胚胎培养用组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种含有适于胚胎培养的组成的胚胎培养用组合物。提供一种包含（a）以下的表A所示出的组成的、胚胎培养用组合物：表A。
【专利说明】胚胎培养用组合物
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及培养用组合物。更具体地，本发明涉及胚胎培养用组合物。
【背景技术】
[0002]体外受精、胚胎培养以及胚胎移植等是经济价值高的动物的改良及生产、以及再生医疗、生殖医疗等广泛的领域中的重要的技术。体外受精以及胚胎培养是在生物体外处理配子或胚胎。迄今为止，开发出了各种各样的胚胎培养用培养基，例如模拟胚胎形成中的周围体液环境的变化的逐次培养基(原文:逐次培養培地)、添加了血清的血清培养基以及容易处理的无血清的单一培养基(原文:単一培地)。单一培养基无需如逐次培养基那样对应于胚胎的形成阶段来更换培养基。无血清培养基能够降低如血清培养基那样源于来自生物体的材料的品质的偏差、病毒感染等危险性。
[0003]作为无血清单一培养基的一种，已知有KSOM培养基(非专利文献I及2)。对于用KSOM培养基培养出的胚胎而言，与用KSOM出现之前的培养基培养出的胚胎相比，虽然胚泡的细胞数增加了(非 专利文献3)，但是达不到在生物体内产生的胚泡的细胞数(非专利文献4 及 5)。
[0004]已知氨基酸具有生物合成的前体、能量源、有机性渗透压调节物质、细胞内pH缓冲物质、抗氧化物质以及螯合物质等的作用，向胚胎培养用培养基添加氨基酸可有效地作用于胚胎形成(非专利文献6)。虽然在最初开发时，KSOM培养基是仅含有作为氨基酸的谷酰胺的培养基，但是显而易见的是，通过向KSOM培养基加入20种氨基酸，可提高胚泡产生率、孵化率以及胚泡的细胞数(非专利文献7)。
[0005]在开发人着床前胚胎的培养用的培养基时，推荐使用了小鼠胚胎的研究(非专利文献8及9)。对于KSOM培养基或者添加了 20种氨基酸的KSOMaa培养基，使用小鼠胚胎进行了研究(非专利文献4及7)，不过还确认了上述培养基不仅适于人类的胚胎的培养，也适于牛、兔子、恒河猴(普通猕猴)、猪以及大鼠等各种各样动物胚胎的培养，现在已被广泛使用。
[0006](现有技术文献)
[0007](非专利文献)
[0008]非专利文献I:Proc Natl Acad Sci USA2007; 104 (36):14289-14293.[0009]非专利文献2:小鼠胚胎的操作手册第3版2005; 149-193.[0010]非专利文献3:Fertil Steril2006;86:1252-1265.[0011 ]非专利文献 4:Biol Reprodl994; 50:1027-1033.[0012]非专利文献5:Reproduction2009; 137:271-283.[0013]非专利文献6:Semin Reprod Med2000; 18 (2):205-218.[0014]非专利文献7:Mol Reprod Devl995;41 (2):232-238.[0015]非专利文献8:Human Reproductionl998; 13 (4): 173-183.[0016]非专利文献9:Human Reproduction Update2003; 9 (6): 557-582.
【发明内容】
[0017](发明所要解决的问题)
[0018]由于培养用培养基中的各成分的效果依赖于其他成分的浓度(非专利文献9)，因此为了将20种氨基酸分别组合而设定成适于胚胎形成的浓度，需要大量的研究。并且，在着床前期胚胎的研究中，由于其样品的稀缺性，难以进行那样大规模的分析。因此，在以KSOMaa培养基为代表的胚胎培养用的培养基中添加的氨基酸浓度大多是以体细胞的增殖能力为指标而确定的浓度，对于胚胎形成并不是最优的。
[0019]例如，在KSOMaa培养基中添加的氨基酸浓度，仅是将伊格尔氏(Eagle)等以体细胞的营养需求性为指标所确定的特定浓度的属于必需氨基酸组的13种(Sciencel959;130, 432-437)和其他的属于非必需氨基酸组的7种分别设定成1/2的浓度。另外，在为人胚胎培养而开发的培养液Gl或G2中，添加的氨基酸浓度也直接使用伊格尔氏以体细胞的营养需求性为指标所确定的浓度。
[0020]因此，依然期待着具有适于生物体外的胚胎培养的氨基酸浓度的培养用培养基。
[0021](解决问题的措施)
[0022]本发明的
【发明者】们鉴于有关需求，几经深入研究，结果发现了适于胚胎培养的氨基酸浓度。
[0023]本发明提供包含由以下表A示出的组成的胚胎培养用组合物。
[0024](表1)
[0025]表A
【权利要求】
1.一种胚胎培养用组合物，包含由以下的表A示出的组成: (表1) 表A
2.如权利要求1所述的胚胎培养用组合物，还包含电解质。
3.如权利要求2所述的胚胎培养用组合物，包含有机酸和/或糖质。
4.如权利要求3所述的胚胎培养用组合物，还包含从pH指示剂、pH调节剂、pH缓冲剂、抗生素、维生素类、微量金属元素、螯合剂、激素、细胞生长因子、脂质或者其构成成分、载体蛋白质、细胞外基质成分、还原物质以及聚合物中选择的至少一个成分。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的胚胎培养用组合物，其中谷酰胺衍生物是甘氨酰-L-谷酰胺、L-丙氨酰-L-谷酰胺、L-亮氨酰-L-谷酰胺、L-缬氨酰-L-谷酰胺或者L-异亮氨酰-L-谷酰胺。
【文档编号】C12N5/073GK103717730SQ201280037523
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2012年7月18日 优先权日:2011年8月3日
【发明者】八尾竜马, 朝山雄太, 松久明生 申请人:扶桑药品工业株式会社