一种支原体培养基的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种支原体培养基及其制备方法。其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：蛋白胨15g；牛心浸粉8g；酵母浸粉5g；苯酚红20mg；氯化钠5.2g；L-精氨酸0.5g；氟康唑30mg；紫番荔枝素2mg；无菌绵羊血200ml；蒸馏水加至1000ml。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、支原体分离率高的特点。
【专利说明】一种支原体培养基
【技术领域】
[0001]本发明涉及检验口腔微生物培养领域，具体涉及一种支原体培养基。
【背景技术】
[0002]非淋球菌性尿道炎(nongonococcal urethritis, NGU)在性传播疾病(sexuallytransmitted disease, STD)中所占的比例逐年升高，无论是国外还是国内都居于首位，而解尿支原体(ureaplasma urealyticum, Uu)和人型支原体(Mycoplasmahominis, Mh)是NGU的主要病原体。因此，准确有效地检测支原体的存在，成为诊断NGU的关键因素之一。Uu和Mh的检测目前国内大多采用液体培养法，培养基由黄变红且液体澄清为阳性，不变色或者变色但液体浑浊为阴性。其原理是根据Uu和Mh分解培养基中的尿素产碱使PH上升，而培养基中的酚红指示剂在由酸变碱过程中颜色由黄变红，观察颜色的变化来判断阳性。但是能分解尿素的微生物很多，一些细菌能使颜色变红造成假阳性，还有一些细菌和真菌(尤其是白色念珠菌)能使培养基变红和浑浊，检验科一般会判断阴性，但如果其中同时有支原体生长，由于浑浊就会造成假阴性的判断。前国内商品化的支原体培养基(包括液体和固体)一般添加青霉素类和多粘菌素，青霉素对大多数革兰阳性球菌的作用较强，对肠球菌作用较差，多粘菌素为多肽类抗生素，对绿脓杆菌等革兰氏阴性杆菌作用强大，但对G-球菌和G+细菌均无作用，这两种对真菌都无抑制作用。所以，如果标本中有混合真菌感染，污染少量则仅变红而不造成沉淀，可能形成假阳性的判断；污染量多有沉淀和浑浊，可能形成假阴性的判断。在固体培养基上，真菌菌落的生长，会掩盖支原体生长的琼脂表面，使不能观察到支原体的典型菌落。
【发明内容】
[0003]本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于支原体生长的培养基，降低检验结果的假阳`性和假阴性发生率。
[0004]本发明解决其技术问题的技术方案是:一种支原体培养基，其特征在，配制1000rnl培养基的配方中含有:蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酚红20mg ;氯化钠5.2g ；L-精氨酸0.5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ;无菌绵羊血200ml ;蒸懼水加至1000rnl。
[0005]优化方案中，每1000ml培养基还含有京尼平酸2mg。
[0006]优化方案中，每1000ml培养基还含有浓度200g/L的功劳木水煮液200ml。
[0007]以上各方案的固体培养基配方中，每1000ml培养基还含有琼脂15g。
[0008]其中所述的蛋白胨提供碳氮源和能量；牛心浸粉含有各种多肽、脂肪、生长因子、激素等，这些物质对促进支原体的繁殖和生长都是很重要的因素；酵母浸粉提供支原体生长所需的维生素B族；氯化钠维持均衡的渗透压，且由于支原体较其他的细菌更为耐受高渗环境，所以氯化钠水平适当的提高还有利于抑制其他细菌生长；琼脂是培养基的凝固剂；无菌绵羊血提供能量环境；L-精氨酸属氨基酸类，为营养剂；苯酚红为指示剂；氟康唑可以有效的抑制白色念珠菌在其中的生长；紫番荔枝素有抑制白假丝酵母的真菌作用，且还有一定的细胞毒作用，2mg/L的浓度可以有效的抑制杂菌成长，较普通支原体培养集中使用的高毒醋酸铊安全。京尼平酸能广泛抑制革兰氏阴、阳性菌的生长。功劳木为小檗科植物阔叶十大功劳、细叶十大功劳的茎或茎皮，现代研究表明，功劳木水煎剂在体外对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌均有抑制作用。
[0009]本发明与现有技术相比较，具有支原体检出可靠的特点。
