修改器官和组织细胞膜的脂肪酸组合物的制作方法

专利名称：修改器官和组织细胞膜的脂肪酸组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种组合物和用于迅速改变器官和组织细胞膜的脂肪酸组成的方法，特别是通过给人或动物体胃肠外使用适宜的包含所选择的脂肪酸甘油三酯的等渗脂质乳剂形式的脂肪酸来增加器官和组织细胞膜ω-3脂肪酸的量。
已知脂质乳剂是胃肠外营养品的必需组分并且现在考虑将其用于其它应用。在正常(口服)营养品不可能、有害或有医学禁忌的情况下或当必须迅速改变细胞的脂肪酸模式时，用作胃肠外营养品的脂质乳剂以可静脉内可接受的剂型形式来为机体提供脂肪。目前可获得的脂质乳剂是由植物油(例如，红花油或豆油)制得的。在一些情况下，其还包含中链甘油三酯(MCT)和/或海洋来源的油(鱼油)。
植物或海洋来源的长链甘油三酯可作为能量来源，并且当包含多不饱和脂肪酸(“PUFA”)时，可用作必需脂肪酸的供应者。将该多不饱和的脂肪酸分成ω-6(ω-6；在现有技术中有时被称为“n-6”PUFA)或ω-3(ω-3，有时被称为“n-3”PUFA)系列的分类是以化学结构特征为基础的，更准确地说，是以第一个不饱和键与该脂肪酸分子甲基末端(ω末端)的距离为基础的。例如，在本说明书中，优选地使用“ω-3”。
植物油，例如，大豆油和红花油的特征在于ω-6系列多不饱和脂肪酸(主要是亚油酸，18∶2ω-6)的含量高而其ω-3脂肪酸(几乎只是α-亚麻酸形式，18∶3ω-3)的含量低。
得自冷水鱼的鱼油(“FO”)的特征在于ω-3系列多不饱和脂肪酸(主要是顺式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸，“EPA”，20∶5ω-3、二十二碳五烯酸，＂DPA＂，22∶5ω-3和顺式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸，“DHA”，22∶6 ω-3)的含量高而其ω-6脂肪酸的含量低。
与脂质乳剂一起进行给药的中链甘油三酯(“MCT”)主要作为能量的来源。中链甘油三酯包含饱和脂肪酸，所以其既不包含ω-6也不包含ω-3必需脂肪酸。因为它们的快速水解和其它性质(增强颗粒与细胞的结合)，所以MCT对乳剂颗粒的代谢具有令人感兴趣的影响。
人体本身不能产生必需的ω-6或ω-3系列的多不饱和长链脂肪酸，即，其必需口服、肠内或胃肠外给药。机体仅能由短链不饱和脂肪酸来合成长链不饱和脂肪酸。两种系列竞争同一个延长-去饱和的酶系。但是，不能由ω-3系列的母体来形成ω-6脂肪酸，反之亦然。
为了使身体可以获得外源性的游离脂肪酸，其必需通过酶——脂蛋白脂肪酶(LPL)从输入的甘油三酯水解释放或者与乳剂颗粒一起被吸收或其残余物直接进入细胞。一直认为这种开始的脂质水解步骤是脂质代谢的限速步骤。这种限制是由裂解甘油三酯时脂质蛋白脂肪酶相对受限制的活性所导致的。因此，植物油乳剂的最大代谢速率为每天约3.8g脂质/kg体重(Hallberg等人，Acta Physiol.Scand.(1965)第65卷，增刊254，2-23页)。
在甘油三酯输入期间，希望达到尽可能低的甘油三酯血清浓度，例如相当于网状内皮系统(RES)对外源性脂质的低负载。
一般而言，手术后和创伤后的情况以及严重的脓毒性发作的特征为免疫系统的极大刺激。免疫反应包括在高水平时可造成严重组织损害的细胞因子(例如，肿瘤坏死因子和白介素)的释放。此外，高细胞因子浓度还损害LPL对循环的甘油三酯的水解。
在该类临床情况中，特别重要的是使用可迅速水解和消除(以避免血浆甘油三酯浓度的过度增加)并且可以提供能降低细胞因子的产生以及细胞因子对组织的毒性的脂肪酸(例如ω-3脂肪酸)的外源性甘油三酯。当脂肪酸从该甘油三酯分子裂解下来并混入(以游离形式或作为磷脂的组分的形式)到细胞膜中时可获得这种作用，其中，在细胞膜中脂肪酸影响膜的结构(和功能)并可作为第二信使和类花生酸的母体。因此，希望这种过程尽可能迅速地发生。
