核酸扩增反应用筒的制作方法

核酸扩增反应用筒的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种能够简便地进行核酸扩增反应的核酸扩增反应用筒。该核酸扩增反应用筒具备管、核酸扩增反应用容器和柱塞，上述管在其内部依次具备由第1油构成的第1塞子、由与油混合时发生相分离且清洗结合有核酸的核酸结合性固相载体的第1清洗液构成的第2塞子、由第2油构成的第3塞子、由与油混合时发生相分离且将核酸从结合有核酸的核酸结合性固相载体溶出的溶出液构成的第4塞子、由第3油构成的第5塞子；上述核酸扩增反应用容器与管的第5塞子侧连通且含有油；上述柱塞被安装于管的第1塞子侧的开口部，将液体从管的第5塞子侧向核酸扩增反应用容器推出。
【专利说明】核酸扩增反应用筒

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种核酸扩增反应用筒。

【背景技术】
[0002] 由Boom等人报告了使用二氧化硅粒子等核酸结合性固相载体和促溶剂从生物体 材料更简便地提取核酸的方法(参照非专利文献1)。包括该Boom等人的方法在内并使用二 氧化硅等核酸结合性固相载体和促溶剂使核酸吸附于载体并进行提取的方法主要由以下3 个工序构成：（1)在促溶剂存在的条件下，使核酸吸附于核酸结合性固相载体的工序(吸附 工序）；（2)为了除去非特异性结合的夹杂物和促溶剂，用清洗液清洗吸附有核酸的载体的 工序(清洗工序）；以及（3)用水或低盐浓度缓冲液使核酸从载体溶出的工序(溶出工序)。
[0003] 然而，最近，除以往的PCR装置以外，还开发了容易控制加热时间的热循环装置 (参照专利文献1)，但迄今为止尚未开发可适用于这些装置的筒等。
[0004] 专利文献
[0005] 专利文献1 :日本特愿2010-268090 [0006] 非专利文献
[0007] 非专利文献 1 J. Clin. Microbiol.，νο?. 28Νο· 3, ρ· 495-503 (1990)


【发明内容】

[0008] 本发明的目的在于提供一种能够简便地进行核酸扩增反应的核酸扩增反应用筒。
[0009] 作为本发明的一个实施方式的核酸扩增反应用筒具备管、核酸扩增反应用容器和 柱塞，上述管在其内部依次具备由第1油构成的第1塞子（plug)、由与油混合时发生相分 离且清洗结合有核酸的核酸结合性固相载体的第2清洗液构成的第2塞子、由第2油构成 的第3塞子、由与油混合时发生相分离且将上述核酸从结合有核酸的核酸结合性固相载体 溶出的溶出液构成的第4塞子、由第3油构成的第5塞子；上述核酸扩增反应用容器与上述 管的第5塞子侧连通且含有油；上述柱塞被安装于上述管的第1塞子侧的开口部，将液体从 管的第5塞子侧向上述核酸扩增反应用容器推出。在上述柱塞的内部可以收容油和与油混 合时发生相分离且清洗结合有核酸的上述核酸结合性固相载体的第1清洗液。另外，进行 逆转录反应的试剂可以被包含在上述溶出液中。进行上述逆转录反应的试剂可以含有逆转 录酶、dNTP、引物。进行核酸扩增反应的试剂可以被包含在上述溶出液中。进行上述核酸扩 增反应的试剂可以含有DNA聚合酶、dNTP、引物。上述核酸扩增反应用容器可以具有固定上 述管的密封形成部和液滴移动的流路形成部。上述密封形成部可以具有收容从上述流路形 成部溢出的油的油收容部。还可以具备与上述管的第1塞子侧连通并将上述核酸结合性固 相载体导入上述管中的罐。上述罐与上述管可以介由上述柱塞结合。
[0010] 本发明的另一个实施方式是一种核酸扩增反应用筒式试剂盒，具备上述任一种核 酸扩增反应用筒和将上述核酸结合性固相载体导入上述管的罐。上述罐可以含有提取核 酸的溶解液和上述核酸结合性固相载体。上述罐可以具有开口部，上述开口部可以具有可 拆卸的盖。上述罐的开口部可以按照能够被安装于上述管的第1塞子侧的开口部的方式构 成。
[0011] 根据本发明，能够提供一种可简便地进行核酸扩增反应的核酸扩增反应用筒。

【专利附图】

【附图说明】
[0012] 图1 :图1A和图1B是筒1的说明图。
[0013] 图2 :图2A?图2C是筒1的动作说明图。
[0014] 图3 :图3A?图3D是罐3的说明图。
[0015] 图4 :图4是固定爪25和导板26与安装部62的说明图。
[0016] 图5 :图5A和图5B是PCR容器30的周边的说明图。
[0017] 图6 :图6A是PCR装置100的内部结构的立体图。图6B是PCR装置100的主要 结构的侧面图。
[0018] 图7 :图7是PCR装置100的框图。
[0019] 图8 :图8A是旋转体61的说明图。图8B是旋转体61的安装部62中安装有筒1 的状态的说明图。
[0020] 图9 :图9A?图9D是安装筒1时的PCR装置100的状态的说明图。
[0021] 图10 :图10是使磁铁71向下方移动时的磁珠7的行为的示意图。
[0022] 图11:图11A?图11C是核酸溶出处理的说明图。
[0023] 图12 :图12是使磁铁71摇动时的磁珠7的行为的示意图。
[0024] 图13 :图13是表示有无磁铁71摇动的表。
[0025] 图14 :图14A?图14C是液滴形成处理的说明图。
[0026] 图15 :图15A和图15B是热循环处理的说明图。
[0027] 图16 :图16是表示在本发明涉及的一个实施例中使用的核酸提取用试剂盒及其 组装后的装置的图。
[0028] 图17是表示本发明涉及的一个实施例中的实时PCR的结果的图。

【具体实施方式】
[0029] 以下，详细说明本发明的实施方式。应予说明，根据本说明书的记载，本领域技术 人员可明确本发明的目的、特征、优点及其构思，本领域技术人员由本说明书的记载能够容 易地再现本发明。以下记载的发明的实施方式显示本发明优选的实施方式，是为了例示或 说明而示出的，本发明不限定于此。本领域技术人员清楚在本说明书中公开的本发明的意 图和范围内，基于本说明书的记载，可进行各种改变以及修饰。
[0030] 首先，对被安装于PCR装置100的筒进行说明后，对本实施方式的PCR装置100 的构成?动作进行说明。
[0031] 筒
[0032] 图1A和图1B是筒1的说明图。图2A?图2C是筒1的动作说明图。图2A是筒1 的初始状态的说明图。图2B是从图2A的状态按压柱塞10而使密封部件12A与下注射器 22接触时的侧面图。图2C是按压柱塞10后的筒1的说明图。
[0033] 筒1是进行使核酸从结合有核酸的磁珠7溶出到用于聚合酶反应的反应液塞子47 中的核酸溶出处理的容器，并且是对反应液液滴47进行聚合酶反应的热循环处理的容器。 [0034] 核酸提取处理在罐3中进行，在通过管20的期间进行精制。管20的材质没有特别 限定，例如可以是玻璃、塑料等树脂、金属等。特别是，如果选择透明的玻璃、树脂作为管20 的材质，则能够从管20的外部观察空腔内，因此更优选。另外，如果选择透过磁力的物质、 非磁性体作为管20的材质，则使磁性粒子通过管20时等，从管20的外部赋予磁场，从而能 够容易使磁性粒子通过管20,因此优选。应予说明，管20的材质可以与罐的材质相同。
[0035] 管20具有第2清洗液塞子45、反应液塞子47以及油塞子。由于结合有核酸的磁 珠7被外部的磁铁吸引，所以通过使磁铁在外部沿着管20移动，从而磁珠7在管20内移动， 通过第2清洗液塞子45到达反应液塞子47。与磁珠7结合的核酸在第2清洗液塞子45被 清洗液清洗，并在反应液塞子47溶出。在此，"塞子"是指在管20内特定的液体占一个区域 时的液体。例如，在图2A?图2C中，将在毛细管23内保持为柱状的液体称为"塞子"。应 予说明，油不与其它溶液混和，因此，由油构成的塞子具有防止其两侧的水溶性的塞子相互 混合的功能。在塞子中或塞子之间优选没有气泡或其它液体，但只要磁珠7能够通过塞子， 也可以存在气泡或其它液体。
[0036] 油的种类没有特别限定，可以是矿物油、硅油（2CS硅油等)、植物油等，但是通过形 成更高粘度的油，从而在使核酸结合性固相载体在与上侧的塞子的界面移动时，能够提高 由油所带来的"洗掉效果"。由此，在使核酸结合性固相载体从上侧的塞子移动至由油构成 的塞子时，能够使附着于核酸结合性固相载体的水溶性成分更难以带到油内。
[0037] 热循环处理在筒1的PCR容器30进行。PCR容器30用油填满，反应液由于与该油 混合时发生相分离，所以反应液塞子47从管20被推出到PCR容器30中时成为液滴状，另 夕卜，由于比重比油大，所以反应液液滴47沉降。利用外部的加热器在PCR容器30形成高温 区域36A和低温区域36B，反复使筒1整体与加热器一起上下翻转时，反应液液滴47在高温 区域36A与低温区域36B之间交替移动而对反应液液滴47实施2阶段的温度处理。
[0038] PCR容器30的材质没有特别限定，例如可以是玻璃、塑料等树脂、金属等。另外，由 于附近具有高温侧加热器65B，所以PCR容器30的材质优选至少具有100°C以上的耐热性。 PCR容器30的材质如果选择透明或半透明的材质，则荧光测定(亮度测定）变得容易，因此 优选。但是，不需要PCR容器30的全部区域为透明或半透明，只要至少与荧光测定器55对 置的部位(例如PCR容器30的底35A)为透明或半透明即可。应予说明，管20的材质可以 与罐3、柱塞10的材质相同。
