本发明属于畜牧业动物营养技术研究领域，涉及一种含丁酸梭菌的低蛋白饲料配方，更具体的说是一种提高仔猪生长性能和肠道健康等方面的应用。
背景技术：
仔猪断奶是养猪生产中的一个重要阶段，断奶应激是仔猪出生后经受的最大应激。断奶仔猪由于消化与免疫系统发育尚未完善，饲粮形态由母乳到固体饲料的转变将会影响其对营养物质的消化吸收。未消化吸收的营养物质在肠道内作为细菌的发酵底物而引起病原菌增殖，产生大量的毒性物质，从而导致腹泻，损害肠道健康。且仔猪断奶后饲喂高蛋白质饲料易引起肠道功能紊乱，进而导致腹泻。
在仔猪饲料中添加抗生素类生长促进剂可有效降低腹泻发生率，然而抗生素类生长促进剂在饲料工业中的大量使用导致诸多问题出现，如病原菌产生耐药性、动物免疫机能下降、体内菌群失调、畜禽产品中的药物残留等。因此仔猪生长性能和肠道健康的营养调控这一领域的创新性有待于提高。这促使研究人员寻找控制断奶期腹泻、维持肠道完整性的替代方法，其中降低饲料蛋白质水平同时补充合成氨基酸是提高仔猪生长性能、控制仔猪断奶后腹泻的有效措施。
丁酸梭菌是热门的抗生素替代品之一，用于仔猪低蛋白饲料添加剂的相关报道还不多见。通过低蛋白质平衡氨基酸饲粮中添加丁酸梭菌我们研究了一种调节仔猪饲料利用率和肠道菌群的配合饲料，以此来改善仔猪生长性能和肠道健康的营养调控，会在一定程度上缓解蛋白质原料缺乏问题，降低饲料成本，同时减少养殖场对环境的污染，减少仔猪的腹泻，提高养殖业的经济效益。
技术实现要素：
本发明的一个目的是公开了一种含丁酸梭菌的仔猪低蛋白配合饲料。
本发明的另一个目的是公开了所配制的饲料对断奶仔猪生长性能和肠道健康调节的应用效果。
为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容
一种调节仔猪生长性能和肠道健康的配合饲料，其特征在于降低饲料原料中蛋白质含量，同时使用丁酸梭菌饲料添加剂，进行合理配制日粮，由下述重量份数的原料组成：
玉米60-65 豆粕15-22 乳清粉3-6
鱼粉3-9 小麦麸1-6 葡萄糖1-3
豆油1-3 酸化剂0.1-0.5 磷酸氢钙0.5-1.2
石粉0.5-1.1 食盐0.1-0.5 L-赖氨酸盐酸盐0.1-0.7
DL-蛋氨酸0.1-0.7 色氨酸0.1-0.8 苏氨酸0.05-0.3
仔猪预混料1-4丁酸梭菌0.001-0.005（冻干粉中活菌含量为1×109CFU/g）
其中所述的仔猪预混料是指每千克预混料中含有：14,600 mg铁，630 mg铜，410 mg 锰，10,400 mg锌，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg烟酸，8 mg生物素。
本发明所述酸化剂指的是山东天惠源生物科技有限公司产品，主要成分是乳酸、正磷酸、柠檬酸、富马酸、甲酸。
本发明所述的断奶仔猪配合饲料的制备方法：将玉米、豆粕两种原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分别进行称量，在小型混合机中混匀即可。
本发明一个优选的配方：
玉米64.495豆粕16.3乳清粉4
鱼粉3.8小麦麸5葡萄糖1.5
豆油1 酸化剂0.4 磷酸氢钙0.65石粉0.6食盐0.3
L-赖氨酸盐酸盐0.4DL-蛋氨酸0.4 色氨酸0.05苏氨酸0.1
仔猪预混料1丁酸梭菌0.005（冻干粉中活菌含量为1×109CFU/g）
其中所述的仔猪预混料是指每千克预混料中含有：14,600 mg铁，630 mg铜，410 mg 锰，10,400 mg锌，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg烟酸，8 mg生物素。
本发明另一个优选的配方：
玉米64.199豆粕16.3乳清粉4.5
鱼粉4小麦麸3.7葡萄糖2.5
