基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法
【专利摘要】本发明属生物【技术领域】，涉及基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法，其步骤为：利用ALP（Amplified?Length?Polymorphism）分子标记技术的特异性引物进行PCR反应，扩增待测红麻样本的线粒体DNA，能扩增出与细胞质雄性不育系具有相同特异性条带的即为含红麻雄性不育细胞质的材料。所述特异性引物为核苷酸序列如SEQ?ID?No.1和2所示的引物。本发明还提供用于红麻雄性不育细胞质分子鉴定方法的分子标记HM138。本发明采用ALP分子标记技术对红麻雄性不育细胞质材料进行了分子水平多态性检测。该方法鉴定速度快、准确率高、操作简单，非常适用于红麻细胞质雄性不育系的鉴定和分子标记辅助育种。
【专利说明】基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，具体涉及基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法。
【背景技术】 [0002]红麻又称“洋麻”，是锦葵科木槿属一年生韧皮纤维作物。因其在长江流域及其以北地区不能自然留种，北方麻区每年要从华南地区引入大量种子。红麻表现出强大的杂种优势，其杂种优势率高达35%-40%。长期以来，红麻杂种优势利用是国内外红麻育种的主攻目标。
[0003]2008年9月，广西大学周瑞阳发明的“红麻野败型细胞质雄性不育系的选育方法”获得国家发明专利(ZL 200510019454.4)。按此方法已选育出了 K03A (见:桂科鉴字第[2004] 152 号)、福 3A、P3A、917A、722A、763A 和 L23A (见:桂科鉴字第[2007] 177 号)等 7 个细胞质雄性不育系，红麻杂种优势利用取得突破性进展。
[0004]但在农业生产中，由单一细胞质雄性不育系组配的杂交种的大面积推广和长期利用存在某一病害大流行的风险，因为该细胞质雄性不育系组配的杂交种可能成为某一病原微生物生理小种的哺育品种。解决这一问题的基本途径是选育出多种细胞质来源的雄性不育系，并在生产中推广不同细胞质来源的三系杂交种。
[0005]为了选育新的雄性不育细胞质，一般利用现有雄性不育保持系与现有种质资源测交的方法筛选，不但工作量很大，而且带有很大的盲目性。
[0006]若能找到一种雄性不育细胞质的分子标签，则可利用这种标签对现有种质资源进行鉴定，以发掘出新的雄性不育细胞质资源，继而选育出新的雄性不育系。由此将极大地提高工作效率，并有利于现有雄性不育系及其杂交种的知识产权保护。
[0007]关于红麻雄性不育细胞质分子鉴定方法，国内外均未见报道。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是解决目前缺乏红麻雄性不育细胞质分子鉴定方法的问题，提供基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法。
[0009]ALP (Amplified Length Polymorphism:扩增长度多态性)技术是针对特定的位点设计特异引物，进行PCR扩增检测，PCR产物的多态性称为ALP。本发明的目的是利用ALP技术解决红麻雄性不育细胞质的鉴定问题，提供一种红麻雄性不育细胞质的分子鉴定方法。
[0010]本发明提供的基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法，具体步骤如下:
[0011]用ALP分子标记技术的特异性引物进行PCR反应，扩增待测红麻样本的线粒体DNA，能扩增出与细胞质雄性不育系具有相同特异性条带的即为含红麻雄性不育细胞质的材料；
[0012]所述特异性引物为atp8BQ引物对:
[0013]正向引物5’ -CCAACGACGATCCTATCCTAAA-3’(如 SEQ ID N0.1 所示)[0014]反向引物5’ -CTCCACTTACTCGATACAGGCITT-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)。
[0015]其中，所述PCR的反应体系如下:
[0016]
【权利要求】
1.基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法，其特征在于，具体步骤如下: 用ALP分子标记技术的特异性引物进行PCR反应，扩增待测红麻样本的线粒体DNA，能扩增出与细胞质雄性不育系具有相同特异性条带的即为含红麻雄性不育细胞质的材料； 所述特异性引物为atp8BQ引物对: 正向引物 5’ -CCAACGACGATCCTATCCTAAA-3’(如 SEQ ID N0.1 所示) 反向引物 5’ -CTCCACTTACTCGATACAGGCTTT-3，(如 SEQ ID N0.2 所示)。
2.如权利要求1所述的基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法，其特征在于，其PCR反应体系如下:
3.如权利要求1所述的基于红麻atp8基因鉴定雄性不育细胞质的方法，其特征在于，PCR反应条件为:94°C预变性3min，然后94°C 30s, 55°C 20s, 72°C 20s，扩增35个循环，最后72°C终延伸3min。
4.用于权利要求1所述红麻雄性不育细胞质分子鉴定方法的atpSBQ引物对，其特征在于，其为: 正向引物 5’ -CCAACGACGATCCTATCCTAAA-3’(如 SEQ ID N0.1 所示) 反向引物 5’ -CTCCACTTACTCGATACAGGCTTT-3，(如 SEQ ID N0.2 所示)。
5.用于权利要求1所述红麻雄性不育细胞质分子鉴定方法的分子标记HM138，其为用如SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的引物扩增出长度为138bp的特异性条带。
6.如权利要求1-3任一项所述的红麻雄性不育细胞质分子鉴定方法在红麻细胞质雄性不育系选育中的应用。
7.如权利要求4所述的引物在鉴定红麻细胞质雄性不育系中的应用。
8.如权利要求5所述的分子标记在鉴定红麻细胞质雄性不育系中的应用。
【文档编号】C12N15/11GK103740817SQ201310710995
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年12月19日 优先权日:2013年12月19日
【发明者】廖小芳, 赵艳红, 周瑞阳, 陈鹏, 周琼, 周步进 申请人:广西大学