本发明属于组合物领域，具体涉及一种组合物和饲料添加剂及其制备方法。
背景技术：
动物肠道菌群是一个由益生菌、条件致病菌和病原菌组成的复杂微生态系统，其微生物种类超过1000种。其中益生菌主要有乳杆菌和双歧杆菌等，大肠埃希氏菌属是肠道最为常见的引起腹泻的致病菌，肠道的病原菌还包括通过外界喂食霉变饲料进入肠道的霉菌，其中最为常见的是黄曲霉。抗生素在动物肠道体内起到的主要作用是调节肠道菌群，在抑制致病菌生长的同时对益生菌生长没有显著影响。因其良好的抗菌活性，自50年代以来，饲用抗生素促使了畜禽养殖业的迅速发展，它在促进动物生长、提高饲料转化率、改善动物产品品质等方面都起着积极作用。然而，近年大量的研究证实，由于饲用抗生素的不合理使用，产生了细菌耐药性和抗生素残留等负面问题，尤其是人畜交叉抗药性的问题。这已经引起了世界各国的广泛关注，2006年1月起欧盟已全面禁止在饲料中添加抗生素，美国、日本等国家都出台了相似的法律法规限制或禁止饲用抗生素的使用。2015年我国史上最严《食品安全法》和2016年“禁抗令”的出台，预示着寻找开发新型、绿色、安全、高效的饲料添加剂替代抗生素的使用已成大势所趋。
植物精油是一类植物提取物，源于草本植物的花、叶子、茎根、果实种子、树脂通过以蒸馏、压榨等方式提炼出来的，因其良好的抗菌活性，目前植物精油已被我国农业部批准作为一种可长期添加的饲料添加剂，可用于代替饲用抗生素，减少饲用抗生素的使用。然而植物精油属于一种广谱抗菌活性成分，在动物肠道内发挥作用时，不仅对肠道致病菌起作用，也会一定程度上杀害存在于肠道中的益生菌，导致肠道菌群失衡。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种组合物和饲料添加剂及其制备方法，不仅提高了植物提取物抑制肠道致病菌生长的功效，又保护了肠道益生菌。
本发明的具体技术方案如下：
本发明提供了一种组合物，包括：植物精油、酸剂和益生元；
其中，所述植物精油选自肉桂精油、牛至油或大蒜精油；
所述酸剂选自乙酸、甲酸、丙酸、乳酸和柠檬酸中的一种或多种；
所述益生元选自甘露寡糖、异麦芽糖低聚糖、低聚果糖、低聚半乳糖和大豆低聚糖中的一种或多种。
优选的，按重量份数计，包括以下组分：
肉桂精油0.5-2份；
乙酸0.3-0.6份；
甘露寡糖4-10份。
本发明还提供了一种饲料添加剂，包括：上述组合物和辅料。
优选的，所述载体为麦芽糖糊精、淀粉或阿拉伯胶；
按重量份计，所述载体为65-67份。
本发明还提供了上述饲料添加剂的制备方法，包括：包括：将肉桂精油、乙酸、甘露寡糖和载体混合。
本发明所提供的一种组合物包括肉桂精油、乙酸和甘露寡糖，其中肉桂精油具有挥发性和广谱抗菌活性，乙酸能够维持胃肠道酸碱平衡，抑制有害菌群，促进益生菌的生长，乙酸和肉桂精油合用增强了组合物的抑菌效果，降低了肉桂精油对胃肠道益生菌的伤害，促进了胃肠道的吸收；同时，肉桂精油、乙酸和甘露寡糖三者配伍合理，协同增效，既提高了组合物抑制肠道致病菌生长的功效，又增强了机体免疫功能，保护了肠道益生菌。制备方法简单，各组分成本低廉，可有效替代饲用抗生素作为一种饲料添加剂应用于养殖业，降低生成成本。
具体实施方式
本发明提供了一种组合物，包括：植物提取物、酸剂和益生元。
在本发明中，植物提取物选自肉桂精油、牛至油、大蒜精油或其他常用植物精油；酸剂选自乙酸、甲酸、丙酸、乳酸和柠檬酸中的一种或多种；益生元选自甘露寡糖、异麦芽糖低聚糖、低聚果糖、低聚半乳糖和大豆低聚糖等功能性低聚糖中的一种或多种。本发明对植物提取物、酸剂和益生元的来源没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的植物提取物、酸剂和益生元即可，如采用市售商品，也可采用本领域技术人员熟知的制备植物提取物、酸剂和益生元的技术方案自行制备。
