一种产孢真菌菌种长期保藏的方法

一种产孢真菌菌种长期保藏的方法
【专利摘要】本发明涉及一种产孢真菌菌种长期保藏的方法。一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于包括如下步骤：1）将玻璃纸、培养皿、离心管以及真菌培养基进行灭菌，备用；2)灭菌后，冷却到50℃，真菌培养基分到平板，待真菌培养基冷却至室温后，将玻璃纸平展放在真菌培养基上；3）在玻璃纸上接种产孢真菌，28℃培养4-5天；4）将玻璃纸从真菌培养基上取岀，放入培养皿中，盖上培养皿盖，放入28℃培养箱中，干燥3天；5）将玻璃纸放入离心管中；6)将离心管直接放入-80℃冰箱进行保藏。该方法操作步骤简单、保藏菌种成本低。
【专利说明】一种产孢真菌菌种长期保藏的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种产孢真菌菌种长期保藏的方法。
【背景技术】
[0002]目前，产孢真菌菌种保藏有以下方法:1)定期传代保藏法；2)液体石蜡保藏法；3)滤纸片保藏法；4)生理盐水保藏法；5)自然基质保藏法(麦粒保藏法，麸曲保藏法)；6)干燥保藏法(沙土管保藏，冷冻真空保藏)；7)冷冻保藏(液氮-196 °C或超低温冰箱-70°C~_80°C)。以上方法在微生物及产孢真菌菌种保藏起着重要的作用，但有的保藏时期短、有的操作过程复杂、有的需要专用设备等。

【发明内容】

[0003]本发明的目的在于提供一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，该方法操作步骤简单、保藏菌种成本低。
[0004]为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是:一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于包括如下步骤:
[0005]I)将玻璃纸、培养皿、离心管以及真菌培养基进行灭菌，备用；
[0006]2)灭菌后，冷却到50°C，真菌培养基分到平板，待真菌培养基冷却至室温后，将玻璃纸平展放在真菌培养基上；
[0007]3)在玻璃纸上接种产孢真菌，28°C培养4-5天；
[0008]4)将玻璃纸从真菌培养基上取出，放入培养皿中，盖上培养皿盖，放入28°C培养箱中，干燥3天；
[0009]5)将玻璃纸放入离心管中；
[0010]6)将离心管直接放入_80°C冰箱进行保藏。
[0011]上述一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于具体步骤如下:
[0012]1)将具有半透膜特性的常规的玻璃纸剪裁成3平方厘米，放入直径9厘米的培养皿中，50个1.5毫升离心管放入500毫升烧杯中，同配制的真菌培养基在121°C灭菌20分钟，备用；
[0013]2)灭菌后，冷却到50°C，真菌培养基分到平板，每个平板到15毫升，待真菌培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在真菌培养基上；
[0014]3)在玻璃纸上接种产孢真菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子;
[0015]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量菌丝和孢子的玻璃纸从真菌培养基上取出，立即放入无菌的不含真菌培养基的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成3个0.9-1.1平方厘米，盖上培养皿盖，放入28°C培养箱中，干燥3天；[0016]5) 3天后(是指上述干燥3天后)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将上述0.9-1.1平方厘米玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记；
[0017]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱进行长期保藏。
[0018]所述的广抱真囷为哈次木霉囷、棘抱曲霉囷、青霉囷、脉抱囷、黑曲霉囷、绿色木霉菌、根霉菌、毛霉菌等中述任意一种。
[0019]所述的真菌培养基自选用下述任意一种:
[0020](I)马铃薯培养基(PDA)的组成:马铃薯(去皮)200.0g、蔗糖20.0g、琼脂粉18.0g、水 1000.0ml ；
[0021]马铃薯培养基(PDA)的制备:将马铃薯去皮，切成小块，于锅中加自来水1000mL煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加蔗糖后再加琼脂粉，并加水补足lOOOmL，pH自然，121°C灭菌20分钟，得到马铃薯培养基(PDA)。
[0022](2)蔗糖硝酸钠培养基(察贝壳培养基)的组成:鹿糖30.0g、硝酸钠2.0g、磷酸氢二钾1.0g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、琼脂粉18.0g、蒸馏水1000mL ；
[0023]蔗糖硝酸钠培养基(察贝壳培养基)的制备:将蔗糖、硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾、硫酸亚铁、琼脂粉和蒸馏水混合，调节PH7.0,121°C灭菌20分钟，得到蔗糖硝酸钠
培养基(察贝壳培养基)。
[0024](3)马丁培养基的组成:葡萄糖10.(^、蛋白胨5.(^、磷酸二氢钾l.0g、硫酸镁0.5g、琼脂粉18.0g、蒸馏水1000mL ；
[0025]马丁培养基的制备:将葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂粉和蒸馏水混合，pH自然，121°C灭菌20分钟，得到马丁培养基。