鱼油的甘油三酯的水解比得自植物油(例如豆油)的甘油三酯的水解更缓慢，得自植物油的甘油三酯的水解比中链甘油三酯的水解更慢。向长链甘油三酯乳剂中添加鱼油乳剂甚至可以抑制由LPL进行的长链甘油三酯(得自豆油)的水解。
公开的欧洲专利申请EP-A-0311091公开了一种用于胃肠外营养的包含中链甘油三酯和高量鱼油的脂质乳剂。
公开的国际专利申请WO-A-90/08544公开了作为ω-脂肪酸来源的包含鱼油和以总脂质为基础的0至90％中链甘油三酯的脂肪乳以及其用于治疗腹腔脓毒性感染的腹膜内应用。
公开的国际专利申请WO-A-97/19683公开了用于胃肠外营养的包含中链甘油三酯、植物油和鱼油的脂质乳剂。WO-A-97/19683还公开了所说脂质乳剂用于治疗手术后、创伤后、脓毒症、炎症或消瘦病、血管血栓形成风险增加和严重的心律失常的应用。
公开的欧洲专利申请EP-A-0687418提供了一种限制患有创伤、烧伤和/或脓毒症的患者的损伤性响应的脂质乳剂，该脂质乳剂可以被肠内给药或胃肠外给药。
Simoens，C.等人在Clinical Nutrition(1995)，14，177-185中公开了四种包含不同植物油的脂质乳剂对各种组织中脂肪酸组成的影响。Sato，M.等人在Journal of Parenteral and Enteral Nutrition(1994)，18，112-118中公开了在类似血浆的介质中脂蛋白脂肪酶对包含中链和长链甘油三酯的混合脂质乳剂的水解。
公开的德国专利申请DE-A-3721137公开了一种只包含鱼油或包含鱼油和植物油并包含或不包含中链甘油三酯的脂质乳剂用于胃肠外营养和降低肿瘤生长的应用。
公开的德国专利申请DE-A-3409793描述了一种用于输入的脂质乳剂，其包含含有20至22个碳原子的脂肪酸、其酯或2或多种该类脂肪酸或酯的混合物以及植物油、乳化剂、和水。脂肪酸是得自海洋来源(鱼油)的酯的脂肪酸，特别是ω-3脂肪酸。所说的植物油是精制的豆油和/或红花油。
Treskova，E.等人在Journal of Parenteral and EnteralNutrition(2000)，23，253-257中用小鼠模型对不同静脉内脂质乳剂(鱼油；MCT/植物油/鱼油；植物油和MCT/植物油)的血浆清除率和组织靶向性进行了比较。Billman，G.E.，等人在Circulation(1999)，99，2452-2457中令人信服地证明了以其纯游离脂肪酸形式静脉内给药的ω-3脂肪酸可预防狗的由局部缺血诱导的心律不齐。
由上面可以看出，公认的ω-多不饱和脂肪酸的主要作用有(i)降低炎症和栓塞反应，(ii)降低细胞对不同刺激的反应性(例如，降低心律失常的刺激，即心肌梗塞或局部缺血期间的刺激，在癌症和炎症中降低作为对介质如TNFα响应的恶疾)，(iii)改善组织的微灌注(例如，中风期间或局部缺血-重新灌注后的微灌注)，
(iv)改善细胞内的抗氧化剂情况(尽管PUFAs对过氧化物的敏感性是众所周知的，但是其可通过足够量的脂溶性抗氧化剂来进行控制)，和(v)限制细胞内的脂肪积聚。
此外，ω-3 PUFAs对于胎儿和早产新生儿中枢神经系统(CNS)和视网膜的成熟而言也是必需的。但是，在口服供给后，ω-3脂肪酸富集的速率在不同组织间有很大的差别并且在脑的一些区域和视网膜中特别低。
虽然ω-3脂肪酸在所有这些不同水平都起着重要作用，但人类食物摄取的发展特征为ω-3脂肪酸的消费大量增加和ω-6脂肪酸摄取的增加，在西方国家人口中尤其如此。
在一些临床情况中更已经证明了与进入到细胞膜磷脂中的ω-3脂肪酸浓度十分相关的ω-3脂肪酸的益处。
