DNA修复蛋白HmDRP、其编码基因及其用途

DNA修复蛋白HmDRP、其编码基因及其用途
【专利摘要】本发明公开了DNA修复蛋白HmDRP、其编码基因及其用途。本发明涉及DNA修复蛋白HmDRP，特征在于其氨基酸序列由SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列所编码。本发明还涉及DNA修复蛋白HmDRP的基因片段，其特征在于所述基因片段的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。本发明还涉及包含DNA修复蛋白HmDRP的基因DNA序列的表达载体和转化体。另外，本发明还涉及制备DNA修复蛋白HmDRP的方法。本发明涉及的DNA修复蛋白HmDRP通过表达载体导入生物细胞后在热损伤修复方面具有显著功能。
【专利说明】DNA修复蛋白HmDRP、其编码基因及其用途
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及基因克隆，具体涉及一种DNA修复蛋白HmDRP、其编码基因及其用途。
【背景技术】
[0002]DNA修复蛋白是一类修复诱变性和毒性DNA损伤的蛋白，如果这些DNA损伤得不到及时修复，就会导致细胞产生突变、衰老或死亡。DNA修复蛋白和它们的修复机制非常保守，从细菌到人类，广泛存在于生物中。
[0003]Ku蛋白是存在于真核生物中一种DNA修复蛋白，发现于患有自身免疫性疾病的病人细胞。由紧密相关的异源二聚体(70KDa和80KDa亚基)和470KDa的催化亚基(DNA-PKcs)组成。该蛋白主要参与由生理的氧化反应，化疗药物和电离辐射引起DNA双链断裂的修复。Ku蛋白在真核生物中高度保守，蛋白中间有与DNA结合的核心部位，两端又有各自的独特部位。Ku70和Ku80的N-端有vWa结构域，可被DNA-PKcs磷酸化，但Ku70的C端为染色体/DNA结合区-SAP，Ku80的C端有一个参与蛋白-蛋白相互作用的韧性臂，C末端为Ku与DNA-PKcs结合部位。实验证明Ku蛋白与dsDNA末端的结合没有序列特异性。原因可能是Ku70/Ku80-DNA结合核心结构域与DNA结合时，形成圆环包围DNA，将断裂的双链结合在一起。
[0004]Ku蛋白与细胞DNA损伤修复和辐射敏感性有着紧密联系，其功能及表达是否正常，关系到DNA-PK对DSBs的修复能力。Ku70/Ku80功能缺失的细胞有不同的表现。研究表明Ku80缺陷细胞的NHEJ活性降低了≥90%。Tamura K等从拟南芥中克隆到Ku70/Ku80基因，并研究了这两个基因的表达与DSBs的关系。用博来霉素处理悬浮培养的拟南芥细胞，发现Ku70/Ku80的表达量可比对照组高三倍以上。因为博来霉素可以有效诱发细胞DSBs的产生，推测Ku70/Ku80与DSBs修复有关。一系列拟南芥Ku70/Ku80突变体的获得，大大促进了拟南芥Ku70/Ku80蛋白基因功能的研究。这类突变体一般都对DNA损伤诱变剂具有高度敏感性，如博来霉素、甲萘醌和离子辐射等。Liu PF等的最新研究表明:物理因素一热害同样会导致植物细胞DNA损伤。拟南芥在热害胁迫下，能够显著诱导拟南芥Ku蛋白基因的表达，且表达量与损伤时间密切相关。
[0005]在真核生物中，同源重组是DNA双链断裂修复的一种重要途径。RAD52基因群和同源重组紧密相关。该基因群主要包括 RAD50，RAD58/MRE11，XRS2，RPAI，RAD51，RAD52，RAD54，RAD55, RAD57和RAD59。 其中RAD51和RAD54是同源重组中的两个关键成分。RAD51蛋白在进化上非常保守，从细菌到哺乳动物都有其同源物。RAD51家族成员的功能非常特别，它们和DNA —起形成螺旋状核蛋白丝，并且促进DNA配对和链的转换，该步骤是同源重组的一个基本步骤。体外实验表明RAD51和RAD54形成螺旋状核蛋白，其可以促进DNA链间的交换。RAD52和RAD55/57主要是作为RAD51蛋白和单链DNA结合蛋白-RPA的媒介，克服突触前纤维形成时RPA的抑制作用。RAD54蛋白是类Swi2/Snf2家族中的一员，需依赖DNA/ATP激酶激活来分离和改造DNA双链的蛋白复合物，在同源重组中的功能主要与DNA的同源搜索有关。其机制已在基因组和生物化学水平得到广泛证明。实验发现RAD54蛋白具有双链DNA拓扑结构修饰活性，该活性在DNA链的交换汇中起重要作用，RAD54蛋白通过修饰目标双链DNA的拓扑结构，使他们更利于DNA的配对。
