专利名称：板蓝根和益母草提取物及其药物组合物和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，具体而言，本发明涉及可以期待作为扩张冠状动脉、抗心肌缺血、活血化瘀作用的中药板蓝根和益母草提取物以及基本上由该提取物组成的药物组合物及其制备方法和医药用途。
背景技术：
近年来，随着人民生活水平的不断提高，膳食结构发生了很大变化，脂肪和胆固醇摄入量大幅度增加，使业已居高不下的冠心病患病率和死亡率持续上升。据报道，心血管病死亡率已占总死因的第一位，成为威胁人民生命健康的头号杀手。因此，控制和减少冠心病患病率，降低其死亡率，是当前医药界普遍关注的重要课题。由于急性心肌梗塞和猝死是冠心病的主要死因，而心绞痛通常是导致急性心肌梗塞和猝死的先兆，故及时纠正心绞痛发作，对于改善冠心病症状，降低死亡率、提高带病生存质量，均有十分重要的意义。
本发明的药物组合物基本上由两味中药(板蓝根和益母草)组成。将两药组合提取之后用于治疗心血瘀阻型胸痹(冠心病心绞痛)，主要依据板蓝根现代药理学研究成果、血瘀证本质的结论性认识和临床疗效的客观佐证。实际经历了实验研究、临床研究、新药开发前明研究三个基本过程。本组方中以板蓝根为君药，以益母草为臣药，还可以佐以常用的活血化瘀、清热凉心、养阴补心类中药，如川芎、郁金、姜黄、丹参、红花、桃仁、赤芍、牡丹皮、大黄、延胡索、水蛭、蒲黄，或者一些具有明确治疗心血管疾病活性的薯蓣皂甙、葛根总黄酮、银杏叶提取物、山楂黄酮，共同起到相同的作用。
板蓝根是十字花科大青属植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的干燥根，收载于《中华人民共和国药典》(2000年版)(198页)，具清热解毒作用，以及活血化瘀作用。益母草是唇型科益母草属植物益母草(Leonurus heterophyllus Sweet)的干燥地上部分，收载于《中华人民共和国药典》(2000年版)(237页)，具兴血养血、活血化瘀作用。我们发现，在二者一定比例上的混合制剂可以显著改善微循环和血瘀流变学指标，抑制血小板聚集，增强纤维蛋白溶解酶活性，动物急性毒性试验结果表明毒副作用极低。根据中医君臣佐使理论，在含有板蓝根和益母草提取物组合物的基础上，加上其它活血化瘀、清热凉心、养阴补心类中药，如川芎、郁金、姜黄、丹参、红花、桃仁、赤芍、牡丹皮、大黄、延胡索、水蛭、蒲黄或者一些具有明确治疗心血管疾病活性的薯蓣皂甙、葛根总黄酮、银杏叶提取物、山楂黄酮，可以起到与二者组合相同或近似的作用。
技术方案本发明的目的在于提供了一种中药板蓝根和益母草的组合物的提取物；本发明的另一目的是提供了所述中药组合物提取物的制备方法；本发明的另一目的是提供了所述中药组合物提取物用于制备治疗冠心病、心绞痛等心血管疾病药物的用途；本发明的另一目的是提供了一种用于治疗冠心病、心绞痛等心血管疾病的药物组合物。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的本发明的提取物基本上由板蓝根和益母草提取物组成，其制备方法为中药板蓝根和益母草以一定比例混合后，经醇水提取，过滤，减压浓缩，醇沉，静置，离心，制成药物制剂。
因此，本发明制备板蓝根与益母草的组合物方法包括下列步骤a用醇水混合溶剂提取二味药材粉碎后按照一定比例混合的混合物(提取时浸泡时间不少于12小时)，浓缩提取液回收醇溶剂；优选使用乙醇，醇水比例可以是95％-10％醇水，优选75％-35％，更优选55％乙醇水。
b将步骤a得到的提取液过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.08(60℃)，加醇使醇含量达到较高的比例，一般为45％-85％，优选75％；优选使用乙醇，静置一段时间后离心。
c将步骤b得到的上清液减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，得到提取物，如果加入一定量的辅料，干燥制粒，可以得到制剂；或者将上清液减压浓缩至一定相对密度后直接进行冻干得冻干粉。