本发明的一个目的是要提供一种使得可以使ω-3脂肪酸十分迅速和有效地吸收/富集到器官和组织的细胞膜中的方法和组合物。ω-3脂肪酸被有效摄入到器官和组织的细胞膜中指的是所给的ω-3脂肪酸或其母体仅有一部分(或没有)被氧化，其大多数(或全部)都混入到器官和组织中即细胞膜中。在某些情况下，细胞膜及其磷脂富含ω-3长链多不饱和脂肪酸对于ω-3和ω-6脂肪酸之间的恢复和充分平衡而言是必需的(或至少是部分需要的)。获得这些作用不仅对急性病症中的患者而言是必需的，而且对于有增加细胞膜磷脂中ω-3脂肪酸需要的所有患者而言都是必需的，并且当通过静脉内途径给药时可提供某些优点，如在早产儿和患有恶病质性(cachectic)(消瘦)疾病的患者和不能吸收到大量的ω-3脂肪酸的人的情况中都是有益的。
第一种选择是输入纯ω-3 PUFA。但是，因为游离的脂肪酸具有很高的细胞毒性，所以输入纯ω-3脂肪酸PUFA的唯一可能途径是将其与白蛋白(因为其存在于血浆中)相结合。输入速率应十分缓慢以避免血浆浓度的显著增加。白蛋白的存在将增加血浆区的大小并还将显著增加成本。
第二种选择是输入纯鱼油乳剂。但是，纯鱼油乳剂颗粒具有十分缓慢的消除速率，并且当考虑其在ω-3 PUFA方面的高含量时，用纯鱼油乳剂所获得的ω-3脂肪酸向细胞膜磷脂中的混入是十分低效的。这一点可以用大部分通过其它途径如氧化而被代谢的事实来说明。
第三种选择是输入MLF 541——一种由公开的国际专利申请WO-A-97/19683所获知的脂质乳剂。按脂质的总量计，所说的脂质乳剂包含50％MCT(“M”)、植物油(“L”)和10％鱼油(“F”)。但是，已经发现这种乳剂能维持膜磷脂中ω-3和ω-6脂肪酸之间的平衡，但是却不能诱发特定的ω-3脂肪酸的富集。
从上面可以看出，本发明的目的是胃肠外给药，但并不涉及为了营养支持/营养的目的而进行的平衡的脂肪酸供给。本发明的这种目的和其它目的已经通过包含中链甘油三酯(MCT)和鱼油的等渗脂质乳剂得到了解决。本发明的乳剂不包含植物油。本发明特别是涉及一种等渗的脂质乳剂，以该乳剂中的脂质总量计，其包含(i)约60至约95％重量的中链甘油三酯(MCT)，和(ii)约5至约40％重量的鱼油，前提是该乳剂不包含植物油。
已经令人吃惊地发现，通过使用本发明的脂质乳剂可以显著增加某些关键器官和组织的细胞膜的ω-3脂肪酸含量。与包含鱼油作为唯一甘油三酯来源的相似乳剂或包含鱼油、植物油和中链甘油三酯组合的相似乳剂相比，虽然与纯鱼油乳剂相比使用的鱼油更少并且不含任何植物油，但上面所说的本发明的脂质乳剂更有效。已经进一步发现MCT与鱼油的比例对所得效果有显著影响。
本发明的中链甘油三酯包含具有6至14个碳原子的脂肪酸。优选地，至少90％重量的MCTs是辛酸(C8)和癸酸(C10)的甘油三酯。本发明脂质乳剂中的中链甘油三酯部分优选地为该脂质乳剂总脂质含量的70％至90％，更优选地为78％至85％重量。
已知鱼油包含混入到甘油三酯中的二十碳五烯酸(EPA，20∶5ω-3)和二十二碳六烯酸(DHA，22∶6ω-3)，这些酸是所谓的高不饱和ω-3脂肪酸，其对于必需供给机体的结构单元而言是必需的并且在生物学上是很重要的，例如作为类花生酸类物质的母体和膜脂质的结构元素。这些酸进一步有助于抗血栓形成和降低脂质的作用。因为将其从天然产物分离出来和其化学合成的费用都很昂贵，所以选择用较便宜的鱼油来提供这些必需脂肪酸。本发明中所用的术语“鱼油”包括天然鱼油、加工的鱼油、高纯化的鱼油浓缩物或(再-)酯化的(合成的)鱼油。在公开的欧洲专利申请EP-A-0298293中对加工的鱼油进行了描述，该公开物在这里被引入作为参考。