[0006]在耐辐射球菌中，DNA修复蛋白对于其耐热性具有重要作用。DNA修复蛋白基因pprA, recA和irrE的缺失会导致高温条件下存活率的降低。这暗示着DNA修复蛋白对于耐辐射球菌在高温下的存活具有重要作用。在细胞中，对双链DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)进行44°C热处理，该酶会发生失活。而DNA修复蛋白Ku70/Ku80可以恢复热失活的DNA依赖蛋白激酶的活性。
[0007]真姬燕(Hypsizygusmarmoreus (Peck) H.Ε.Bigelow)又名玉蕈、斑玉蕈、蟹味菇等，是一种食药兼用的珍稀食用菌。属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、玉蕈属(Hypsizygus marmoreus Gen.)。其自然分布于欧洲、北美、西伯利亚和日本等北温带地区，是春秋冬季生木腐菌，属于中偏低温型食用菌，主要生长在山毛榉及其他阔叶树的枯木、风倒木和树桩上。
[0008]随着各种生物技术的发展，动植物和细菌中的DNA修复蛋白已经有较多的研究，但大多数是研究DNA修复蛋与紫外和辐射引起的DNA损伤修复的关系，而与热损伤修复有关的研究甚少。
[0009]目如尚未在食用菌中克隆出具有热损伤修复功能的DNA修复蛋白基因。

【发明内容】

[0010]本发明人基于上述领域的空白，从真姬菇中克隆分离出DNA修复蛋白HmDRP基因并获得表达该蛋白的Cdna，并证明了该蛋白可以保护细胞使其减少热损伤死亡率。
[0011 ] 本发明的目的在于提`供:
[0012]DNA修复蛋白HmDRP，其特征在于其氨基酸序列由SEQ ID N0.1所示的核苷酸序列所编码。
[0013]编码所述的DNA修复蛋白HmDRP的基因片段。
[0014]所述的基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。
[0015]包含所述基因片段的表达载体。
[0016]所述表达载体为DRP_pET32a。
[0017]一种转化体，其特征在于包含所述表达载体。
[0018]具有热损伤修复功能的融合蛋白，其功能区的氨基酸序列为SEQ ID N0.1所示的核苷酸序列所编码。
[0019]制备所述融合蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤:
[0020]I)将所述的表达载体转化宿主细胞获得转化体，
[0021]2)培养所述转化体并进行诱导表达，
[0022]3)从诱导表达产物中分离表达的融合蛋白。
[0023]所述方法，其特征在于宿主细胞是大肠杆菌。
[0024]所述的DNA修复蛋白HmDRP在热损伤修复方面的用途。
[0025]所述用途，其特征在于:将所述表达载体导入到生物细胞中使其表达所述的DNA修复蛋白HmDRP从而获得热损伤修复能力。[0026]本发明从真姬菇中分离DNA修复蛋白HmDRP基因，本发明人采用本领域技术人员熟知的生物信息学手段，并通过生物技术方法，扩增出大小分别约1542bp和924bp的片段为真姬菇DNA修复蛋白基因的中间片段。基于所述中间片段，本发明人利用成熟的RACE技术分别扩增得到目的基因的5'端和3'端，再利用生物信息学手段在拼接的虚拟序列上设计用于扩增目的基因ORF全长的引物。再经过一系列生物技术方法，扩增出全长2517bp的具有如SEQ ID N0.1所述序列的cDNA片段真姬菇为DNA修复蛋白HmDRP基因的ORF全序列。这是本发明的显著特点之一，即克隆得到了真姬菇DNA修复蛋白HmDRP基因的ORF全序列。