本发明中，板蓝根与益母草的重量比例可以是从100∶1至1∶2之间的任何比例，优选20∶1-1∶1，更优选10∶1-3∶1，最优选7∶1。
本发明的制备方法中，醇可以是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇等或者它们的混合物。优选乙醇。醇水混合溶剂可以是醇与水的任何比例的混合溶剂，优选乙醇与水的混合溶剂，尤其优选30％-75％的乙醇水溶液，最优选55％的乙醇水溶液。
当然，根据中药君臣佐使的理论，本发明中药板蓝根和益母草组合物中还可以加入其他某些成分，但并不影响本发明的目的，例如，在含有板蓝根和益母草提取物组合物的基础上，加上其它活血化瘀、清热凉心、养阴补心类中药，如川芎、郁金、姜黄、丹参、红花、桃仁、赤芍、牡丹皮、大黄、延胡索、水蛭、蒲黄或者一些具有明确治疗心血管疾病活性的薯蓣皂甙、葛根总黄酮、银杏叶提取物、山楂黄酮等，可以起到与二者组合相同或近似的作用，这些组合物及其提取物也在本发明要求保护的范围中。
本发明的特点是结合了常用药典用药的板蓝根和益母草两味药材，经组合后共同使用，在以汤剂进入临床时得到确切疗效，对于治疗50例缺血性心脏病患者的疗效观察显示本药物组合物的制剂疗效优于市场上阳性对照药物。
本发明方法制备得到的以板蓝根和益母草两味药材为主的组合物的提取物用制药领域的常规方法，结合中药制药中常规的可药用辅料，可以制成各种药物组合物，如片剂，颗粒剂，胶囊等。这些药物组合物可以用于治疗冠心病、心绞痛等心血管疾病药物的用途。
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的百分数是重量百分数。
实施例1中药板蓝根与益母草提取物及其药用组合物的制备取板蓝根14.45公斤，益母草2.2公斤，粉碎后加55％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取两小时；第二次加3.5倍量，提取两小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.08(60℃)。加乙醇使含醇量达到75％，静置12小时后离心。取上清液减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，得到提取物，加浸膏重的三分之一量的可溶性淀粉，干燥，分装成10,000粒胶囊剂(TMYX)(以下简称TMYX胶囊)。
实施例2中药板蓝根与益母草提取物药用组合物胶囊(以下简称TMYX胶囊)对大鼠心肌缺血(冠状动脉结扎法)的治疗作用摘要经结扎大鼠冠状动脉所致急性心肌缺血实验证明，中药板蓝根与益母草药用组合物可显著缩小心肌梗塞面积，对缺血性心电图有明显改善，能显著降低该模型大鼠血清肌酸磷酸激酶性和乳酸含量，显著提高红细胞电泳速度。能显著延长小鼠缺氧存活时间、降低氧代谢、具有耐缺氧作用。实验还证明，该药可显著抑制血栓形成、增加纤溶酶活性和改善微循环。表明该药具有显著活血化淤作用，为该药治疗心血管病提供了实验依据。
实验目的观察TMYX胶囊经口服给药对心肌缺血、耐缺氧、血栓形成、纤溶酶活性、微循环等的影响，为临床应用提供了实验依据。
受试药物实施例1中得到的TMYX胶囊粉。
临床日服剂量30g生药，经提取做成胶囊粉分三次服用。实验用不含赋形剂的浸膏粉进行，以蒸馏水配成水悬液灌胃给药，实验剂量均按生药量标示。复方丹参片(简称FDS)由广东省中药研究所药厂生产。将片剂用蒸馏水配成悬浊液灌胃给药，实验剂量均按片剂量标示。
试剂氧化硝基四氨唑兰(N-BT)，北京朝阳区东风制药厂生产，批号；乳酸，上海新海浓场乳酸厂生产；肌酸，北京化工厂生产，伤寒复伤寒甲乙菌苗，长春生物制品研究所生产。
动物大鼠Wistar种；小鼠昆明种，均由辽宁省医药工业研究动物室提供。