鱼油的适宜实例有工业大规模得自冷水鱼的油。典型的冷水鱼选自鲑鱼、沙丁鱼、鲭鱼、鲱鱼、凤尾鱼、胡瓜鱼和箭鱼。同样，术语鱼油也包括通过ω-3-脂肪酸的(再-)酯化而合成获得的油，其中所说的ω-3-脂肪酸如得自上面冷水鱼的鱼油，所说的(再-)酯化是通过将甘油三酯水解，然后进行纯化并将所得的ω-3-脂肪酸与甘油一起进行浓缩进行的。鱼油一般包含具有12至22个碳原子链长度的脂肪酸的甘油酯。特别优选的是高纯化的鱼油提浓物，例如，其是由沙丁鱼、鲑鱼、鲱鱼和/或鲭鱼油获得的。以通过气相色谱法测定的鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础(面积百分数)，其具有20至40％，优选至少25％的二十碳五烯酸含量。此外，以通过气相色谱测定的鱼油浓缩物的脂肪酸甲酯为基础(面积百分数)，其具有约10至20％，优选至少12％的二十二碳六烯酸含量。在可通过ω-3脂肪酸的再酯化作用合成获得的鱼油的情况中，以甘油三酯的总量计，可以将二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的总浓度升至至少45％。USP 6,159,523公开了一种制备鱼油提浓物的方法。一般而言，天然鱼油中ω-6系列(例如，亚油酸，18∶2ω-6)多不饱和脂肪酸的量较低并且一般低于10％，优选低于5％。
当要影响炎症过程时，特别优选地使用一种富含EPA的鱼油。在ω-3脂肪酸不足从而影响了中枢神经系统的生长和成熟的情况中，在儿科患者中特别优选富含DHA的鱼油。
以该脂质乳剂的总脂质含量计，本发明乳剂的鱼油含量优选地为约5％至约30％，更优选地为约15％至约22％重量。
以水性脂质乳剂的总重量为基础，该脂质乳剂的总脂质含量(MCT+鱼油)为约5％至约30％，优选地为约10％至约25％重量。
在整篇说明书中，将在涉及该乳剂的脂质浓度时使用的“％重量”与“g脂质/100mL乳剂”可互换使用。
除蒸馏水外，该等渗的脂质乳剂还可包含常规辅剂和/或添加剂，如乳化剂、乳化助剂(辅助乳化剂)、稳定剂、抗氧化剂、和等渗添加剂。
对于乳化剂而言，可以使用生理上可接受的乳化剂(表面活性剂)，如动物或植物来源的磷脂。特别优选的是精制的卵磷脂类，尤其是大豆卵磷脂、鸡蛋卵磷脂、或其某些部分、或相应的磷脂。以总乳剂为基础，乳化剂含量可以为约0.02至约2.5％重量，优选地为约0.6％至约1.5％并且最优选地为约1.2％重量。
此外，还可以用长链——C16至C20脂肪酸的碱金属盐来作为乳化助剂(辅助乳化剂)。尤其优选的是其钠盐。以总乳剂为基础，所用辅助乳化剂的浓度为约0.005％至约0.1％，优选地为约0.02％至约0.04％重量。此外，还可以使用单独或与其它辅助乳化剂组合形式的胆固醇、胆固醇酯，以乳剂为基础，其使用浓度为约0.005％至约0.1％，优选地为约0.02％至约0.04％重量。
本发明的脂质乳剂可包含有效量的抗氧化剂，如维生素E，特别是α-生育酚(其是人体内维生素E的最具活性的异构体)以及β-和γ-生育酚、和/或作为抗氧化剂的棕榈酸抗坏血酸酯，从而避免形成过氧化物。所说抗氧化剂的总量可高至5000mg。在一个优选的实施方案中，以100g脂质为基础，所说抗氧化剂的总量可以为约10mg至约2000mg，更优选地为约25mg至约1000mg，最优选为约100mg至500mg。
对于稳定和等渗而言，以该乳剂为基础，本发明的乳剂可包含约2％至约5％重量的稳定剂或等渗添加剂，例如多羟基的醇。优选甘油、山梨醇、木糖醇或葡萄糖，特别优选甘油。以各治疗必需的药学有效量将该等渗的脂质溶剂给予受治疗者。给药可以连续进行或以每天一次或几次剂量的形式进行。药学有效量指的是每天每公斤体重约0.1至约1.0g TG(甘油三酯)，优选地为每天每公斤体重提供约0.2g至约0.5g TG，最优选地为每天每公斤体重约0.25g至约0.33g TG。
关键的组织选自内皮、白细胞、血小板和免疫细胞。器官选自心、脑、肾、肺、肝和脂肪。本发明等渗的脂质乳剂和方法可用于治疗患有ω-3脂肪酸普遍不足或在某些器官和组织的细胞膜中相对不足的患者。本发明的乳剂和方法特别是对于手术或经皮血管再造术如在冠状动脉或其它“外周”动脉中等的手术、心肌局部缺血或梗死、不稳定的咽痛、短暂的局部脑缺血或中风、炎症、自体免疫性、以及血栓形成性疾病如静脉或动脉的疾病、器官移植(既包括供体的输入又包括受体的输入)、血管造影操作、血液透析、早产儿、急性期反应、急性呼吸痛苦综合征、肠局部缺血、糖尿病的心血管并发症、严重烧伤、严重的恶病质、雷诺氏病、和细胞膜ω-3脂肪酸不足有很高的价值。
