具有抗氧化性滑菇黏液的提取方法及其应用与流程

本发明属于食品加工领域，具体涉及一种具有抗氧化性滑菇黏液的提取方法及应用。

背景技术：

滑菇学名光帽鳞伞(Pholiota nameko)。由于其菌盖表面有一层黏液，食用时黏滑可口而得名。滑菇不仅味道鲜美，营养丰富，而且具有较高的医疗价值。我国已成为世界上滑菇产量最大的国家，主产区集中在河北北部、辽宁、黑龙江等地。在我国台湾省，因滑菇伞形小，半球形，果团块，像一串珍珠做成的珠宝，也被称为“珍珠蘑”或“真珠菇”。

滑菇鲜菇含水分约为93％。每100g滑菇干菇中含粗蛋白33.76g，纯蛋白15.13g，脂肪4.05g，总糖38.89g(其中加水生成还原糖32.24g，戊聚糖2.77g，甲基戊聚糖0.94g，海藻糖3.67g，甘露糖3.20g)，纤维14.23g，灰分8.99g。灰分中含有钾、磷、铁、钙等多种矿质元素。此外，每100g滑菇含有维生素B₂0.05mg，维生素C 8.83mg，维生素D 0.22g，滑菇具有很高的营养价值，是一种低热量、低脂肪的保健食品。

新鲜滑菇表面含有大量黏液，从滑菇黏液的功能看，滑菇黏液可以通过提高胸腺指数、脾指数和脾淋巴细胞转化率增强机体免疫力，发挥抗衰老作用。工业中常常采用水洗、杀青、冷却、盐渍的方法处理滑菇，以延长保存期，并且方便食用，此过程会产生大量的含滑菇粘液的废水，一般作为废液扔掉，不但污染环境，还造成滑菇营养物质的大量损失，导致浪费。

技术实现要素：

为了对滑菇黏液进行充分利用，避免浪费，减少环境污染，本发明提供一种具有抗氧化性的滑菇黏液的提取方法及其应用。

本发明第一个目的是请求保护具有抗氧化性滑菇黏液的提取方法，滑菇黏液的提取方法为：

将新鲜滑菇菌根剪除，将滑菇子实体于25～27℃水中摇洗2～3h，滑菇子实体与水料液比为1:1～1:3(g/ml)，过滤后收集滤液，重复2～4次相同操作合并滤液，过滤除杂，得到滑菇黏液。

优选的，摇洗条件为：温度25℃摇洗2h。

优选的，滑菇子实体与水料液比为1:1(g/ml)。

本发明另一个目的请求保护上述滑菇黏液的应用，方法为：将滑菇黏液经旋转蒸发气真空浓缩4-5倍后倒入浅盘中，于45～60℃烘箱中热风干燥至恒重，得到滑菇黏液干物质，将滑菇黏液干物质作为有效成分制备抗氧化剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明滑菇黏液提取方法简单易操作，成本低，适合大规模生产、利于工业化。该方法得到的滑菇黏液抗氧化性强，制备的抗氧化剂绿色、无污染、抗氧化活性高，可以替代现有的化学抗氧化剂。本发明拓宽了滑菇黏液的应用领域，提高滑菇黏液利用率，变废为宝将其作为抗氧化剂的原料，弥补现有技术的不足，为抗氧化剂领域提供新思路。

附图说明

图1蛋白质标准曲线；

图2黏液中DNA琼脂凝胶电泳；

图3磷标准曲线；

图4葡萄糖标准曲线；

图5滑菇黏液的抗氧化性曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的说明，但本发明不以任何形式受限于实施例内容。实施例中所述试验方法如无特殊说明，均为常规方法；如无特殊说明，所述试剂和生物材料，均可从商业途径获得。

实施例1

滑菇黏液的提取：

将新鲜滑菇菌根剪除，称取滑菇子实体3份各200g，分别编号为1、2、3号。每份用200mL水于25℃下摇洗2h，过滤后收集滤液。再将滑菇子实体用200mL水于25℃下摇洗2h，过滤。再用100mL水同条件下摇洗，分别合并三次过滤后的滤液。用六层纱布过滤除杂三次，制成滑菇黏液。4℃冰箱保存。

