专利名称：10－羟基喜树碱脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及10-羟基喜树碱脂质体及其制备方法。
背景技术：
拓扑异构酶抑制剂是用于癌症治疗的一类重要的化疗药物，这类化合物具有抑制拓扑异构酶的酶活性作用，抑制拓扑异构酶参与DNA的复制、修复、遗传重组和转录。10-羟基喜树碱是拓扑异构酶抑制剂的一个代表，10-羟基喜树碱是从珙桐科落叶植物喜树的种子或根皮中提出的一种生物碱，喜树广泛分布于我国南方，资源十分丰富。目前我国通过化学合成、生物发酵生产10-羟基喜树碱都已获得成功。据统计植物类抗肿瘤药一直是抗肿瘤临床用药的领先类别，10-羟基喜树碱及其类似物是继紫杉醇之后成为发达国家竞相开发研究的另一类植物抗肿瘤药。我国近几年来10-羟基喜树碱的市场份额在植物类抗肿瘤药中一直排在前三位。在过去10年里，美、英、法、日等西方国家已先后开发出大量10-羟基喜树碱类的衍生物，其中已有部分10-羟基喜树碱衍生物进入抗肿瘤药市场。10-羟基喜树碱的作用机制十分明确，它是一种抑制DNA拓扑异构酶I活性的化合物。实验研究表明它主要作用与DNA合成期，对G0期细胞没有作用，对G1、G2与M期细胞有轻微杀伤力。它可形成一种可逆的酶-10-羟基喜树碱-DNA三元复合物，该复合物能阻止拓扑异构酶反应中断裂/连接循环中的重新连接步骤。动物实验表示其抗瘤谱较广，对核酸特别是DNA的合成有明显的抑制作用，与常用抗肿瘤药物无交叉耐药性。目前临床主要用于治疗肝癌、大肠癌、肺癌和白血病的治疗。但此药的毒副反应较大，主要表现为骨髓抑制，引起白细胞减少、胃肠道反应、泌尿道刺激等，这些毒副反应限制了10-羟基喜树碱的临床应用。并且因为10-羟基喜树碱的水不溶性，目前临床所用的制剂是采用NaOH溶液调节PH使其结构中的α-羟基内酯环打开而溶解，但其内酯环为官能团，打开后形成的药物羧酸盐形式表现为极低的抗拓扑异构酶I活性。
针对10-羟基喜树碱在临床应用中的缺陷和局限性，可以对10-羟基喜树碱进行了两个方面的研究改造1.将其进行化学结构的改造，诸如国外已上市的拓扑替康、依立替康等，以达到改善水溶性的目的及提高疗效作用。2.采用新剂型来改善其水溶性以及改善疗效、降低毒副作用，其中一种方法是将其包裹在脂质体中。脂质体是一种类似生物膜结构的双分子层小囊，其膜材可在体内生物降解且无毒性和免疫原性，从而可作为药物载体。脂质体中存在非极性区域，为脂溶性药物的静脉给药提供了可能；此外由于受脂质体的保护，被包裹的药物可以减少受外界环境的影响，也不会影响外界环境。由于脂质体是一外源性物质，进入体内会受到体内防御系统的摄取，因而在正常人体内，脂质体主要会在肝、脾、肺等部位富集，出现较高的局部药浓，还可起到被动靶向载体的效果。
将10-羟基喜树碱制备成脂质体可以克服它因为化学结构所造成的缺点，具有以下药效动力学和药代动力学特点一方面将10-羟基喜树碱制备成脂质体，无须α-羟基内酯环开环，提高了药效；其保存在中性水溶液中，还可以避免α-羟基内酯环在水环境中水解，提高了稳定性；并且由于脂质体的包裹可减少10-羟基喜树碱对血液学产生的影响；另一方面采用脂质体剂型可以改变10-羟基喜树碱的体内分布，使其具有肝、肺靶向性。鉴于这两点，10-羟基喜树碱制备脂质体可以降低药物的毒性，同时提高药物的治疗效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有良好水溶性的10-羟基喜树碱脂质体，不需通过打开10-羟基喜树碱分子中的α-羟基内酯环使其溶解，从而提高了药效。
本发明的目的还在于提供一种制备具有良好水溶性的、稳定性提高的10-羟基喜树碱脂质体的方法。
本发明的目的可以通过以下措施来达到一种10-羟基喜树碱脂质体，其特征是以下述重量配比为原料10-羟基喜树碱1-2份，磷脂20-150份，胆固醇2-15份。
一种10-羟基喜树碱脂质体，其特征是以下述重量配比为原料10-羟基喜树碱1-2份，磷脂20-150份，胆固醇2-15份，甘露醇或葡萄糖25-75份。
上述的磷脂是卵磷脂、大豆磷脂或氢化大豆磷脂。
上述的10-羟基喜树碱脂质体中可以包括氨基酸，氨基酸与10-羟基喜树碱脂质体可以形成复合物。