豆油1 酸化剂0.4 磷酸氢钙0.5石粉0.6食盐0.3
L-赖氨酸盐酸盐0.4DL-蛋氨酸0.4色氨酸0.05苏氨酸 0.15
仔猪预混料1丁酸梭菌0.001（冻干粉中活菌含量为1×109CFU/g）
其中所述的仔猪预混料是指每千克预混料中含有：14,600 mg铁，630 mg铜，410 mg 锰，10,400 mg锌，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg烟酸，8 mg生物素。
本发明进一步公开了所配制的饲料对断奶仔猪肠道微生物区系的应用效果。特别是对改善断奶仔猪腹泻和肠道菌群平衡等方面的应用。
本发明的断奶仔猪配合饲料实验结果表明：
试验C组、试验D组和试验E组显著（P＜0.05）降低了仔猪腹泻率和料重比，显著（P＜0.05）提高平均日增重；试验C组和试验D组空肠和回肠乳酸杆菌的数量显著（P＜0.05）高于试验B组，而试验C组和试验D组回肠中大肠杆菌的数量显著降低（P＜0.05）。为了更进一步说明本发明的积极效果，提供如下的试验方法及结果：
1．试验动物及分组：
采用单因子试验设计，选取体重6.78 ± 0.51 kg的健康杜×长×大三元杂交断奶仔猪120头，随机分为5个处理，每个处理分为4个重复，每个重复6头猪。每个处理组分别饲喂不同日粮：饲喂基础日粮(NC)、饲喂低蛋白饲粮、饲喂低蛋白饲粮＋0.001丁酸梭菌（浓度为1×105CFU/g）、饲喂低蛋白饲粮＋0.005丁酸梭菌（浓度为5×105CFU/g）组、饲喂低蛋白饲粮＋0.009丁酸梭菌（浓度为9×105CFU/g）。
2．基础饲粮配方及营养水平：
根据NRC（1998）配制猪基础日粮配方及营养水平如表1所示。
表1 基础饲粮组成及营养水平（饲喂基础）
a 每千克预混料中含有：14,600 mg铁，630 mg铜，410 mg 锰，10,400 mg锌，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg烟酸，8 mg生物素。
b 根据NRC（1998）饲料成分表计算。
3．试验规程：
试验在一个商品万头猪场进行，试验期28天。饲喂、管理、免疫按猪场规定程序进行。饲喂28天后，从每个处理的每个重复组中随机选取1头断奶仔猪屠宰，剖杀前12h禁食，然后采用颈静脉放血的办法处死，打开腹腔，立即结扎喷门瓣、幽门瓣、直肠远端，无菌取十二指肠、空肠、回肠等内容物，置于液氮速冻后，转放到-80℃冰箱中冻存以待分析。整个试验过程中观察仔猪的健康状况，记录死、淘仔猪以及腹泻、用药情况。
4．测定指标：
生长性能的测定：分别于试验的28 d、56 d称个体重、结料，计算ADG、ADFI和F/G。
腹泻率的测定：在整个试验期内，每天分别统计两个处理组的发生腹泻仔猪的头数，试验结束计算每组的腹泻率。腹泻评分标准见表2。
表 2 腹泻评分标准
注：腹泻指数评分标准参照Kelly （1990）提供的方法进行。
肠道菌群的测定：
5．统计分析：
采用SAS统计软件下的Compare Means模块中的One-Way ANOVA进行方差分析，并采用Duncan’s多重比较进行组间差异显著性检验，P<0.05为差异显著。
本发明公开的低蛋白配合饲料在断奶仔猪饲料中的应用效果，主要包括：
（1）血清指标：
表3中，A为基础饲粮组，B为低蛋白饲粮组，C为低蛋白饲粮＋0.001丁酸梭菌（浓度为1×105CFU/g）组，D为低蛋白饲粮＋0.005丁酸梭菌（浓度为5×105CFU/g）组，E为低蛋白饲粮＋0.009丁酸梭菌（浓度为9×105CFU/g）组。
表3对仔猪生长性能的影响
由表3可知，①试验B组与试验A组初体均重、末体均重、ADG、ADFI和F/G差异均不显著（P＞0.05）；因此，所配低蛋白饲粮合理，在满足仔猪生长需要，不影响仔猪生长性能的前提下，节约了成本。