[0039] 筒1由罐3和筒主体9构成。预先在构成筒1的试剂盒中准备罐3、筒主体9以及 适配器5。通过介由适配器5连接罐3与筒主体9来装配筒1。但是，也可以按将罐3直接 安装于筒主体9的方式构成。
[0040] 在以下的筒1的构成要件的说明中，如图2A所示，以沿长条的筒1的方向为"长边 方向"，以罐3侧为"上游侧"，以PCR容器30侧为"下游侧"。应予说明，有时也将上游侧简 单表示为"上"，将下游侧简单表示为"下"。
[0041] (1)罐
[0042] 图3A?图3D是罐3的说明图。
[0043] 预先在试剂盒中准备的罐3中收容有溶解液41和磁珠7。在罐3的开口安装了 可拆卸的盖3A (参照图3A)。使用5M硫氰酸胍、2%TritonX-100、50mMTris-HCl (ρΗ7·2)作 为溶解液41。操作者取下盖3A，打开罐3的开口（参照图3B)，将附着有病毒的棉棒浸渍于 罐3内的溶解液41中，将病毒采集到溶解液41中（参照图3C)。搅拌罐3内的液体时，可 以在图3C的状态下振荡罐3,但这样溶解液41容易溢出，因此，如图3D所示，优选将带有盖 5A的适配器5安装于罐3的开口后振荡罐3。由此罐3内的物质受到搅拌，病毒粒子被溶 解液41溶解，核酸游离，并且被涂布于磁珠7的二氧化硅吸附核酸。其后，操作者取下安装 于罐3开口的适配器5的盖5A，将罐3介由适配器5安装于筒主体9 (参照图2A)。
[0044] 罐3由具有柔性的树脂构成，罐3可膨胀。柱塞10滑动而从图2A的状态变为图 2B的状态时，罐3膨胀，由此抑制管20内的液体的压力过度上升，抑制管20内的液体被推 出到下游侧。为了使罐3容易膨胀，优选在罐3形成变形部3B。
[0045] 应予说明，提取?扩增核酸的试样并不局限于病毒，也可以是细胞。细胞的来源没 有特别限定，可以是微生物，也可以是高等生物的组织片、血液等。
[0046] 另外，溶解液只要含有促溶物质就没有特别限定，出于破坏细胞膜或使细胞中含 有的蛋白质变性的目的，可以含有表面活性剂。作为该表面活性剂，只要是通常用于从细胞 等提取核酸的表面活性剂，就没有特别限定，具体而言，可举出Triton-X等Triton系表面 活性剂、T Ween20等Tween系表面活性剂这样的非离子型表面活性剂，N-月桂酰肌氨酸钠 (SDS)等阴离子型表面活性剂，特别优选使非离子型表面活性剂为0. 1?2%的范围来使用。 此外，溶解液中优选含有2-巯基乙醇或二硫苏糖醇等还原剂。溶解液可以是缓冲液，优选 为pH6?8的中性缓冲液。考虑这些因素，具体而言，优选含有3?7M的胍盐、0?5%的非 离子型表面活性剂、〇?〇. 2mM的EDTA、0?0. 2M的还原剂等。
[0047] 促溶物质只要是在水溶液中产生促溶离子(离子半径大的1价阴离子)，具有增加 疏水性分子的水溶性的作用，有助于核酸对固相载体的吸附的物质，就没有特别限定。具体 而言，可举出硫氰酸胍盐、盐酸胍盐、碘化钠、碘化钾、高氯酸钠等，其中，优选蛋白质变性作 用强的硫氰酸胍或盐酸胍。这些促溶物质的使用浓度因各物质不同而异，例如，使用硫氰酸 胍时，优选在3?5. 5M的范围使用，使用盐酸胍时，优选在5M以上使用。
[0048] 另外，采集试样的器具没有特别限定，根据用途选择刮刀、棒、刮板等代替棉棒即 可。
[0049] 罐3的内容积没有特别限定，例如，可以为0. lmL?100mL。罐3的材质没有特别 限定，例如可以为玻璃、塑料等树脂、金属等。特别是，如果选择透明的玻璃、树脂作为罐的 材质，则能够从罐3的外部观察内部，因此更优选。应予说明，罐3与各管20可以一体成型， 也可拆装。如果利用橡胶、弹性体、高分子等具有柔软性的材质作为罐3的材质，则通过在 将盖安装于罐3的状态下使罐3变形，能够对罐3的内部加压。由此，能够从管的内部向外 部，从管的前端侧推出管20的内容物。
[0050] (2)筒主体
[0051] 筒主体9具有柱塞10、管20、以及PCR容器30。
[0052] (2-1)柱塞
[0053] 以下，参照图2A?图2C对柱塞10进行说明。
[0054] 柱塞10是从作为注射器发挥功能的管20的下游侧推出液体的可动式的推杆。柱 塞10具有将管20内的规定量的液体从管20的末端向PCR容器30推出的功能。另外，柱 塞10也具有介由适配器5安装罐3的功能。
[0055] 柱塞10具有筒状部11和棒状部12。筒状部11设置于罐3侧(上游侧)，棒状部 12设置于管20侧(下游侧)。棒状部12从筒状部11的下游侧的内壁被板状的2个凸缘13 支撑。棒状部12的下游侧从筒状部11突出到下游侧。
[0056] 筒状部11在上游侧和下游侧开口，筒状部11的内壁成为液体的通路。适配器5 与筒状部11的上游侧(罐3侧）的开口嵌合。对于预先在试剂盒中准备的筒主体9的柱塞 10而言，可在筒状部11的上游侧的开口安装能取下的盖。筒状部11的下游侧的开口位于 管20的上注射器21的内部。从筒状部11的上游侧的开口导入的磁珠7通过筒状部11的 内部，穿过凸缘13的表面和背面，从筒状部11的下游侧的开口出来，被导入到管20的上注 射器21。
[0057] 筒状部11的下游侧与管20的上注射器21的内壁嵌合。筒状部11内接于管20 的上注射器21，并且能够相对于上注射器21沿长边方向滑动。
[0058] 在筒状部11的上游侧的开口的周围形成了安装适配器5的安装台11A。另外，安 装台11A也是按压柱塞10时被按压的部位。通过按压安装台11A，从而柱塞10相对于管 20滑动，从图2A的状态变为图2C的状态。柱塞10向下游侧移动时，安装台11A与管20的 上缘接触(参照图2C)。换言之，柱塞10的安装台11A与管20的上缘的间隔成为柱塞10的 滑动长度。
[0059] 棒状部12在初始状态下位于管20的上注射器21的内部，与下注射器22分离(参 照图2A)。如果柱塞10相对于管20滑动，则棒状部12被插入管20的下注射器22,棒状部 12内接于下注射器22,并且相对于下注射器22向下游方向滑动(参照图2B和图2C)。
[0060] 棒状部12的与长边方向正交的截面的形状是圆形。但是，棒状部12的截面形状 只要能够与管20的下注射器22的内壁嵌合，则可以是圆、椭圆、多边形，没有特别限定。
[0061] 在棒状部12的下游侧的端部形成有密封部件12A。密封部件12A与下注射器22 嵌合时，可防止下游侧的管20内的液体向上注射器21逆流。而且，将柱塞10从图2B的状 态按压至图2C的状态时，期间以与密封部件12A在下注射器22内滑动的体积相当的量，管 20内的液体从下游侧被推出。
[0062] 应予说明，密封部件12A在下注射器22内滑动的体积(管20内的液体从下游侧被 推出的量)比管20内的反应液塞子47和第3油塞子48的总计多。由此，能够以管20中不 残留反应液的方式将管20内的液体推出。
[0063] 柱塞10的材质没有特别限定，例如可以是玻璃、塑料等树脂、金属等。另外，柱塞 10的筒状部11和棒状部12可以由相同的材质一体形成，也可以由不同材质形成。在此，将 筒状部11和棒状部12分别用树脂成型，介由凸缘13将筒状部11与棒状部12结合，由此 形成柱塞10。
[0064] 在柱塞10的内部预先收容有构成第1塞子的油42和构成第2塞子的第1清洗液 43。由于柱塞10内的油42的比重比第1清洗液43小，所以将罐3安装于筒主体9时，如 果使柱塞10的安装台11A朝上而坚起筒主体9,则如图2A所示，油42被配置在罐3内的液 体与筒主体9的第1清洗液43之间。作为油42,使用2CS硅油，作为第1清洗液43,使用 8M 盐酸胍、0· 7%TritonX-100。
[0065] 应予说明，第1清洗液43只要是与构成第1塞子的油42和构成第3塞子的油44 混合时均发生相分离的液体即可。第1清洗液43优选为水或低盐浓度水溶液，在为低盐浓 度水溶液时，优选为缓冲液。低盐浓度水溶液的盐浓度优选lOOmM以下，更优选50mM以下， 最优选10mM以下。另外，低盐浓度水溶液的下限没有特别限制，优选为0. ImM以上，进一步 优选为〇· 5mM以上，最优选为ImM以上。另外，该溶液可以含有Triton、Tween、SDS等表面 活性剂，pH值没有特别限定。用于制备缓冲液的盐没有特别限定，但优选使用Tris、HEPES、 PIPES、磷酸等的盐。此外，该清洗液优选含有不阻碍核酸对载体的吸附、逆转录反应、PCR反 应等的量的醇。此时，醇浓度没有特别限定，可以是70%以下，也可以是60%以下，也可以是 50%以下，也可以是40%以下，也可以是30%以下，也可以是20%以下，也可以是10%以下，优 选为5%以下或2%以下，进一步优选为1%以下或0. 5%以下，最优选为0. 2%以下或0. 1%以 下。
[0066] 应予说明，第1清洗液43中可以含有促溶剂。例如，如果第1清洗液43中含有盐 酸胍，则能够维持或强化吸附于粒子等的核酸的吸附，并且能够清洗粒子等。作为含有盐酸 胍时的浓度，例如可以为3mol/L?10m 〇l/L，优选为5mol/L?8mol/L。只要盐酸胍的浓度 为该范围内，就能够使粒子等所吸附的核酸更稳定地吸附，并且能够清洗其它夹杂物等。
[0067] (2-2)管
[0068] 以下，参照图2A?图2C对管20进行说明。
[0069] 管20是能够使液体沿长边方向流通的筒状的形状。管20具有上注射器21、下注 射器22以及毛细管23,各部的内径阶段性地不同。