[0027]本发明还提供了一种用于宿主细胞热损伤修复的方法。本发明人将DNA修复蛋白HmDRP基因的ORF全序列连接至重组载体构建含有DNA修复蛋白HmDRP基因的原核表达载体并转化宿主细胞，通过诱导使得HmDRP蛋白在宿主细胞中表达。将含有所述表达载体的宿主细胞、不含所述表达载体的宿主细胞以及含有不含DNA修复蛋白HmDRP基因的表达载体的宿主细胞共同进行热处理，发现含有所述转化体的宿主细胞存活率得到显著提高。
[0028]此外，本发明还提供了一种制备所述重组HmDRP蛋白的方法，即利用生物技术方法将DNA修复蛋白HmDRP基因的ORF全序列连接至重组载体，构建含有DNA修复蛋白HmDRP基因的原核表达载体并转化宿主细胞，获得含有所述表达载体的转化体。培养转化体，可从培养物中获得真姬菇DNA修复蛋白HmDRP。
【专利附图】

【附图说明】
[0029]图1 为 pMD19_T Simple vector 质粒图谱。
[0030]图2为表达载体pET32a(+)质粒图谱。
[0031]图3为真姬菇菌株的基因组DNA电泳图谱:泳道1~3:均为基因组DNA。
[0032]图4为真姬菇菌株总RNA电泳图谱:泳道1~3:均为RNA。
[0033]图5为DNA修复蛋白HmDRP基因cDNA序列部分片段电泳图谱:M =Marker ;泳道1~2:分别以P1/P2，P3/P4为引物的PCR扩增产物。
[0034]图6为含有HmDRP基因cDNA序列部分片段的菌液PCR产物电泳图谱:泳道M =DNAMarker ;泳道I~4为含有HmDRP基因cDNA序列部分片段的菌液PCR产物(I~2，3~4分别为以P1/P2，P3/P4为引物的菌液PCR产物)。
[0035]图7为HmDRP基因cDNA序列部分片段同源性比对结果。
[0036]图8为HmDRP基因cDNA3’和5’ RACE产物电泳图谱:A:3’ RACE产物；B:5’ RACE产物。
[0037]图9为含有HmDRP基因cDNA3’和5’ RACE产物的菌液PCR电泳检测图谱:A:3’ RACE产物；B:5’ RACE产物。
[0038]图10为HmDRP基因ORF扩增电泳图谱:泳道M =Marker ;泳道I~2 =DNA修复蛋白HmDRP基因ORF扩增产物。
[0039]图11为含有HmDRP基因ORF的菌液PCR电泳图谱:泳道M =Marker ;泳道I~2:含有HmDRP基因ORF的菌液PCR扩增产物。
[0040]图12为使用ProtScale程序对HmDRP基因拼接的cDNA全长对应编码的氨基酸序列的疏水结构的分析图谱。[0041]图13为HmDRP基因拼接的cDNA全长对应编码的氨基酸序列跨膜结构的预测分析图谱。
[0042]图14为HmDRP基因拼接的cDNA全长对应编码的氨基酸序列功能位点分析图谱。
[0043]图15为HmDRP基因拼接的cDNA全长对应编码的氨基酸序列保守结构域分析图
-1'TfeP曰。
[0044]图16为HmDRP基因拼接的cDNA全长对应编码的氨基酸序列与其他物种中DNA修复蛋白系统进化树分析图谱。
[0045]图17为HmDRP基因DNA序列扩增电泳图谱:泳道M =Marker ;泳道I~2 =HmDRP基因DNA的PCR扩增产物。
[0046]图18为含有HmDRP基因DNA序列菌液PCR电泳图谱:M =Marker ;泳道I~3:含有HmDRP基因DNA序列菌液PCR扩增产物。
[0047]图19为HmDRP基因加酶切位点的cDNA全长PCR产物电泳图谱:M =Marker ;泳道I~2 =HmDRP基因加酶切位点的cDNA全长PCR扩增产物。
[0048]图20为含有HmDRP基因加酶切位点的cDNA全长的菌液PCR电泳图谱:M =Marker ；泳道I~6:含有HmDRP基因加酶切位点的cDNA全长的菌液扩增产物。
[0049]图21为重组质粒DRP_pET32a双酶切产物电泳检测图谱:M =Marker ;泳道I~2:重组质粒DRP-pET32a双酶切产物。
`[0050]图22为重组HmDRP蛋白诱导表达后的SDS-PAGE图:M:蛋白质Marker ;泳道1:1PTG诱导pET32a转化的菌液；泳道2 =IPTG诱导的DRP_pET32a转化的菌液；泳道3:未经诱导的DRP-pET32a转化的菌液。
[0051]图23为热损伤(50°C)条件下DNA修复蛋白HmDRP影响大肠杆菌存活率的图。【具体实施方式】