为使本发明组合物实现最佳的抑菌效果，使其能够起到完全替代饲用抗生素的抑菌效果而作为一种良好的饲料添加剂，发明人对本发明组合物中各组分进行了优化，经过大量的试验发现，肉桂精油、乙酸和甘露寡糖这三者配伍使用可起到协同增效的作用。
进一步的，本发明所提供的组合物，按重量份数计，包括以下组分：
肉桂精油0.5-2份；
乙酸0.3-0.6份；
甘露寡糖4-10份。
更进一步的，肉桂精油-醇溶液的含量优选为0.3-0.8份，更优选为0.3份、0.5份或0.8份；
2％的乙酸-醇溶液优选为0.3-0.6份，更优选为0.4份或0.5份；
主要起保护胃肠道益生菌作用的甘露寡糖优选为4-8份，更优选为4份、7份或8份。
本发明还提供了一种饲料添加剂，包括：上述组合物和载体。在本发明中，载体优选为麦芽糖糊精、淀粉和阿拉伯胶，更优选为麦芽糊精。本发明对载体的来源没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的载体即可，如采用市售商品，也可采用本领域技术人员熟知的制备载体的技术方案自行制备。
进一步的，按重量份计，载体的含量优选为65-67份，更优选为65份、66份或67份。
本发明还提供了上述饲料添加剂的制备方法，为了提高肉桂精油、乙酸和甘露寡糖这三者之间的溶解度，使其更好的进行混合，本发明饲料添加剂中肉桂精油和乙酸均先采用醇溶液进行稀释，然后再进行各组分之间的混合。
在本发明中，制备过程优选为以下步骤：
将肉桂精油、醇溶液混合，得到肉桂精油-醇溶液；
将乙酸、醇溶液混合，得到乙酸-醇溶液；
将所述肉桂精油-醇溶液、乙酸-醇溶液、甘露寡糖和麦芽糖糊精混合。
进一步的，醇溶液包括：无水乙醇、丙二醇和丙三醇中的一种或两种。
更进一步的，肉桂精油-醇溶液中所述肉桂精油的质量百分比含量为10％，乙酸-醇溶液中所述乙酸的质量百分比含量为2％。
本发明对所述组合物和饲料添加剂的制备方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的制备工艺即可。
通过如体外抑菌实验等研究结果表明，上述组合物使用时，按照100g/t饲料的规格将其添加到猪饲料中，一方面能抑制猪肠道致病菌生长的同时不影响或促进猪肠道益生菌的生长，起到抗生素在猪肠道中的作用，另一方面对猪饲料本身存在的腐败微生物显示出有效的抗菌作用，从而达到防腐作用。说明肉桂精油-乙酸-甘露寡糖三种组分协同使用可以提高机体免疫功能，提高养殖效益，能够起到完全替代饲用抗生素的抑菌效果而作为一种良好的饲料添加剂。
肉桂精油具有挥发性和广谱抗菌活性，能够增加胃肠道吸收，抑制胃肠道致病菌的增殖；乙酸能够维持胃肠道酸碱平衡，抑制有害菌群，促进益生菌的生长；甘露寡糖作为一种益生元，可提高机体免疫力，保护胃肠道益生菌，促进生长。乙酸和肉桂精油合用增强了组合物的抑菌效果，降低了肉桂精油对胃肠道益生菌的伤害，促进了胃肠道的吸收。同时，肉桂精油、乙酸和甘露寡糖三者配伍合理，协同增效，既提高了组合物抑制肠道致病菌生长的功效，又增强了机体免疫功能，保护了肠道益生菌。制备方法简单，各组分成本低廉，可有效替代饲用抗生素作为一种饲料添加剂应用于养殖业，降低生成成本。
下面将结合本发明具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例只是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本领域技术人员应当理解，对本发明的具体实施例进行修改或者对部分技术特征进行同等替换，而不脱离本发明技术方案的精神，均应涵盖在本发明保护的范围中。
