肋柱花鉴别的引物及pcr方法
【专利摘要】本发明属于分子生物学【技术领域】，涉及中药及中药材鉴定领域，特别涉及一种能够特异鉴定肋柱花的PCR扩增方法及其特异引物。使用此方法鉴别蒙成药中肋柱花，只通过简单的DNA提取、PCR特异性扩增、电泳检测即可完成对样品的鉴另0。具有操作简单、特异性强、重复性好等优点。主要用于蒙成药中肋柱花的快速鉴定。
【专利说明】肋柱花鉴别的引物及PCR方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学【技术领域】，涉及蒙药材及蒙成药鉴定领域，特别涉及一种 能够特异鉴定肋柱花的PCR扩增方法及其特异引物。
【背景技术】
[0002] 肋柱花是一种蒙医传统用药，蒙药名哈比日跟一地格达。为龙胆科植物肋柱花 (Lomatogonium rotatum(L.)Fries ex Nym.)的干燥全草。用于治疗癌疫、伤寒、流感、中暑 头热等疾病。
[0003] "地格达"来自印度梵语音译，蒙语为苦的意思。作为蒙医常用要药之一，具有清热 解毒、凉血消肿、平息"协日"，愈伤之功效。根据文献记载和我们的实际调查研究，内蒙古地 区作为"地格达"类蒙药使用的植物多达7科30余种，然而由于内蒙古自治区区域广阔而 药用资源物种分布的区域性差异明显，游牧生产过程中徒迁频繁而就地利用药用资源等诸 多原因，在蒙药材中，同一品种的名称、基原、临床功效与使用等方面因地、因人而异的现象 极为普遍。肋柱花作为"地格达"类药材之一也不例外，同时还调查统计发现含"地格达"类 的蒙成药在内蒙古地区使用也较为广泛。由于"地格达"类蒙药基原植物极为复杂，不同科 属的植物在不同地区等同入药，致使目前"地格达"类蒙药在不同地区市场流通、医疗部门 及制药企业应用十分混乱。这些情况同时也反映出了对蒙成药中使用的"地格达"类生药 进行品种鉴定的必要性和迫切性。因此，建立一种用于鉴别肋柱花的方法非常重要。
[0004] 之前鉴别肋柱花的方法，如薄层色谱方法等。胡伊力格其等采用薄层色谱的方法 通过分析甲醇、乙醚、石油醚部分对肋柱花进行鉴定（胡伊力格其等.四种地格达类蒙药材 的鉴别研究，内蒙古民族大学学报，2007,22(3) :328)。本研究组之前使用DNA条形码技术 对肋柱花进行分子的鉴别研究，但这种方法比较繁琐，需要测序，不利于推广。近年来发展 的以分子生物学为基础的检测方法如位点特异性PCR等克服了药材传统鉴别方法准确度 不高、主观性大等缺点。对肋柱花及其含有其蒙成药的特异PCR分子鉴别还尚未见报道， 本发明通过特异性PCR的方法实现了肋柱花与含肋柱花的蒙成药快速、准确鉴别。在本发 明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中所提及的PCR方法及引物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种肋柱花的PCR引物及其鉴定方法，该PCR鉴定方法操作 简单、样品量少，能快速、准确的将肋柱花从成药中鉴定出来，为肋柱花鉴定提供了一种实 用的技术。
[0006] 1、一种鉴定肋柱花的特异引物F1、F2,其序列为：
【权利要求】
1. 一种鉴定肋柱花的特异引物FI、F2,其序列为：Fl :5' -TTAGTTGTGCCAGAGTTTGC-3'， F2 :5' -AAGTTCCATCTATAAATGGATAAGA-3'。
2. -种肋柱花的PCR鉴定方法，其特征在于，包括下列步骤： a) 从所述材料中提取到DNA样品； b) 用权利要求1所述的引物进行PCR反应，扩增反应体系包括：10Xbuffer缓冲液 L，dNTPl. L，引物各 0? L，EX Taq 酶 0? L，DNAO. L，灭菌蒸馏水 14. L ;反应 条件：解链温度95°C，时间5min，退火温度95°C，时间30s，，54°C，时间30s，复性温度72°C， 时间为lmin40s，40个循环后72°C延伸，时间为7min ; c) 电泳所述扩增产物，如果存在分子量约为232bp的单一条带，则确定所检材料含有 肋柱花。
【文档编号】C12Q1/68GK104212883SQ201310642685
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】李旻辉, 崔占虎, 龙平 申请人:李旻辉, 崔占虎, 龙平