[0070] 上注射器21是能够使液体沿长边方向流通的筒状的形状。柱塞10的筒状部11 可滑动地内接于上注射器21的内壁，上注射器21作为与柱塞10的筒状部11相对的注射 器发挥功能。
[0071] 下注射器22是能够使液体沿长边方向流通的筒状的形状。下注射器22的内壁能 够与柱塞10的棒状部12的密封部件12A可滑动地嵌合，下注射器22作为与柱塞10的棒 状部12相对的注射器发挥功能。
[0072] 毛细管23是能够使液体沿长边方向流通的细管状的形状。毛细管23的内径是 液体能够维持塞子的形状的大小，在此为1. 〇mm。在毛细管23的末端(管20的下游侧的端 部)，与其余部分相比内径变小，在此为〇. 5mm。将毛细管23的末端的内径设定为小于后述 的液滴状的反应液的直径（1. 5?2. 0mm)。由此，将反应液塞子47从毛细管23的末端推出 时，能够避免液滴状的反应液附着于毛细管23的末端，或者逆行至毛细管内。
[0073] 应予说明，毛细管23只要在内部具有空腔且具有能够使液体沿长边方向流通的 筒状的形状即可，在长边方向可以弯曲，但优选为直线状。对于管的内部的空腔，只要液体 在管内能够维持塞子的形状，大小、形状就均没有特别限定。另外，管内的空腔的大小、与长 边方向垂直的截面的形状可以沿着管的长边方向变化。
[0074] 管的外形的与长边方向垂直的截面的形状也没有限定。此外，管的壁厚(从内部的 空腔的侧面到外部的表面的长度）也没有特别限定。管为圆筒状时，其内径（内部的空腔的 与长边方向垂直的截面的圆的直径)例如可以为〇. 5mm?2_。如果管的内径在该范围内， 则对于管的材质、液体的种类而言，在广泛的范围内都能容易地形成液体的塞子。前端优选 进一步变细而成为锥形，可以为0. 2mm?1mm。而且，通过减小毛细管23的末端的内径(毛 细管23的开口直径)，从而能够抑制在PCR容器30内反应液液滴47吸附于毛细管23的开 口而难以分离。但是，如果使毛细管23的末端的内径过小，则会形成许多小的反应液液滴 47。应予说明，如果毛细管23的末端以外的部分与末端同样地细径化，则从确保各塞子的 体积的必要性考虑，筒1会变长，因此不优选。
[0075] 毛细管23在内部从上游侧开始依次具备第1油塞子44、第2清洗液塞子45、第2 油塞子46、反应液塞子47、第3油塞子48。换言之，在水溶性的塞子(第2清洗液塞子45或 反应液塞子47)的两侧配置有油塞子。
[0076] 应予说明，在第1油塞子44的上游侧的上注射器21和下注射器22中预先收容 有油42和清洗液43 (参照图2A)。上注射器21和下注射器22的内径比毛细管23的内径 大，在上注射器21和下注射器22中无法将液体（油42和清洗液43)维持为像塞子这样的 柱状，但第1油塞子44被毛细管23保持为塞子的形状，因此可抑制构成第1油塞子44的 油向上游侧移动。
[0077] 第2清洗液塞子45可以由5mM Tris盐酸缓冲液构成，第2清洗液可以是基本上 与第1清洗液中所述的成分相同的构成，可以与第1清洗液相同，也可以不同，但是优选事 实上不含有促溶物质的溶液。这是为了不向之后的溶液中带入促溶物质。如上所述，该清 洗液也优选含有不阻碍核酸对载体的吸附、逆转录反应、PCR反应等的量的醇。此时，醇浓 度没有特别限定，可以为70%以下，也可以为60%以下，也可以为50%以下，也可以为40%以 下，也可以为30%以下，也可以为20%以下，也可以为10%以下，但是优选为5%以下或2%以 下，进一步优选为1%以下或〇. 5%以下，最优选为0. 2%以下或0. 1%以下。
[0078] 第2清洗液塞子45可以由被油的塞子分割成的多个塞子构成。第2清洗液塞子 45由多个塞子构成时，各塞子的液体可以相同也可以不同。其中，只要至少具有一个清洗液 的塞子，其它塞子的液体就没有特别限定，但优选全部塞子为清洗液。第2清洗液塞子45 被分割的数量，例如可以考虑管20的长度、清洗的对象等而适当地设定。
[0079] 反应液塞子47由反应液构成。反应液是指使吸附于核酸结合性固相载体的核酸 从载体溶出到溶液中并进行逆转录反应和聚合酶反应的液体。因此，预先将核酸溶出后的 反应液制备成直接被用于逆转录反应和聚合酶反应的缓冲溶液。
[0080] 为了进行逆转录反应，反应液含有逆转录酶、dNTP以及逆转录酶用引物(寡聚核苷 酸)，此外，为了进行聚合酶反应，可以进一步含有DNA聚合酶和DNA聚合酶用引物(寡聚核 苷酸)，还可以含有TaqMan探针、分子信标（Molecular Beacon)、循环探针等实时PCR用探 针、SYBR绿等嵌入剂用荧光色素。此外，作为反应阻碍防止剂，优选含有BSA (牛血清白蛋 白）或明胶。溶剂优选为水，更优选事实上不含有乙醇、异丙醇等有机溶剂和促溶物质的溶 齐U。另外，优选含有盐，以成为逆转录酶用缓冲液和/或DNA聚合酶用缓冲液。用于形成缓 冲液的盐只要不阻碍酶反应就没有特别限定，优选使用T riS、HEPES、PIPES、磷酸等的盐。逆 转录酶没有特别限定，例如，可以使用来自禽成髓细胞瘤病毒（Avian Myeloblast Virus)、 Ras相关病毒2型（Ras Associated Virus2型)、莫洛尼小鼠白血病病毒（Mouse Molony Murine Leukemia Virus)、人类免疫缺陷病毒 1 型（Human Immunodefficiency Virusl 型） 的逆转录酶等，但优选耐热性的酶。DNA聚合酶也没有特别限定，但优选耐热性的酶、PCR用 酶，例如有Taq聚合酶、Tfi聚合酶，Tth聚合酶或者它们的改进型等非常大量的市售品，但 优选可进行热启动的DNA聚合酶。
[0081] 反应液中含有的dNTP、盐的浓度只要是适合所使用的酶的浓度即可，通常使dNTP 为10?1000 μ Μ、优选为100?500 μ M，使Mg2+为1?lOOmM、优选为5?10mM，使Cl-为 1?2000mM、优选为200?700mM即可，总离子浓度没有特别限定，可以是高于50mM的浓度， 优选为高于l〇〇mM的浓度，更优选为高于120mM的浓度，进一步优选为高于150mM的浓度， 进一步优选为高于200mM的浓度。上限优选为500mM以下，更优选为300mM以下，进一步优 选为200mM以下。引物用寡聚核苷酸各自使用0.1?10 μΜ，优选使用0.1?ΙμΜ。如果 BSA或明胶的浓度为lmg/mL以下，则防止反应阻碍的效果小,如果为10mg/mL以上,则有可 能阻碍逆转录反应或其后的酶反应，因此优选为1?10mg/mL。使用明胶时，其来源可例示 牛皮、猪皮、牛骨，但没有特别限定。明胶难以溶解时，可通过加热而使其溶解。
[0082] 例如，作为反应液，可以使用以下的溶液。
[0083]
[0084] 0.2u///L AMV 逆转录酶（Mi丨:φ?η Gene ) 25，ι/"Ι, Γ;(、ιι(' liiq Ν? P(:K 酶（Nippon (>iu、） 0.5mM dNTP 1.0//M 物（正向） 1.0//M 引物（反向> 0.5//Μ 探针（Taq man ) 4.0m?/mL BSA X 1 缓冲液（MgCh 7mfVh Tris pH9.0 25mfVl; ΚΧ? 50m\1>
[0085] 反应液塞子47的体积没有特别限定，可以将吸附有核酸的粒子等的量等作为指 标来适当地设定。例如，粒子等的体积为0. 5 μ L时，反应液塞子47的体积只要为0. 5 μ L 以上就足够，优选为〇. 8 μ L?5 μ L，进一步优选为1 μ L?3 μ L。反应液塞子的体积只要 为这些范围，例如，即便使核酸结合性固相载体的体积为0. 5 μ L，也能够将核酸从载体充分 溶出。
[0086] 毛细管23的下游部被插入PCR容器30。由此，通过将管20内的反应液塞子47从 管20推出，从而能够将反应液推出至PCR容器30。
[0087] 通过使毛细管23的外壁的环状的凸部与PCR容器30的内壁接触而形成上密封 部。另外，通过使上密封部的下游侧的毛细管23的外壁与PCR容器30的内壁接触而形成 下密封部。关于上密封部与下密封部，在后面述及。
[0088] 管20进一步具有固定爪25和导板26。图4是固定爪25和导板26与安装部62 的说明图。
[0089] 固定爪25是将筒1固定于安装部62的部件。如果筒1被插入安装部62到固定 爪25钩挂住为止，则筒1相对于安装部62被固定在正常的位置。换言之，筒1相对于安装 部62位于异常的位置时，固定爪25不钩挂在安装部62上。
[0090] 导板26是在将筒1安装于PCR装置100的安装部62时引导筒1的部件。在PCR 装置100的安装部62形成有导轨63A，管20的导板26沿着导轨63A进行引导，同时筒1 被插入安装部62而固定。筒1是长条的形状，但由于筒1边由导板26引导，边被插入安装 部62,所以容易将筒1相对于安装部62固定在正常的位置。
[0091] 固定爪25和导板26是从毛细管23的左右突出的板状的部件。用磁铁使管20内 的磁珠7移动时，使磁铁从板状的固定爪25、导板26的垂直方向靠近。由此，能够使磁铁 与管20内的磁珠7的距离拉近。但是，只要使磁铁与管20内的磁珠7的距离拉近，固定爪 25和导板26就可以是其它形状。
[0092] (2_3)PCR 容器
