发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法
【专利摘要】本发明公开了一种发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法，其步骤如下：1）将面包酵母斜面菌种接种到糖蜜液体培养基中，得种子液；2）将种子液接种到糖蜜培养基中，温度28℃，间歇摇荡培养；3）将步骤2）的种子液接入发酵罐中，发酵培养4～6h，之后按工艺要求平均流加稀释糖蜜和营养盐，流加培养24～25h；4）将步骤3）的发酵醪液经离心机加水离心洗涤，获得固形物含量60%～70%的酵母抽提物生产乳膏，再将该乳膏加水稀释至使用浓度10～20%的乳液即可。本发明采用甘蔗糖蜜为培养基碳源培养酵母抽提物乳液的生产方法，缩短了生产时间，提高了酵母抽提物乳液的生产水平，获得酵母细胞乳液浓度为250～300g/L，蛋白质含量高达55%。
【专利说明】发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于酵母抽提物及生物发酵领域，具体涉及一种发酵生产高密度酵母抽提 物乳液的方法。
【背景技术】
[0002] 酵母抽提物采用以蛋白质含量丰富的食用酵母为原料，采用自溶、酶解、分离、浓 缩等现代生物高新技术，将酵母细胞内的蛋白质、核酸等进行降解后精制而成，是一种棕黄 色可溶性膏状或浅黄色粉状纯天然制品。主要成分为多肽、氨基酸、呈味核苷酸、B族维生素 及微量元素，是非常适合微生物生长的天然营养源，由于酵母抽提物营养丰富、加工性能良 好，在一些食品加工中往往能起到有效增强产品鲜美味、醇厚感，同时缓和产品咸味、酸味， 掩盖异味等作用，是一种优良的天然调味料，在食品行业中具有广泛的用途。
[0003]目前生产酵母抽提物的原料主要来自啤酒酵母和面包酵母，国外生产酵母抽提物 大多使用啤酒废酵母，我国则主要以面包酵母生产酵母抽提物。以废啤酒酵母生产的酵母 抽提物主要是废酵母的再利用，价格低廉，但无法开发出高端的酵母抽提物产品，如高蛋 白、高核酸、高谷氨酸等。以糖蜜发酵的面包酵母生产的酵母抽提物质量比较稳定，蛋白质 和核酸含量高，营养物质的组成全面。一般高端的酵母抽提物产品采用专业的面包酵母来 生产，酵母抽提物正在向以面包酵母为主的原料转变。
[0004] 最新数据表明，近年来，中国的酵母提取物年均需求增长率高于10%以上，而在美 国和欧洲市场的增长速度大约在5%。目前全球酵母提取物的年生产规模在20万吨左右。
[0005] 我国生产酵母抽提物面临原料不足，生产技术相对落后，生产成本普遍较高，产品 质量档次相对较低与欧美等发达国家差距很大。
[0006] 检索到目前生产酵母抽提物的原料相关专利及文献报道如下： 1、中国专利，一种高谷氨酸酵母抽提物及其制备方法申请号：CN200810189433.0公 开（公告）号：CN101756151A申请（专利权）人：安琪酵母股份有限公司摘要：本发 明提供了一种酵母抽提物及其制备方法，该方法包括以一种蛋白质含量超过60%的酵母培 养物为原料在富含氮源的培养基中培养制得酵母乳，然后将一定量的蛋白酶以及谷胺酰胺 转氨酶加入到所述酵母乳中，从而经过一系列工艺制得一种酵母抽提物。该酵母抽提物中 的谷氨酸含量大于10 %，根据本发明提供的制备方法，可以大规模地制得谷氨酸含量大于 10 %的酵母抽提物。
[0007] 2、中国专利，酵母抽提物的提取残渣的利用方法申请号：CN201280006932. 6,公开 (公告）号：CN103338659A申请（专利权）人：兴人生命科学株式会社摘要：获得一种适 用于功能性食品或药品等、品质稳定、除去了留醇配糖体等杂质的葡萄糖神经酰胺组合物。 作为其原料，使用有食用经验、安全且容易收购的原料，以低成本来生产葡萄糖神经酰胺组 合物。将从圆酵母等提取酵母抽提物后的酵母残渣作为原料，利用醇类等有机溶剂对其进 行提取，从而得到含有葡萄糖神经酰胺的组合物。
[0008] 3、中国专利，一种同时制备酵母抽提物和β-1,3-葡聚糖的方法，申请号： CN201010214448. 5公开（公告）号：CN101897431A申请（专利权）人：中国农业大 学摘要：一种属于酵母抽提物及β_1，3-葡聚糖的制备领域的同时制备酵母抽提物和 β -1，3-葡聚糖的方法。该方法包括啤酒废酵母脱苦除杂，啤酒废酵母的酶解与灭活，酵母 抽提物的分离与干燥，β_1，3-葡聚糖的酸碱处理、洗涤及干燥等步骤。该方法具有原料利 用率高、品质好、成本低、易于产业化等特点，实现了啤酒废酵母再利用，并同时生产出酵母 抽提物和β _1, 3-匍聚糖两种广品的目的。