②试验C组的料重比（F/G）显著低于试验A组和试验B组，因此，试验C组添加量为添加下限。
③试验D组的料重比（F/G）显著低于试验C组和试验E组，因此，试验D组添加量为添加上限。
④因此，丁酸梭菌添加剂的添加量在0.001-0.005范围内均可。
（2）腹泻率：
表4中，A为基础饲粮组，B为低蛋白饲粮组，C为低蛋白饲粮＋0.001丁酸梭菌（浓度为1×105CFU/g）组，D为低蛋白饲粮＋0.005丁酸梭菌（浓度为5×105CFU/g）组，E为低蛋白饲粮＋0.009丁酸梭菌（浓度为9×105CFU/g）组。
表4低蛋白饲粮对断奶仔猪腹泻率的影响
注：同行之间肩注，无字母表示差异不显著（P＞0.05），字母不同表示差异显著（P＜0.05）。
由表4可知，①低蛋白饲粮B组可显著降低仔猪腹泻率；
②添加了丁酸梭菌的C、D、E试验组与B组相比，仔猪腹泻率显著降低，但试验C、D、E组之间差异不显著。
③试验E组成本高于试验C组和试验D组。因此，在低蛋白饲粮中丁酸梭菌的添加量为0.001-0.005比较适宜。
（3）肠道菌群：
表5中，B为低蛋白饲粮组，C为低蛋白饲粮＋0.001丁酸梭菌（浓度为1×105CFU/g）组，D为低蛋白饲粮＋0.005丁酸梭菌（浓度为5×105CFU/g）组。
表5丁酸梭菌对仔猪肠道微生物的影响 (lg CFU/g)
由表5的试验结果表明：
①十二指肠中的乳酸杆菌和大肠杆菌含量在各试验组间差异不显著（P＞0.05）。
②试验C组和试验D组空肠中乳酸杆菌数显著（P＜0.05）高于试验B组。大肠杆菌数量三组之间差异不显著（P＞0.05）。
③试验C组和试验D组回肠中的乳酸杆菌和大肠杆菌数量显著（P＜0.05）高于试验B组。试验C组和试验D组回肠中的乳酸杆菌和大肠杆菌数量差异不显著（P＞0.05）。但试验D组的乳酸杆菌数量比试验C组提高了1.73%，试验D组的大肠杆菌数量比试验C组降低了2.99%。
④因此，丁酸梭菌添加剂的添加量在0.001-0.005范围内均可。
本发明对以丁酸梭菌为饲料添加剂的低蛋白饲料配方进行了安全性实验，其方法如下：
（1）步骤：
材料和方法：选择28日龄断奶的杜×长×大仔猪6头，临床健康、发育正常，试验期28天，试验期内随时观察中毒表现及死亡情况。
（2）饲喂的仔猪饲料原料组成：
玉米63.54、豆粕16.5、乳清粉4、鱼粉4.4、小麦麸4.2、葡萄糖2、豆油1、酸化剂0.3、磷酸氢钙0.5、石粉0.6、食盐0.35、L-赖氨酸盐酸盐0.2、DL-蛋氨酸0.25、色氨酸0.05、苏氨酸0.1、仔猪预混料2、丁酸梭菌0.01（冻干粉中活菌含量为1×109CFU/g）。
结果：给断奶仔猪饲喂上述试验日粮，连续饲喂28天，未见明显中毒现象，观察期内无死亡，尸检中各主要脏器未见明显异常。
（3）结论：断奶仔猪日粮中添加0.01%丁酸梭菌（冻干粉中活菌含量为1×109CFU/g）饲喂仔猪，饲喂效果安全。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作一步说明，但不作为本发明的限制。本发明的实施例中所述的重量份数原料指的是克、公斤或吨，可根据生产实际的需要加以调整。本发明所用到的各种原料例如：磷酸氢钙、石粉、食盐、L-赖氨酸盐酸盐、DL-蛋氨酸、色氨酸、苏氨酸、丁酸梭菌对外均有售；其中下面的产品均有市售：
酸化剂指的是山东天惠源生物科技有限公司产品；
仔猪预混料指的是天津市鼎圣饲料有限公司产品；
玉米指的是普通市售二级玉米；
豆粕指的是中粮集团有限公司产品；
乳清粉和葡萄糖指的是天津市升腾饲料有限公司产品；
鱼粉指的是进口秘鲁鱼粉；
小麦麸指的是河北永生食品有限公司产品；
丁酸梭菌指的是洛阳瑞莱生物工程有限公司产品。
实施例1
断奶仔猪的低蛋白配合饲料原料组成：
