)的酶是葡萄糖激酶(GK)。
4.根据权利要求1所述的一种1，5_脱水葡糖醇的氧化法测定方法，其特征是将待测物1，5-脱水葡萄糖醇(1，5-AG)氧化的酶是吡喃糖氧化酶(PROD)。
【文档编号】C12Q1/533GK103725749SQ201210417645
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2012年10月16日 优先权日:2012年10月16日
【发明者】潘利琴 申请人:温州市人民医院