[0009] 4、中国专利，由脱脂大豆柏制备非肉源的羊肉粉的方法申请号： CN200810140581. 3公开（公告）号：CN101322545A申请（专利权）人：河南京华食品科 技开发有限公司摘要：由脱脂大豆柏制备非肉源的羊肉粉的方法，有效解决非肉源羊肉粉 的生产，以满足多方面需求问题，其实现的技术方案是，首先将脱脂大豆柏、酵母抽提物和 玉米淀粉非肉源纯天然原料在双螺杆挤压膨化机内进行浓缩、降解、重排和热分解反应，获 取微孔状膨化固体，再将微孔状膨化固体以浸淋方式配以其它的调味液、复合氨基酸成分， 用连续方式进入带式烘干机进行烘干，然后制成非肉源肉香粉，再进一步与其它组分，从而 可制成各种风味的羊肉粉等调味料，本发明是肉源肉香粉的替代品，产能高、成本低、蛋白 含量高、香气香味浓郁逼真，能形成从炖煮到烧烤宽阔和谐的肉类风味，有良好的经济和社 会效益。
[0010] 5、中国专利，用啤酒废酵母制备酵母多糖、海藻糖及酵母抽提物的方法，申请号： CN2〇〇910〇3682〇. 5,公开（公告）号：CN10148m9A，申请（专利权）人：华南理工大学； 广州珠江啤酒股份有限公司摘要：一种利用啤酒废酵母同时制备酵母多糖、海藻糖及酵母 抽提物的方法。该方法包括啤酒废酵母脱苦去杂质，啤酒废酵母的自溶以及酶解与灭活，酵 母多糖的分离和干燥，海藻糖的膜分离、浓缩、结晶及干燥，酵母抽提物的浓缩及干燥等步 骤。该方法具有原料利用率高、品质好、成本低、易于产业化的特点，实现了从同一种工业废 弃物一啤酒废酵母同时生产出酵母多糖、海藻糖和酵母抽提物三种产品，提高了工业废 弃物的利用率，达到了废弃物最大资源化的目的。
[0011] 6、中国专利，一种从啤酒废酵母中提取多肽和氨基酸的方法申请号： CN201110426167. 0公开（公告）号：CN102550802A申请（专利权）人：成都宏安生物科 技有限公司摘要：一种从啤酒废酵母中提取多肽和氨基酸的方法，啤酒废酵母粉经预处 理、高压均质处理、第一次抽提、酶解、第二次抽提、灭酶和压滤分离后，喷雾干燥得到酵母 多肽和氨基酸粉。本发明以啤酒厂生产啤酒后的副产物--啤酒废酵母为原料，提取酵母 多肽和氨基酸粉，可以减轻污染和实现资源的二次转化，也可产生大的经济效益；本发明采 用的是先高压均质，再两次抽提，中间辅之以复合蛋白酶酶解，可以增加酵母细胞壁的通透 性和提1?酵母细胞内蛋白和氣基酸的溶出率，进而提1?酵母抽提物的获得率，增加酵母蛋 白的含量；本发明可以作为功能性饲料添加剂和食品添加剂。
[0012] 7、中文期刊，L-苯丙氨酸工程菌株高密度发酵的研究翁雪清，福建麦丹生物集团 有限公司福州研究中心，发酵科技通讯2012,摘要：高密度发酵是现代发酵工程的一项 新技术，能显著提高大肠杆菌工程菌体和基因工程产品的产量。对于重组大肠杆菌的发酵 来讲，实现高密度发酵，可相应地缩小生物反应器的体积和降低生物量的分离费用，从而降 低生产成本，达到提高生产效率的目的。本文通过均匀优化实验设计对L-苯丙氨酸大肠杆 菌工程菌种子培养基的主要成分进行了优化研究,并通过30L全自动发酵罐来表征优化， 结果显示：硫酸铵3. Og/L，硫酸镁7. Og/L，酵母抽提物13g/L具有较好的工程菌生长的同步 性，种子0D61(I在稀释100倍后达到0. 190,为进一步实现高密度发酵生产打下基础。
[0013] 8、中文期刊，高浓度培养YE乳液的研究，邓春明陈佳泉马兴周，广西轻工业 2009,广东丹宝利酵母有限公司，摘要：在酵母抽提物乳液的培养中，通过在甘蔗糖蜜 流加糖液中添加一定比例的果葡萄糖浆来降低发酵液的渗透压，减轻高渗透压对酵母细胞 生长的抑制作用，以达到高浓度培养酵母细胞的目的。通过正交试验优化发酵工艺条件，在 试验中取得了酵母培养浓度高达320g/L的效果。
[0014] 由上述公开文献所见，用于生产酵母抽提物的乳液多为啤酒废酵母和少量面包酵 母。啤酒酵母乳液多具有苦味，生产酵母抽提物时难以完全去除。而高密度发酵生产面包 酵母用于生产酵母抽提物的报道不多。
【发明内容】
[0015] 本发明的目的是为了解决上述现有技术存在的问题，提供一种利用面包酵母和以 糖厂糖蜜为培养基生产高密度酵母抽提物乳液的方法。
