专利名称：肝病保护剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及肝病保护剂。更详细地说，它涉及含香菇菌丝体提取物的肝病保护剂。
香菇很早就被认为对多种疾病和症状有治疗作用，但只在最近的时间内，对其某些药理学功效作了描述。已报道了香菇菌丝体提取物具有多种功效，包括抑制肿瘤形成及抑制移植的肿瘤细胞在大肠和肝脏的生长，增加肿瘤形成实验中大鼠和小鼠的存活率(N.Sugan等人，癌症通讯(Cancer letter)271，1985；Y.Suzuki等人；日本结肠直肠学杂志(Journal Japan Society of Coloproctology；43178，1990等)；促有丝分裂的活性(T.Tabata等人，免疫药理学，2557，1992，Y.Hibino等人，免疫药理学(Immuno pharma cology)，2877，1994等)；促进抗体产生，并增强其抑制由ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒性)引起的免疫性肝细胞损害的效应(Y.Mizoguchi等人，肝胆胰研究杂志(Journalof Heroto-Billary-Pancreatic Study)，15127，1987)；以及植物激素效应，如促进生根或作物生长(M.Mitsuhashi-Kato等人，植物细胞生理(Plant cell Physiol.)26221，1985)，或者抗植物病毒效应(Y.Komuro等人，日本农林渔业部植物病毒研究组的报告，1977)。
本发明旨在进一步解释香菇菌丝体提取物的药理学作用，并推断其在制药或保健应用方面的新用途。
发明内容
作为为解决上述问题进行的具体研究的一个结果，本发明的获得是以发现香菇菌丝体提取物显示明显的肝病防护作用为基础的。
相应地，本发明提供的药物诱导型肝病保护剂中含有香菇菌丝体提取物。
本发明的药物诱导型肝病保护剂可以是一种组合物形式，用于治疗和/或预防药物诱导型肝病，该组合物包含香菇菌丝体提取物和任选的药学可接受载体。
本发明的药物诱导型肝病保护剂可以是食物的形式或饮料的形式，这些形式并没有限制性。
本发明还提供了一种保护免受药物诱导型肝脏损伤的方法，其中包括香菇菌丝体提取物的施用。
另外，本发明也提供香菇菌丝体提取物用于制备药物诱导型肝病保护剂的用途。
附图简述
图1显示的是香菇菌丝体提取物体外肝病保护试验的结果，使用的是原代培养的大鼠肝细胞。
图2显示的是香菇菌丝体提取物体内肝病保护试验的结果，使用的是CCl4诱导的大鼠肝损伤模型。
图3显示的是香菇菌丝体提取物对药物诱导型肝病患者的肝保护试验结果。
本发明的优选实施方案本发明的药物诱导型肝病保护剂所用的香菇菌丝体提取物是指通过压碎和分解固体培养基上培养的香菇菌种生长的菌丝体获得提取物，优选的是在水和酶的存在下，压碎和分解含香菇菌丝体的固体培养基而获得的提取物。
此处所用香菇菌丝体提取物最好由如下操作获得，但不限于该操作，香菇菌种在以蔗渣和去脂稻糠为基础的固体培养物上培养，长出菌丝体，然后含生长的菌丝体之固体培养基经脱木质处理使30％(重量)或更少的物质能透过12目筛网。向脱木质处理的固体培养物中加入水和选自以下的一种或多种酶纤维素酶，蛋白酶或葡糖苷酶，而固体培养基的温度保持在30-55℃。所述固体培养物在上述酶的存在下压碎研细，使至少70％(重量)的蔗渣纤维能透过12目筛网。然后，温度升高至95℃，使酶失活并灭菌，得到的悬液经过滤则成为香菇菌丝体提取物。香菇菌丝体提取物可直接用于本发明的保护剂，但也可以浓缩且冻干成粉末保存，以便于用于不同的剂型。冻干后的粉末是灰色、吸湿的，并具有特殊的味道和气味。
由此获得的香菇菌丝体提取物通过酚-硫酸方法检测含15-50％，最好为20-40％(w/w)的碳水化合物，通过Lowry方法检测含10-40％，最好为13-30％(w/w)的蛋白质，以没食子酸为标准品用10-40％，最法检测，其含1-5％，最好为2.5-3.5％(w/w)的多酚。香菇菌丝体提取物还含(但不限于)约0.1％的脂肪，约0.4％的纤维和约20％的灰分。
香菇菌丝体提取物中糖组成(％)的一个例子如下木糖15.2，阿拉伯糖8.2，甘露糖8.4，葡萄糖39.4，半乳糖5.4，半乳糖胺12.0，葡糖醛酸11.3。但随培养条件或其他因素的不同，糖组成也会改变。
在所有下列实验中，香菇菌丝体提取物均显示明显的药物诱导性肝病的保护作用用大鼠肝细胞的体外实验，用CCL4诱导大鼠肝病的体内实验和对药物诱导型肝病患者的实验。
