专利名称：一种基于瑞士乳杆菌发酵的含ace抑制肽的羊奶的制备方法
技术领域：
本发明属于羊奶发酵技术领域，涉及一种基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法。
背景技术：
世界卫生组织(WHO)将高血压定义为在未使用降压药物的情况下，非同日3次测量血压，收缩压> HOmmHg和/或舒张压> 90mmHg。据2010年卫生部组织的全国居民27万人营养与健康状况调查资料显示，我国60岁及以上人群高血压的患病率为49% ，即约每2位60岁以上的人中就有I人患高血压。近年来,儿童高血压患病率也有所升高,根据近10年部分省市的调查结果，儿童高血压患病率，学龄前儿童为2 4%，学龄儿童为4 9%。高血压可引起脑卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性肾脏病等多种并发症，不仅致残、致死率高，而且严重消耗医疗和社会资源，给家庭和国家造成沉重负担。目前常用降压药物包括钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、血管紧张素受体阻滞剂(ARB)、利尿剂、α受体阻滞剂和β受体阻滞剂六类，以及由上述药物组成的固定配比复方制剂。ACE抑制肽是ACEI中的一类具有降血压功能的多肽类物质，它对于血压正常的动物或人没有降血压作用，具有安全性高，无毒副作用的特点。目前，研究者已分离出多种天然来源的ACE抑制肽，其中大多是利用蛋白酶水解各种食物蛋白得到。有研究发现，一些酸奶也具有降血压功能，并有学者从中分离得到了 ACE抑制肽。羊奶以其营养丰富、易于吸收等诸多优点被誉为奶中精品。瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)是一种具有保健功效的新型酸奶生产菌种,其蛋白酶水解活力高，能够水解乳蛋白产生多种对人体有益的生物活性肽，其产生的ACE抑制肽抑制率较闻。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，所制备的羊奶既具有酸羊奶的营养价值和独特风味，还含有抑制率较高的ACE抑制肽，不仅促进了羊奶资源的开发利用，对于高血压的防治以及高血压患者的营养保健也有积极作用。本发明是通过以下技术方案来实现一种基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)将瑞士乳杆菌接种于羊奶或羊奶复原乳中，在30 40°C下恒温厌氧发酵10 15h，得到发酵羊奶；2)按质量份数计，取步骤I)得到的发酵羊奶80 90份，与5 10份的蔗糖、
O.15 O. 5份的稳定剂及5 30的水充分混合后冷却至10°C以下，得到混合发酵羊奶；
3)将混合发酵羊奶在2 5°C条件下密封，后熟8 10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。所述的瑞士乳杆菌在接种之前还进行以下活化I)将瑞士乳杆菌的冻干菌粉接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第一次活化；2)按体积分数计，取3 7%第一次活化的菌液，接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第二次活化；3)按体积分数计，取3 7%第二次活化的菌液，接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第三次活化；
完成第三次活化后，按体积分数计，取3 7%第二次活化的菌液接种于羊奶或羊奶复原乳中。所述的羊奶复原乳为羊奶粉与水以10 20 :100的质量比溶解于水中。所述的羊奶或羊奶复原乳中还添加了酪蛋白，以提高发酵羊奶的凝固性以及ACE抑制肽的抑制率；以质量比计，酪蛋白添加量为O. 5^0. 9%。所述稳定剂为果胶、羧甲基纤维素钠、藻酸丙二醇酯中的一种或两种。所述含ACE抑制肽的羊奶中瑞士乳杆菌的活菌数大于108cfu/mL。所述含ACE抑制肽的羊奶中ACE抑制肽抑制率为65 90%。所述制备的含ACE抑制肽的羊奶在制备预防高血压或高血压辅助治疗的饮品中应用。与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果本发明提供的基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，采用以瑞士乳杆菌单菌株发酵的方式制备羊奶饮品，方法简便易行，不仅除去了羊奶中的膻味，还保留了羊奶中丰富的营养物质，凝乳细腻，易于吸收；所制备的发酵羊奶中保加利亚乳杆菌活菌数大于108cfu/mL，可提供包括调节胃肠道菌群平衡、增强免疫力、降低胆固醇等一系列的益生作用。进一步的，还在发酵过程中添加酪蛋白，提高了发酵羊奶中ACE抑制肽的抑制率，还增加了发酵乳中蛋白质和氨基酸的含量；而为了保证羊奶发酵过程中产生的ACE抑制肽具有较高抑制率，在发酵结束后还添加了蔗糖与稳定剂。本发明提供的基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，所制得的发酵羊奶中ACE抑制肽抑制率可达到75 90%，坚持长期饮用，可以有效地预防高血压的发病，同时也可用于高血压患者的辅助治疗，可应用与制备预防高血压或高血压辅助治疗的饮品中。