[0016] 本发明所述的发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法，包括如下步骤： a).将面包酵母斜面菌种接种于100mL糖蜜液体种子培养基中，温度28°C下，间歇摇 荡培养24h或低转速lOOrpm振荡培养24h。
[0017] b).将步骤a)的种子液100mL按10%接种量接种至装有糖蜜液体种子培养基的 3L三角瓶中，制备1000mL种子液。在温度28°C下，间歇摇荡培养24h或低转速lOOrpm振 荡培养24h。
[0018] c).将步骤b)的种子液按15%的接种量在火焰圈下无菌接种到装有发酵培养基 的15L发酵罐中，使得初始培养液总体积约6200mL。调节温度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0. 3vvm小量通风培养4h?6h。之后开始按工艺要求流加补料稀释糖蜜和营养盐，流加培 养条件：培养温度为28°C，pH3. 5?4. 5,通气量1. 0?2. Ovvm下补料流加24h?25h。
[0019] d).将步骤c)获得的发酵醪液经离心机5000r/min，离心洗漆10min，加水离心洗 涤3?5次，获得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鲜酵母乳膏，再将该鲜酵母乳膏用水 稀释到10?15%的乳液即可。
[0020] 其中，步骤a)和步骤b)中的糖蜜液体种子培养基配方为：稀释糖蜜150mL/L，尿 素 2. 50g/L，磷酸一铵0· 60g/L，七水硫酸镁0· 12g/L，七水硫酸锌0· 05g/L，氯化钾0· 10g/L， 氯化钠 〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。调节培养基pH到4. 2,121°C高温灭菌20min。
[0021] 其中，步骤C)中的发酵培养基配方为：稀释糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一铵 9. 0g，七水硫酸镁7. 5g，七水硫酸锌1. 0g，氯化钾5g，氯化钠5g，微量元素母液10mL。121°C 高温灭菌20min。
[0022] 其中，所述的稀释糖蜜为原糖蜜用水稀释至锤度45?50%°Bx，加热煮沸lmin，冷 却至50?80°C，用离心机4000r/min，离心分离10min，弃去沉淀物，即得稀释糖蜜。
[0023] 所述的流加营养盐为，尿素110g和磷酸一铵20g，两种营养盐一起配成500mL溶 液。121°C高温灭菌20min。
[0024] 其中，所述的微量元素母液配方为：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ 0· 4 mg/L，泛酸4mg/ L，生物素0.1 mg/L，维生素& 0.4 g/L，维生素 C 4 mg/L。
[0025] 其中，步骤c)中所述的按工艺要求流加补料稀释糖蜜和营养盐：每罐流加稀释糖 蜜约5. 0L，按流加发酵时间Oh?8h平均流加稀释蜜总量的20%，8h?18h平均流加稀释蜜 总量的56%，18h?24h平均流加稀释蜜总量的24%。每罐补料需要营养盐尿素110g和磷酸 一铵20g，两种营养盐一起配成500mL溶液，按流加发酵时间Oh?8h平均流加营养盐总液 量的50%，8h?12h平均流加营养盐总液量的50%。
[0026] 本发明生产的高密度酵母抽提物乳液，其蛋白质含量高，能生产出高端的酵母抽 提物广品，有效提商了生广效益。
[0027] 与现有技术比较，本发明的突出的实质性特点和显著的进步是： 1、本方面采用适宜的发酵方法，合理的培养基配方及发酵方式，获得高含蛋白质、高密 度的酵母抽提物专用生产乳液。
[0028] 2、原料来源丰富，可以选用面包酵母，也可以采用糖蜜酒精生产过程的酵母。
[0029] 3、反应条件温和， 4、得到的抽提物口感好，能提高酵母抽提物产品中的总氮含量和氨基态氮含量。
【专利附图】
【附图说明】
[0030] 附图1是本发明实施例的生产工艺的示意图。
[0031] 图中看到，本发明的发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法，其步骤如下：1)将面 包酵母斜面菌种接种到糖蜜液体培养基中，得种子液；2)将种子液接种到营养盐和糖蜜培 养基中，温度28°C，间歇摇荡培养；3)将步骤2)的种子液接入15L气升式发酵罐中，发酵培 养4?6h，之后按工艺要求平均流加稀释糖蜜和营养盐，流加培养24?25h ;4)将步骤3) 的发酵醪液经离心机加水离心洗涤，获得固形物含量60%?70%的酵母抽提物生产乳膏，再 将该乳膏加水稀释至使用浓度10?20%的乳液即可。