[0052]以下对本发明的实施方式进行具体说明，这并不限制本发明的范围。
[0053]DNA 修复蛋白 HmDRP
[0054]本文涉及DNA修复蛋白HmDRP，在本文中有时也简称为“HmDRP”、“DNA修复蛋白”、“HmDRP蛋白”、“蛋白”。根据本文的一个实施方案，DNA修复蛋白HmDRP选自其中每个蛋白包含与SEQ ID N0.1编码的氨基酸序列至少80%同一的氨基酸序列的蛋白的组。根据本文的一个实施方案，DNA修复蛋白HmDRP是真姬菇来源的DNA修复蛋白。本文涉及的DNA修复蛋白HmDRP具有热损伤修复功能。根据本文的一个实施方案，DNA修复蛋白HmDRP可以降低大肠杆菌的热损伤。
[0055]DNA
[0056]本文还涉及一种编码上述所有DNA修复蛋白HmDRP的DNA，其是该蛋白的编码序列。
[0057]用于本说明书的术语“编码序列”的意思是直接指定其蛋白质产物的氨基酸序列的核苷酸序列。
[0058]编码序列的边界通常由开放阅读框(Open reading frame, 0RF)决定,所述开放阅读框(ORF)通常以ATG起始密码子或可供选择的起始密码子例如GTG和TTG开始，并且以终止密码子例如TAA、TAG和TGA结束。编码序列可以是DNA、cDNA或重组核苷酸序列。[0059]根据本文的一个实施方案，DNA具有SEQ ID NO:1所示的碱基序列。
[0060]重鉬载体
[0061]本文还涉及重组载体，其包含编码上述DNA修复蛋白HmDRP的DNA。
[0062]本文涉及的重组载体包含编码上述所有的融合蛋白的DNA序列、启动子、转录和翻译终止信号。本文中所述的DNA序列可以和其它调控序列结合在一起，产生重组载体，该载体可以包括一个或多个(数个)方便的限制位点以允许在这些位点插入或取代编码肽段的DNA序列。备选的，可以通过在适当的用于表达的载体中插入包含所述氨基酸序列的DNA序列来表达本文的DNA序列。在制备重组载体的过程中，将编码序列导入载体中，从而将该编码序列与适当的表达调控序列可操作地连接。
[0063]启动子、转录信号、翻译终止信号以及其它调控序列是任何本领域普通技术人员能够可以根据常规选择而确定的。
[0064]重组载体可以是任何载体(例如，质粒或病毒)，其能够方便地进行重组DNA步骤，并且能够产生核苷酸序列的表达。载体的选择将通常依赖于载体与将引入该载体的宿主细胞的相容性。载体可以是线状或闭合环状质粒。
[0065]载体可以是自主复制载体，例如，质粒、染色体外元件、微型染色体或人工染色体。载体可以含有任何用于确保自复制的构建。或者，载体可以是一种当被引入宿主细胞中时，整合到基因组中并且与整合了 该载体的染色体一起复制的载体。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的完整DNA，或可以使用转座子。
[0066]pET原核表达载体系统是现今所知在E.coli中克隆表达重组蛋白的功能最强大的系统。pET32a是pET载体系统中应用较广泛的一个，其带有氨苄青霉素抗性基因，具有T7启动子和Lac操纵子，末端有T7终止子，可以通过IPTG诱导来调控外源基因的表达。pET32a表达载体的优点在于表达的蛋白以融合的形式存在，避免了被细胞蛋白酶降解的可能性，并且TrxA标签使融合蛋白的纯化过程简化。
[0067]根据本文的一个实施方案，本文的重组载体是pET32a(+)。优选地，该重组载体是通过以下步骤构建:
[0068]将SEQ ID NO:1所示的DNA片段插入质粒pET32a(+)的多克隆位点，得到重组载体。
[0069]根据本文的一个实施方案,本文的重组载体是pMD19_T Simple vector,优选地，该重组载体是通过以下步骤构建:
[0070]将SEQ ID勵:1所示的0嫩片段插入质粒？]\?191 Simple vector的多克隆位点，得到重组载体。
[0071]转化体
[0072]本文还涉及转化体，其是将包含编码上述DNA修复蛋白HmDRP的DNA导入宿主细胞而得到的转化体。
[0073]本文涉及的转化体可用于蛋白质的生产，通过将包含本文DNA序列的载体导入宿主细胞而得到该转化体，并在适当的培养基中培养该转化体，可以用来生产所需要的目标蛋白质。