氨基酸的用量与10-羟基喜树碱以下述重量配比为原料10-羟基喜树碱1份，氨基酸0.5-3份。
上述的氨基酸选自谷氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、半胱氨酸。
一种10-羟基喜树碱脂质体的制备方法，其特征是将10-羟基喜树碱、磷脂、胆固醇按上述比例溶于氯仿、乙醇或乙醚中，恒温除去溶剂，加入溶有上述比例计算的甘露醇或葡萄糖的水溶液，溶解后，超声波或高压匀浆处理，即可得到10-羟基喜树碱脂质体，分装于西林瓶或安瓿内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱脂质体冻干制剂。
一种10-羟基喜树碱脂质体的制备方法，其特征是将10-羟基喜树碱、磷脂、胆固醇按上述比例溶于氯仿、乙醇或乙醚中，恒温除去溶剂，加入溶有上述比例计算的含有氨基酸的甘露醇或葡萄糖的水溶液，溶解后，超声波或高压匀浆处理，即可得到10-羟基喜树碱脂质体，分装于西林瓶或安瓿内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱脂质体冻干制剂。
上述恒温除去溶剂的温度是40-60℃。
上述冷冻干燥后西林瓶或安瓿通入氮气或二氧化碳，然后进行轧盖或封口。
本发明的有益效果表现在按本发明技术方案制备的10-羟基喜树碱脂质体溶液经过冷冻干燥，即得10-羟基喜树碱脂质体冻干剂。在使用前经水化又可形成脂质体溶液，避免了通常脂质体以溶液形式保存稳定性差的缺点，从而提高了使用的可靠性。
按本发明技术方案制备的10-羟基喜树碱脂质体冻干剂具有良好的水溶性，溶解后的脂质体各项指标与冻干前无明显变化，溶解后10-羟基喜树碱的浓度最高可达10mg/ml，根据临床用药要求进行稀释；同时可以避免10-羟基喜树碱的水解，提高了10-羟基喜树碱的稳定性。本发明制备的10-羟基喜树碱脂质体，抗癌疗效与市售10-羟基喜树碱注射液相比，药效明显提高。
本发明方法采用薄膜法制备，不采用国外文献报道的PH梯度法，工艺简单。本发明中加入的氨基酸在本技术方案条件下，可以带有电荷，从而防止脂质体聚集，能明显解决脂质体的聚集现象，比不加氨基酸稳定。
具体实施例方式
实施例1取10-羟基喜树碱1.0g，精制卵磷脂66g及胆固醇4.5g置圆底烧瓶内，加入乙醇，使上述混合物完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴减压干燥成膜，加入含2g谷氨酸和50g甘露醇的水溶液溶解膜，用超声仪超声粉碎，即得10-羟基喜树碱脂质体溶液。显微镜检查形态，经Coulter粒度测定仪检测其粒径。
实施例2取10-羟基喜树碱1.0g，精制卵磷脂20g及胆固醇2.0g置圆底烧瓶内，加入氯仿，使上述混合物完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴减压干燥成膜，加入含2.0g谷氨酸和25g甘露醇的水溶液溶解膜，用超声仪超声粉碎，即得10-羟基喜树碱脂质体溶液。
实施例3取10-羟基喜树碱1.0g，精制卵磷脂80g及胆固醇5.0g置圆底烧瓶内，加入氯仿，使上述混合物完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴减压干燥成膜，加入含50g甘露醇的水溶液溶解膜，用超声仪超声粉碎，即得10-羟基喜树碱脂质体溶液。
实施例4取10-羟基喜树碱1.0g，精制卵磷脂100g及胆固醇5.0g置圆底烧瓶内，加入氯仿，使上述混合物完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴减压干燥成膜，加入含1.0g谷氨酸和50g甘露醇的水溶液溶解膜，用超声仪超声粉碎，即得10-羟基喜树碱脂质体溶液。
实施例5取10-羟基喜树碱1.0g，精制卵磷脂150g及胆固醇15g置圆底烧瓶内，加入氯仿，使上述混合物完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴减压干燥成膜，加入含1.0g谷氨酸和75g甘露醇的水溶液溶解膜，用超声仪超声粉碎，即得10-羟基喜树碱脂质体溶液。