【具体实施方式】
[0010]以下结合实际情况，对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0011]实施例1液体培养基，配制1000ml培养基的配方中含有:蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酹红20mg ;氯化钠5.2g ;L_精氨酸0.5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ；无菌绵羊血200ml ;蒸懼水加至总量为1000ml。同配方中加入琼脂15g既可以用来制备实施例2固体培养基。
[0012]实施例3液体培养基，配制1000ml培养基的配方中含有:蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酹红20mg ;氯化钠5.2g ;L_精氨酸0.5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ；京尼平酸2mg ;无菌绵羊血200ml ;蒸懼水加至总量为1000ml。同配方中加入琼脂15g既可以用来制备实施例4固体培养基。
[0013]实施例5液体培养基，配制1000ml培养基的配方中含有:蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酹红20mg ;氯化钠5.2g ;L_精氨酸0.5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ；浓度200g/L的功劳木水煮液200ml ;无菌绵羊血200ml ;蒸馏水加至总量为1000ml。同配方中加入琼脂15g既可以用来制备实施例6固体培养基。实施例6固体培养基制备方法为:取功劳木加水煮沸I小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得功劳木水煮液；将蛋白胨、牛心浸粉、酵母浸粉、苯酚红、氯化钠、琼脂、功劳木水煮液和蒸馏水混匀，在涡旋器上震荡15min，过滤，滤液210°C灭菌15min，冷却到45°C，加入无菌绵羊血、灭菌氟康唑、灭菌紫番荔枝素，混匀后灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。
[0014]所述的功劳木水煮液浓度为200g/L，指的是每升功劳木水煮液中含有生药200g。
[0015]本发明所得支原体培养基具有检出可靠、支原体分离率高的特点，为临床资料充分证明，有关资料如下。
[0016]I对象与方法
[0017]1.1培养基制备:共设8组，分别为实施例1~6方案组和对照I组、对照2组。对照I组为支原体肉汤液体培养基，对照2组为支原体肉汤固体培养基。
[0018]1.2标本采集培养方法:妇科和皮肤科门诊患者的泌尿生殖道标本拭子108例。采集方法:男性患者用无菌棉球擦干尿道口后，用无菌棉拭子插入尿道口 2~3cm，轻轻旋转后取出；女性患者清除阴道口分泌物后，用无菌棉拭子插入宫颈口 I~2cm，轻轻旋转后取出。用拭子先接种固体培养基，然后用于液体培养基接种，36 °C培养。
[0019]1.3结果判定方法
[0020]1.3.1阳性确定金标准:显微镜下见到典型支原体生长结合生化反应确认Utu Mh。
[0021]1.3.2液体培养基阳性确定标准:分别于24~48h观察颜色由黄色变红色，严格按照结果判读表读取结果。[0022]1.3.3固体培养基阳性确定标准:为24h后逐日观察颜色的变化(黄色变为红色)。同时在显微镜下观察典型支原体菌落:Mh煎蛋样菌落(100~300 μ m), Uu棕褐色颗粒、棕褐色菌线或棕褐色团块样菌落。
[0023]2结果:108份标本最后确定阳性为41例，各组阳性例数见下表。
[0024]
【权利要求】
1.一种支原体培养基，其特征在，配制1000ml培养基的配方中含有:蛋白胨15g ；牛心浸粉Sg ；酵母浸粉5g ；苯酌 红20mg ；氯化钠5.2g ；L-精氨酸0.5g ；氟康唑30mg ；蒸馏水加至总量为1000ml。
【文档编号】C12Q1/04GK103805675SQ201210595206
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2012年12月24日 优先权日:2012年12月24日
【发明者】郭三保 申请人:郭三保