[0026](4)豆芽汁蔗糖培养基的组成:黄豆芽20.0g、蔗糖20.0g、琼脂粉18.0g、水1000.0mL ；
[0027]豆芽汁蔗糖培养基的制备:先将黄豆芽洗净，放入1000.0mL水中煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加蔗糖后再加琼脂粉，并加水补足1000mL,调节pH7.0,121°C灭菌20分钟，得到豆芽汁蔗糖培养基。
[0028]选择适合培养产孢真菌的真菌培养基。
[0029]本发明的特点是让产孢真菌在具有半透膜特性的常规的玻璃纸正常生长并大量产生孢子，为菌种在-80超低温冰箱长期保藏奠定基础。本发明以常规真菌培养基加上玻璃纸为载体，采用常规培养方式，在玻璃纸上收集真菌孢子，并在28°C条件下自然干燥后，孢子在_80°C能得到长期保藏。
[0030]本发明的有益效果是:
[0031]1、本发明操作步骤简单，无需制备孢子悬浮液和添加任何保护剂；
[0032]2、本发明需要专用设备少，仅需一台-70°C或_80°C超低温冰箱作为专用设备；
[0033]3、用此方法保藏菌种成本低。
[0034]本发明不仅适合科研院所，同时也适合广大的基层单位。
【具体实施方式】
[0035]为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
[0036]实施例1:
[0037]哈茨木霉菌的保藏
[0038]真菌培养基选用马铃薯培养基。马铃薯培养基(PDA)的组成:马铃薯(去皮)200.0g、蔗糖 20.0g、琼脂粉 18.0gdjC 1000.0mL ；
[0039]马铃薯培养基(PDA)的制备:将马铃薯去皮，切成小块，于锅中加自来水1000mL煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加蔗糖后再加琼脂粉，并加水补足lOOOmL，pH自然，121°C灭菌20分钟，得到马铃薯培养基(PDA)。
[0040]具体保藏方法包括如下步骤:
[0041]I)将具有半透膜特性的常规的玻璃纸剪裁成3平方厘米，放入直径9厘米培养皿中，50个1.5毫升离心管放入500毫升烧杯中，同配制的马铃薯培养基(PDA)在121°C灭菌20分钟，备用。
[0042]2)灭菌后，冷却到50°C，马铃薯培养基到平板(每个平板到15毫升)，待马铃薯培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在马铃薯培养基上。
[0043]3)在玻璃纸上接种哈茨木霉菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子。
[0044]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量哈茨木霉菌菌丝和孢子的玻璃纸从马铃薯培养基上取出，立即放入无菌的不含真菌培养基的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成3个I平方厘米左右，盖上培养皿盖，放入28°C培养箱中，干燥3天。
[0045]5) 3天后，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将I平方厘米左右(0.9-1.1平方厘米)玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记。
[0046]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱中，哈茨木霉菌菌种长期保藏。
[0047]哈茨木霉菌菌种保藏10年后，成活率为100%。
[0048]实施例2:
[0049]棘孢曲霉菌的保藏
[0050]真菌培养基选用马铃薯培养基。马铃薯培养基(PDA)的组成:马铃薯(去皮)200.0g、蔗糖 20.0g、琼脂粉 18.0gdjC 1000.0mL ；
[0051]马铃薯培养基(PDA)的制备:将马铃薯去皮，切成小块，于锅中加自来水1000mL煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加蔗糖后再加琼脂粉，并加水补足lOOOmL，pH自然，121°C灭菌20分钟，得到马铃薯培养基(PDA)。
[0052]具体保藏方法包括如下步骤:
[0053]I)将具有半透膜特性的常规的玻璃纸剪裁成3平方厘米，放入直径9cm的培养皿中，50个1.5毫升离心管放入500mL烧杯中，同配制的马铃薯培养基(PDA)在121°C灭菌20分钟，备用。
[0054]2)灭菌后，冷却到50°C，马铃薯培养基分到平板(每个平板到15毫升)，待马铃薯培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在马铃薯培养基上。
[0055]3)在玻璃纸上接种棘孢曲霉菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子。
[0056]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量棘孢曲霉菌菌丝和孢子的玻璃纸从马铃薯培养基上取出，立即放入无菌的不含真菌培养基的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成I平方厘米左右(共3片，每片0.9-1.1平方厘米)，盖上培养皿盖，放入28 °C培养箱中，干燥3天。
[0057]5) 3天后，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将I平方厘米左右(0.9-1.1平方厘米)的玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记。
[0058]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱中，棘孢曲霉菌菌种长期保藏。
[0059]保藏10年后，成活率为100%。
[0060]实施例3:
[0061]青霉菌的保藏
[0062]真菌培养基选用蔗糖硝酸钠培养基。蔗糖硝酸钠培养基(察贝壳培养基):蔗糖30.0g、硝酸钠2.0g、磷酸氢二钾1.0g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、琼脂粉18.0g、蒸馏水1000mL0调节pH7.0，121°C灭菌20分钟。
[0063]具体保藏方法包括如下步骤:
[0064]I)将具有半透膜特性的常规的玻璃纸剪裁成3cm2，放入直径9cm的培养皿中，1.5毫升离心管放入500mL烧杯中，同配制的蔗糖硝酸钠培养基在121°C灭菌20分钟，备用。
[0065]2)灭菌后，冷却到50°C，蔗糖硝酸钠培养基到平板(每个平板到15毫升)，待蔗糖硝酸钠培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在蔗糖硝酸钠培养基上。
[0066]3)在玻璃纸上接种青霉菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子。
[0067]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量青霉菌菌丝和孢子的玻璃纸从蔗糖硝酸钠培养基上取出，立即放入无菌的不含真菌培养基的直径9厘米的米培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成I平方厘米左右(共3片，每片0.9-1.1平方厘米)，盖上培养皿盖，放入28 °C培养箱中，干燥3天。
[0068]5) 3天后，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将I平方厘米左右(0.9-1.1平方厘米)的玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记。
[0069]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱中，青霉菌菌种长期保藏。
[0070]保藏3年后，成活率为100%。
[0071]实施例4:
[0072]脉孢菌的保藏
[0073]真菌培养基选用蔗糖硝酸钠培养基。蔗糖硝酸钠培养基(察贝壳培养基):蔗糖30.0g、硝酸钠2.0g、磷酸氢二钾1.0g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、琼脂粉18.0g、蒸馏水1000mL0调节pH7.0，121°C灭菌20分钟。[0074]具体保藏方法包括如下步骤:
[0075]I)将具有半透膜特性的常规的玻璃纸剪裁成3cm2，放入直径9cm的培养皿中，1.5毫升离心管放入500mL烧杯中，同配制的蔗糖硝酸钠培养基在121°C灭菌20分钟，备用。
[0076]2)灭菌后，冷却到50°C，蔗糖硝酸钠培养基到平板(每个平板到15毫升)，待蔗糖硝酸钠培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在蔗糖硝酸钠培养基上。
[0077]3)在玻璃纸上接种脉孢菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子。
[0078]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量脉孢菌菌丝和孢子的玻璃纸从蔗糖硝酸钠培养基上取出，立即放入无菌的不含真菌培养基的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成I平方厘米左右(共3片，每片0.9-1.1平方厘米)，盖上培养皿盖，放入28 °C培养箱中，干燥3天。
[0079]5) 3天后，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将I平方厘米左右(0.9-1.1平方厘米)的玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记。
[0080]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱中，脉孢菌菌种长期保藏。
[0081]保减I年后， 成活率100%。
[0082]实施例5:
[0083]黑曲霉囷的保减
[0084]真菌培养基选用马丁培养基。马丁培养基:葡萄糖10.0g、蛋白胨5.0g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g、琼脂粉18.0g、蒸馏水lOOOmL，pH自然，121°C灭菌20分钟。
[0085]具体保藏方法包括如下步骤:
[0086]I)将具有半透膜特性的常规的玻璃纸剪裁成3cm2，放入直径9cm的培养皿中，1.5毫升离心管放入500mL烧杯中，同配制的马丁培养基在121°C灭菌20分钟，备用。
[0087]2)灭菌后，冷却到50°C，马丁培养基到平板(每个平板到15毫升)，待马丁培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在马丁培养基上。
[0088]3)在玻璃纸上接种黑曲霉菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子。
[0089]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量黑曲霉菌菌丝和孢子的玻璃纸从马丁培养基上取出，立即放入的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成I平方厘米左右(共3片，每片0.9-1.1平方厘米)，盖上培养皿盖，放入28°C培养箱中，干燥3天。
[0090]5) 3天后，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将I平方厘米左右(0.9-1.1平方厘米)的玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记。
