一种增加茶叶及其加工产品中egcg含量的方法_2

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%的无水巧樣酸,0.1 %的酵母 提取物,0.1 %的干酪素水解物,用IM的肥1把抑调到4.0。每个250mL锥形瓶中加入25血培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0029] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(IX IO8个/ml),在 30°C条件下(振荡速度18化pm)连续培养4天,过滤去除菌体即可得到粗酶液。
[0030] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入20mL上述酶液 W及20mL水(对照茶样品加入20血灭活的酶液及20mL水);40°C水浴下反应60min,反应结束 后沸水浴5min,然后过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0031] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 618.6mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0032] 实施例4:
[0033] 步骤一、制备2 %果胶培养基:培养基组成为:2.0%的果胶,0.05%的氯化钟, 0.01 %的屯水合硫酸儀,0.1 %的巧樣酸=钢二水合物,0.1 %的无水巧樣酸,0.1 %的酵母 提取物,0.1 %的干酪素水解物,用IM的肥1把抑调到4.0。每个250mL锥形瓶中加入25血培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0034] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(1 X IO8个/ml),在 30°C条件下(振荡速度18化pm)连续培养4天,过滤去除菌体即可得到粗酶液。
[0035] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入30mL酶液W及 1 OmL水(对照茶样品加入30mL灭活的酶液及1 OmL水),振荡摇匀;70 °C水浴下反应60min,反 应结束后沸水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0036] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 624.6mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0037] 实施例5:
[0038] 步骤一、制备2%麦教培养基:每个250mL锥形瓶中加入Ig麦教(过40目筛)W及 SOmL盐溶液,12rC高压蒸汽灭菌20min。盐溶液组成(g/L):硫酸锭1.0,硫酸儀5.0,屯水合 硫酸亚铁0.005,憐酸二氨钟5.0,pH 4.8。
[0039] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(IX IO8个/ml),在 30°C条件下19化pm培养6天,过滤去除菌体得到粗酶液。
[0040] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入5mL麦教培养基 发酵的酶液W及35mL水(对照茶样品加入5mL灭活酶液及35mL水),振荡摇匀;10°C水浴下反 应60min,反应结束后沸水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0041 ] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 519.5mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0042] 实施例6:
[0043] 步骤一、制备36%麦教培养基:每个250血锥形瓶中加入12g麦教(过40目筛),加入 21.3mL盐溶液,12TC高压蒸汽灭菌20min。其中盐溶液组成为(g/L):硫酸锭1.0,硫酸儀 5.0,屯水合硫酸亚铁0.005,憐酸二氨钟5.0,pH 4.8。
[0044] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(1 X IO8个/ml),在 30°C条件下连续培养6天,再向培养基中加入15mL憐酸盐缓冲液(pH 7.0),在20°C条件下 (振荡速度18化pm)浸提化,过滤去除菌体即得到粗酶液。
[0045] 步骤S、酶反应:称取lg(± Img)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入IOmL上述酶液 W及30mL水(对照茶样品加入IOmL灭活酶液及30mL水),振荡摇匀;25°C水浴下反应60min, 反应结束后沸水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0046] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 548.6mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.2mg/L。
[0047] 实施例7:
[004引步骤一、制备54%麦教培养基:在250mL锥形瓶中加入16g麦教(过40目筛)W及 10血盐溶液,m°C高压蒸汽灭菌20min。其中,盐溶液配制(g/L):硫酸锭1.0,硫酸儀5.0,屯 水合硫酸亚铁0.005,憐酸二氨钟5.0,加蒸馈水配制,调节pH 4.8。
[0049] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL霉菌抱子悬液(1 X IO8个/ml),在 30°C条件下连续培养6天,再向培养基中加入30mL憐酸盐缓冲液(pH 7.0),在20°C条件下 (振荡速度18化pm)浸提化,过滤去除菌体得到粗酶液。
[0050] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入20mL上述酶液 W及20mL水(对照茶样品加入20mL灭活的酶液及20mL水),振荡摇匀;40 °C水浴下反应 60min,沸水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0051 ] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 631.5mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.5mg/L。
[0化2] 实施例8:
[0053] 步骤一、制备70 %麦教培养基:在250mL锥形瓶中20g麦教(过40目筛)和9mL盐溶 液,12rC高压蒸汽灭菌20min。盐溶液配制(g/L):硫酸锭1.0,硫酸儀5.0,屯水合硫酸亚铁 0.005,憐酸二氨钟5.0,加蒸馈水配制,调节抑4.8。
[0054] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(1 X IO8个/ml),在 30°C条件下连续培养6天,向培养基中加入35mL憐酸盐缓冲液(pH 7.0),在20°C条件下(振 荡速度18化pm)浸提化,过滤去除菌体得到粗酶液。
[0055] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入30mL酶液W及 1 OmL水(对照茶样品加入30mL灭活的酶液及1 OmL水),振荡摇匀;70 °C水浴下反应60min,反 应结束后沸水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0056] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 611.5mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.3mg/L。
[0化7] 实施例9:
[0058] 步骤一、制备1 %薦糖培养基:称取薦糖lOg,硝酸钢3g,憐酸氨二钟Ig,氯化钟 0.5g,硫酸亚铁0.0Ig,硫酸儀0.5g,加水定容至1000 mL。每个250mL锥形瓶中加入30mL培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0059] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(1 X IO8个/ml),在 30°C条件下(振荡速度18化pm)培养6天,过滤去除菌体即可得到粗酶液。
[0060] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入5mL该酶液W及 35mL水(对照茶样品加入5mL灭活酶液及35mL水),振荡摇匀;10°C水浴下反应60min,反应结 束后沸水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0061 ] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 529.3mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[006^ 实施例10:
[0063] 步骤一、制备2%薦糖培养基:称取薦糖20g,硝酸钢3g,憐酸氨二钟Ig,氯化钟 0.5g,硫酸亚铁0.0Ig,硫酸儀0.5g,加水定容至1000 mL。每个250mL锥形瓶中加入30mL培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0064] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(1 X IO8个/ml),在 30°C条件下(振荡速度18化pm)连续培养6天,过滤去除菌体得到粗酶液。
[0065] 步骤S、酶反应:称取lg(±
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