[0093] 图5A和图5B是PCR容器30的周边的说明图。图5A是初始状态的说明图。图5B 是按压柱塞10后的状态的说明图。以下，同时参照图2A?图2C对PCR容器30进行说明。
[0094] PCR容器30是收入从管20推出的液体的容器，并且是热循环处理时收容反应液液 滴47的容器。
[0095] PCR容器30具有密封形成部31和流路形成部35。密封形成部31是插入管20的 部分，是抑制从流路形成部35溢出的油泄漏到外部的部位。流路形成部35是密封形成部 31下游侧的部分，是形成反应液液滴47移动的流路的部位。PCR容器30以密封形成部31 的上密封部34A和下密封部34B这2个位置固定于管20。
[0096] 密封形成部31具有油收容部32和阶梯部33。
[0097] 油收容部32是筒状的部位，作为收容从流路形成部35溢出的油的容器发挥功能。 在油收容部32的内壁与管20的毛细管23的外壁之间有间隙，该间隙成为收容从流路形成 部35溢出的油的油收容空间32A。油收容空间32A的体积比柱塞10的密封部件12A在管 20的下注射器22中滑动的体积大。
[0098] 通过使油收容部32的上游侧的内壁与管20的环状的凸部接触而形成上密封部 34A。上密封部34A是允许空气通过，并且抑制油收容空间32A的油泄漏到外部的密封部件。 上密封部34A以油因油的表面张力而不泄漏的程度形成通气口。上密封部34A的通气口 可以是管20的凸部与油收容部32的内壁之间的间隙，也可以是形成于管20的凸部的孔、 槽或切口。另外，也可以利用吸收油的油吸收材形成上密封部34A。
[0099] 阶梯部33是设置于油收容部32的下游侧的具有阶梯的部位。阶梯部33的下游 部的内径比油收容部32的内径小。阶梯部33的内壁与管20的毛细管23的下游侧的外 壁接触。通过阶梯部33的内壁与管20的外壁接触而形成下密封部34B。下密封部34B是 允许流路形成部35的油流向油收容空间32A，并且又抵抗该流动的密封部件。因下密封部 34B的压力损失而导致流路形成部35的压力比外部大气压高，因此热循环处理时即使加热 流路形成部35的液体，也难以在流路形成部35的液体中产生气泡。
[0100] 流路形成部35是管状的部位，成为形成反应液液滴47移动的流路的容器。流路 形成部35中填充有油。流路形成部35的上游侧被管20的末端封闭，管20的末端朝向流 路形成部35开口。流路形成部35的内径比管20的毛细管23的内径大，比反应液塞子47 的容量的液体成为球状时的外径大。流路形成部35的内壁优选具有水溶性的反应液不附 着的程度的疏水性。
[0101] 应予说明，流路形成部35的上游侧被外部的高温侧加热器65B加热至相对高的温 度(例如约95度)，形成高温区域36A。流路形成部35的下游侧被外部的低温侧加热器65C 加热至相对低的温度(例如约60°C)，形成低温区域36B。PCR容器30的底35A (下游侧的 端部）被包含于低温区域36B。由此，流路形成部35内的液体中形成温度梯度。
[0102] 如图5A所示，初始状态下，PCR容器30的流路形成部35中填充有油。油的界面 位于油收容空间32A的较下游侧。油收容空间32A中的油界面上游侧的体积比柱塞10的 密封部件12A在管20的下注射器22滑动的体积大。
[0103] 如图5B所示，按压柱塞10时，管20内的液体被推出至流路形成部35。由于流路 形成部35中预先填充有油，且管20内的液体被推出至其中，所以气体不流入流路形成部 35。
[0104] 按压柱塞10时，首先，管20的第3油塞子48流入流路形成部35,流入部分的油从 流路形成部35流入油收容空间32A，油收容空间32A的油界面上升。此时，因下密封部34B 的压力损失而导致流路形成部35的液体的压力变高。第3油塞子48从管20被推出后，反 应液塞子47从管20流入流路形成部35。由于流路形成部35的内径比毛细管23的内径 大，所以在管20内为塞子状(柱状）的反应液塞子47在流路形成部35的油中成为液滴状。 应予说明，由于油收容空间32A中的初始状态下的油界面上游侧的体积比柱塞10的密封部 件12A在管20的下注射器22中滑动的体积大，所以油不从油收容空间32A溢出即可。
[0105] <PCR 装置 100>
[0106] 图6A是PCR装置100的内部结构的立体图。图6B是PCR装置100的主要结构的 侧面图。图7是PCR装置100的框图。PCR装置100使用筒1进行核酸溶出处理和热循环 处理。
[0107] 在以下的PCR装置100的说明中，如图所示，定义上下、前后、左右。即，以将PCR装 置100的基座51设置成水平时的垂直方向为"上下方向"，根据重力方向定义"上"和"下"。 另外，以筒1的旋转轴的轴向为"左右方向"，以与上下方向和左右方向垂直的方向为"前后 方向"。从筒1的旋转轴看，以筒插入口 53A侧为"后"、相反侧为"前"。以从前侧看时的左 右方向的右侧为"右"、左侧为"左"。
[0108] PCR装置100具有旋转机构60、磁铁移动机构70、按压机构80、荧光测定器55以 及控制器90。
[0109] (1)旋转机构60
[0110] 旋转机构60是使筒1和加热器旋转的机构。通过旋转机构60使筒1和加热器上 下翻转，从而反应液液滴47在PCR容器30的流路形成部35内移动，进行热循环处理。
[0111] 旋转机构60具有旋转体61和旋转用马达66。图8A是旋转体61的说明图。图 8B是在旋转体61的安装部62安装有筒1的状态的说明图。
[0112] 旋转体61是能够以旋转轴为中心进行旋转的部件。旋转体61的旋转轴被在基座 51固定的支撑台52所支撑。旋转体61中设有安装筒1的安装部62和加热器(溶出用加 热器65A、高温侧加热器65B以及低温侧加热器65C)。旋转体61旋转时，能够在维持筒1 与加热器的位置关系的状态下使筒1上下翻转。旋转用马达66是使旋转体61旋转的动力 源。旋转用马达66根据来自控制器90的指示使旋转体61旋转至规定的位置。可以在旋 转用马达66与旋转体61之间夹设齿轮等传递机构。
[0113] 安装部62是安装筒1的部位。安装部62具有形成了凹口的固定部63。另外，形 成于加热器(溶出用加热器65A、高温侧加热器65B以及低温侧加热器65C)的插入孔64A也 作为安装部62发挥功能。通过在PCR容器30被插入插入孔64A的状态下筒1的固定爪25 钩挂在固定部63的凹口，从而筒1被安装于旋转体61 (参照图4)。在此，加热器的一部分 兼作安装部62,但安装部62与加热器也可以分开设置。另外，安装部62介由溶出用加热器 65A被间接固定于旋转体61，但也可以被直接设置于旋转体61。另外，安装部62可安装的 筒1的数量不限于1个，也可以是多个。
[0114] 在固定部63沿上下方向形成有导轨63A (参照图4)。导轨63A将筒1的导板26 边在前后方向限制，边引导到插入方向。由于导轨63A边引导导板26,边使筒1插入安装部 62,所以将筒1的PCR容器30引导至插入孔64A，将筒1相对于安装部62固定在正常的位 置。
[0115] PCR装置100具备溶出用加热器65A、作为PCR用加热器的高温侧加热器65B和低 温侧加热器65C。各加热器由未图示的发热源与加热块构成。发热源例如为筒式加热器，被 插入加热块。加热块例如为导热系数高的铝等金属，抑制热不均，用来自发热源的热加热筒 1内的液体。另外，为了不吸附使磁珠7移动的磁铁71，加热块优选为非磁性体。
[0116] 溶出用加热器65A是将筒1的反应液塞子47加热的加热器。如果筒1被固定在 正常的位置，则溶出用加热器65A与管20的反应液塞子47对置。例如，通过溶出用加热器 65A将反应液塞子47加热至约50°C，从而促进核酸从磁珠游离。
[0117] 高温侧加热器65B是加热PCR容器30的流路形成部35的上游侧的加热器。如 果筒1被固定在正常的位置，则高温侧加热器65B与PCR容器30的流路形成部35的上游 侦U (高温区域36A)对置。例如，高温侧加热器65B将PCR容器30的流路形成部35的上游 侧的液体加热至约90?100°C。
[0118] 低温侧加热器65C是加热PCR容器30的流路形成部35的底35A的加热器。如果 筒1被固定在正常的位置，则低温侧加热器65C与PCR容器30的流路形成部35的下游侧 (低温区域36B)对置。例如，低温侧加热器65C将PCR容器30的低温区域36B的液体加热 至约50?75 °C。
[0119] 在高温侧加热器65B与低温侧加热器65C之间配置有间隔件65D。间隔件6?抑 制高温侧加热器65B与低温侧加热器65C之间的热传导。另外，间隔件65D也可以用于正 确地规定高温侧加热器65B与低温侧加热器65C之间的距离。由此，利用高温侧加热器65B 和低温侧加热器65C在PCR容器30的流路形成部35内的液体中形成温度梯度。
[0120] 分别构成溶出用加热器65A、高温侧加热器65B以及低温侧加热器65C的加热块 中分别形成有构成插入孔64A的贯通孔。PCR容器30的底35A的外壁从低温侧加热器65C 的插入孔64A的下侧开口露出。荧光测定器55从插入孔64A的下侧的开口测定反应液液 滴47的亮度。
[0121] 应予说明，在高温侧加热器65B和低温侧加热器65C中分别设置有温度控制装置， 可以设定成适合于各聚合酶反应的温度。