[0091]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱中，黑曲霉菌菌种长期保藏。
[0092]保藏I年后,成活率100%。
[0093]实施例6:[0094]绿色木霉菌的保藏
[0095]真菌培养基选用马丁培养基。马丁培养基:葡萄糖10.0g、蛋白胨5.0g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g、琼脂粉18.0g、蒸馏水1000mL。pH自然，121°C灭菌20分钟。
[0096]具体保藏方法包括如下步骤:
[0097]I)将具有半透膜特性的常规的玻璃纸剪裁成3cm2，放入直径9cm的培养皿中，1.5毫升离心管放入500mL烧杯中，同配制的马丁培养基在121°C灭菌20分钟，备用。
[0098]2)灭菌后，冷却到50°C，马丁培养基到平板(每个平板到15毫升)，待马丁培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在马丁培养基上。
[0099]3)在玻璃纸上接种绿色木霉菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子。
[0100]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量绿色木霉菌菌丝和孢子的玻璃纸从马丁培养基上取出，立即放入无菌的不含真菌培养基的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成I平方厘米左右(共3片，每片0.9-1.1平方厘米)，盖上培养皿盖，放入28 °C培养箱中，干燥3天。
[0101]5) 3天后，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将I平方厘米左右(0.9-1.1平方厘米)的玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记。
[0102]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱中，绿色木霉菌菌种长期保藏。
[0103]保藏12年后，成活率100%。
[0104]实施例1:
[0105]根霉菌的保藏
[0106]真菌培养基选用豆芽汁蔗糖培养基。豆芽汁蔗糖培养基:黄豆芽20.0g、蔗糖20.0g、琼脂粉18.0gdK 1000.0ml0先将豆芽洗净，放入水中煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加糖，并加水补足1000ml。调节pH7.0。121°C灭菌20分钟。
[0107]具体保藏方法包括如下步骤:
[0108]I)将具有半透膜特性的玻璃纸剪裁成3cm2，放入直径9cm的培养皿中，1.5毫升离心管放入500mL烧杯中，同配制的豆芽汁蔗糖培养基在121°C灭菌20分钟，备用。
[0109]2)灭菌后，冷却到50°C，豆芽汁蔗糖培养基到平板(每个平板到15毫升)，待豆芽汁蔗糖培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在豆芽汁蔗糖培养基上。
[0110]3)在玻璃纸上接种根霉菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子。
[0111]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量根霉菌菌丝和孢子的玻璃纸从豆芽汁蔗糖培养基上取出，立即放入无菌的不含真菌培养基的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成I平方厘米左右(共3片)，盖上培养皿盖，放入28°C培养箱中，干燥3天。
[0112]5) 3天后，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将I平方厘米左右(0.9-1.1平方厘米)的玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记。
[0113]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱中，根霉菌菌种长期保藏。
[0114]保藏3年后，成活率100%。
[0115]实施例8:
[0116]毛霉囷的保减
[0117]真菌培养基选用豆芽汁蔗糖培养基。豆芽汁蔗糖培养基:黄豆芽20.0g、蔗糖20.0g、琼脂粉18.0gdK 1000.0ml0先将豆芽洗净，放入水中煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加糖，并加水补足1000ml。调节pH7.0。121°C灭菌20分钟。
[0118]具体保藏方法包括如下步骤:
[0119]1)将具有半透膜特性的玻璃纸剪裁成3cm2，放入直径9cm的培养皿中，1.5毫升离心管放入500mL烧杯中，同配制的豆芽汁蔗糖培养基在121°C灭菌20分钟，备用。
[0120]2)灭菌后，冷却到50°C，豆芽汁蔗糖培养基到平板(每个平板到15毫升)，待豆芽汁蔗糖培养基彻底冷却后(即冷却至室温)，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸平展放在豆芽汁蔗糖培养基上。
[0121]3)在玻璃纸上接种毛霉菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子。
[0122]4)用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将带大量毛霉菌菌丝和孢子的玻璃纸从豆芽汁蔗糖培养基上取出，立即放入的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀(酒精灯火焰灭菌)将玻璃纸剪裁成1平方厘米左右(共3片)，盖上培养皿盖，放入28 °C培养箱中，干燥3天。