[0032]
【具体实施方式】
[0033] 以下实施用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0034] 实例 1 发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法，由如下步骤组成： 步骤1 :将面包酵母斜面菌种接种于100mL糖蜜液体种子培养基中，温度28°C下，间歇 摇荡培养24h。
[0035] 步骤2 :将步骤1的种子液100mL按10%接种量接种至装有糖蜜液体种子培养基 的3L三角瓶中，制备1000mL种子液。在温度28°C下，间歇摇荡培养24h。
[0036] 其中，步骤1和步骤2中的糖蜜液体种子培养基配方为：稀释糖蜜150mL/L，尿素 2. 50g/L，磷酸一铵0· 60g/L，七水硫酸镁0· 12g/L，七水硫酸锌0· 05g/L，氯化钾0· 10g/L，氯 化钠〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。调节培养基pH到4. 2,121°C高温灭菌20min。
[0037] 步骤3 :将步骤2的种子液按15%的接种量在火焰圈下无菌接种到装有发酵培养 基的15L发酵罐中，使得初始培养液总体积约6200mL。调节温度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0.3vvm小量通风培养4h。之后开始流加补料稀释糖蜜和营养盐。流加培养条件：培养温度 为28°C，pH3. 5?4. 5,通气量1. 0?2. Ovvm下补料流加24h。
[0038] 其中，15L发酵罐的发酵培养基配方为：稀释糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一铵 9. 0g，七水硫酸镁7. 5g，七水硫酸锌1. 0g，氯化钾5g，氯化钠5g，微量元素母液10mL。121°C 高温灭菌20min。
[0039] 微量元素母液配方：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ (X4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0· 1 mg/L，维生素 & 0.4 g/L，维生素 C 4 mg/L。
[0040] 发酵补料配方及流加工艺控制：每罐流加稀释糖蜜约5. 0L，按流加发酵时间Oh? 8h平均流加稀释蜜总量的20%，8h?18h平均流加稀释蜜总量的56%，18h?24h平均流加 稀释蜜总量的24%。每罐补料需要营养盐尿素110g和磷酸一铵20g，两种营养盐一起配成 500mL溶液，按流加发酵时间Oh?8h平均流加营养盐总液量的50%，8h?12h平均流加营 养盐总液量的50%。其中，流加的稀释糖蜜和营养盐均应121°C高温灭菌20min。
[0041] 步骤4 :将发酵醪液经离心机5000r/min，离心洗漆10min，加水离心洗漆3?5次， 获得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鲜酵母乳膏，再将该乳膏用水稀释到10?15%的 乳液。
[0042] 结果：发酵培养结束，发酵醪液中的酵母细胞浓度达到278. 36g/L，且菌体大小均 匀，芽孢率1. 0%以下，菌体蛋白质含量54. 8%。
[0043] 实例 2 发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法，由如下步骤组成： 步骤1 :将面包酵母斜面菌种接种于100mL糖蜜液体种子培养基中，温度28°C下，间歇 摇荡培养24h。
[0044] 步骤2 :将步骤1的种子液100mL按10%接种量接种至装有糖蜜液体种子培养基 的3L三角瓶中，制备1000mL种子液。在温度28°C下，间歇摇荡培养24h。
[0045] 其中，步骤1和步骤2中的糖蜜液体种子培养基配方为：稀释糖蜜150mL/L，尿素 2. 50g/L，磷酸一铵0· 60g/L，七水硫酸镁0· 12g/L，七水硫酸锌0· 05g/L，氯化钾0· 10g/L，氯 化钠 〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。调节培养基pH到4. 2,121°C高温灭菌20min。
