20nm处的吸光度。
[0249] 确定在酶法处理的汁液样品中的颜色：
[0250] 在酶处理后，将汁液样品在5000rpm下再次离心10min并且将离心液倒入新管中。
[0251 ] 在420nm下，使用分子装置读取器(Molecular Device reader)测量吸光度。
[0253] 剂量:酶蛋白（mg)/30ml的汁液
[0254] Abs:在离心后的36小时后在420nm下的吸光度
[0255] 颜色减少％，负值指示颜色增加。
[0256] 在通过离心去除有色沉淀后，葡萄糖氧化酶处理的苹果汁显示出颜色的60%减 少。进一步研究显示出颜色沉淀为粒径足够大到可通过离心去除，还使得用以去除颗粒的 简单过滤步骤得以实现。这种过滤步骤在AJC的生产中是标准的。
[0257] 实验 2:
[0258] 蛇果汁中颜色减少的百分比（孵育37 °C /4小时/200rpm)
[0259] 针对剂量优化研究，在以下条件下，将在50ml法尔肯圆锥管中的30ml汁液用不同 剂量的酶进行处理:37°C，在200rpm下持续4小时。在酶处理后，将汁液样品在5000rpm下再 次离心10min并且将滤液倒入新法尔肯50ml管中。然后在420nm下，使用分子装置读取器测 量吸光度。 样品 剂量 Abs 颜色减少％ 对照 0 0 0.68 0%
[0260] GOX 100 0.53 0.66 3% GOX 250 1.34 0.60 12% GOX 500 2.68 0.57 16% GOX 1000 5.36 0.51 25%
[0261] 剂量:百万分率(ppm)的酶蛋白
[0262] Abs:在4小时后并在离心后在420nm下的吸光度
[0263] 颜色减少％ :正值代表哎离心后汁液中的颜色的减少。
[0264] 在250、500和100(^口111葡萄糖氧化酶(3￡〇10勵:2)下，在苹果汁的颜色去除中，观 察到了显著视觉差异。在500ppm和lOOOppm处理的汁液样品中观察到了 16%和25%的颜色 减少。
[0265] 实例11:使用碳水化合物氧化酶对苹果汁进行脱色
[0266] 青苹果(Granny Smith)是绿色的苹果，但是已知具有相对高的多酸，并且是用于 汁液提取的常见苹果类型之一。将五公斤的青苹果用于汁液提取。将苹果磨碎，并且将来自 雪霉微座孢的碳水化合物氧化酶直接添加至磨碎的苹果材料中。孵育在23°C下进行1小时。 然后在300bar下，使用Haffico压榨机，提取汁液持续3分钟。然后将提取的汁液进行巴氏消 毒，并且通过沃特曼1号纸滤纸进行过滤。然后分析滤出的汁液。使用在420nm下测量的吸光 度研究色差。使用福林-乔卡梯奥比色法(FC方法)测量总多酚含量。
[0267] 酶的细节:来自雪霉微座孢的碳水化合物氧化酶描述于许(Xu)F等人，欧洲生物化 学杂志（Eur J Biochem.)2001 年2月；268(4): 1136-42以及于W0 99/31990中。
[0270]由此可见，在碳水化合物氧化酶处理的样品中观察到了颜色的显著减少（30%)。 多酚含量也减少了 68 %。
【主权项】
1. 一种用于对获得自糖料作物的糖溶液进行脱色的方法，其中将该溶液用葡萄糖氧化 酶(EC 1.1.3.4)、碳水化合物氧化酶(EC 1.1.3)或脱氢酶进行酶法处理，导致该溶液的颜 色和/或浊度的减少。2. 根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中去除了至少20%、至少25%、至少 30%、至少35%、特别是至少40%、更特别是45%、甚至更特别是至少50%的颜色。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中当在糖生产过程中在蒸发之前的任何步骤处添 加该葡萄糖氧化酶、碳水化合物氧化酶、或脱氢酶时，该颜色减少是可以实现的。4. 根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中通过去除不是类黑精的颜色获得颜色 的减少。5. 根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中该糖溶液获得自任何含蔗糖的糖料作 物，如，甘蔗、甜菜、甜高粱。6. 根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中该糖溶液选自下组，该组包括以下各 项：原汁、初级汁、次级汁、混合汁、亚硫酸化汁、石灰处理汁、倾析汁、清汁、浮汁、澄清汁、原 糖溶液、和/或VHP、VVHP、晶体、白糖溶液。7. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该葡萄糖氧化酶是黑曲霉葡萄糖氧化 酶，并且优选为披露为SEQ ID NO:2的成熟多肽的氧化酶，具体地为具有葡萄糖氧化酶活性 的SEQ ID NO:2的氨基酸17-605或与SEQ ID NO:2的氨基酸17-605具有至少85%、至少 90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、 至少99%、或100%的序列一致性的多肽。8. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该碳水化合物氧化酶是直立枝顶孢霉 碳水化合物氧化酶，并且更具体地为披露为SEQ ID NO:4的成熟多肽的氧化酶，具体地为具 有碳水化合物氧化酶活性的SEQ ID NO:4的氨基酸20-499或与SEQ ID NO:4的氨基酸20-499具有至少85%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少 96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性的多肽。9. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该脱氢酶选自下组，该组由以下各项组 成:葡萄糖脱氢酶(EC 1.1.99.10)、纤维二糖脱氢酶(EC 1.1.99.18)、葡萄寡糖氧化酶(EC 1.1.99. B3)或其他适合的碳水化合物脱氢酶(EC 1.1.99)。10. 根据权利要求9所述的方法，其中该脱氢酶选自下组，该组由以下各项组成:特异腐 质霉纤维二糖脱氢酶，具体地为披露为SEQ ID NO:6的成熟纤维二糖脱氢酶的纤维二糖脱 氢酶，具体地为具有纤维二糖脱氢酶活性的SEQ ID NO:6的氨基酸24-785或与SEQ ID NO:6 的氨基酸24-785具有至少85%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少 95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性的多肽。