[0123]5) 3天后，用无菌镊子(酒精灯火焰灭菌)将I平方厘米左右(0.9-1.1平方厘米)的玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸(共3片，3个离心管)，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记。
[0124]6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱中，毛霉菌菌种长期保藏。
[0125]保藏I年后，成活率100%。
[0126]本发明所列举的各种培养基以及各种真菌菌株都能实现本发明，在此不一一列举实施例。
【权利要求】
1.一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于包括如下步骤: 1)将玻璃纸、培养皿、离心管以及真菌培养基进行灭菌，备用； 2)灭菌后，冷却到50°C，真菌培养基分到平板，待真菌培养基冷却至室温后，将玻璃纸平展放在真菌培养基上； 3)在玻璃纸上接种产孢真菌，28°C培养4-5天； 4)将玻璃纸从真菌培养基上取出，放入培养皿中，盖上培养皿盖，放入28°C培养箱中，干燥3天； 5)将玻璃纸放入离心管中； 6)将离心管直接放入_80°C冰箱进行保藏。
2.根据权利要求1所述的一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于:具体步骤如下: 1)将玻璃纸剪裁成3平方厘米，放入直径9厘米的培养皿中，1.5毫升离心管放入500毫升烧杯中，同配制的真菌培养基在121°C灭菌20分钟，备用； 2)灭菌后，冷却到50°C，真菌培养基分到平板，每个平板到15毫升，待真菌培养冷却至室温后，用无菌镊子将玻璃纸平展放在真菌培养基上； 3)在玻璃纸上接种产孢真菌，28°C培养4-5天后，在玻璃纸上，产生大量菌丝和孢子； 4)用无菌镊子将带大量菌丝和孢子的玻璃纸从真菌培养基上取出，立即放入无菌的不含真菌培养基的直径9厘米的培养皿中，并用无菌剪刀将玻璃纸剪裁成3个0.9-1.1平方厘米，盖上培养皿盖，放入28 °C培养箱中，干燥3天； 5)用无菌镊子将上述0.9-1.1平方厘米玻璃纸放入1.5毫升无菌离心管中，每个离心管放一片玻璃纸，盖上盖子、用封口膜封口并做好标记； 6)将以上离心管直接放入_80°C超低温冰箱进行长期保藏。
3.根据权利要求1或2所述的一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于:所述的产孢真菌为哈茨木霉菌、棘孢曲霉菌、青霉菌、脉孢菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌、根霉菌、毛霉菌等中述任意一种。
4.根据权利要求1或2所述的一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于:所述的真菌培养基自选用马铃薯培养基、蔗糖硝酸钠培养基、马丁培养基、豆芽汁蔗糖培养基中任意一种。
5.根据权利要求4所述的一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于:所述马铃薯培养基的组成:马铃薯200.0g、蔗糖20.0g、琼脂粉18.0gdK 1000.0ml ； 马铃薯培养基的制备:将马铃薯去皮，切成小块，于锅中加自来水1000mL煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加蔗糖后再加琼脂粉，并加水补足lOOOmL，pH自然，121°C灭菌20分钟，得到马铃薯培养基。
6.根据权利要求4所述的一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于:所述蔗糖硝酸钠培养基的组成:蔗糖30.0g、硝酸钠2.0g、磷酸氢二钾1.0g、硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、琼脂粉18.0g、蒸懼水1000mL ； 蔗糖硝酸钠培养基的制备:将蔗糖、硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾、硫酸亚铁、琼脂粉和蒸馏水混合，调节PH7.0,121°C灭菌20分钟，得到蔗糖硝酸钠培养基。
7.根据权利要求4所述的一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于:所述马丁培养基的组成:葡萄糖10.0g、蛋白胨5.0g、磷酸二氢钾1.(^、硫酸镁0.5g、琼脂粉18.0g、蒸懼水1000mL ； 马丁培养基的制备:将葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂粉和蒸馏水混合，PH自然，121°C灭菌20分钟，得到马丁培养基。
8.根据权利要求4所述的一种产孢真菌菌种长期保藏的方法，其特征在于:所述豆芽汁蔗糖培养基的组成:黄豆芽20.0g、蔗糖20.0g、琼脂粉18.0gdK 1000.0mL ； 豆芽汁蔗糖培养基的制备:先将黄豆芽洗净，放入1000.0mL水中煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加蔗糖后再加琼脂粉，并加水补足1000mL,调节pH7.0,121°C灭菌20分钟，得到豆芽汁蔗糖培养基。
【文档编号】C12R1/80GK103789210SQ201410052916
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年2月17日 优先权日:2014年2月17日
【发明者】胡小加, 廖星, 谢立华, 余常兵, 李银水, 廖祥生, 车志 申请人:中国农业科学院油料作物研究所