具体实施例方式下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。实施例I基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取O. 4g瑞士乳杆菌的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法进行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将IOmL浓度为1%的酪蛋白溶液添加到90mL鲜羊奶中并混合均匀，过滤净化后在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入5mL活化好的瑞士乳杆菌，在37°C恒温厌氧发酵12h，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将5. 7份的蔗糖、O. 3份的果胶用10份的水溶解，在65°C巴氏杀菌20min后冷却至40±3°C，再加入到84份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至I (TC以下，再在4 C冰箱后熟8 IOh,即制成广品。所得产品中瑞士乳杆菌活菌数为5. 87X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率为88. 36%ο
ACE抑制肽抑制率的检测方法为紫外分光光度法用含有O. 3mol/L NaCl 的 O. lmol/L 硼酸盐缓冲液(ρΗ8· 3)将 HHL (Hip-His-Leu)配成5mmol/L的溶液。在IOmL试管中分别加入200 μ L的5mmol/L Hip-His-Leu溶液和80 μ L的发酵乳上清液，于37°C下保温5min后，再加入20 μ L ACE溶液(溶解于蒸馏水中，活力为O. lU/mL)，混匀后在37°C下保温30min进行反应，之后加入250 μ L lmol/L HCl终止反应，再加入I. 5mL醋酸乙酯，经15s振荡混匀后，静置5min，用移液管吸取I. OmL的醋酸乙酯层，于120°C烘干30min,再加入I. OmL蒸懼水,混勻后在228nm处测定吸光度。在上述条件下，抑制50%的ACE活性(IC50)为样品的一个活性单位。ACE 抑制率=[(B-A) / (B-C) ] X 100%式中A——含有发酵乳乳清(或溶于蒸馏水的多肽溶液)和ACE溶液的吸光度；B—不含发酵乳乳清(或溶于蒸馏水的多肽溶液)样品，但含有ACE溶液的吸光度；C—为含脱脂乳乳清(或蒸馏水)，但不含ACE溶液的吸光度。实施例2基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取O. 4g瑞士乳杆菌的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌种，按上述操作方法进行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将14g羊奶粉和20mL浓度为1%的酪蛋白溶液添加到80mL水中并混合均匀，在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳杆菌，在40°C恒温厌氧发酵10h，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将7份的蔗糖、O. 2份的羧甲基纤维素钠用7. 8份的水溶解，在650C巴氏杀菌20min后冷却至40 ± 3°C，再加入到85份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成产品。所得产品中瑞士乳杆菌活菌数为4. 75X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率为85. 73%。实施例3基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤
I)取O. 4g瑞士乳杆菌的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌种，按上述操作方法进行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将14g羊奶粉和50mL浓度为1%的酪蛋白溶液添加到50mL水中并混合均匀，在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳杆菌，在35°C恒温厌氧发酵14h，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将5份的蔗糖、O. 3份的藻酸丙二醇酯用6. 7份的水溶解，在650C巴氏杀菌20min后冷却至40 ± 3°C，再加入到88份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成产品。所得产品中瑞士乳杆菌活菌数为4. 68X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率为83. 17%。
