为0、200、400、600、800、 ΙΟΟΟμ mol。然后于每只试管中分别加入1 %茚三酮溶液0.5mL，充分混匀，将试管口封住，在 100°C沸水浴中加热15min，冷却后用双蒸水稀释至25mL，充分混勾，于570nm处比色，以氨基 酸含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线:y = 〇. 〇 126x+0.0115，R2 = 0.9986。图1为 蛋白酶活力测定的标准曲线图。本实施例使用的为赖氨酸(分析纯）。
[0047]蛋白酶活力的测定方法:首先将2%酵素待测溶液稀释成不同的浓度，然后进行如 下操作：
[0048] 空白组:取试管A，加入ImL胰蛋白酶液，在80 °C下恒温IOmin;然后加入ImL燕麦蛋 白，于40°C下反应10min;接着加入1 %茚三酮溶液0.5mL，充分混匀，将试管口封住，在100°C 沸水浴中加热15min，冷却后用双蒸水稀释至25mL，充分混勾，于570nm处比色得到Abs值。空 白组做两个平行组。
[0049] 实验组:取试管B，加入2%酵素待测溶液、ImL酶液和ImL燕麦蛋白，于40°C下反应 IOmin ;接着加入1 %茚三酮溶液0.5mL，充分混匀，将试管口封住，在100 °C沸水浴中加热 15min，冷却后用双蒸水稀释至25mL，充分混勾，于570nm处比色得到Abs值。实验组做两个平 行组。
[0050] 许管公忒.枏抿烷袖曲雜和》1犋的y值(Abs)求出X值（氨基酸含量）。
[0051]
[0052]式中：x为反应液中氨基酸的含量；
[0053] V为反应试剂的总体积，3mL;
[0054] η为酶液的稀释倍数；
[0055] t为反应时间，IOmin:
[0056] m为酶质量或酶体积，g或mL。
[0057] 2、酵素中的脂肪酶活力测定采用以下方法：用0.025mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)配 制浓度为2%的酵素待测溶液。按照QB/T 1803-1993A4方法对杏鲍菇酵素中的脂肪酶活性 进行检测（其中检测过程中采用的Na OH溶液的浓度为0.005mol/L)。规定Ig固体酶粉，于40 °C，pH 7.5的条件下，水解脂肪酶分钟产生Ιμπιο?的脂肪酸，即为一个脂肪酶国际单位，以U/ g表不。
[0058] 3、酵素中SOD酶活力的测定采用以下方法：按照碧云天的总SOD活性检测试剂盒 (NBT法，产品编号SO 109，包装100次)进行SOD酶活力测定。测定结果为:259 · 2U/mL。
[0059] 4、酵素中胞外多糖的测定采用以下方法:取IOOmL杏鲍菇酵素成品，4000rpm下离 心15min。取50mL离心后的上清液，加入250mL 95%乙醇充分震荡后，于4000rpm下离心 15min。取离心后的沉淀加入50mL水溶解得到胞外多糖待测液。取上述胞外多糖待测液采用 苯酚一硫酸法测定多糖含量。
[0060] 测定方法为:精密吸取葡萄糖标准溶液0·0,0·1，0·2,0·3,0·4,0·5,0·6,0·7,0·8， 1.0111以相当于葡萄糖0.0，100,200,300,400,500,600,700,800，100(^8)，及0.511^胞外多糖 待测液置于15mL比色管中，用蒸馏水补足I .OmL。于每个比色管中加入1.0mL5.0%苯酸水溶 液，摇匀后静止2min，迅速加入5mL浓硫酸，静止IOmin后置30 °C温度水浴中加热15min。取出 置冷水中冷却，以空白管为对照，分光光度计在波长490nm处测定光密度。以葡萄糖浓度为 横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线:y = 0.005x+0.0173，R2 = 0.9999，图2为胞外多糖 含量测定的标准曲线图。根据标准曲线计算出胞外多糖的含量。
[0061 ] 表1为实施例1、2、3以及对比例1杏鲍菇酵素成品中蛋白酶、脂肪酶、SOD酶活性、胞 外多糖含量的结果。
[0062]表1:杏鲍燕酵素成品中四种酶的含量结果表
[0065] 从表1的可知:实施例1、2和3的杏鲍菇酵素中，蛋白酶、脂肪酶、SOD酶和胞外多糖 含量均明显高于对比例1;其中实施例1的杏鲍菇酵素质量最佳，实施例2中杏鲍菇酵素原液 的含量减少，胞外多糖含量也减少，仅为162mg/L;实施例3中，苹果和桃比例适当可以加大 到2份，不影响口感，但蛋白酶、SOD酶以及胞外多糖的含量并没有增加，反而有所降低。
[0066] 对比例2
[0067] 在实施例1的配方中添加芒果酵素原液，其中杏鲍菇酵素原液、芒果酵素原液、西 瓜酵素原液、桃酵素原液、葡萄酵素原液和苹果酵素原液的体积比为3:1:1:1:1:1，其余步 骤与实施例1相同。
[0068] 对比例3
[0069] 在实施例1的配方中添加木瓜酵素原液，其中杏鲍菇酵素原液、木瓜酵素原液、西 瓜酵素原液、桃酵素原液、葡萄酵素原液和苹果酵素原液的体积比为3:1:1:1:1:1，其余步 骤与实施例1相同。
