一种具有拆分消旋体γ-内酰胺活性的（-）γ-内酰胺酶及其编码基因与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种具有拆分消旋体γ-内酰胺活性的(-)γ-内酰胺酶及其编码基因与应用，其是来源于大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium?japonicum?USDA6)的(-)γ-内酰胺酶及其编码基因，还提供了该(-)γ-内酰胺酶水解拆分消旋体γ-内酰胺的应用。本发明所述(-)γ-内酰胺酶是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由序列表中的SEQ?ID?No:1的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中的SEQ?ID?No:1氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有拆分消旋体γ-内酰胺活性的由SEQ?ID?No:1衍生的蛋白质。利用该(-)γ-内酰胺酶水解拆分消旋体γ-内酰胺，其拆分活性接近100％，进而利用催化产物氨基酸制备(-)γ-内酰胺。
【专利说明】—种具有拆分消旋体Y -内酰胺活性的(-)Y -内酰胺酶及其编码基因与应用
【技术领域】
[0001]本发明属于酶工程领域，具体涉及一种具有拆分消旋体Y-内酰胺活性的(-)Y-内酰胺酶及其编码基因，以及该(-)Y-内酰胺酶的应用。
【背景技术】
[0002](-)2_氮杂双环[2,2，I]庚-5-烯-3-酮(简称(_) Y-内酰胺)是制备抗病毒药物阿巴卡韦及抗流感药物帕拉米韦等重要的中间体。相比化学合成方法具有过程繁琐且易造成环境污染的缺点，生物酶法在合成手性(_) Y-内酰胺的过程中具有高效简便、环境友好等诸多优点。
[0003]
【权利要求】
1.一种具有拆分消旋体Y-内酰胺活性的(-)Y-内酰胺酶，是如下(a)或(b)的蛋白质: (a)由序列表中的SEQID No:1的氨基酸残基序列组成的蛋白质； (b)将序列表中的SEQID No:1氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有拆分消旋体Y -内酰胺活性的由SEQ ID No:1衍生的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的㈠Y-内酰胺酶的编码基因。
3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于:所述(-)Y-内酰胺酶的编码基因具有下列核苷酸序列之一: (a)序列表中SEQID No:2所示的核苷酸序列； (b)编码序列表中SEQID No:1蛋白质序列的多核苷酸。
4.含有权利要求2或3所述的(-)Y-内酰胺酶编码基因的重组表达载体。
5.含有权利要求2或3所述的(-)Y-内酰胺酶编码基因的转基因细胞系。
6.含有权利要求2或3所述的(-)Y-内酰胺酶编码基因的宿主菌。
7.根据权利要求1所述的(_)Y-内酰胺在拆分消旋体Y-内酰胺，利用催化产物氨基酸进一步获得(_) Y -内酰胺的应用。
8.根据权利要求2或3所述的(-)Y-内酰胺酶编码基因在拆分消旋体Y-内酰胺，利用催化产物氨基酸进一步获得(_) Y -内酰胺的应用。
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于所述应用为:将含(-)Y-内酰胺酶基因的重组大肠杆菌菌体悬浮到pH6.0-pH8.5的磷酸缓冲液中，加入Y内酰胺底物，37°转化24小时，拆分消旋Y-内酰胺，得到催化产物氨基酸，进行一步制备(_) Y-内酰胺。
【文档编号】C12R1/19GK103966192SQ201410218809
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年5月22日 优先权日:2014年5月22日
【发明者】郑国钧, 任璐 申请人:北京化工大学