[0046] 步骤3 :将步骤2的种子液按15%的接种量在火焰圈下无菌接种到装有发酵培养 基的15L发酵罐中，使得初始培养液总体积约6200mL。调节温度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0. 3vvm小量通风培养4h。之后开始流加补料稀释糖蜜和营养盐。流加培养条件：培养温度 为28°C，pH3. 5?4. 5,通气量1. 0?2. Ovvm下补料流加24h。
[0047] 其中，15L发酵罐的发酵培养基配方为：稀释糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一铵 9. 0g，七水硫酸镁7. 5g，七水硫酸锌1. 0g，氯化钾5g，氯化钠5g，微量元素母液10mL。121°C 高温灭菌20min。
[0048] 微量兀素母液配方：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ 0· 4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0· 1 mg/L，维生素 & 0.4 g/L，维生素 C 4 mg/L。
[0049] 发酵补料配方及流加工艺控制：每罐流加稀释糖蜜约5. 0L，按流加发酵时间Oh? 8h平均流加稀释蜜总量的20%，8h?18h平均流加稀释蜜总量的56%，18h?25h平均流加 稀释蜜总量的24%。每罐补料需要营养盐尿素110g和磷酸一铵20g，两种营养盐一起配成 500mL溶液，按流加发酵时间Oh?8h平均流加营养盐总液量的50%，8h?12h平均流加营 养盐总液量的50%。其中，流加的稀释糖蜜和营养盐均应121 °C高温灭菌20min。
[0050] 步骤4 :将发酵醪液经离心机5000r/min，离心洗漆10min，加水离心洗漆3?5次， 获得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鲜酵母乳膏，再将该乳膏用水稀释到10?15%的 乳液。
[0051] 结果：发酵培养结束，发酵醪液中的酵母细胞浓度达到285. 61g/L，且菌体大小均 匀，芽孢率1. 0%以下，菌体蛋白质含量55. 0%。
[0052] 实例 3 发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法，由如下步骤组成： 步骤1 :将面包酵母斜面菌种接种于100mL糖蜜液体种子培养基中，温度28°C下，间歇 摇荡培养24h。
[0053] 步骤2 :将步骤1的种子液100mL按10%接种量接种至装有糖蜜液体种子培养基 的3L三角瓶中，制备1000mL种子液。在温度28°C下，间歇摇荡培养24h。
[0054] 其中，步骤1和步骤2中的糖蜜液体种子培养基配方为：稀释糖蜜150mL/L，尿素 2. 50g/L，磷酸一铵0· 60g/L，七水硫酸镁0· 12g/L，七水硫酸锌0· 05g/L，氯化钾0· 10g/L，氯 化钠〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。调节培养基pH到4. 2,121°C高温灭菌20min。
[0055] 步骤3 :将步骤2的种子液按15%的接种量在火焰圈下无菌接种到装有发酵培养 基的15L发酵罐中，使得初始培养液总体积约6200mL。调节温度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0. 3vvm小量通风培养6h。之后开始流加补料稀释糖蜜和营养盐。流加培养条件：培养温度 为28°C，pH3. 5?4. 5,通气量1. 0?2. Ovvm下补料流加24h。
[0056] 其中，15L发酵罐的发酵培养基配方为：稀释糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一铵 9. 0g，七水硫酸镁7. 5g，七水硫酸锌1. 0g，氯化钾5g，氯化钠5g，微量元素母液10mL。121°C 高温灭菌20min。
