一株黄曲霉及其在制备芦丁和鬼臼毒素单葡萄糖苷中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一株黄曲霉及其在制备芦丁和鬼臼毒素单葡萄糖苷中的应用。黄曲霉(Aspergillus?flavus)TG7，它的保藏编号为CGMCC?NO.8570。本发明还保护黄曲霉TG7在制备芦丁和/或鬼臼毒素单葡萄糖苷中的应用。本发明还保护一种制备芦丁和/或鬼臼毒素单葡萄糖苷的方法，包括如下步骤：发酵培养黄曲霉TG7，得到芦丁和/或鬼臼毒素单葡萄糖苷。本发明提供的内生黄曲霉可通过发酵制备芦丁和鬼臼毒素单葡萄糖苷，操作简单、成本低廉、生产周期短，具有工业化规模生产的应用潜力。本发明为直接获取鬼臼毒素单糖苷了新途径，避免了对野生鬼臼属植物的大量采挖，对保护生态环境多样性具有重要意义。
【专利说明】一株黄曲霉及其在制备芦丁和鬼臼毒素单葡萄糖苷中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一株黄曲霉及其在制备芦丁和鬼白毒素单葡萄糖苷中的应用。
【背景技术】
[0002]芦丁具有广泛的利用价值，主要体现在其作为治疗药物以及保健品上。芦丁具有维生素P样作用，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，以及抗炎、抗过敏、利尿、解痉、镇咳、降血脂等方面的作用。而国内外医药行业以芦丁作为原料，开发了多种药物，如芦丁片、维脑路通(羟乙芦丁)、芦丁镁铬盐、多维葡萄糖羟丁芦丁、槲皮素等心血管药物。此外，芦丁还可作为抗氧化剂和天然食用色素。目前，我国芦丁生产主要以槐米为原料进行提取，而槐米因资源不足，不能充分满足市场需求，因此探索芦丁的新来源以缓解供应紧张，具有十分重要的意义。传统的芦丁提取法主要有(热)碱提取酸沉淀法、大孔吸附树脂纯化法、超声波辐射提取多次重结晶法、连续回流提取法等，这些传统方法虽然可以成功提取芦丁，但是都存在着各种各样的弊端，如产率低、水解副产物较多、工艺复杂、成本较高等。
[0003]鬼白毒素单糖苷衍生物具有较强的抗癌活性，并且毒性较低，已经被开发为两种广泛运用于临床的广谱抗肿瘤药物etoposide和teniposide。目前，鬼白毒素的单糖苷衍生物主要是由鬼白毒素半合成得到。目前，鬼白毒素的主要来源是从天然鬼白属植物中提取，而医药方面的需求日益增加，导致对野生鬼白属植物的大量采集，已经对资源造成了严重的破坏。鬼白毒素的来源问题已经成为研究的热点，但是各种方法均有缺陷，大规模组织培养技术对于鬼白类植物并不适用，化学合成虽可进行，但成本太高。而通过基因工程学手段构建工程菌也由于参与形成该类物质的酶数量过多而无法进行。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一`株黄曲霉及其在制备芦丁和鬼白毒素单葡萄糖苷中的应用。
[0005]本发明提供的黄曲霉(Aspergillus flavus) TG7，简称黄曲霉TG7，已于2013年12月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC N0.8570。
[0006]本发明还保护黄曲霉TG7在制备芦丁和/或鬼白毒素单葡萄糖苷中的应用。
[0007]本发明还保护一种制备芦丁和/或鬼白毒素单葡萄糖苷的方法，包括如下步骤:发酵培养黄曲霉TG7，得到芦丁和/或鬼白毒素单葡萄糖苷。
[0008]所述发酵培养采用的培养基具体可为马铃薯葡萄糖培养基。
[0009]所述发酵培养的条件具体可为:26-30°C、100-150rpm振荡培养5-9天。所述发酵培养的条件更加具体可为:28°C、120rpm振荡培养7天。
[0010]所述方法中还可包括将发酵液进行萃取的步骤。所述萃取采用的萃取剂具体可为氯仿。
[0011]本发明提供的内生黄曲霉可通过发酵制备芦丁和鬼白毒素单葡萄糖苷，操作简单、成本低廉、生产周期短，具有工业化规模生产的应用潜力。本发明为直接获取鬼白毒素单糖苷了新途径，避免了对野生鬼白属植物的大量采挖，对保护生态环境多样性具有重要意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0012]图1为黄曲霉TG7的菌落形态。
[0013]图2为显微镜下观察黄曲霉TG7的照片。
[0014]图3为芦丁标准品的高效液相色谱图。
[0015]图4为鬼臼毒素单葡萄糖苷标准品的高效液相色谱图。
[0016]图5为粗提物的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0017]以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例中用抽滤器分离时采用杭州特种纸业有限公司的定性滤纸(中速:102)。
[0018]户丁标准品:中国药品生物制品检定所。
[0019]鬼臼毒素单葡萄糖苷标准品(鬼臼毒素7’ -O-葡萄糖苷):Changqi ZHAO, AkitoNAGATSU, Keiichiro HATANO, Naohiro SHIRAI, Setsuko KATO, and Yukio OGIHARA，NewLignan Glycosides from Chinese Medicinal Plant:SinopodophiIIum emodi，Chem.Pharm.Bull.51 (3):55-261 (2003)。
[0020]芦丁(Rutin)的结构式如下:
[0021]
【权利要求】
1.黄曲霉(Aspergillusflavus) TG7，它的保藏编号为 CGMCC N0.8570。
2.权利要求1所述黄曲霉在制备芦丁和/或鬼白毒素单葡萄糖苷中的应用。
3.一种制备芦丁和/或鬼白毒素单葡萄糖苷的方法，包括如下步骤:发酵培养权利要求I所述黄曲霉，得到 芦丁和/或鬼白毒素单葡萄糖苷。
【文档编号】C12R1/67GK103820328SQ201410022432
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年1月17日 优先权日:2014年1月17日
【发明者】赵长琦, 梁子臻, 张嘉, 朱妍妍 申请人:北京师范大学