一种增加茶叶及其加工产品中egcg含量的方法_3

文档序号:9894965阅读:来源:国知局
Img)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入IOmL酶液W及 30mL水(对照茶样品加入IOmL灭活酶液及30mL水),振荡摇匀;25°C水浴下反应60min,反应 结束后沸水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0066] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 545.7mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.6mg/L。
[0067] 实施例11:
[0068] 步骤一、制备3%薦糖培养基:称取薦糖30g,硝酸钢3g,憐酸氨二钟Ig,氯化钟 0.5g,硫酸亚铁0.0Ig,硫酸儀0.5g,加水定容至1000 mL。每个250mL锥形瓶中加入30mL培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0069] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL抱子悬液(1 X IO8个/ml ),在30 °C、180rpm条件下振荡培养6天,过滤去除菌体即得到粗酶液。
[0070] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入20mL酶液W及 20mL水(对照茶样品加入20mL灭活的酶液及20mL水),振荡摇匀;40°C水浴下反应60min,反 应结束后沸水浴5min,然后过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0071] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 582.3mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0072] 实施例12:
[0073] 步骤一、制备4%薦糖培养基:称取薦糖40g,硝酸钢3g,憐酸氨二钟Ig,氯化钟 0.5g,硫酸亚铁0.0Ig,硫酸儀0.5g,加水定容至1000 mL。每个250mL锥形瓶中加入30mL培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0074] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL抱子悬液(IX IO8个/ml),在30°C 条件下(振荡速度18化pm)连续培养6天,过滤去除菌体即可得到粗酶液。
[0075] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入30mL酶液W及 1 OmL水(对照茶样品30mL灭活的酶液及1 OmL水),振荡摇匀;70°C水浴下反应60min,反应结 束后沸水浴5min,然后过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0076] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 596.7mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0077] 为了进一步说明本发明的创造性,下面再列举采用其他培养基发酵的酶液处理茶 叶的对比实施例进行比较,W说明本发明采用果胶、麦教和薦糖为碳源培养微生物所带来 的技术效果。
[007引对比实施例1:
[0079] 步骤一、制备2%葡萄糖培养基:称取去皮的马铃馨150g,切成小块煮沸半小时,然 后用纱布过滤,再加葡萄糖lOg,融化后补足水至lOOOmL。每个250mL锥形瓶中加入30血培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0080] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(1 X IO8个/ml),在 30°C条件下(振荡速度18化pm)连续培养6天,过滤去除菌体得到粗酶液。
[0081] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入5mL该酶液W及 35mL水(对照茶样品加入5mL灭活酶液及35mL水),振荡摇匀;10°C水浴下反应60min,沸水浴 5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0082] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 442. Omg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0083] 对比实施例2:
[0084] 步骤一、制备2 %葡萄糖培养基:称取去皮的马铃馨200g,切成小块煮沸半小时,然 后用纱布过滤,再加葡萄糖20g,融化后补足水至lOOOmL。每个250mL锥形瓶中加入30血培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0085] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL抱子悬液(1 X IO8个/ml),在30°C 条件下(振荡速度18化pm)连续培养6天,过滤去除菌体即可得到粗酶液。
[0086] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入15mL酶液W及 25mL水(对照茶样品加入15mL灭活的酶液及25mL水),振荡摇匀;30°C水浴下反应60min,沸 水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0087] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 138. Omg/L,对照样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0088] 对比实施例3:
[0089] 步骤一、制备3%葡萄糖培养基:称取去皮的马铃馨250g,切成小块煮沸半小时,然 后用纱布过滤,再加葡萄糖30g,融化后补足水至lOOOmL。每个250mL锥形瓶中加入30血培养 基,121°C高压蒸汽灭菌20min。
[0090] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL抱子悬液(IX IO8个/ml),在30°C 条件下(振荡速度18化pm)连续培养6天,过滤去除菌体即可得到粗酶液。
[0091] 步骤S、酶反应:称取Ig( ± Img)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入30mL酶液W及 1 OmL水(对照茶样品加入30mL灭活的酶液及1 OmL水),振荡摇匀;70 °C水浴下反应60min,沸 水浴5min,然后过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0092] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 112.7mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0093] 对比实施例4:
[0094] 步骤一、制备25%抽皮粉培养基:250mL锥形瓶中加入抽皮粉(过20目筛)3g,硫酸 锭Ig,水8mL,12rC高压蒸汽灭菌20min。
[0095] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL黑曲霉抱子悬液(1 X IO8个/ml), 在30°C条件下培养6天,向培养基中加入30mL憐酸盐缓冲液(pH 7.0),20°C条件下振荡浸提 化,过滤去除菌体及抽皮粉得到粗酶液。
[0096] 步骤S、酶反应:称取lg(±lmg)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入5mL酶液W及 35mL水(对照茶样品加入5mL灭活酶液及35mL水),振荡摇匀;10°C水浴下反应60min,反应结 束后沸水浴5min,过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0097] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 512.6mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0098] 对比实施例5:
[0099] 步骤一、制备31.1 %抽皮粉培养基:250mL锥形瓶加入抽皮粉(过20目筛)5g,硫酸 锭Ig,水8mL,12rC高压蒸汽灭菌20min。
[0100] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(IX IO8个/ml),在 30°C条件下培养6天,向培养基中加入30mL憐酸盐缓冲液(pH 7.0),在20°C条件下振荡浸提 化,过滤去除残渣即得到粗酶液。
[0101] 步骤S、酶反应:称取Ig( ± Img)粉状乌龙茶样品(过20目筛),加入15mL酶液W及 25mL水(对照茶样品加入15mL灭活的酶液及25mL水),振荡摇匀;30°C水浴下反应60min,沸 水浴5min,然后过滤茶汤,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0102] 步骤四、茶样品中EGCG含量的检巧U:用LC-MS检测加酶茶样品中EGCG的含量为 500.1 mg/L,对照茶样品中EGCG的含量为516.4mg/L。
[0103] 对比实施例6:
[0104] 步骤一、制备50%抽皮粉培养基:250mL锥形瓶中加入抽皮粉(过20目筛)7g,硫酸 锭Ig,水8mL,12rC高压蒸汽灭菌20min。
[0105] 步骤二、发酵制备粗酶液:培养基冷却后接种2mL曲霉抱子悬液(IX IO8个/ml),在 30°C条件下连续培养6天,向培养基中加入
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