可以用本发明等渗的脂质乳剂来制备用于治疗上述疾病的药物/药用组合物。
本发明的脂质乳剂一律是水包油(o/w)乳剂，其中外部连续相由精制的用于胃肠外目的的蒸馏水所组成。该类水包油(o/w)乳剂是通过将MCT和鱼油进行混合，然后乳化和灭菌来获得的。将该脂质乳剂的pH值调节至生理学可接受的值，优选地将pH调至约6.0至约9.0，更优选地为约6.5至约8.5。正如从所描述的制备方法中看出的那样，本发明的乳剂是一种甘油三酯混合物的乳剂。在乳化前可以向该MCT/鱼油混合物中加入助剂和添加剂或可以在灭菌前将其加入到该乳剂中。
本发明等渗的脂质乳剂可以根据公知的标准操作用interization来进行制备。常用的方法是首先将脂质、乳化剂和其它助剂和添加剂进行混合，然后在分散的同时用水对其进行添补。水可任选地包含另外的水溶性组分(例如甘油)。由此获得的乳剂仍然包含直径约10微米的脂质颗粒。然后，必须通过附加的均化来进一步降低该乳剂的平均颗粒大小，例如用高压均化器来进行均化。对于胃肠外应用而言，优选小于约1.0微米，特别是小于约0.8微米，最优选小于约0.5微米的中等脂质小滴。本发明的脂质乳剂优选是可静脉内注射的。因此，本发明还涉及一种包含如上所属的等渗脂质乳剂的药用组合物，其优选是用于注射到人或动物体内的药用组合物。
本发明的脂质乳剂可被胃肠外给药于有受损的组织或器官灌注或增加的严重心律失常(例如心室纤维性颤动)风险或血管血栓形成或严重的心律失常或逾常的炎性反应、急性呼吸困难综合征的患者，或在用血液透析进行治疗的患者的透析期间进行给药或用于迅速升高早产儿脑和视网膜中的ω-3脂肪酸含量。本发明可用于血管再造操作前处于手术前状况或处于手术后状况或患有炎性疾病的患者；此外，其还可用于操作如腹部手术或器官移植后严重或持续的侵犯后代谢反应、和多发性损伤、炎性疾病、烧伤、感染、即将发生的或显现出的脓毒症、消瘦病。
将用下面的实施例来对本发明进行进一步的说明，但不应认为本发明会受到这些实施例的限制。
实施例下表表示了用于下面实施例脂质乳剂的各种油的脂肪酸组成(大约的％)表
1)中链甘油三酯，例如，Captex 355，Karlshamns商品。
2)豆油，例如，“Sojal”，Croda的商品。
3)红花油，例如，“Saflorl”，Gustav Heess的商品。
4)高纯化的鱼油，例如，Sanomega S28GA，Nippon Oil and Fats的商品。
包含MCT、鱼油和乳化剂(每100mL乳剂约1.2g得自小鸡蛋黄的分级的磷脂)并任选地包含植物油的实施例中的脂质乳剂可以用制备在水中的治疗乳剂的标准工业方法来进行制备，其是通过用Ultra-Turrax将成分进行分散并在搅拌的同时用水性组分来对其进行补充。用氢氧化钠水溶液和/或油酸钠将pH值调至pH 8.0至9.0。用高压均化器在400kg/cm2下来进行随后的均化。在将其分散于适宜等级的玻璃瓶中后，用公知的方法来进行热灭菌。以总乳剂为基础，每100mL试验乳剂具有20g的总脂质含量，其相当于约20％重量。该乳剂颗粒的平均粒度为约300nm并且可以变化±20％。所有的乳剂都具有大约相同的乳剂颗粒直径。乳剂MLF 541、鱼油100％、和MCT/鱼油5∶5不是本发明的乳剂，其仅用于进行比较。
材料和方法在加到细胞培养物之前，将脂质制剂在血浆中在25℃下以250mgTG/dL(TG＝甘油三酯)的终浓度培养45分钟并通过短期的超-离心(30分钟；20,000g)将乳剂富含甘油三酯的颗粒(TGRP)进行分离。此外，将HUVEC(人脐带静脉内皮细胞)用牛脂蛋白脂肪酶(8微克/mL，在DMEM中)在室温下培养30分钟，然后将其进行洗涤(用包含3％BSA的DMEM(Gibco)洗涤一次，用DMEM洗涤两次)。