[0122] (2)磁铁移动机构70
[0123] 磁铁移动机构70是使磁铁71移动的机构。磁铁移动机构70使筒1内的磁珠7 被磁铁71吸引，并且通过使磁铁71移动而使磁珠7在筒1内移动。磁铁移动机构70具有 一对磁铁71、升降机构73以及摇动机构75。
[0124] 磁铁71是吸引磁珠7的部件。作为磁铁71，可以使用永磁铁、电磁铁等，但是在此 使用不产生发热等的永磁铁。一对磁铁71以在前后方向对置、上下方向的位置大致相同的 方式被臂72保持。各磁铁71可以从被安装于安装部62的筒1的前侧或后侧对置。一对 磁铁71可以从前后方向夹持被安装于安装部62的筒1。通过使磁铁71从与筒1的固定 爪25或导板26被设置的方向（在此是左右方向）正交的方向（在此是前后方向）对置，从而 能够拉近筒1内的磁珠7与磁铁71的距离。
[0125] 升降机构73是使磁铁71在上下方向移动的机构。由于磁铁71吸引磁珠7,所以 只要配合磁珠7的移动而使磁铁71在上下方向移动，就能够在上下方向引导筒1内的磁珠 7。
[0126] 升降机构73具有在上下方向移动的滑架73A和升降用马达73B。滑架73A是能 够在上下方向移动的部件，由被设置于具有筒插入口 53A的侧壁53的滑架引导部73C在上 下方向可移动地引导。由于滑架73A中安装有保持一对磁铁71的臂72,所以如果滑架73A 在上下方向移动，则磁铁71在上下方向移动。升降用马达73B是使滑架73A在上下方向移 动的动力源。升降用马达73B根据来自控制器90的指示而使滑架73A移动至上下方向的 规定的位置。升降用马达73B用带73D和滑轮73E使滑架73A在上下方向移动，但也可以 利用其它传递机构使滑架73A在上下方向移动。
[0127] 滑架73A位于最上方的位置(退避位置)时，磁铁71位于筒1的上侧。滑架73A位 于退避位置时，即使筒1旋转，升降机构73也不与筒1接触。另外，升降机构73能够使滑 架73A的位置下降至磁铁71与反应塞子对置的位置。由此，升降机构73能够使磁铁71移 动以使罐3内的磁珠7移动至反应塞子的位置。
[0128] 摇动机构75是使一对磁铁71在前后方向摇动的机构。使一对磁铁71在前后方 向摇动时，各磁铁71与筒1的间隔交错地改变。由于磁珠7被距离近的磁铁71吸引，所以 通过使一对磁铁71在前后方向摇动，筒1内的磁珠7在前后方向移动。
[0129] 摇动机构75具有摇动用马达75A和齿轮。摇动用马达75A和齿轮被设置于滑架 73A，能够与滑架73A-起在上下方向移动。摇动用马达75A的动力介由齿轮被传递至臂 72,由此保持磁铁71的臂72相对于滑架73A以摇动旋转轴75B为中心进行旋转。为了防 止磁铁71与筒1接触而使筒1损伤，摇动机构75在磁铁71不与筒1接触的范围内使磁铁 71摇动。
[0130] 摇动旋转轴75B是臂72的旋转轴。摇动旋转轴75B与左右方向平行以使磁铁71 能够在前后方向摇动。从右或左侧看摇动旋转轴75B时，摇动旋转轴75B与筒1相比偏向 前侧或后侧地配置。由此，滑架73A向下移动时，能够避免筒1与臂72的接触。应予说明， 只要能够使磁铁71在前后方向摇动，则摇动旋转轴75B也可以是与上下方向平行的轴。
[0131] (3)按压机构80
[0132] 按压机构80是按压筒1的柱塞10的机构。通过用按压机构80按压柱塞10,从而 筒1的反应液塞子47和油塞子被推入PCR容器30,并在PCR容器30的油中形成反应液液 滴47。
[0133] 按压机构80具有柱塞用马达81和杆82。柱塞用马达81是使杆82移动的动力 源。杆82是按压筒1的柱塞10的安装台11A的部件。不按压筒1的罐3而按压安装台 11A的理由是罐3可膨胀、由具有柔性的树脂构成。在罐3不发生变形的情况下，按压机构 80也可以通过按压罐3来按压柱塞10。
[0134] 杆82按压柱塞10的方向不是上下方向而是相对于上下方向倾斜45度。因此，利 用按压机构80按压柱塞10时，PCR装置100在使旋转体61旋转45度而使筒1的长边方 向与杆82的移动方向一致后，使杆82移动。由于杆82按压柱塞10的方向相对于上下方 向倾斜45度，所以容易以不干扰升降机构73的方式配置按压机构80。另外，由于杆82按 压柱塞10的方向相对于上下方向倾斜45度，所以能够减小PCR装置100在上下方向的尺 寸。
[0135] (4)荧光测定器55
[0136] 荧光测定器55是测定PCR容器30的反应液液滴47的亮度的测定器。荧光测定 器55以与筒1的PCR容器30的底35A对置的方式被配置在旋转体61的下侧。荧光测定 器55从低温侧加热器65C的插入孔64A的下侧开口测定位于PCR容器30的底35A的反应 液液滴47的亮度。
[0137] (5)控制器 90
[0138] 控制器90是进行PCR装置100的控制的控制部。控制器90具有例如CPU等处理 器和ROM、RAM等存储装置。在存储装置中存储有各种程序和数据。另外，存储装置提供展 开程序的区域。处理器通过执行被存储于存储装置的程序来实现各种处理。
[0139] 例如，控制器90控制旋转用马达66,使旋转体61旋转至规定的旋转位置。旋转机 构60中设置有未图示的旋转位置传感器，控制器90根据旋转位置传感器的检测结果来使 旋转用马达66驱动·停止。
[0140] 另外，控制器90控制加热器(溶出用加热器65A、高温侧加热器65B以及低温侧加 热器65C)，使各加热器发热。在构成加热器的加热块中设置有未图不的温度传感器，控制器 90根据温度传感器的检测结果来控制筒式加热器的开?关。
[0141] 另外，控制器90控制升降用马达73B而使磁铁71在上下方向移动。在PCR装置 100中设置有检测滑架73A的位置的未图示的位置传感器，控制器90根据位置传感器的检 测结果来使升降用马达73B驱动·停止。
[0142] 另外，控制器90控制摇动用马达75A，使磁铁71在前后方向摇动。在PCR装置100 中设置有检测保持磁铁71的臂72的位置的位置传感器，控制器90根据位置传感器的检测 结果来使摇动用马达75A驱动·停止。
[0143] 另外，控制器90控制荧光测定器55,测定PCR容器30的反应液液滴47的亮度。 控制器90在荧光测定器55与筒1的PCR容器30的底35A对置时，使荧光测定器55进行 测定。测定结果被保存在存储装置中。
[0144] <动作说明>
[0145] (1)筒1的安装动作
[0146] 图9A?图9D是安装筒1时的PCR装置100的状态的说明图。图9A是安装筒1前 的初始状态的说明图。图9B是待机状态的说明图。图9C是刚刚安装筒1之后的说明图。 图9D是筒1在安装状态下的初始状态的说明图。
[0147] 如图9A所示，在安装筒1前的初始状态中，安装部62的安装方向为上下方向。在 以下说明中，以该状态的旋转体61的旋转位置为基准（0度)，从右看时以逆时针旋转为正 方向来表示旋转体61的旋转位置。
[0148] 如图9B所示，控制器90驱动旋转用马达66,使旋转体61旋转-30度。在该状态 下，操作者将筒1从筒插入口 53A插入安装部62。此时，导板26被导轨63A引导，同时筒1 被插入安装部62,因此筒1的PCR容器30被引导至安装部62的插入孔64A。操作者插入 筒1，至筒1的固定爪25钩挂在固定部63的凹口为止。由此，筒1相对于安装部62被固定 在正常的位置。假定在PCR容器30没被插入插入孔64A，筒1相对于安装部62位于异常的 位置时，筒1的固定爪25没有钩挂在固定部63的凹口，所以操作者能够识别筒1位于异常 的位置。
[0149] 如图9C所示，如果筒1相对于安装部62被固定在正常的位置，则管20的反应液 塞子47与溶出用加热器65A对置，PCR容器30的流路形成部35的上游侧（高温区域36A) 与高温侧加热器65B对置，PCR容器30的流路形成部35的下游侧(低温区域36B)与低温侧 加热器65C对置。由于旋转体61中设置有安装部62和加热器，所以即使旋转体61旋转， 筒1与加热器的位置关系也保持原样。
[0150] 筒1被安装于安装部62后，如图9D所示，控制器90使旋转体61旋转30度，使旋 转体61的位置返回到基准位置。应予说明，控制器90可以通过未图示的传感器来检测筒 1被安装于安装部62,也可以通过操作者的输入操作来检测。
[0151] (2)核酸溶出处理
[0152] ?磁铁71的上下移动
[0153] 图10是使磁铁71向下方移动时的磁珠7的动作的示意图。筒1内的磁珠7被磁 铁71吸引。因此，如果磁铁71在筒1的外部移动，则筒1内的磁珠7与磁铁71-起移动。
[0154] 图11A?图11C是核酸溶出处理的说明图。图11A是核酸溶出处理前的PCR装置 100的状态的说明图。图11B是使磁铁71移动至反应液塞子47时的PCR装置100的状态 的说明图。图11C是提起磁铁71时的PCR装置100的状态的说明图。
[0155] 如图11A所示，初始状态的筒1将罐3位于上侧，长边方向与垂直方向平行。在该 状态下，如图2A所示，筒1从上方依次具备：含有磁珠7的溶解液41 (罐3)、油42 (柱塞 10)、清洗液43 (管20的上游侧)、第1油塞子44 (毛细管23)、第2清洗液塞子45 (毛细管 23)、第2油塞子46 (毛细管23)、反应液塞子47 (毛细管23)、第3油塞子48 (毛细管23)、 油（PCR容器30)。