[0074]术语“宿主细胞”包括母体细胞的任何后代，其由于复制过程中发生的突变而不同于母体细胞。宿主细胞可以是在本文的蛋白基因的克隆产生中有用的任何细胞，例如，原核或真核细胞。原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于，芽孢杆菌属、链球菌属、链霉菌属、葡萄球菌属、肠球菌属、乳酸菌属、乳球菌属、梭菌属、地芽孢杆菌属和海洋芽孢杆菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于，大肠杆菌、假单胞菌属、沙门氏菌属、弯曲杆菌属、螺杆菌属、黄杆菌属、梭杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属和脲原体属。细菌宿主细胞可以是任何大肠杆菌属细胞。宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。在一个具体的方面，宿主细胞可以是真菌细胞。在一个具体的方面，真菌宿主细胞可以是食用菌细胞，包括但不限于真姬菇、香菇、草菇、蘑菇、木耳、银耳、猴头、竹荪、松口蘑(松茸)、口蘑、红菇、杏鲍菇、牛肝菌、羊肚菌、马鞍菌、块菌。
[0075]大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早、目前应用最广泛的经典表达系统，是分子生物学产业化发展的重要工具。此系统具有遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高、表达产物容易纯化、稳定性好以及适应范围广等优点，因此本发明选用原核表达系统中的大肠杆菌BL21(DE3)作为表达宿主菌。
[0076]根据本文的一个实施方案，细菌宿主细胞是大肠杆菌。根据进一步的实施方案，细菌宿主细胞是大肠杆菌BL21。根据进一步的实施方案，细菌宿主细胞是大肠杆菌DH5a。
[0077]DNA修复蛋白HmDRP热损伤修复的方法
[0078]本文还涉及DNA修复 蛋白HmDRP热损伤修复的方法，其包括:
[0079]将DNA修复蛋白HmDRP的基因连接到上述质粒载体上构成重组载体；
[0080]将重组载体导入宿主细胞而得到转化体；以及
[0081]利用培养基培养该转化体，将转化体置于热环境中进行热处理并观察存活率。
[0082]其中，转化体的培养可以使用包含碳源、氮源、无机盐、各种维生素等的常规营养培养基来进行，作为碳源，可以使用例如葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖等糖类，乙醇、甲醇等醇类，柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、马来酸、富马酸等有机酸类，废糖蜜等。作为氮源，可以单独或混合使用例如氨气、硫酸铵、氯化铵、硝酸铵、尿素等。此外，作为无机盐，可以使用例如磷酸一氢钾、磷酸二氢钾、硫酸镁等。此外，培养基中可以添加蛋白胨、肉膏、酵母提取物、玉米浆、酪蛋白氨基酸、生物素等各种维生素等营养素。此外，在培养中，可优化培养基的氮源、碳源、无机离子，从而能够进一步促进细菌的生长和融合蛋白的表达。
[0083]培养通常在通气搅拌、振荡等需氧条件下进行。对培养温度没有特殊限制，只要是宿主微生物能够生长繁育的温度即可，此外，对培养过程中的PH也没有特殊限制，只要是宿主微生物能够生长繁育的PH即可。培养中的pH调整可以通过添加酸或碱来进行。
[0084]根据本文的一个实施方案诱导培养条件是:37°C振荡培养2.5~3h，待0D600达到0.5~0.6时，加入IPTG至终浓度0.5mM, 37°C诱导8h。
[0085]根据本文的一个实施方案，进行上述诱导培养的培养基的溶剂是水，溶质是10g/LNaCl, 5g/L酵母提取物，20g/L蛋白胨和100 μ g/L氨苄青霉素。
[0086]主要试剂