表1 黏液的提取数据汇总表

实验结果表明，200g新鲜滑菇，共加500ml水，25℃下进行摇洗。最终获得黏液量的平均值为315ml，黏液的平均得率为63％。滑菇黏液pH平均值为5.42，呈弱酸性。滑菇含水量为95.23％，黏液的干物质含量为2.25mg/mL。

实施例2

滑菇黏液定性分析

(1)蛋白质定性试验

采用Bradford法测蛋白含量。用双缩脲法检测蛋白的存在。蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与Cu²⁺络合成紫红色的络合物。其颜色的深浅与被测样品中蛋白质浓度呈正比，而与蛋白质分子量和氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。

取两支试管，分别加入1％的标准蛋白溶液1mL和黏液1mL。再各加入10％NaOH溶液2mL，摇匀，再加入1％的硫酸铜溶液2滴，边加边摇，观察溶液颜色的变化。

表2 标准蛋白测得的吸光值

表3 滑菇黏液蛋白质含量测定的结果

实验结果表明，滑菇黏液中蛋白浓度为15.41μg/mL，蛋白含量为0.685％。

(2)核酸定性试验

采用定磷法测核算含量。使用DNA提取试剂盒对滑菇黏液中的DNA进行提取和纯化，然后用1％的琼脂凝胶电泳检测。

如图2所示。实验结果表明，图中出现两条亮带，说明滑菇黏液中有DNA的存在。

表4 滑菇黏液核酸含量的测定

DNA浓度计算公式：有机磷含量/测定时取样毫升数×稀释倍数/9.9％ (1)

实验结果表明，滑菇黏液中DNA浓度为27.38μg/mL，核酸含量为1.217％。

(3)多糖定性试验

采用FehLing法。取两支试管，分别加入1％的葡萄糖溶液1mL、黏液1mL，再各加入FehLing试剂(0.1g/ml NaOH和0.05g/ml CuSO₄混合，现用现配)2mL、浓硫酸1滴。沸水浴中加热5min，取出、冷却，观察颜色变化。

表5 滑菇黏液多糖含量测定的数据汇总

实验结果表明，黏液中多糖浓度为0.512mg/mL，多糖纯度为74.50％，多糖含量为22.76％

200g新鲜滑菇用500mL水进行摇洗，得到黏液量的平均值为315mL，黏液的得率为63％。即1g新鲜滑菇，可获得的黏液量为1.575mL，其中黏液多糖为0.891mg，核酸为43.12μg，蛋白质为24.27μg。由于滑菇的含水量为95.23％，所以1g鲜滑菇的干重为0.0477g。以滑菇的干重进行换算，可得每1g滑菇干菇中含有黏液多糖18.679mg，核酸0.904mg，蛋白质0.508mg。

实施例3

抗氧化性能测试

滑菇黏液对·OH的清除作用

取六支10mL刻度管，均依次加入1mL的Tris-HCL溶液(pH8.20)，0.3mL硫酸亚铁铵(5mmol/L)和0.3mL的邻二氮菲溶液(7.5mmol/L)，1号和2号试管不加样品，3到6号试管中分别加入0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL的黏液，1号试管不加入H₂O₂(7.5mmol/L)，2到6号试管加入H₂O₂。定容至10mL。在37℃的水浴锅中反应1h，用Tris-HCL溶液调零，在510nm下测吸光度A，计算对·OH的清除率。