实施例4基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取O. 4g瑞士乳杆菌的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法进行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将20mL浓度为1%的酪蛋白溶液添加到80mL鲜羊奶中并混合均匀，过滤净化后在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳杆菌，在37°C恒温厌氧发酵llh，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将7份的蔗糖、O. 2份的羧甲基纤维素钠用10. 8份的水溶解，在650C巴氏杀菌20min后冷却至40 ± 3°C，再加入到82份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成产品。所得产品中瑞士乳杆菌活菌数为5. 66X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率为85. 44%ο实施例5基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取O. 4g瑞士乳杆菌的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法进行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将20mL浓度为1%的酪蛋白溶液添加到80mL鲜羊奶中并混合均匀，过滤净化后在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳杆菌，在35°C恒温厌氧发酵14h，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将5份的蔗糖、O. I份的羧甲基纤维素钠、O. I份的果胶用7.8份的水溶解，在65°C巴氏杀菌20min后冷却至40 ±3°C，再加入到87份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成产品。所得产品中瑞士乳杆菌活菌数为4. 42X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率为79. 80%ο所制备的发酵羊奶坚持长期饮用，可以有效地预防高血压的发病，同时也可用于高血压患者的辅助治疗，可应用于制备预防高血压或高血压辅助治疗的饮品中。
权利要求
1.一种基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 1)将瑞士乳杆菌接种于羊奶或羊奶复原乳中，在30 40°C下恒温厌氧发酵10 15h，得到发酵羊奶； 2)按质量份数计，取步骤I)得到的发酵羊奶80 90份，与5 10份的蔗糖、O.15 O.5份的稳定剂及5 30的水充分混合后冷却至10°C以下，得到混合发酵羊奶； 3)将混合发酵羊奶在2 5°C条件下密封，后熟8 10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。
2.如权利要求I所述的基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述的瑞士乳杆菌在接种之前还进行以下活化 1)将瑞士乳杆菌的冻干菌粉接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第一次活化； 2)按体积分数计，取3 7%第一次活化的菌液，接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第二次活化； 3)按体积分数计，取3 7%第二次活化的菌液，接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第三次活化； 完成第三次活化后，按体积分数计，取3 7%第二次活化的菌液接种于羊奶或羊奶复原乳中。
3.如权利要求I所述的基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述的羊奶复原乳为羊奶粉与水以10 20 :100的质量比溶解于水中。
4.如权利要求I所述的基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述的羊奶或羊奶复原乳中还添加了酪蛋白，以提高ACE抑制肽的抑制率；以质量比计，酪蛋白添加量为O. I O. 5%。
5.如权利要求I所述的基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述稳定剂为果胶、羧甲基纤维素钠、藻酸丙二醇酯中的一种或两种。
6.如权利要求I所述的基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述含ACE抑制肽的羊奶中瑞士乳杆菌的活菌数大于108cfu/mL。
7.如权利要求I所述的基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述含ACE抑制肽的羊奶中ACE抑制肽的抑制率为65 90%。
8.权利要求I所述制备的含ACE抑制肽的羊奶在制备预防高血压或高血压辅助治疗的饮品中应用。
全文摘要
本发明公开了一种基于瑞士乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，将瑞士乳杆菌接种于羊奶或羊奶复原乳中，在30～40℃下恒温厌氧发酵10～15h，得到发酵羊奶；将发酵羊奶80～90份，与5～10份的蔗糖、0.15～0.5份的稳定剂及5～30的水充分混合后冷却至10℃以下，得到混合发酵羊奶；将混合发酵羊奶在2～5℃条件下密封，后熟8～10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。所制备的羊奶既具有酸羊奶的营养价值和独特风味，还含有抑制率较高的ACE抑制肽，不仅促进了羊奶资源的开发利用，对于高血压的防治以及高血压患者的营养保健也有积极作用。
文档编号A23C9/123GK102960444SQ20121047079
公开日2013年3月13日 申请日期2012年11月19日 优先权日2012年11月19日
发明者陈合, 吉喆, 舒国伟 申请人:陕西科技大学