[0087]Maxima Hot Start PCR Master Mix (2X )、DreamTaq PCR Master Mix (2X )和 DNA Marker 购于 Thermo 公司；Advantage2Polymerase Mix 和 SMARTcr? RACE cDNAAmplication Kit,购于Clontech公司；K0D-Plus_Neo高保真酶，购于东洋纺株式会社；PrimeScript? RT-PCR，BamHI和XhoI限制性内切酶、T4DNA连接酶均购于TaKaRa公司；氨苄青霉素钠购于生工生物工程(上海)股份有限公司；Fungal RNA Kit和E.Z.N.A,? PlasmidMini Kit II 购于 OMEGA 生物技术公司；EZ Spin Column DNA GelExtraction Kit,购于Bio Basic公司。其他试剂，如马铃薯、葡萄糖、琼脂、蛋白胨、酵母提取物、NaCl、丙烯酰胺(Acr)、亚甲基双丙烯酰胺(Bis)、CTAB、乙酸钠、Tris、浓盐酸、过硫酸铵(APS)、SDS、BPB、甘油、2-ME ( β-巯基乙醇)、甘氨酸、考马斯亮蓝R250、异丙醇、冰醋酸、乙醇、TEMED(N, N，N’，N’ -四甲基乙二胺)均为国产分析纯。
[0088]氨苄青霉素(Amp)贮存液(100mg/mL):1g氨苄青霉素钠盐溶于少量的水中，加水定容至IOmL,过滤除菌，分装成小份，于_20°C贮存。
[0089]DNA 提取缓冲液:2.5%CTAB, IOOmM Tris-HCl (pH8.0),20mM EDTA (ρΗ8.0)，1.4ΜNaCl，121°C 灭菌 20min 备用。
[0090]3M CH3C00Na (ρΗ8.0)，121?灭菌 20min 备用。
[0091 ] SDS-PAGE电泳所用试剂配制(参照《分子克隆》):
[0092]1、30%丙烯酰胺单体贮存液(T=30%):丙烯酰胺(Acr) 29.0g，亚甲基双丙烯酰胺(Bis) l.0g。先用80mL双蒸水搅拌溶解，直至溶液变成透明，再用双蒸水定容至lOOmL。
0.45 μ m滤膜去杂质，于棕色瓶4°C保存。
[0093]2、1.5M Tris-HCl (pH8.8):Trisl8.17g 加 ddH20 溶解，浓盐酸调 pH 至 8.8，定容至lOOmL，4°C保存备用。
[0094]3,1.0M Tris-HCl (pH6.8):Trisl2.1lg 加 ddH20 溶解，浓盐酸调 pH 至 6.8，定容至lOOmL，4°C保存备用。`
[0095]4、10% 过硫酸铵(APS):1g APS 加 ddH20 至 10mL。
[0096]5,5XSDS-PAGE Loading Buffer:
[0097]
【权利要求】
1.DNA修复蛋白HmDRP，其特征在于其氨基酸序列由SEQ ID N0.1所示的核苷酸序列所编码。
2.编码权利要求1所述的DNA修复蛋白HmDRP的基因片段。
3.根据权利要求2所述的基因片段，其核苷酸序列如SEQID N0.1所示。
4.包含权利要求2或3所述基因片段的表达载体。
5.一种转化体，其特征在于包含权利要求7所述表达载体。
6.具有热损伤修复功能的融合蛋白，其功能区的氣基酸序列为SEQID N0.1所不的核苷酸序列所编码。
7.制备权利要求7所述融合蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤: 1)将权利要求4或5所述的表达载体转化宿主细胞获得转化体， 2)培养所述转化体并进行诱导表达， 3)从诱导表达产物中分离表达的融合蛋白。
8.权利要求8所述方法，其特征在于宿主细胞是大肠杆菌。
9.权利要求1所述的DNA修复蛋白HmDRP在热损伤修复方面的用途。
10.根据权利要求10所述的用途，其特征在于:将权利要求4或5所述的表达载体导入到生物细胞中使其表达所·述的DNA修复蛋白HmDRP从而获得热损伤修复能力。
【文档编号】C12N1/21GK103848903SQ201410089057
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2014年3月12日 优先权日:2014年3月12日
【发明者】郭立忠, 宋凯凯, 赵慧慧, 卢伟东, 徐丽丽, 刘琳 申请人:青岛农业大学