[0156] 如图11A所示，在初始状态下，滑架73A位于最上方的位置(退避位置)，磁铁71位 于筒1的上侧。从该状态，控制器90使升降用马达73B驱动，使滑架73A缓慢地向下方移 动，使磁铁71缓慢地向下方移动。应予说明，由于筒1的长边方向与垂直方向平行，因此磁 铁71沿着筒1移动。
[0157] 如果磁铁71向下方移动，则磁铁71与罐3对置，罐3内的磁珠7被磁铁71吸引。 控制器90以磁珠7能够与磁铁71 -起移动的程度的速度使滑架73A向下方移动。
[0158] 如果磁铁71从与罐3对置的位置(罐3的高度）移动至与柱塞10对置的位置(柱 塞10的高度)，则磁珠7通过柱塞10的筒状部11的上游侧的开口，并通过罐3内的溶解液 41与筒主体9的上游侧的油42的界面。由此，结合有核酸的磁珠7被导入筒主体9。由于 磁珠7通过与油42的界面时，溶解液41被油42洗掉，所以溶解液41的成分不易被带入油 42中。由此，能够抑制溶解液41的成分混入清洗液塞子、反应液塞子47中。
[0159] 如果磁铁71在与柱塞10对置的状态下向下方移动，则磁珠7通过筒状部11的内 部，穿过凸缘13的表面和背面而从筒状部11的下游侧的开口出来，被导入管20的上注射 器21。在此期间，磁珠7在柱塞10内通过油42与清洗液43的界面。如果磁珠7被导入清 洗液43中，则与磁珠7结合的核酸被清洗液43清洗。
[0160] 在该阶段中，由于柱塞10的棒状部12没有被插入管20的下注射器22,所以如果 磁铁71从与上注射器21对置的位置(上注射器21的高度)移动至与毛细管23对置的位置 (毛细管23的高度)，则磁珠7从上注射器21向下注射器22移动，从下注射器22移动至毛 细管23。在毛细管23的上游侧存在第1油塞子44,磁珠7从下注射器22向毛细管23移 动时，磁珠7通过清洗液43与油的界面。此时，由于清洗液43被油洗掉，所以清洗液43的 成分不易被带入油中。由此，能够抑制清洗液43的成分混入第2清洗液塞子45、反应液塞 子47中。
[0161] 如果磁铁71从与第1油塞子44对置的位置(第1油塞子44的高度）移动至与第 2清洗液塞子45对置的位置(第2清洗液塞子45的高度)，则磁珠7通过油与清洗液的界 面。如果磁珠7被导入第2清洗液塞子45中，则与磁珠7结合的核酸被清洗液清洗。
[0162] 如果磁铁71从与第2清洗液塞子45对置的位置(第2清洗液塞子45的高度）移 动至与第2油塞子46对置的位置(第2油塞子46的高度)，则磁珠7通过清洗液与油的界 面。此时，由于清洗液被油洗掉，所以清洗液的成分不易被带入油中。由此，能够抑制清洗 液的成分混入反应液塞子47中。
[0163] 如果磁铁71从与第2油塞子46对置的位置(第2油塞子46的高度）移动至与反 应液塞子47对置的位置(反应液塞子47的高度)，则磁珠7通过第2油塞子46与反应液塞 子47的界面。
[0164] 在磁珠7被导入反应液塞子47之前，控制器90控制溶出用加热器65A而预先将 反应液塞子47加热至约50°C。另外，通过在磁珠7被导入之前预先加热反应液塞子47,从 而能够缩短从磁珠7被导入反应液塞子47到核酸的溶出结束的时间。
[0165] 如图11B所示，如果在磁铁71移动至与反应液塞子47对置的位置(反应液塞子47 的高度)后，控制器90使升降用马达73B停止，使磁铁71在上下方向的移动停止，并在50°C 进行30秒处理，则与磁珠7结合的核酸在反应液塞子47的液体中游离，进行逆转录反应。 通过加热反应液塞子47来促进核酸从磁珠7的溶出和逆转录反应。
[0166] 在反应液塞子47中使核酸溶出后，控制器90使升降用马达73B向与此前相反的 方向驱动，使滑架73A缓慢地向上方移动，使磁铁71缓慢地向上方移动。控制器90以磁珠 7能够与磁铁71 -起移动的程度的速度使滑架73A向上方移动。
[0167] 如果磁铁71从图11B所示的状态向上方移动，则磁珠7从反应液塞子47移动至 第2油塞子46,磁珠7被从反应液塞子47除去。
[0168] 如果磁铁71缓慢地移动至与上注射器21对置的位置，则磁珠7也移动至上注射 器21，磁珠7成为下注射器22的上侧。只要使磁珠7移动至该位置，按压柱塞10时磁珠7 就不会被导入PCR容器30。因此，控制器90可以在从该状态到图11C所示的状态期间，以 磁珠7无法追随磁铁71的移动的程度的速度使滑架73A向上方移动。应予说明，只要按压 柱塞10时磁珠7不会被导入PCR容器30,就可以在更早的阶段加快滑架73A的移动速度。
[0169] 控制器90的存储装置中预先存储有与磁铁71的移动速度相关的信息，控制器90 根据该信息来执行上述动作(使磁铁71上下移动的动作)。
[0170] ?磁铁71的摇动
[0171] 使磁铁71在上下方向移动期间，控制器90可以使摇动用马达75A驱动而使夹持 筒1的一对磁铁71在前后方向摇动。
[0172] 图12是使磁铁71摇动时的磁珠7的行为的示意图。磁铁71在上下方向移动期 间，管20从前后方向被一对磁铁71夹持。由于一对磁铁71被臂72保持，所以一对磁铁71 在前后方向的距离几乎恒定。因此，如果一对磁铁71中的一方靠近管20,则另一方离开管 20 〇
[0173] 由于磁珠7被距离近的磁铁71吸引，所以如果一方磁铁71靠近管20,则磁珠7被 吸引至该磁铁71侧。其后，如果该磁铁71离开管20而相反侧的磁铁71靠近管20,则这次 磁珠7被相反侧的磁铁71吸引。由此，磁珠7在前后方向移动。如果使一对磁铁71在前 后方向摇动，则磁珠7在前后方向往复移动。
[0174] 如果磁珠7在前后方向往复移动，则磁珠7容易与液体接触。特别是，由于毛细管 23内的液体几乎不具有流动性，所以想要使毛细管23内的液体尽可能与磁珠7接触时，磁 珠7在前后方向往复移动是有效的。
[0175] 图13是表不有无磁铁71的摇动的表。
[0176] 磁珠7在油塞子(第1油塞子44或第2油塞子46)中向下方移动时，控制器90 使摇动马达停止，使磁铁71不摇动。此时，控制器90在使一对磁铁71中的一方靠近管20 的状态下使磁铁71向下方移动。这是因为与各磁铁71与管20的距离均等的情况相比，磁 珠7容易追随磁铁71的移动。
[0177] 磁珠7在第2清洗液塞子45中向下方移动时，控制器90使摇动马达驱动，使磁铁 71在前后方向摇动。由此，磁珠7在第2清洗液塞子45内边在前后方向摇动，边向下方移 动，所以能够提高磁珠7的清洗效率。另外，由于清洗效率得到提高，所以能够抑制第2清 洗液塞子45的量，能够实现筒1的小型化。
[0178] 磁珠7通过清洗液与油(第2油塞子46)的界面时，控制器90使摇动马达停止，使 磁铁71不摇动。由此，磁珠7不摇动地通过界面，因此清洗液的成分不易被带入油中。应予 说明，控制器90在使一对磁铁71中的一方靠近管20的状态下使磁铁71向下方移动。由 此，磁珠7被距离近的磁铁71吸引而凝聚，附着于磁珠7的清洗液被推出，因此清洗液的成 分不易被带入油中。
[0179] 磁珠7位于反应液塞子47中时，控制器90使摇动马达驱动而使磁铁71在前后方 向摇动。由此，磁珠7在反应液塞子47内在前后方向摇动，因此能够提高与磁珠7结合的 核酸的溶出效率。另外，由于溶出效率得到提高，所以能够缩短从磁珠7被导入反应液塞子 47到核酸的溶出结束的时间。
[0180] 应予说明，在反应液塞子47中使核酸溶出后，使磁铁71向上方移动而提起磁珠7 时，控制器90使摇动马达停止而使磁铁71不摇动。此时，控制器90在使一对磁铁71中的 一方靠近管20的状态下使磁铁71向下方移动。由此，磁珠7变得容易追随磁铁71的移动， 能够加快磁铁71的移动速度。
[0181] 在控制器90的存储装置中存储有与毛细管23的各塞子的位置相关的信息和如图 13所示的摇动信息，控制器90根据该信息来执行上述动作(使磁铁71摇动的动作)。
[0182] (3)液滴形成处理
[0183] 图14A?图14C是液滴形成处理的说明图。图14A是提起磁铁71时的PCR装置 100的状态的说明图。图14B是使旋转体61旋转45度的状态的说明图。图14C是按压机 构80的杆82按压柱塞10的状态的说明图。
[0184] 如图14A所示，滑架73A位于退避位置时，即使筒1旋转，升降机构73也不与筒1 接触。成为这样的状态后，控制器90使旋转体61旋转45度。
[0185] 如图14B所示，如果旋转体61旋转45度，则筒1的长边方向与按压机构80的杆 82的移动方向平行。控制器90驱动柱塞用马达81，使杆82移动。如果在杆82与筒1的 柱塞10的安装台11A接触后，杆82进一步移动，则柱塞10被压入管20侧。控制器90使 杆82移动至图14C所示的状态，按压柱塞10直到柱塞10的安装台11A与管20的上缘接 触。
[0186] 如果柱塞10被压入管20侧，则柱塞10的棒状部12的密封部件12A与管20的下 注射器22嵌合(参照图2B)。然后，如果柱塞10被进一步压入，则密封部件12A在下注射 器22内滑动。由此，以与密封部件12A在下注射器22内滑动的体积相当的量，管20的下 游侧的液体(第3油塞子48、反应液塞子47等）被推出至PCR容器30的流路形成部35。