[0070] 分别对实施例1~3，对比例2、3的杏鲍菇酵素进行口感评分，评分标准参见表2，评 分结果列于表3中。
[0071 ]表2:杏鲍菇酵素的口感评分标准表
[0076] 从表3的口感评分结果可知：实施例1~3的口感评分明显高于对比例2、3，证明杏 鲍菇酵素中添加的水果，以苹果，葡萄，西瓜，桃子4种水果最佳，如果再添加其他的水果，将 会影响其滋味、口感和气味等。
[0077] 以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。虽 然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人 员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内 容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此， 凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单 修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。
【主权项】
1. 一种杏鲍菇酵素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 将杏鲍菇进行发酵得到杏鲍菇酵素原液； (2) 分别将苹果汁、葡萄汁、桃汁和西瓜汁进行发酵得到苹果酵素原液、葡萄酵素原液、 桃酵素原液和西瓜酵素原液； (3) 将所述步骤（1)中制备得到的杏鲍菇酵素原液和步骤(2)中苹果酵素原液、葡萄酵 素原液、桃酵素原液、西瓜酵素原液进行混合，发酵得到杏鲍菇酵素。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)具体为:将杏鲍菇打浆， 加入红糖和双蒸水得到杏鲍菇浆液，在杏鲍菇浆液中接种酵母菌发酵得到杏鲍菇酵素原 液。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，酵母菌的的接种量为5v/v%~8v/ v% 〇4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的条件为:20~30°C下，避光 发酵48h~72h。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为:分 别在苹果汁、葡萄汁、桃汁和西瓜汁中加入红糖、双蒸水和蛋白胨;然后接种酵母菌进行发 酵得到苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液，所述酵母菌的的接种量 均为5v/v% ~8v/v%。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的条件为:20~30°C下，避光 发酵48h~72h。7. 根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)具体为:将 所述步骤（1)中制备得到的杏鲍菇酵素原液和步骤(2)中的苹果酵素原液、葡萄酵素原液、 桃酵素原液和西瓜酵素原液按照体积比为3:1:1:1:1混合得到混合液，进行发酵得到杏鲍 菇酵素。8. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述发酵具体为:在混合液中接种8v/ v%~ΙΟv/v%嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌的混合菌种，联合发酵2天~3天。9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述混合菌种中，所述嗜酸乳酸杆菌： 保加利亚乳杆菌的体积比为1:1。10. -种权利要求1至9中任一项制备方法制备得到的杏鲍菇酵素。
【专利摘要】本发明公开了一种杏鲍菇酵素及其制备方法，其中杏鲍菇酵素采用以下方法制备得到：将杏鲍菇进行发酵得到杏鲍菇酵素原液；分别将苹果汁、葡萄汁、桃汁和西瓜汁进行发酵得到苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液；将杏鲍菇酵素原液和苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液、西瓜酵素原液进行混合，发酵得到杏鲍菇酵素。本发明将杏鲍菇与苹果、葡萄、桃子、西瓜进行复配，制备得到的杏鲍菇酵素口感俱佳、营养价值极高，脂肪酶、SOD酶和胞外多糖含量高。
【IPC分类】A23L33/135, A23L33/00, A23L2/38, A23L31/00
【公开号】CN105707851
【申请号】CN201610169838
【发明人】谢纯良, 彭源德, 洪益秋, 朱作华, 严理, 龚文兵, 龙济宇, 洪仁狄
【申请人】中国农业科学院麻类研究所, 湖南忠食农业生物科技有限公司
【公开日】2016年6月29日
【申请日】2016年3月24日