专利名称：深层发酵法生产的冬虫夏草保健营养液的制作方法
技术领域：
本发明公开了一种深层发酵法生产的冬虫夏草保健营养液，它属于医药工业技术领域，也属于保健食品技术领域，也属于生物工程技术领域。本发明菌种在中国典型培养物保藏中心的保藏号为S—W229 CCTCC M94052。
冬虫夏草是一种药用真菌，属子囊菌纲，麦角菌科，虫草属，虫草菌[Cordycepssinensis(Berk)Sacc]，它是一种名贵中药材，可与人参、鹿茸相媲美。是三大补品之一。冬虫夏草具有药用功效的最早文字记载是1757年(清乾隆二十二年)吴仪洛所撰写的《本草从新》，它明确指出冬虫夏草具有“保肺益肾，止血化痰已痨嗽”的功效。事实上，人们在生活实践中将冬虫夏草作为药用药材，要比文字记载早得多。藏族同胞早已用它入药，称之为“雅扎贡布”，直译就是冬虫夏草。
冬虫夏草是滋补药，这早已为人们所知，《本草纲目拾遗》、《文房肆考》中确有关于冬虫夏草治虚损的记载。冬虫夏草能作为滋补佳品，经我国多年研究证明，它含有18种氨基酸，其中包括人体必需的8种氨基酸，还含有人体造血所必需的维生素B12。这些成份既能治病，也能滋补身体。但是，冬虫夏草真正能治病的有效成份，是经现代科学技术鉴定了的冬虫夏草中所含的虫草酸及虫草素等成份，这些成份具有扩张气管、镇静、抗多种细菌、降血压的功效。据有关民间医疗资料冬虫夏草多用于治疗肺结核、老人畏寒、咳嗽、衰弱、贫血虚弱、遗精阳萎、自汗盗汗、腰膝酸痛、神经衰弱、病后久虚、咯血吐血、慢性肾炎等症都获得很好的效果。
在1960年代初曾有人报告蛹虫[Cordyceps militaris(L.)Link]的菌丝体培养液中有一种代谢产物——冬虫夏草素(Cordycepin)对小鼠艾氏腹水癌(EC)及人鼻咽癌细胞有抑制作用，1979年有人用天然冬虫夏草的提取物对小鼠艾氏腹水癌进行了抗癌试验，发现此提取物对EC有明显的抑制作用。近年，不少人用冬虫夏草的人工培养菌丝体提取物作抗癌作用研究，发现其具有一定的抗肿瘤作用。
由于冬虫夏草具有多种医疗和滋补功能，近年来，人们对它的需求量越来越大，且已畅销世界各地。鉴于野生冬虫夏草分布在海拨3500～4000米的高山草甸的山坡上，生长周期长，加之近年来冬虫夏草资源受到很大的破坏，造成野生冬虫夏草资源严重短缺。据1941年日本国小林统计，冬虫夏草全属共137种，中国有26种，全属中90％以上寄生于昆虫。而这种鳞翅目昆虫要求的生态环境苛刻，很难进行人工培养，因此，我国科学工作者从1960年代起，就开始进行人工发酵法培养冬虫夏草的研究工作。有的采用把菌种接种到蝙蝠蛾幼虫上；有的采用动物性蛋白朊作培养基的组份，且生产规模尚小，口服液的口感不理想。
本发明的目的是为克服冬虫夏草寄生于鳞翅目昆虫要求生态环境的苛刻，本发明拟提出一种人工培养方法，在投料、接种后经深层发酵之产物，其发酵液即可制成冬虫夏草保健口服液，其菌丝体则能直接加工成高效滋补成品，且在生物工程生产中无废物排泄出来，不污染环境。在培养基中，拟去掉动物性蛋白，用农副产品代替动物性蛋白。此外，制成的冬虫夏草保健口服液应是气味清香、口感好、包泽乳白的口服液。
为实现本发明目的所采取的技术措施是发酵法培养冬虫夏草菌丝体工艺流程包括培养、提取、灭菌、封装。(1)培养以植物性蛋白朊、黄豆芽汁、葡萄糖、淀粉、复合氨基酸配制成菌丝体菌种培养基的斜面培养，经两次菌种摇瓶菌种种子培养，再经一级、二级菌种种子培养，然后在发酵罐作深层发酵培养，深层发酵完毕后实行放罐，液体和菌丝体可混作为保健营养液。(2)提取采用高速冷冻离心，离心速率14000rps/M，离心20分钟，将发酵液进行过滤，分别收集冬虫夏草菌丝体和滤液。(3)配制制剂3.1冬虫夏草菌丝体粉剂对冬虫夏草菌丝体减压低温干燥，然后粉碎，获得粉剂。3.2菌丝体抽取物用包括乙醇的溶剂将活性物质腺嘌呤核苷、尿嘧啶等提取出来。3.3培养基的组成配方其配方为植物性蛋白朊占≥2到7％；黄豆芽汁液占≥0.5到1.2％；淀粉占≥4到6％；葡萄糖占≥4到6％；复合氨基酸占≥0.1到0.3％；其余为水。口服保健营养液制剂装入制剂并中经灭菌后即封闭而成产品。