[0057] 微量兀素母液配方：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ 0· 4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0· 1 mg/L，维生素 & 0.4 g/L，维生素 C 4 mg/L。
[0058] 发酵补料配方及流加工艺控制：每罐流加稀释糖蜜约5. 0L，按流加发酵时间Oh? 8h平均流加稀释蜜总量的20%，8h?18h平均流加稀释蜜总量的56%，18h?24h平均流加 稀释蜜总量的24%。每罐补料需要营养盐尿素110g和磷酸一铵20g，两种营养盐一起配成 500mL溶液，按流加发酵时间Oh?8h平均流加营养盐总液量的50%，8h?12h平均流加营 养盐总液量的50%。其中，流加的稀释糖蜜和营养盐均应121 °C高温灭菌20min。
[0059] 步骤4 :将发酵醪液经离心机5000r/min，离心洗漆10min，加水离心洗漆3?5次， 获得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鲜酵母乳膏，再将该乳膏用水稀释到10?15%的 乳液。
[0060] 结果：发酵培养结束，发酵醪液中的酵母细胞浓度达到295. 54g/L，且菌体大小均 匀，芽孢率0. 06%，菌体蛋白质含量55. 2%。
[0061] 实例 4 发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法，由如下步骤组成： 步骤1 :将面包酵母斜面菌种接种于100mL糖蜜液体种子培养基中，温度28°C下，间歇 摇荡培养24h。
[0062] 步骤2 :将步骤1的种子液100mL按10%接种量接种至装有糖蜜液体种子培养基 的3L三角瓶中，制备1000mL种子液。在温度28°C下，间歇摇荡培养24h。
[0063] 其中，步骤1和步骤2中的糖蜜液体种子培养基配方为：稀释糖蜜150mL/L，尿素 2. 50g/L，磷酸一铵0· 60g/L，七水硫酸镁0· 12g/L，七水硫酸锌0· 05g/L，氯化钾0· 10g/L，氯 化钠 〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。调节培养基pH到4. 2,121°C高温灭菌20min。
[0064] 步骤3 :将步骤2的种子液按15%的接种量在火焰圈下无菌接种到装有发酵培养 基的15L发酵罐中，使得初始培养液总体积约6200mL。调节温度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0. 3vvm小量通风培养6h。之后开始流加补料稀释糖蜜和营养盐。流加培养条件：培养温度 为28°C，pH3. 5?4. 5,通气量1. 0?2. Ovvm下补料流加24h。
[0065] 其中，15L发酵罐的发酵培养基配方为：稀释糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一铵 9. 0g，七水硫酸镁7. 5g，七水硫酸锌1. 0g，氯化钾5g，氯化钠5g，微量元素母液10mL。121°C 高温灭菌20min。
[0066] 微量兀素母液配方：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ 0· 4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0· 1 mg/L，维生素 & 0.4 g/L，维生素 C 4 mg/L。
[0067] 发酵补料配方及流加工艺控制：每罐流加稀释糖蜜约5. 0L，按流加发酵时间Oh? 8h平均流加稀释蜜总量的20%，8h?18h平均流加稀释蜜总量的56%，18h?25h平均流加 稀释蜜总量的24%。每罐补料需要营养盐尿素110g和磷酸一铵20g，两种营养盐一起配成 500mL溶液，按流加发酵时间Oh?8h平均流加营养盐总液量的50%，8h?12h平均流加营 养盐总液量的50%。其中，流加的稀释糖蜜和营养盐均应121 °C高温灭菌20min。
[0068] 步骤4 :将发酵醪液经离心机5000r/min，离心洗漆10min，加水离心洗漆3?5次， 获得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鲜酵母乳膏，再将该乳膏用水稀释到10?15%的 乳液。