[0187] 首先，管20的第3油塞子48流入流路形成部35。由于流路形成部35中填充有 油，所以流入部分的油从流路形成部35流入油收容空间32A，油收容空间32A的油界面上 升。此时，因下密封部34B中的压力损失而导致流路形成部35的液体的压力高于外部大气 压（油收容空间32A的压力）。第3油塞子48被从管20推出后，反应液塞子47从管20流 入流路形成部35。由于流路形成部35的内径比毛细管23的内径大，所以在管20内为塞子 状的反应液塞子47在流路形成部35的油中成为液滴状。
[0188] 由于密封部件12A在下注射器22内滑动的体积(管20内的液体被从下游侧推出 的量）比管20内的反应液塞子47和第3油塞子48的总计多，所以反应液塞子47被从管 20推出后，第2油塞子46的一部分也被推出至流路形成部35。由此，管20中不残留反应 液，反应液塞子47的全部液量成为液滴状。另外，由于第2油塞子46的一部分被从管20 的下游侧推出，所以反应液液滴47容易离开管20 (反应液液滴47不易吸附于毛细管23的 开口）。
[0189] 由于毛细管23的末端的内径(毛细管23的开口径）被设计得较小，所以在PCR容 器30内液滴化的反应液不易吸附于毛细管23的开口。另外，反应液的比重比PCR容器30 的油的比重大。因此，反应液液滴47离开毛细管23的末端，使流路形成部35形成流路并 向底35A沉降。但是，在该阶段，由于流路形成部35的流路倾斜45度，所以反应液液滴47 容易附着于流路形成部35的内壁。因此，需要使流路形成部35的流路回到垂直方向。
[0190] 形成反应液液滴47后(柱塞10被按压后)，控制器90沿与此前相反的方向驱动柱 塞用马达81，使杆82回到原来的位置。在该状态下，即使筒1旋转，按压机构80的杆82也 不与筒1接触。成为这样的状态后，控制器90使旋转体61回到基准位置。如果旋转体61 回到基准位置，则流路形成部35的流路成为垂直方向，因此反应液液滴47变得不易附着于 流路形成部35的内壁。
[0191] (4)热循环处理
[0192] 图15A和图15B是热循环处理的说明图。图15A是对反应液液滴47实施低温侧 的温度处理的状态的说明图。图15B是对反应液液滴47实施高温侧的温度处理的状态的 说明图。在各图的左侧示出了 PCR装置100的状态，在各图的右侧示出了 PCR容器30的流 路形成部35的内部的状态。
[0193] 如果筒1相对于安装部62被固定在正常的位置，则PCR容器30的流路形成部35 的上游侧（高温区域36A)与高温侧加热器65B对置，PCR容器30的流路形成部35的下游侧 (低温区域36B)与低温侧加热器65C对置。在热循环处理期间，控制器90通过被设置于旋 转体61的高温侧加热器65B将PCR容器30的流路形成部35的上游侧的高温区域36A的 液体加热至约90?100°C。另外，控制器90通过设置于旋转体61的低温侧加热器65C将 流路形成部35的下游侧的低温区域36B的液体加热至约50?75°C。由此，在热循环处理 期间，PCR容器30的流路形成部35内的液体中形成温度梯度。由于在旋转体61中设有安 装部62和加热器，所以即使旋转体61旋转，筒1与加热器的位置关系也保持原样。
[0194] 在热循环处理期间，PCR容器30内的液体被加热。假定PCR容器30的液体被加 热而产生气泡，则有可能流路形成部35内的液体的温度产生波动，或者流路形成部35中的 反应液液滴47的移动(沉降）受到阻碍。但是，在本实施方式中，因下密封部34B中的压力 损失导致流路形成部35的液体的压力高于外部大气压，所以PCR容器30的液体变得不易 产生气泡。
[0195] 如图15A所示，旋转体61位于基准位置时，低温侧加热器65C位于高温侧加热器 65B的下侧，筒1的PCR容器30的底35A变得朝下。由于反应液液滴47的比重比油的比重 大，所以反应液液滴47在流路形成部35内沉降。如果反应液液滴47在流路形成部35内 沉降，则到达PCR容器30的底35A，因此结束沉降而留在低温区域36B。由此，反应液液滴 47移动至低温区域36B。控制器90以规定的时间保持图15A的状态，将反应液液滴47在 低温区域36B加热至约50?75°C (实施低温侧的温度处理)。在此期间，发生聚合酶反应 的延伸反应。
[0196] 如果控制器90驱动旋转用马达66而使旋转体61从图15A的状态旋转180度，则 成为图15B所示的状态。如果旋转体61从基准位置旋转180度，则筒1上下翻转，并且高温 侧加热器65B和低温侧加热器65C也上下翻转。换言之，高温侧加热器65B位于低温侧加热 器65C的下侧，筒1的PCR容器30的底35A变得朝上。如果反应液液滴47在流路形成部 35内沉降，则到达管20的末端(毛细管23的末端)，因此结束沉降而留在高温区域36A。由 此，反应液液滴47移动至高温区域36A。控制器90以规定时间保持图15B的状态，在高温 区域36A中将反应液液滴47加热至约90?100°C (实施高温侧的温度处理)。在此期间， 发生聚合酶反应的变性反应。
[0197] 如果控制器90驱动旋转用马达66而使旋转体61从图15B的状态旋转-180度， 则回到图15A的状态。在该状态下，如果反应液液滴47在流路形成部35内沉降，则反应液 液滴47移动至低温区域36B，在低温区域36B再次被加热至约50?75°C (实施低温侧的 温度处理)。应予说明，由于毛细管23的末端的内径(毛细管23的开口直径）被设置得较 小，所以反应液液滴47变得不易吸附于毛细管23的开口，因此，如果旋转体61从图15B的 状态旋转-180度，则反应液液滴47不吸附于毛细管23的开口而离开管20向PCR容器30 的底35A沉降。
[0198] 控制器90驱动旋转用马达66,以规定的循环数反复进行使旋转体61的旋转位置 成为图15A的状态的操作与使之成为图15B的状态的操作。由此，PCR装置100能够对反 应液液滴47实施PCR的热循环处理。
[0199] 在控制器90的存储装置中存储有高温侧加热器65B的温度、低温侧加热器65C的 温度、在图15A的状态下保持的时间、在图15B的状态下保持的时间、循环数（图15A的状 态与图15B的状态的反复次数）的热循环信息，控制器90根据该热循环信息来执行上述处 理。
[0200] (5)荧光测定
[0201] 如图15A所示，旋转体61位于基准位置时，荧光测定器55与筒1的PCR容器30 的底35A对置。因此，进行反应液液滴47的荧光测定时，控制器90在使旋转体61位于基 准位置的状态下从低温侧加热器65C的插入孔64A的下侧开口，使荧光测定器55测定位于 PCR容器30的底35A的反应液液滴47的荧光强度。
[0202] 旋转体61旋转180度而成为基准位置之后，反应液液滴47立即在PCR容器30的 流路形成部35内沉降，反应液液滴47有时不到达PCR容器30的底35A。因此，控制器90 优选在从旋转体61的旋转位置成为图15A的状态后再经过规定时间后（即将使旋转体61 从图15A的状态旋转之前)测定荧光强度。或者，控制器90也可以在使旋转体61到基准位 置时后的规定时间的期间，使荧光测定器55测定荧光强度，以存储荧光强度的时间经历。 实施例
[0203] 实验例1
[0204] 在本实验例中，如图16所示，在上述核酸提取用试剂盒中，使用在管200的内部具 有第1塞子210?第7塞子270的构成。
[0205] 首先，在容量3mL的聚乙烯制容器130中收容375 μ L的吸附液和1 μ L的磁珠分 散液。吸附液使用76质量％的盐酸胍、1. 7质量％的乙二胺四乙酸二氢二钠二水合物以及 10质量％的聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯的水溶液(东洋纺制，MagExtractor-Genome-、 NPK-1 )。另外，作为磁珠原液，使用含有50体积％的磁性二氧化硅粒子和20质量％的氯化 锂的磁珠原液。
[0206] 使用移液管从容器130的口 121加入从人采集的血液50 μ L，对容器130加盖122， 用手振荡30秒，进行搅拌。其后，取下容器130的盖122,与管200连接。应予说明，管200 中在两端形成有栓110,取下第1塞子210侧的栓110,将容器130与管200连接。
[0207] 在此，第1塞子210、第3塞子230、第7塞子270、第5塞子250为硅油。第2塞子 220的第1清洗液为76质量％的盐酸胍的水溶液。另外，第4塞子240的第2清洗液是pH 为8. 0的Tris-盐酸缓冲液(溶质浓度5mM)。第6塞子260的溶出液为无菌水。
[0208] 然后，移动永磁铁410,将容器130内的磁珠125导入管200内。然后，使磁珠125 移动至第6塞子260。磁珠125在管200内的各塞子中存在的时间大约如下所述。第1、3、 7塞子：各3秒，第2塞子：20秒，第4塞子：20秒，第6塞子：30秒。应予说明，在第2塞子 220和第4塞子240中，不进行振动磁珠等操作。另外，第2塞子220、第4塞子240以及第 6塞子260的体积分别为25 μ L、25 μ L以及1 μ L。
[0209] 接着，取下管的第7塞子侧的栓110,用手使容器120变形，使第7塞子270和第6 塞子260排出PCR的反应容器。该操作在利用永磁铁使磁珠移动而退避至第2塞子220后 进行。