以下实施例中所采用的肉桂精油、乙酸、甘露寡糖、麦芽糊精、1,2-丙二醇、无水乙醇、四环素、阿莫西林、多黏菌素b、卡那霉素和恩诺沙星均为市售；产肠毒素大肠杆菌k88ac菌株受赠于广州美瑞泰科生物工程技术有限公司；大肠杆菌的保藏号为atcc25922；肠出血性大肠杆菌的保藏号为atcc35150(o157：h7)；致泻性大肠杆菌的保藏号为cicc10411(o127：k63)。
实施例1
1、配方
其中，所述份数为重量份。
2、制备方法
用1,2-丙二醇配制体积百分比浓度为10％的肉桂精油溶液，用3％无水乙醇配制体积百分比浓度为2％的乙酸溶液；然后，按处方量取各组分，再将肉桂油、乙酸和甘露寡糖混合后滴加到麦芽糊精中，充分混合均匀，得到一种饲料添加剂。将该饲料添加剂直接加进猪饲料中充分混合即可。其中，添加量为每吨饲料中添加100g饲料添加剂。
实施例2
1、配方
其中，所述份数为重量份。
2、制备方法
用1,2-丙二醇配制体积百分比浓度为10％的肉桂精油溶液，用3％无水乙醇配制体积百分比浓度为2％的乙酸溶液；然后，按处方量取各组分，再将肉桂油、乙酸和甘露寡糖混合后滴加到麦芽糊精中，充分混合均匀，得到一种饲料添加剂。最后，将该饲料添加剂直接加进猪饲料中充分混合即可。其中，添加量为每吨饲料中添加100g饲料添加剂。
实施例3
1、配方
其中，所述份数为重量份。
2、制备方法
用1,2-丙二醇配制体积百分比浓度为10％的肉桂精油溶液，用3％无水乙醇配制体积百分比浓度为2％的乙酸溶液；然后，按处方量取各组分，再将肉桂油、乙酸和甘露寡糖混合后滴加到麦芽糊精中，充分混合均匀，得到一种饲料添加剂。最后，将该饲料添加剂直接加进猪饲料中充分混合即可。其中，添加量为每吨饲料中添加100g饲料添加剂。
通过提高益生元的添加量促进益生菌的生长，从而调节肠道菌群的平衡，能较好的预防由大肠杆菌属性引起的腹泻。
实施例4体外抑菌活性测定实验
选择四环素、阿莫西林、多黏菌素b、卡那霉素和恩诺沙星等5种代表性饲用抗生素作为阳性对照，选择大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、致泻性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌等代表性胃肠道致病菌以及黄曲霉作为指示菌，采用纸片法对本发明饲料添加剂进行体外抑菌活性测定实验，每组设3次重复，观察实验结果时抑菌圈越大说明抑菌的效果越强。其中，组1为肉桂精油组，组2为乙酸组，组3为甘露寡糖组，组4为乙酸-甘露寡糖组(混合体积比为1：1)，组5为肉桂精油-乙酸组(混合体积比为1：1)，组6为乙酸-甘露寡糖组(混合体积比为1：1)。
表1为体外抑菌活性检测实验结果，如表1所示，本实施例制备的饲料添加剂对上述4种大肠杆菌和黄曲霉都具有较强的抑制作用，说明本发明所提供的饲料添加剂一方面能抑制猪肠道致病菌生长的同时不影响或促进猪肠道益生菌的生长，起到饲用抗生素在猪肠道中的作用，另一方面对猪饲料本身存在的腐败微生物显示出有效的抗菌作用，从而达到防腐作用。因此，本发明所提供肉桂精油-乙酸-甘露寡糖组合物可凭借其具有较强的抑菌作用和自身天然绿色的特点，作为一种具有明显抗菌作用的饲料添加剂，替代抗生素在饲料添加剂中的应用。
表1
注：抑菌圈直径＝抑菌圈直径平均值±标准偏差，孔径直径(5mm)包含在测量结果中，“-”表示整个平皿均不长菌。