然后以500μg TG/mL(50mg/dL)的终浓度向细胞培养介质(含3％BSA)中加入TGRP。在37℃下培养4小时。在用胰蛋白酶-EDTA溶液进行处理前将内皮细胞用0.02％包含BSA的DMEM洗涤一次并用DMEM洗涤两次。
用气液色谱法对此前用薄层色谱法分离出来的液体组分(TG、CE[＝胆固醇酯]、PL)中的脂肪酸模式进行测定(Lepage G.and Roy C.C.，J.Lipid Res.(1986)，27114-120)。
结果初步实验在第一套实验中，我们对我们关于培养物中表皮细胞生长的体外模型的再现性进行了试验。实际上，在培养前必须形成能保证在器皿中形成十分稳定和融合的单分子层(并能避免过度融合)的条件，并且必须对内皮细胞生长期间脂肪酸组成的变化进行试验。这一系列实验证明在5天期间HUVEC必须在包含10％血清的介质中进行培养以达到融合，并且证明了然后，生长可以被一种在缺乏血清介质中的2天培养所抑制，其确保了稳定的脂肪酸组成。
设计了第二套实验方案以对达到ω-3 PUFA的显著混合的培养时间进行最优化。这些实验表明，鉴于介质中50mg/dL的甘油三酯浓度(其低于脂质输入期间血浆甘油三酯的平均上升)，在4小时内的培养导致了内皮细胞磷脂相当大和近乎最大的变化。实际上，与4小时相比，在20小时期间的培养没有表现出大的另外的改变，但是导致了细胞内甘油三酯含量增加并部分引起细胞死亡。
在用TGRP培养4小时后，除去包含脂质的介质并将代之以不含脂肪的介质。然后将细胞再另外培养2小时或20小时以对内皮细胞中脂肪酸模式的稳定性进行评估。在2小时和20小时后细胞磷脂中总ω-3脂肪酸的含量仍然没有改变。但是，在20小时后，发现ω-3PUFA的分布轻微改变，其主要包括DPA(二十二碳五烯酸)的含量(EPA的消费)增加。这些改变可能是由于发生于细胞膜磷脂中的延伸和去饱和途径。
乳剂甘油三酯对混入到细胞磷脂中的ω-3多不饱和脂肪酸的影响如上所述的那样对细胞进行培养，然后将其在不存在(对照细胞)或存在两种实验性TGRP，即MCT/鱼油8∶2和MCT/鱼油5∶5的情况下培养4小时，与MLF 541(公开的国际专利申请WO-A-97/19683，Lipoplus，B.Braun Melsungen AG，德国)和纯鱼油(FO 100％)乳剂进行比较。
表1在用TGRP培养4小时后内皮细胞磷脂的脂肪酸组成(平均值±SD，n＝4)
(FO＝鱼油)通过用MCT/鱼油8∶2进行培养所诱导的细胞磷脂内EPA的升高分别表示了用MCT/鱼油5∶5和纯鱼油所观测到的75和82％的增加。在诱导DPA(二十二碳五烯酸，C225 ω-3)和DHA增加方面MCT/鱼油8∶2至少与所有其它制剂一样有效。
表2相对于脂质制剂中ω-3脂肪酸含量而言内皮细胞磷脂中ω-3PUFA的增加(Δ)(表示为重量％脂肪酸富集/鱼油比例)
考虑在不同试验制剂中的各鱼油含量，显然MCT/鱼油8∶2可比所有其它制剂更有效地在细胞磷脂中混入EPA、DPA和DHA。
MLF 541在使内皮细胞富含ω-3脂肪酸方面也表现出显著的功效，而与其高鱼油含量相比，纯鱼油和在较小程度上的MCT/鱼油5∶5表现出较差的功效。
表3在用MLF 541、MCT/鱼油8∶2或纯鱼油进行处理后内皮细胞膜磷脂中的ω-3/ω-6脂肪酸比例(重量％)
对于细胞磷脂中的ω-3/ω-6脂肪酸比例而言，MCT/鱼油8∶2和FO 100％使得该平衡增加了两倍，而MLF 541既影响ω-3脂肪酸含量又影响ω-6脂肪酸含量，因而基本没有改变该比例。
与专利法要求进行说明和解释的要求相一致，上面的说明书已经涉及了本发明的特定实施方案。但是，可以对要求保护的脂质乳剂、用于治疗的方法和将所述脂质乳剂进行给药的方法进行许多改进、变化和修改，这对于本领域技术人员而言是显而易见的，其不会脱离所要保护的本发明的范围和主旨。希望用下面的权利要求来包含所有该类修改和变化。