本发明中的保护剂可用于由下列抗生素引起的肝病头孢烯类抗生素(如头孢沙定、头孢呋辛钠、拉他头孢钠)，氨基糖甙类抗生素(如硫酸阿米卡星)，抗肿瘤药(如阿柔比星)，抗酸细菌抗生素(如利福平)，四环素，大环酯类抗生素，青霉素；中枢神经药剂如退热药，镇痛药和消炎药(如阿斯匹林)，镇静剂(如，氯噁唑仑)，抗癫痫类药(如丙戊酸钠)，全身麻醉剂(如氟烷)，镇静催眠药(如苯巴比妥)，普通感冒药，循环系统药如抗心律失常药(如，吲哚洛尔)，血管舒张药(如曲区地尔)，循环系统药(如盐酸尼卡地平)，抗高血压药(如盐酸柳胺羟胺)，抗血管硬化药(如氯贝特)，抗代谢类药如喃氟啶；激素类药如磷雌氮芥，磺胺类药如磺胺甲噁唑；抗结核药如异烟肼；合成抗菌药如诺氟沙星；以及所说的环境类激素如双酚类、邻苯二甲酸酯，氯乙烯单体，壬酸酯和醇类，因此本发明中的保护剂可用作治疗或/和预防药物诱导的肝病的组合物，其中含香菇菌丝体提取物和任选的药学可接受载体。
它们最好的给药途径是口服给药，但也可以通过静脉、皮下或其他途径给药。适用于口服给药的剂型包括片剂、胶囊、粉末、颗粒、溶液、糖浆等。但并不限于此。
药学可接受的载体包括合适的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、调味剂、着色剂、增溶剂、增悬剂，包衣剂或本领域已知的其他成分，但并不限于此。
由医生、药剂师或营养学家根据病人年龄，体重和身体状况，给药途径和其他因素可决定本发明中保护剂的剂量。该剂量并不严格限制，因为本发明的保护剂所含的香菇菌丝体提取物非常安全，可用作食物，但一般剂量范围是以香菇菌丝体粉末算每日40mg-6g，最好为400mg-1.8g，它可与造成肝病的药物一起施用。
本发明的保护剂也可以食物的形式提供。优选的食物形式包括颗粒、面条、糖果、胶冻、甜饼等。本发明的保护剂还可以饮料的形式提供。这些食物或饮料中除含香菇菌丝体提取物外，可含维生素，矿物质，如钙、食用纤维如聚氨基葡萄糖，蛋白质如大豆提取物，脂肪如licithin，糖类如乳糖。
然而，下列实施例进一步说明本发明并不局限于以上的范围，本领域普通技术人员可对其进行不同改变和修饰，这些改变和修饰同样包括在本发明中。
然后，这种含培养基的混合物在可变速齿轮泵中循环，固体培养基在齿轮作用下压碎研细，持续约200分钟，使约80％(重量)的蔗渣纤维可透过12目筛网。含培养基物的混合物被压碎研细的同时，上述混合基的温度逐渐升高。然后，含培养基的混合物继续加热至90℃并保持30分钟。加热至90℃是为了保证酶失活和灭菌。得到的含培养基的混合物经60目的纱网过滤得到香菇菌丝体提取液，该液体经浓缩然后转化为冻干的粉末。实施例2用原代培养的肝细胞进行体外实验1)大鼠肝细胞的分离和原代培养从大鼠(雄性Wistar大鼠，6-8周龄)分离肝细胞，并在37℃下5％CO2条件下培养过夜。
2)用CCl4和待测物处理肝细胞步骤1)中制备的肝细胞用500ml无血清培养基培养24小时，培养基中含不同浓度的CCl4(DMSO溶液肝病诱导剂)和待测物(香菇菌丝体提取物或对照物质)3)测定GOT活性培养上清液转移至Eppendorf管中，在室温10000转/分离心5分钟。用GOT试剂(Ligui Tech Got IFCC来自Boehringer Mannheim)检测该上清液中GOT活性。以不含任何待测物质的培养上清液中平均的GOT活性为基准，通过计算各培养上清液中GOT活性百分比，评估肝病程度。结果见图1。
如图1显示，香菇菌丝体提取物有保护肝脏免受损害的作用。实施例3用CCl4诱导的大鼠肝病体内实验制备香菇菌丝体提取物颗粒，其中含20％的香菇菌丝体提取粉末(剩余部分为乳糖)。大鼠口服给药7天检查其对CCl4诱导肝病的保护作用。施用香菇菌丝体提取物颗粒后，腹膜内注射CCl4诱导肝病，然后从腹腔动脉采血，测定血清的GOT和GPT，结果如图2所示。
如图2显示，香菇菌丝体提取物有保护肝脏免受损害的作用。实施例4对患药物诱导的肝病患者的实验两名由化疗引起肝病的患者(均并发肺结核)每日接受6g香菇菌丝体提取物颗粒(含20％的香菇菌体提取物粉末，其余为乳糖)，持续4周。连续施用引起肝病的药物(乙胺丁醇、异烟肼、利福平)。4周后检测病人外周血中GOT和GDP水平。结果如图3所示。两位患者的GOP和GPT水平均下降至正常范围内。未发现有副作用。
工业用途本发明中的药物诱导型肝病保护剂含香菇菌丝体提取物，可用于预防或治疗药物引起的肝病。本发明中的保护剂适用于大范围的工业用途，因为它们可与引起肝病的药物共用，并且没有任何副作用，可安全使用。
权利要求
1.一种含香菇菌丝体提取物的针对药物诱导型肝病保护剂。
2.呈组合物形式的权利要求1的用于治疗和/或预防药物诱导型肝病保护剂，其中含香菇菌丝体提取物和任选地药学可接受载体。
3.权利要求1或2中的保护剂用于口服给药。
4.呈食物形式的权利要求1的保护剂。
5.呈饮料形式的权利要求1的保护剂。
6.一种保护免受药物诱导型肝病的方法，包括施用香菇菌丝体提取物。
7.香菇菌丝体提取物用于制备药物诱导型肝病保护剂的用途。
全文摘要
含香菇菌丝体提取物的药物诱导型肝病保护剂。
文档编号A23L2/52GK1332632SQ99815186
公开日2002年1月23日 申请日期1999年11月26日 优先权日1998年11月27日
发明者藤村胜行, 山口康代, 杉野玲子, 白银英树, 竹内丰实 申请人:小林制药株式会社, 长冈均