实施例6取10-羟基喜树碱1.0g，精制大豆磷脂44g及胆固醇6.0g置圆底烧瓶内，加入氯仿，使上述混合物完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴减压干燥成膜，加入含50g甘露醇的水溶液溶解膜，用高压匀浆泵进行匀浆，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于西林瓶或安瓿内，使每瓶含10-羟基喜树碱2mg，冷冻干燥，通氮气轧口，即得淡黄色的10-羟基喜树碱脂质体冻干制剂。
实施例7取按实施例1所述制备的10-羟基喜树碱脂质体及游离的10-羟基喜树碱溶液，脂质体包裹的药物和游离药物均用5％的葡萄糖输液稀释至所需的浓度。
按常规于小鼠腋下接种肝癌HAC，接种后分为7组，每组10只，雌雄各半，并于接种后1、3、5天治疗，共治疗3次，按体重给药，分别静脉注射10-羟基喜树碱脂质体4.0mg/kg、2.0mg/kg、1.0mg/kg和游离10-羟基喜树碱溶液16.0mg/kg、8.0mg/kg、4.0mg/kg及同容积5％葡萄糖溶液；于接种后11天解剖，取瘤块称重计算抑瘤率，与对照组、同剂量之间比较作t检验，结果显示10-羟基喜树碱制成脂质体后具有非常显著的抑制HAC瘤株的作用，同剂量(4.0mg/kg)的脂质体和市售制剂具有极显著性差异，结果见下表
如上表所示，脂质体包裹的10-羟基喜树碱治疗效果较好，达到治疗效果所需的脂质体包裹的10-羟基喜树碱的剂量是游离药物剂量的1/4，即脂质体包裹药物的治疗效果至少是游离药物的4倍。
权利要求
1.一种10-羟基喜树碱脂质体，其特征是以下述重量配比为原料10-羟基喜树碱1-2份，磷脂20-150份，胆固醇2-15份。
2.一种10-羟基喜树碱脂质体，其特征是以下述重量配比为原料10-羟基喜树碱1-2份，磷脂20-150份，胆固醇2-15份，甘露醇或葡萄糖25-75份。
3.根据权利要求1或2所述的10-羟基喜树碱脂质体，其特征是所述的磷脂是卵磷脂、大豆磷脂或氢化大豆磷脂。
4.根据权利要求1或2所述的10-羟基喜树碱脂质体，其中可以包括氨基酸，所述的氨基酸与10-羟基喜树碱脂质体形成复合物。
5.根据权利要求4所述的10-羟基喜树碱脂质体，其中氨基酸的用量与10-羟基喜树碱以下述重量配比为原料10-羟基喜树碱1份，氨基酸0.5-3份。
6.根据权利要求4或5所述的10-羟基喜树碱脂质体，其中所述的氨基酸选自谷氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、半胱氨酸。
7.一种10-羟基喜树碱脂质体的制备方法，其特征是将10-羟基喜树碱、磷脂、胆固醇按上述比例溶于氯仿、乙醇或乙醚中，恒温除去溶剂，加入溶有上述比例计算的甘露醇或葡萄糖的水溶液，溶解后，超声波或高压匀浆处理，即可得到10-羟基喜树碱脂质体，分装于西林瓶或安瓿内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱脂质体冻干制剂。
8.根据权利要求7所述的10-羟基喜树碱脂质体的制备方法，其特征是将10-羟基喜树碱、磷脂、胆固醇按上述比例溶于氯仿、乙醇或乙醚中，恒温除去溶剂，加入溶有上述比例计算的含有氨基酸的甘露醇或葡萄糖的水溶液，溶解后，超声波或高压匀浆处理，即可得到10-羟基喜树碱脂质体，分装于西林瓶或安瓿内，冷冻干燥，得10-羟基喜树碱脂质体冻干制剂。
9.据权利要求7或8所述的10-羟基喜树碱脂质体的制备方法，其特征是恒温除去溶剂的温度是40-60℃。
10.据权利要求7或8所述的10-羟基喜树碱脂质体的制备方法，其特征是冷冻干燥后西林瓶或安瓿通入氮气或二氧化碳，然后进行轧盖或封口。
全文摘要
本发明公开了具有良好抗癌作用的10－羟基喜树碱脂质体，其水溶性及稳定性较好，疗效相对于游离的10－羟基喜树碱明显提高；并公开了10－羟基喜树碱脂质体的制备方法，以磷脂和胆固醇为膜材，用氯仿、乙醇或乙醚为溶剂，用甘露醇或葡萄糖作为冻干保护剂。
文档编号A61P35/00GK1537534SQ03113179
公开日2004年10月20日 申请日期2003年4月14日 优先权日2003年4月14日
发明者周卫, 周 卫 申请人:江苏省药物研究所, 南京凯腾科技有限公司