权利要求
1.一种等渗的脂质乳剂，以乳剂中脂质的总量为基础，其包含(i)约60至约95％重量的中链甘油三酯(MCT)，和(ii)约5至40％重量的鱼油，前提是该乳剂不包含植物油。
2.如权利要求1所述的等渗脂质乳剂，其中所述的中链甘油三酯脂肪酸包含约6至约14个碳原子。
3.如权利要求2所述的等渗脂质乳剂，其中所述的中链甘油三酯包括至少约90％辛酸(C8)和癸酸(C10)的甘油三酯。
4.如权利要求1所述的等渗脂质乳剂，其中所说的鱼油选自沙丁鱼、鲑鱼、鲱鱼、鲭鱼和/或其它冷水鱼油或通过甘油与通过冷水鱼油的水解所获得的ω-3脂肪酸的再酯化而合成获得的鱼油。
5.如权利要求1所述的等渗脂质乳剂，其中以鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础，所说鱼油的甘油三酯包含至少约25％的二十碳五烯酸。
6.如权利要求1所述的等渗脂质乳剂，其中以鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础，所说鱼油的甘油三酯包含至少约12％的二十二碳六烯酸。
7.如权利要求1所述的等渗脂质乳剂，其中以脂质乳剂的总量为基础，总脂质含量为约5至约30％重量。
8.如权利要求1所述的等渗脂质乳剂，其进一步包含至少一种助剂或添加剂，所说的助剂或添加剂选自乳化剂、乳化助剂(辅助乳化剂)、稳定剂、抗氧化剂和等渗添加剂。
9.一种通过给受治疗者使用治疗有效量的等渗脂质乳剂来增加人或动物体关键器官和组织的细胞膜的ω-3-脂肪酸含量的方法，所说的等渗脂质乳剂以乳剂中脂质的总量为基础，包含(i)约60至约95％重量的中链甘油三酯(MCT)，和(ii)约5至约40％重量的鱼油，前提是该乳剂不包含植物油。
10.如权利要求9所述的方法，其中所说的中链甘油三酯脂肪酸包含约6至约14个碳原子。
11.如权利要求9所述的方法，其中所说的中链甘油三酯包括至少约90％辛酸(C8)和癸酸(C10)的甘油三酯。
12.如权利要求9所述的方法，其中所说的鱼油选自沙丁鱼、鲑鱼、鲱鱼、鲭鱼和/或其它冷水鱼油或通过甘油与通过冷水鱼油的水解所获得的ω-3脂肪酸的再酯化而合成获得的鱼油。
13.如权利要求9所述的方法，其中以鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础，所说鱼油的甘油三酯包含至少约25％的二十碳五烯酸。
14.如权利要求9所述的方法，其中以鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础，所说鱼油的甘油三酯包含至少约12％的二十二碳六烯酸。
15.如权利要求9所述的方法，其中以该脂质乳剂的总量为基础，总脂质含量为约5至约30％重量。
16.如权利要求9所述的方法，其进一步包含至少一种助剂或添加剂，所说的助剂或添加剂选自乳化剂、乳化助剂(辅助乳化剂)、稳定剂、抗氧化剂和等渗添加剂。
17.如权利要求9所述的方法，其中所说的器官选自心、肾、脑、肝、肺和脂肪组织。
18.如权利要求9所述的方法，其中所说的组织选自内皮、白细胞、血小板和免疫细胞。
19.如权利要求9所述的方法，其是用于治疗手术或经皮血管再造术、心肌局部缺血或梗死、不稳定的咽痛、短暂的局部脑缺血或中风、炎症、自体免疫、以及血栓形成性疾病、器官移植、血管造影操作、血液透析、早产儿、急性期反应、急性呼吸痛苦综合征、肠局部缺血、糖尿病的心血管并发症、严重烧伤、严重的恶病质、雷诺氏病、以及细胞膜中ω-3脂肪酸不足。
20.一种等渗的脂质乳剂用于制备增加关键细胞和组织细胞膜ω-3脂肪酸含量的药物，其中以乳剂中脂质的总量为基础，所说的等渗脂质乳剂包含(i)约60至约95％重量的中链甘油三酯(MCT)，和(ii)约5至约40％重量的鱼油，前提是该乳剂不包含植物油。