玉米63.199、豆粕17.3、乳清粉4.5、鱼粉4、小麦麸3.7、葡萄糖2.5、豆油1、酸化剂0.4、磷酸氢钙0.5、石粉0.6、食盐0.3、L-赖氨酸盐酸盐0.4、DL-蛋氨酸0.4、苏氨酸0.15、仔猪预混料1、丁酸梭菌0.001（冻干粉中活菌含量为1×109CFU/g）。
其中所述的仔猪预混料是指每千克预混料中含有：14,600 mg铁，630 mg铜，410 mg 锰，10,400 mg锌，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg烟酸，8 mg生物素。
制备方法：将玉米、豆粕两种原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分别进行称量，在小型混合机中混匀即可。
实施例2
断奶仔猪的低蛋白配合饲料原料组成：
玉米64.495、豆粕16.8、乳清粉4、鱼粉3.3、小麦麸4.5、葡萄糖2、豆油1、酸化剂0.4、磷酸氢钙0.65、石粉0.6、食盐0.3、L-赖氨酸盐酸盐0.4、DL-蛋氨酸0.4、色氨酸0.05、苏氨酸0.1、仔猪预混料1、丁酸梭菌0.005（冻干粉中活菌含量为1×109CFU/g）。
其中所述的仔猪预混料是指每千克预混料中含有：14,600 mg铁，630 mg铜，410 mg 锰，10,400 mg锌，15,000μg碘，17,000μg硒，227,600 IU VA，22,800 IU VD3，1,100 mg VE，30 mg VK3，700 mg VB2，200 mg VB6，1,340 mg泛酸，2,300 mg烟酸，8 mg生物素。
制备方法：将玉米、豆粕两种原料粉碎，其他原料均不需要粉碎，按照重量比例分别进行称量，在小型混合机中混匀即可。
实施例3
采用断奶仔猪的低蛋白配合饲料饲喂断奶仔猪的方法：
此系列配方适用28日龄断奶仔猪，适用期为断奶后28~40天，根据情况让仔猪自由采食即可，必须提供充足的饮水，其他按正常的饲养管理进行。
实施例4
比较试验
常规的断奶仔猪饲料：
方法：配制玉米-豆粕型断奶仔猪日粮，不添加丁酸梭菌。选择28日龄6头仔猪，试验期28天。
步骤：试验结束后对3头仔猪进行屠宰，取十二指肠、空肠、回肠肠段内容物样品1 g，溶解于9 mL的无菌生理盐水中，充分混合，然后逐级10 倍系列稀释至10-7。选择10-5-10-7的稀释度，取0.1 mL 稀释液接种到相应的滚管培养基中进行乳酸杆菌培养。选取10-2-10-5的稀释度，取0.2 mL稀释液于相应的平板培养基中进行大肠杆菌的计数。
大肠杆菌计数采用麦康凯琼脂培养基：蛋白胨，20.0 g/L；乳糖，10.0g/L；胆盐，5.0 g/L；氯化钠，5.0 g/L；中性红，0.075 g/L；琼脂，12.0 g/L；pH 7.4 ± 0.2。
乳酸杆菌计数采用Rogosa琼脂：胰蛋白胨，10.0 g/L；酵母膏，5.0 g/L；葡萄糖，20.0 g/L；吐温80，1.0 mL/L；磷酸二氢钾，6.0 g/L；柠檬酸铵，2.0 g/L；乙酸钠，17.0 g/L；硫酸镁，0.575 g/L；硫酸锰，0.12 g/L；硫酸亚铁，0.034 g/L；琼脂，20.0 g/L；pH 5.4 ± 0.2。
其中乳酸杆菌的琼脂培养基制成Hungates滚管；大肠杆菌采用平板培养。所有的培养基置于37 ℃培养箱中，培养24～48 h 后计数。每个稀释度做两个平板或者滚管，以30～300 个菌落的平板或者滚管的稀释度做计数用。
结果：十二指肠中乳酸杆菌和大肠杆菌含量分别为5.16lg CFU/g和3.91 lg CFU/g；空肠中乳酸杆菌和大肠杆菌含量分别为6.33 lg CFU/g和3.55 lg CFU/g；回肠中乳酸杆菌和大肠杆菌含量分别为6.57 lg CFU/g和3.93 lg CFU/g。
结论：通过比较试验说明：低蛋白饲粮中添加丁酸梭菌能调节断奶仔猪肠道菌群，改善肠道健康和提高仔猪整体健康状况。