与已有技术相比较，本发明已达到的技术效果本发明的冬虫夏草保健营养液的感观指标为乳白色液体，内含有乳白色珠状菌丝球，呈微甜酸味，无异味，无臭味，无杂质。理化指标发酵罐发酵后离心分离出的上清液，它含腺嘌呤核苷10.09μg/ml，尿嘧啶1.5μg/ml。菌丝体含腺嘌呤核苷7.3μg/g，尿嘧啶3.5μg/g。离心后，上清液含氨基多糖0.47mg/ml，菌丝体含氨基多糖29mg/g。微生物指标细菌总数(个/ml)≤100；大肠菌群(个/100ml)＜3；致病菌，未检出。质量指标还原糖≥10mg/ml；氨基酸＞100mg/100ml。理化检验、微生物检验按国家GB标准执行。质量标准中，还原糖按国家GB标准检验；氨基酸含量为按日立835—50型氨基酸系列分析仪测定的数据。
本发明的冬虫夏草保健营养液，富含多糖、氨基酸，还含有人体造血所需的维生素B12。经测定，本发明的产品含有组成蛋白质成份的18种氨基酸。其中，人体不能自身合成的8种必需的氨基酸含量较高，特别是与儿童智力及体格发育有关的平时被称为“半必需”的精氨酸及组氨酸，其含量也很高。氨基多糖作为增强免疫能力的物质是为试验所证明了的。本发明的营养液含有的多糖中就具有氨基多糖，它是一种理想的温性缓补剂。
本发明的冬虫夏草保健营养液经“食品安全性毒理学试验”急性毒性试验属无毒级；三项致突变试验均为阴性，表明该受试物无明显遗传毒性。经“骨髓微核试验”，与对照组结果一致为阴性，与阳性对照组比较，差异极显著(P＜0.01)。经“沙门氏菌/微粒体测试致突变试验”，评价方法为自发回变数超过1倍以上为阳性，测试结果本受试物菌落回变数与阴性对照组比较未超过1倍，结果为阴性。“精子畸形试验”结果与阴性对照组比较，结果基本一致。
下面结合实施例，对本发明的技术方案作进一步说明菌种斜面培养基以植物蛋白朊、葡萄糖、淀粉配成斜面培养基。将与保藏于中国典型培养物保藏中心保藏的一样的冬虫夏草菌体进行斜面菌种培养，然后经500ml和5000ml三角瓶内两次该菌丝体培养，再经1001、5001一级、二级种子罐内，两次该菌丝体种子培养，接着在5吨发酵罐内发酵培养该菌丝体，经在25—30℃、PH值自然发酵4～6天，发酵完毕后，放罐，过滤，分别收集过滤液和菌丝体，制成保健营养液，经灭菌、封装而成产品。
权利要求
1.保藏号为S—W229 CCTCC M94052的深层发酵法的冬虫夏草菌种，其特征在于它属于囊菌纲，麦角菌科，冬虫夏草属，冬虫夏草菌，其拉丁名为Cordyceps Sinensis(Berk)Sacc。
2.一种深层发酵法生产的冬虫夏草保健营养液，其特征在于本发明的工艺流程包括培养、提取、灭菌、封装，先用斜面培养基对菌丝体斜面培养，经两次菌种摇瓶菌种种子培养，再经一级、二级菌种罐种子培养，然后在发酵罐中作深层发酵培养，发酵完毕后，进行过滤、提取，分别收集冬虫夏草菌丝体和滤液，经灭菌、封装而成产品。
3.按权利要求2所述的冬虫夏草保健营养液，其特征在于菌丝体培养的温度为≥25到30℃；培养时间为≥4到6天。
4.按权利要求2或3所述的冬虫夏草保健营养液，其特征在于本发明的培养基的配方为植物性蛋白朊占≥2到7％；黄豆芽汁液占≥0.5到1.2％；淀粉占≥4到6％；葡萄糖占≥4到6％；复合氨基酸占≥0.1到0.3％；其余为水。
5.按权利要求2所述的冬虫夏草保健营养液，其特征在于a.冷冻离心过滤的离心转速为14000rps/分，离心时间20分钟；b.分离出的冬虫夏草菌丝体，减压低温干燥，粉碎后得冬虫夏草菌丝体粉剂；c.菌丝体抽取物，用包括乙醇的溶剂将腺嘌呤核苷和尿嘧啶活性物质抽取；d.发酵完毕后放罐出的液体和菌丝体混制成保健营养液。
全文摘要
本发明涉及了一种经国家典型培养物保藏中心保藏菌种的深层发酵法生产的冬虫夏草保健营养液，它的工艺流程包括培养、提取、灭菌、封装；冬虫夏草菌丝体经斜面培养，经两次菌种摇瓶菌种培养，再经一级、二级菌种罐培养，然后在发酵罐中作深层发酵培养，完毕后进行过滤、提取，分别收集过滤液和菌丝体，制成冬虫夏草保健营养液，灭菌、封装成产品。它是滋补佳品，含有18种氨基酸，包括人体必需的8种氨基酸。
文档编号C12N1/14GK1164571SQ9611970
公开日1997年11月12日 申请日期1996年12月13日 优先权日1996年12月13日
发明者张世伟 申请人:张世伟