表6 黏液清除羟自由基活性试验加样表

·OH清除率计算公式为：

式(2)中，A1为体系不加H₂O₂和黏液的吸光值；A2为体系加H₂O₂而不加黏液以后的吸光值；A3为体系加入H₂O₂和黏液后的吸光值。

表7 滑菇黏液对·OH的清除率

当清除率达到50％时，加入黏液的体积为1.45mL，其中含有0.82mg的多糖，22.34μg的蛋白质和39.70μg的核酸。

滑菇黏液对O^2-·的清除作用

取5支10mL刻度管，各加入0.05mol/L Tris-HCL缓冲液4.5mL，置于25℃水浴中预热25min，1到4号分别加入0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL黏液并用水补足到2.0mL。5号试管中加入2mL水。每支试管各加入0.4mL邻苯三酚溶液(0.5mmol/L)，混匀后于25℃水浴中反应4min，加入HCL(8mol/L)2滴终止反应。以Tris-HCL缓冲液调零，于320nm处测定吸光度，空白对照组以相同体积的水代替。

表8 清除超氧阴离子活性试验加样表

超氧阴离子清除率计算公式为：

O^2-·清除率(％)＝(Ao－Ai)÷Ao×100％ (3)

式(3)中，Ao为体系未加多糖溶液(黏液)的吸光值；Ai为体系加入多糖溶液(黏液)的吸光值。

表9 滑菇黏液对超氧阴离子的清除率

通过计算可得，当清除率达到50％时，加入黏液的体积为1.22mL，其中含有0.69mg的多糖，18.80μg的蛋白质和33.40μg的核酸。与同组实验所测得的滑菇黏液多糖和Vc抗氧活性的结果相比，当清除率达到50％时，多糖浓度为0.72mg/mL，Vc浓度为0.43mg/mL。测定时所加的体积为1mL，滑菇黏液具有较强的抗氧化能力，并且其主要作用的物质是多糖。

滑菇黏液对DPPH自由基的清除作用

取9个试管，1号为空白试管，加入2mL无水乙醇和2mLDPPH溶液。2到5号试管分别加入2mL DPPH溶液，6到9号试管分别加入2mL的无水乙醇。2到5号试管分别加入0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL的黏液，并用水补足至2.0mL6到9号试管分别加入0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL的黏液，并用水补足至2.0mL。反应0.5h后在517nm处测吸光值Ai。

表10 清除DPPH自由基活性试验加样表

DPPH自由基清除率计算公式为：

DPPH自由基清除率(％)＝[1-(Ai－Aj)]÷Ac×100％ (4)

式(4)中，Ai为体系加入DPPH和滑菇黏液的吸光值；Aj为体系加入多糖溶液而未加DPPH的吸光值；Ac为体系不加入滑菇黏液的吸光值。

表11 滑菇黏液对DPPH的清除率

通过计算可得，当清除率达到50％时，加入黏液的体积为1.21mL，其中含有0.68mg的多糖，18.65μg的蛋白质和33.13μg的核酸。与同组实验所测得的滑菇黏液多糖和Vc抗氧活性的结果相比，当清除率达到50％时，多糖浓度为0.78mg/mL，Vc浓度为0.44mg/mL。测定时所加的体积为1mL，滑菇黏液具有较强的抗氧化能力，并且其主要作用的物质是多糖。

将滑菇黏液对·OH、O^2-·、和DPPH的清除率进行对比，如图5所示，可以看出，滑菇黏液对DPPH的清除作用较强，并且在黏液体积为1mL以前，对O^2-·清除率增加的速率相对较快，在黏液体积为1mL以后，滑菇黏液对DPPH清除率增加的速率相对较快。

实施例4 制备抗氧化剂

本发明实施例1制备的滑菇黏液可以直接作为抗氧化剂原料制备抗氧化剂，也可以作为辅料用于制备抗氧化剂。制备抗氧化剂的方法可以采用本领域常用的包衣片剂的生产方法。制备抗氧化剂时，先将滑菇黏液经旋转蒸发气真空浓缩5倍后倒入浅盘中，于45℃烘箱中热风干燥至恒重，得到滑菇黏液干物质。将滑菇黏液干物质与配料(茶多酚、微晶纤维素)混合均匀，经粉末直压、素片、包薄膜衣片制成包衣片剂。