11. 根据权利要求9所述的方法，其中该脱氢酶选自下组，该组由以下各项组成:嗜热毁 丝霉纤维二糖脱氢酶，具体地为披露为SEQ ID NO:8的成熟纤维二糖脱氢酶的纤维二糖脱 氢酶，具体地为具有纤维二糖脱氢酶活性的SEQ ID NO:8的氨基酸22-828或与SEQ ID NO:8 的氨基酸22-828具有至少85%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少 95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性的多肽。12. 根据权利要求9所述的方法，其中该脱氢酶选自下组，该组由以下各项组成：围小丛 壳菌葡萄糖脱氢酶，具体地为披露为SEQ ID NO: 10的成熟葡萄糖脱氢酶的葡萄糖脱氢酶， 具体地为具有葡萄糖脱氢酶活性的SEQ ID NO: 10的氨基酸17-600或与SEQ ID NO: 10的氨 基酸17-600具有至少85%、至少90 %、至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94%、至少95 %、 至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性的多肽。13. 根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中酶法产生的过氧化氢不足以导致等 效的颜色和/或浊度的减少。14. 根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中在酶处理过程中pH是在从3-7的范围 内。15. -种用于对果汁或果汁浓缩物进行脱色的方法，其中将该果汁或果汁浓缩物用葡 萄糖氧化酶(EC 1.1.3.4)、或其他适合的碳水化合物氧化酶(EC 1.1.3)进行酶法处理，导 致该果汁或果汁浓缩物的颜色减少。16. 根据权利要求15所述的方法，其中该果汁或果汁浓缩物是获得自苹果、梨、菠萝或 番木瓜。17. 根据权利要求15所述的方法，其中该葡萄糖氧化酶是黑曲霉葡萄糖氧化酶，并且优 选地为披露为SEQ ID NO: 2的成熟多肽的氧化酶，具体地为具有葡萄糖氧化酶活性的SEQ ID NO: 2的氨基酸17-605或与SEQ ID NO: 2的氨基酸17-605具有至少85%、至少90%、至少 91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96 %、至少97 %、至少98 %、至少99%、 或100 %的序列一致性的多肽。18. 根据权利要求15所述的方法，其中该碳水化合物氧化酶是直立枝顶孢霉碳水化合 物氧化酶，并且更具体地为披露为SEQ ID NO:4的成熟多肽的氧化酶，具体地为具有碳水化 合物氧化酶活性的SEQ ID N0:4的氨基酸20-499或与SEQ ID N0:4的氨基酸20-499具有至 少85 %、至少90 %、至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94%、至少95 %、至少96 %、至少 97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性的多肽。19. 根据权利要求15所述的方法，其中该碳水化合物氧化酶是来自雪霉微座孢。20. 根据权利要求15-19中任一项所述的方法，其中在酶处理后包括分离步骤，以便去 除颜色沉淀。21. 根据权利要求20所述的方法，其中该分离步骤是过滤。22. -种用于在冷藏果汁浓缩物的过程中防止颜色形成的方法，其中将该果汁浓缩物 用葡萄糖氧化酶(EC 1.1.3.4)、或其他适合的碳水化合物氧化酶(EC 1.1.3)进行酶法处 理。23. 根据权利要求22所述的方法，其中该果汁浓缩物是苹果汁浓缩物。24. 根据权利要求22所述的方法，其中该葡萄糖氧化还原酶是黑曲霉葡萄糖氧化酶，并 且优选地为披露为SEQ ID NO:2的成熟多肽的氧化酶，具体地为具有葡萄糖氧化酶活性的 SEQ ID NO:2的氨基酸17-605或与SEQ ID NO:2的氨基酸17-605具有至少85%、至少90%、 至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94%、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 %、至少 99%、或100%的序列一致性的多肽。25. 根据权利要求22所述的方法，其中该碳水化合物氧化酶是来自雪霉微座孢。26. 根据权利要求22所述的方法，其中该碳水化合物氧化酶是直立枝顶孢霉碳水化合 物氧化酶，并且更具体地为披露为SEQ ID NO:4的成熟多肽的氧化酶，具体地为具有碳水化 合物氧化酶活性的SEQ ID N0:4的氨基酸20-499或与SEQ ID N0:4的氨基酸20-499具有至 少85 %、至少90 %、至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94%、至少95 %、至少96 %、至少 97%、至少98%、至少99%、或100%的序列一致性的多肽。27.根据权利要求15-26中任一项所述的方法，其中通过去除不是类黑精的颜色获得颜 色的减少。
【专利摘要】本发明涉及用于对获得自糖料作物的糖溶液进行脱色的方法，其中将该溶液用氧化还原酶进行酶法处理，导致该溶液的颜色和/或浊度的减少。还描述了使用氧化还原酶对果汁溶液进行脱色的方法。具体而言，描述了葡萄糖氧化酶、碳水化合物氧化酶、葡萄糖脱氢酶、纤维二糖脱氢酶和葡萄寡糖氧化酶。葡萄糖氧化酶的作用至少导致有色沉淀的形成，该有色沉淀可以通过过滤或离心去除。
【IPC分类】A23L2/84, A23L5/49, C13B20/00, A23L2/82
【公开号】CN105578893
【申请号】CN201480052939
【发明人】K.M.施诺尔, E.A.博格斯达席尔瓦, M.D.G.P.托斯卡诺, S.普拉巴卡尔
【申请人】诺维信公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年10月10日
【公告号】WO2015052315A2, WO2015052315A3