[0210] 然后，向该提取液中加入19μ L的PCR的反应试剂，根据常规方法进行实时PCR。 PCR 的反应试剂的详细成分为 Light Cycler480Genotyping Master (Roche Diagnostics 公司制 4707524) 4 μ L、用无菌水稀释 1000 倍的 SYBR Green I (Life Technologies 公司 制S7563) 0. 4μ?、100μΜ的β肌动蛋白检测用引物（F/R)各0. 06yL、无菌水14. 48yL。 将实验例1的PCR的扩增曲线示于图17。应予说明，图17的纵轴是荧光亮度，横轴是PCR 的循环数。
[0211] 实验例2
[0212] 在实验例2中，利用通常的核酸提取法进行核酸的提取。首先，在容量1. 5mL的聚 乙烯制容器（Eppendorf微量离心管）中收容375 μ L的吸附液和20 μ L的磁珠分散液。作 为吸附液、磁珠分散液的组成，与上述实验例相同。
[0213] 接着，使用移液管从容器的口导入从人采集的血液50 μ L，对容器加盖，用旋涡混 合器搅拌10分钟，操作磁性支架和移液管，进行B/F分离操作。在该状态下，容器内残留有 磁珠和少量的吸附液。
[0214] 接着，向容器中导入与实验例1相同的组成的第1清洗液450 μ L，加盖并利用旋 涡混合器搅拌5秒，操作磁性支架和移液管，除去第1清洗液。反复2次该操作。在该状态 下，容器内残留有磁珠和少量的第1清洗液。
[0215] 接着，向容器中导入与实验例1相同组成的第2清洗液450 μ L，加盖并利用旋涡混 合器搅拌5秒，操作磁性支架和移液管，除去第1清洗液。反复2次该操作。在该状态下， 容器内残留有磁珠和少量的第2清洗液。
[0216] 然后，向容器中加入无菌水(溶出液）50 μ L，加盖并利用旋涡混合器搅拌10分钟， 操作磁性支架和移液管，回收上清液。该上清液含有靶核酸。
[0217] 然后，从该提取液分注1 μ L，进而加入19 μ L的PCR的反应试剂，根据常规方 法进行实时PCR。PCR的反应试剂的详细成分是Light Cycler480Genotyping Master (Roche Diagnostics 公司制 4707524)4yL、用无菌水稀释 1000 倍的 SYBR Green I (Life Technologies公司制S7563)0. 4 μ L、100yM的β肌动蛋白检测用引物（F/R)各0. 06μ L、 无菌水14. 48yL。将此时的扩增曲线示于图17。
[0218] 实验结果
[0219] 根据上述实验例可以理解以下内容。
[0220] (1)如果比较作为PCR预处理的核酸的提取处理所需要的时间，则从将样品插入 容器到将靶核酸导入PCR的反应容器的时间在实验例1中大约为2分钟。在实验例2中大 约为30分钟。由此实验例1的核酸提取方法与实验例2的核酸提取方法相比，核酸提取所 需要的时间大幅度缩短。
[0221] (2)各清洗液在实验例1中的量是实验例2的约18分之1的量。此外，溶出液的 量在实验例1中也是实验例2的约50分之1。因此，在实验例1中，清洗液和溶出液的量相 对于实验例2为极少量就足够。
[0222] (3)如果在吸附液和溶出液的量中比较溶出液中的靶核酸的浓度，则认为理想的 是实验例1为实验例2的50倍的浓度。但是，在本次的实验例中，由于血液样本中含有的 核酸量多，超过luL的磁珠可吸附的量，无法将血液样本中含有的核酸全部回收，所以在 实验例1中没有得到实验例2的50倍浓度。在核酸含量少而不超过1 μ L的磁珠可吸附的 量的样品的情况下，实验例1中可得到实验例2的50倍浓度。
[0223] (4)观察图17的图可知在核酸含量多的全血样本中，核酸的扩增率的上升在实验 例1中比实验例2快约0. 6个循环。S卩，实验例1中使用的PCR的反应液与实验例2中使 用的PCR的反应液相比，靶核酸的浓度高。即，溶出液中的靶核酸的浓度在实验例1中比实 验例2商。
[0224] 符号说明
[0225] 1 筒
[0226] 3 罐
[0227] 3A 盖
[0228] 3B变形部
[0229] 5 适配器
[0230] 5A 盖
[0231] 7 磁珠
[0232] 9 筒主体
[0233] 10 柱塞
[0234] 11筒状部
[0235] 11A安装台
[0236] 12棒状部
[0237] 12A密封部件
[0238] 13 凸缘
[0239] 20 管
[0240] 21上注射器
[0241] 22下注射器
[0242] 23毛细管
[0243] 25固定爪
[0244] 26 导板
[0245] 30 PCR 容器
[0246] 31密封形成部
[0247] 32油收容部
[0248] 33阶梯部
[0249] 34A上密封部
[0250] 34B下密封部
[0251] 35流路形成部
[0252] 35APCR容器的底
[0253] 36A高温区域
[0254] 36B低温区域
[0255] 41溶解液
[0256] 42 油
[0257] 43第1清洗液
[0258] 44第1油塞子
[0259] 45第2清洗液塞子
[0260] 46第2油塞子
[0261] 47反应液塞子或反应液液滴
[0262] 48第3油塞子
[0263] 51 基座
[0264] 53 侧壁
[0265] 55荧光测定器
[0266] 60旋转机构
[0267] 61旋转体
[0268] 62安装部
[0269] 63固定部
[0270] 64A插入孔
[0271] 65A溶出用加热器
[0272] 65B高温侧加热器
[0273] 65C低温侧加热器
[0274] 6?间隔件
[0275] 66旋转用马达
[0276] 70磁铁移动机构
[0277] 71 磁铁
[0278] 72 臂
[0279] 73升降机构
[0280] 73A 滑架
[0281] 73B升降用马达
[0282] 73C滑架引导部
[0283] 75摇动机构
[0284] 80按压机构
[0285] 81柱塞用马达
[0286] 82 杆
[0287] 90控制器
[0288] 100 PCR 装置
[0289] 110 栓
[0290] 121 口
[0291] 122 盖
[0292] 125 磁珠
[0293] 130聚乙烯制容器
[0294] 200 管
[0295] 210 第 1 塞子
[0296] 220 第 2 塞子
[0297] 230 第 3 塞子
[0298] 240 第 4 塞子
[0299] 250 第 5 塞子
[0300] 260 第 6 塞子
[0301] 270 第 7 塞子。
【权利要求】
1. 一种核酸扩增反应用筒，具备：管、核酸扩增反应用容器和按压机构， 所述管在其内部依次具备： 由第1油构成的第1塞子， 由与油混合时发生相分离且清洗结合有核酸的核酸结合性固相载体的第2清洗液构 成的第2塞子， 由第2油构成的第3塞子， 由与油混合时发生相分离且将所述核酸从结合有核酸的核酸结合性固相载体溶出的 溶出液构成的第4塞子， 由第3油构成的第5塞子； 所述核酸扩增反应用容器与所述管的第5塞子侧连通且含有油； 所述按压机构被安装于所述管的第1塞子侧的开口部，将液体从所述管的所述第5塞 子侧向所述核酸扩增反应用容器推出。
2. 根据权利要求1所述的核酸扩增反应用筒，其中，所述按压机构是柱塞， 在所述柱塞的内部收容有油和与油混合时发生相分离且清洗结合有核酸的所述核酸 结合性固相载体的第1清洗液。
3. 根据权利要求1或2所述的核酸扩增反应用筒，其特征在于，进行逆转录反应的试剂 被包含在所述溶出液中。
4. 根据权利要求3所述的核酸扩增反应用筒，其中，进行所述逆转录反应的试剂含有 逆转录酶、dNTP、引物。
5. 根据权利要求3或4所述的核酸扩增反应用筒，其中，进行核酸扩增反应的试剂被包 含在所述溶出液中。
6. 根据权利要求5所述的核酸扩增反应用筒，其中，进行所述核酸扩增反应的试剂含 有DNA聚合酶、dNTP、引物。
7. 根据权利要求1?6中任一项所述的核酸扩增反应用筒，其中，所述核酸扩增反应用 容器具有固定所述管的密封形成部和液滴流动的流路形成部。
8. 根据权利要求7所述的核酸扩增反应用筒，其中，所述密封形成部具有收容从所述 流路形成部溢出的油的油收容部。
9. 根据权利要求1?8中任一项所述的核酸扩增反应用筒，进一步具备与所述管的第 1塞子侧连通并将所述核酸结合性固相载体导入所述管的罐。
10. 根据权利要求9所述的核酸扩增反应用筒，其中，所述罐与所述管介由所述柱塞结 合。
11. 一种核酸扩增反应用筒式试剂盒，具备权利要求1?8所述的核酸扩增反应用筒和 将所述核酸结合性固相载体导入所述管的罐。
12. 根据权利要求11所述的核酸扩增反应用筒式试剂盒，其中，所述罐含有提取核酸 的溶解液和所述核酸结合性固相载体。
13. 根据权利要求11或12所述的核酸扩增反应用筒式试剂盒，其中，所述罐具有开口 部，在所述开口部具有可拆卸的盖。
14. 根据权利要求11?13中任一项所述的核酸扩增反应用筒式试剂盒，其中，所述罐 的开口部以能够安装于所述管的第1塞子侧的开口部的方式构成。
【文档编号】C12M1/00GK104046555SQ201410089111
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年3月12日 优先权日:2013年3月13日
【发明者】齐藤祐司, 高城富美男 申请人:精工爱普生株式会社