[0069] 结果：发酵培养结束，发酵醪液中的酵母细胞浓度达到300. 08g/L，且菌体大小均 匀，芽孢率1. 1%，菌体蛋白质含量55. 0%，做成调味品风味好。
【权利要求】
1. 一种发酵生产高密度酵母抽提物乳液的方法，其特征在于，包括如下步骤： a) .将面包酵母斜面菌种接种于lOOmL糖蜜液体种子培养基中，温度28°C下，间歇摇 荡培养24h或低转速lOOrpm振荡培养24h ; b) .将步骤a)的种子液100mL按10%接种量接种至装有糖蜜液体种子培养基的3L三 角瓶中，制备l〇〇〇mL种子液。
2. 在温度28°C下，间歇摇荡培养24h或低转速lOOrpm振荡培养24h ; c) .将步骤b)的种子液按15%的接种量在火焰圈下无菌接种到装有发酵培养基的15L 发酵罐中，使得初始培养液总体积约6200mL ;调节温度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1?0. 3vvm 小量通风培养4h?6h ;之后开始按工艺要求流加补料稀释糖蜜和营养盐，流加培养条件： 培养温度为28°C，pH3. 5?4. 5,通气量1. 0?2. Ovvm下补料流加24h?25h ; d) .将步骤c)获得的发酵醪液经离心机5000r/min，离心洗漆lOmin，加水离心洗漆 3?5次，获得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鲜酵母乳膏，再将该鲜酵母乳膏用水稀 释到10?15%的乳液即可； 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)和步骤b)中的糖蜜液体种子培养基 配方为：稀释糖蜜150mL/L，尿素2. 50g/L，磷酸一铵0. 60g/L，七水硫酸镁0. 12g/L，七水硫 酸锌0. 05g/L，氯化钾0. 10g/L，氯化钠0. 10g/L，微量元素母液2mL，调节培养基pH到4. 2， 121°C高温灭菌20min。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中的发酵培养基配方为：稀释糖 蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一铵9. 0g，七水硫酸镁7. 5g，七水硫酸锌1. 0g，氯化钾5g，氯化 钠5g，微量元素母液lOmL，121°C高温灭菌20min。
4. 根据权利要求1?3任一项所述的方法，其特征在于，所述的稀释糖蜜为原糖蜜用水 稀释至锤度45?50%°Bx，加热煮沸lmin，冷却至50?80°C，用离心机4000r/min，离心分 离10min，弃去沉淀物，即得稀释糖蜜。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中的流加营养盐为，尿素110g和 磷酸一铵20g，两种营养盐一起配成500mL溶液，121°C高温灭菌20min。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中的流加稀释糖蜜是经121°C高 温灭菌20min。
7. 根据权利要求2?3任一项所述的方法，其特征在于，所述的微量元素母液配方为： MnCI2*2H20 4mg/L，KI 0.4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0.1 mg/L，维生素 & 0.4 g/L，维生 素 C 4 mg/L。
8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中所述的按工艺要求流加补料稀 释糖蜜和营养盐：每罐流加稀释糖蜜约5. 0L，按流加发酵时间Oh?8h平均流加稀释蜜总 量的20%，8h?18h平均流加稀释蜜总量的56%，18h?24h平均流加稀释蜜总量的24% ;每 罐补料需要营养盐尿素1 l〇g和磷酸一铵20g，两种营养盐一起配成500mL溶液，按流加发酵 时间Oh?8h平均流加营养盐总液量的50%，8h?12h平均流加营养盐总液量的50%。
【文档编号】A23L1/221GK104195180SQ201410388212
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月8日 优先权日:2014年8月8日
【发明者】廖福真, 汪子雄, 莫小驹, 陈书勤, 刁晓, 周茂浪 申请人:广西湘桂酵母科技有限公司