一种具有自由基清除作用和防霉变作用的蒲公英提取物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物提取物，具体涉及一种具有自由基清除作用和防霉变作用的 蒲公英提取物。
【背景技术】
[0002] 植物提取物中化学成分复杂，活性多样，在多种领域均具有广泛应用。植物提取物 中有一类黄酮成分，由于酚羟基较多，还原性较强，具有自由基清除作用。
[0003] 蒲公英为菊科多年生草本植物，是传统的药用植物，其全草具有很高的药用价值， 含有多种活性成分，如蒲公英留醇、蒲公英苦素和黄酮类等。除了具有利胆保肝、抗菌消炎、 利尿、抗癌及增强机体免疫等之外，并且有报道其水提物能降低糖尿病的并发症。近来的研 究表明蒲公英的药用价值与其所含黄酮类物质有着极大的关系，引起了人们的关注。自由 基生物学的研究表明，黄酮类物质的许多生物学效应均与清除活性氧自由基的作用密切相 关。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种黄酮类含量高、大极性物质含量低的蒲公英提取物， 该提取物具有非常强的自由基清除作用和防霉变作用。
[0005] 上述目的是通过如下技术方案实现的：
[0006] -种具有自由基清除作用和防霉变作用的蒲公英提取物，其特征在于由以下步骤 制备：（a)称取干燥的蒲公英用60~70 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到 浓缩液；(b)对步骤（a)浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到 石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用 5~15 %乙醇冲洗8~12个柱体积除去大极性物质，再用65~75 %乙醇洗脱10~14个 柱体积，收集65~75%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。
[0007] 进一步地，步骤（a)中所述热回流提取采用的乙醇浓度为65%。
[0008] 进一步地，步骤（C)中所述大孔树脂为DlOl型大孔树脂。
[0009] 进一步地，步骤（c)中先用10%乙醇冲洗10个柱体积除去大极性物质。
[0010] 进一步地，步骤（c)中除去大极性物质后，再用70%乙醇洗脱12个柱体积，收集 70%乙醇洗脱液。
[0011] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的蒲公英提取物的批 间差异，提供了一种蒲公英提取物的液相分析方法，所述提取物的液相分析方法为：
[0012] 色谱柱：Agilent TC C18 柱（4. 6mmX250mm，5 μπι);
[0013] 流动相：Α为乙腈，B为0.1 %甲酸溶液（三乙胺调节pH值至6. 0);
[0014] 梯度洗脱程序：0 ~5min，A 15%;5 ~40min，A 15%-35%;40 ~57min，A 35% -75% ;
[0015] 57 ~65min，A 75%- 15% ;65 ~70min，A 15%- 15% ;
[0016] 流动相流速：1.0 mL · min S
[0017] 检测波长：275nm;
[0018] 柱温：30°C ;
[0019] 进样量：10 μ L。
[0020] 上述蒲公英提取物在制备防霉抗氧化保鲜剂中的应用。
[0021] -种防霉抗氧化保鲜剂，含有有效浓度的上述蒲公英提取物。
[0022] 本发明的有益效果：
[0023] (1)本发明提供的蒲公英提取物黄酮含量高，且大极性物质含量非常低，防霉抗氧 化效果非常好，可以用于制备防霉抗氧化的保鲜剂。
[0024] (2)本发明研究过程中发现，大极性物质的存在会抑制黄酮发挥防霉抗氧化作用， 制备方法中先通过液液萃取的方法富集黄酮，再通过大孔树脂除去大极性物质，能得到高 黄酮含量、大极性物质含量低的蒲公英提取物。
【附图说明】
[0025] 图1为蒲公英提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0027] 药材来源：药材蒲公英购自安徽亳州中药材市场。
[0028] 主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；DlOl型大孔树脂购自天 津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA ;甲酸为HPLC级，购于TEDIA ;色谱用纯 净水为哇哈哈纯净水。所用试剂和材料均为可以购买到的常规商品。
[0029] 总黄酮含量测定方法：参见文献（刁海鹏等，蒲公英花中总黄酮含量测定，山西医 科大学学报，2004年02期）或参考教科书紫外分光光度计法测定总黄酮含量。
[0030] 实施例1 :蒲公英提取物1的制备
[0031] (a)称取干燥的蒲公英8kg用65%乙醇热回流提取3次（25LX3次），每次2小时， 合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液（3L) ;(b)对步骤（a)浓缩液依次用石油醚（3LX3 次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物（865g) ; (c)正丁醇萃取物用DlOl型大孔树脂富集，先用 10 %乙醇冲洗10个柱体积除去大极性物质，再用70 %乙醇洗脱12个柱体积，收集70 %乙 醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥（355g)。
[0032] 该实施例所得蒲公英提取物中，总黄酮含量约为58%。
[0033] 实施例2 :蒲公英提取物2的制备
[0034] (a)称取干燥的蒲公英8kg用60%乙醇热回流提取3次（25LX3次），每次2小时， 合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液（3L) ;(b)对步骤（a)浓缩液依次用石油醚（3LX3 次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物（870g) ; (c)正丁醇萃取物用DlOl型大孔树脂富集，先用 5 %乙醇冲洗12个柱体积除去大极性物质，再用65 %乙醇洗脱14个柱体积，收集65 %乙醇 洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥（352g)。
[0035] 该实施例所得蒲公英提取物中，总黄酮含量约为54%。
[0036] 实施例3 :蒲公英提取物3的制备
[0037] (a)称取干燥的蒲公英8kg用70%乙醇热回流提取3次（25LX3次），每次2小时， 合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液（3L) ;(b)对步骤（a)浓缩液依次用石油醚（3LX3 次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物（860g) ; (c)正丁醇萃取物用DlOl型大孔树脂富集，先用 15 %乙醇冲洗8个柱体积除去大极性物质，再用75 %乙醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇 洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥（358g)。
[0038] 该实施例所得蒲公英提取物中，总黄酮含量约为55%。
[0039] 实施例4 :对比实施例（大孔树脂除多糖步骤中，采用纯水洗脱），蒲公英提取物4
[0040] (a)称取干燥的蒲公英8kg用65%乙醇热回流提取3次（25LX3次），每次2小时， 合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液（3L) ;(b)对步骤（a)浓缩液依次用石油醚（3LX3 次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙 酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物（860g) ; (c)正丁醇萃取物用DlOl型大孔树脂富集，先用纯 水冲洗10个柱体积，再用70 %乙醇洗脱12个柱体积，收集70 %乙醇洗脱液，减压浓缩，喷 雾干燥（420g)。
[0041] 该实施例所得蒲公英提取物中，总黄酮含量约为17%。
[0042] 实施例5 :对比实施例（大孔树脂除多糖步骤中，采用20 %乙醇洗脱），蒲公英提 取物5
[0043] (a)称取干燥的蒲公英8kg用65%乙醇热回流提取3次（25LX3次），每次2小时， 合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液（3L) ;(b)对步骤（a)浓缩液依次用石油醚（3LX3 次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物（862g) ; (c)正丁醇萃取物用DlOl型大孔树脂富集，先用 20 %乙醇冲洗8个柱体积，再用70 %乙醇洗脱12个柱体积，收集70 %乙醇洗脱液，减压浓 缩，喷雾干燥（285g)。
[0044] 该