21.如权利要求20所述的应用，其中所说的中链甘油三酯脂肪酸包含约6至约14个碳原子。
22.如权利要求20所述的应用，其中所说的中链甘油三酯包括至少约90％辛酸(C8)和癸酸(C10)的甘油三酯。
23.如权利要求2 0所述的应用，其中所说的鱼油选自沙丁鱼、鲑鱼、鲱鱼、鲭鱼和/或其它冷水鱼油或通过甘油与通过冷水鱼油的水解所获得的ω-3脂肪酸的再酯化而合成获得的鱼油。
24.如权利要求20所述的应用，其中以鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础，所说鱼油的甘油三酯包含至少约25％的二十碳五烯酸。
25.如权利要求20所述的应用，其中以鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础，所说鱼油的甘油三酯包含至少约12％的二十二碳六烯酸。
26.如权利要求20所述的应用，其中以该脂质乳剂的总量为基础，总脂质含量为约5至约30％重量。
27.如权利要求20所述的应用，其进一步包含至少一种助剂或添加剂，所说的助剂或添加剂选自乳化剂、乳化助剂(辅助乳化剂)、稳定剂、抗氧化剂和等渗添加剂。
28.如权利要求20所述的应用，其中所说的器官选自心、肾、脑、肝、肺和脂肪组织。
29.如权利要求20所述的应用，其中所说的组织选自内皮、白细胞、血小板和免疫细胞。
30.如权利要求20所述的应用，其是用于治疗手术或经皮血管再造术、心肌局部缺血或梗死、不稳定的咽痛、短暂的局部脑缺血或中风、炎症、自体免疫、以及血栓形成性疾病、器官移植、血管造影操作、血液透析、早产儿、急性期反应、急性呼吸痛苦综合征、肠局部缺血、糖尿病的心血管并发症、严重烧伤、严重的恶病质、雷诺氏病、以及细胞膜中ω-3脂肪酸不足。
31.一种包含一种等渗脂质乳剂的药用组合物，其中以该乳剂中的脂质总量为基础，所说的等渗脂质乳剂包含(i)约60至约95％重量的中链甘油三酯(MCT)，和(ii)约5至约40％重量的鱼油，前提是该乳剂不包含植物油。
32.如权利要求31所述的药用组合物，其中所说的中链甘油三酯脂肪酸包含约6至约14个碳原子。
33.如权利要求32所述的药用组合物，其中所说的中链甘油三酯包括至少约90％辛酸(C8)和癸酸(C10)的甘油三酯。
34.如权利要求31所述的药用组合物，其中所说的鱼油选自沙丁鱼、鲑鱼、鲱鱼、鲭鱼和/或其它冷水鱼油或通过甘油与通过冷水鱼油的水解所获得的ω-3脂肪酸的再酯化而合成获得的鱼油。
35.如权利要求31所述的药用组合物，其中以鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础，所说鱼油的甘油三酯包含至少约25％的二十碳五烯酸。
36.如权利要求31所述的药用组合物，其中以鱼油提浓物的脂肪酸甲酯为基础，所说鱼油的甘油三酯包含至少约12％的二十二碳六烯酸。
37.如权利要求31所述的药用组合物，其中以该脂质乳剂的总量为基础，总脂质含量为约5至约30％重量。
38.如权利要求31所述的药用组合物，其进一步包含至少一种助剂或添加剂，所说的助剂或添加剂选自乳化剂、乳化助剂(辅助乳化剂)、稳定剂、抗氧化剂和等渗添加剂。
39.胃肠外应用的如权利要求31所述的药用组合物。
40.用于注射的如权利要求39所述的药用组合物。
全文摘要
本发明涉及一种用于迅速改变器官和组织的细胞膜脂肪酸组成的组合物和方法，其特别是涉及通过给人或动物体胃肠外使用包含脂肪酸甘油三酯的等渗脂质乳剂形式的脂肪酸来增加器官和组织的细胞膜的ω－3脂肪酸的量。
文档编号A61K31/231GK1553798SQ02817634
公开日2004年12月8日 申请日期2002年7月20日 优先权日2001年7月25日
发明者Y·卡彭蒂尔, I·杜庞特, Y 卡彭蒂尔, 犹 申请人:目标打击股份公司