实验结果一、对大鼠心肌缺血的影响(冠状动脉结扎法)方法体重200-300g Wistar种大鼠，雌雄各半，随机分4组，分别灌服TMYX7.2、3.6g/kg、FDS 0.43g/kg和同容积生理盐水(简称NS)，每天1次，连续给药14天，末次药后1小时，用0.64g/kg乌拉坦腹腔注射麻醉，背位固定，测标准II及V4导联心电图为梗塞前心电图。开胸后，用医用无损伤缝合针(5个零号线)，在肺动脉圆锥与在左心耳跟部之间向下约1.5mm处，穿线结扎冠状动脉，造成急性心肌梗塞，迅速关胸。梗塞后1小时测心电图，取心电图有明显心肌缺血改变者实验用。于梗塞后8小时同前灌服药物1次，24小时测定心电图后，由眼眶静脉丛取血，测定血清肌酸磷酸激酶和乳酸含量，用红细胞电泳仪测定红细胞电泳速度。然后处死大鼠，摘取心脏，放-20℃冰箱中冷冻30分钟，沿冠状沟剪取心室，将心室横向切成5片，放N-BT液中38℃水浴保温15分钟。将各片心肌非兰染区(梗塞区)切下，称湿重，计算与心室重之比为心肌梗塞范围。
结果1、对心肌梗塞范围的影响NS组心肌梗塞范围为14.79％，给药各组梗塞范围显著减小(P＜0.01-0.001)，均在7.10～9.35％之间(见表1)，临床同效量的TMYX与FDS作用相近。表明TMYX有显著缩小心肌梗塞范围的作用，同时看到随剂量增加作用增强的量效关系。
表1 TMYX对结扎冠状动脉大鼠梗塞范围的影响(均数±标准差)组别剂量(g/kg) 动物数 心肌梗塞范围(梗塞区/心室，％)NS 同体积 8 14.79±3.71FDS 0.438 7.43±2.34***TMYX7.2 9 7.10±1.85***TMYX3.6 10 9.35±2.41**与NS组比较**P＜0.01***P＜0.0012、对肌酸磷酸激酶、乳酸和红细胞电泳速度的影响测定NS组血清肌酸磷酸激酶为67.89U，给药各组降至30.40-32.62U(见表2)，与NS组比较均有显著性差异(P＜0.001)；NS组乳酸含量为59.82mg/dl，给药各组均降至38.2641.68mg/dl(见表2)，与NS组比较差异显著(P＜0.01)；NS组红细胞电泳速度为5.10μm/秒，给药各组均增加至7.49-8.24μm/秒，与NS组比较差异均显著(P＜0.01)。实验证明，TMYX具有显著降低肌酸磷酸激酶，降低乳酸含量和提高红细胞电泳速度等作用，表明该药能显著降低心肌损伤，改善心肌无氧代谢和改善血液流变学。
表2 TMYX对结扎冠状动脉大鼠血清肌酸磷酸激酶、乳酸和红细胞电泳速度的影响(均数±标准差)组别 剂量 动物数肌酸磷酸激酶活性 乳酸含量 红细胞电泳速度(g/kg) (U)(mg/dl) (μm/秒)NS同体积8 67.89±22.03 59.82±13.49 5.10±1.11FDS 0.43 8 30.40±12.47**41.68±4.66**8.00±1.90**TMYX 7.2 9 31.85±10.91***40.04±5.25**8.24±1.46**TMYX 3.6 1032.62±14.05***38.26±4.57**7.49±1.66**与NS组比较**P＜0.01***P＜0.0013、对心率和心电图的影响测定心肌梗塞前后II导联心电图计算心率变化；测定V2导联心电图T波高度变化，以梗塞前后T波高度差值进行统计。结果各组大鼠梗塞前后心率变化不明显(见表3)，NS组梗塞后略有增加，给药各组梗塞后1小时心率略有降低，24小时基本恢复正常，梗塞前后心率变化均无显著差异(P)0.05)；NS组梗塞后心电图T波明显增高，给药各组心电图T波抬高均明显减小(见表3)，表明该药对心率无明显影响，但能明显改善心肌梗塞所致的缺血性心电图。
表3 TMYX对结扎冠状动脉大鼠心率及心电图T波的影响(均数±标准差)组别剂量 动物数 心率(次/分) T波(前后差值)(g/kg)梗塞前 1(小时)24(小时) 1(小时) 24(小时)NS 同容积8 405.9±3.2 413.8±61.1465.6±44.10.40±0.300.13±0.15FDS 0.43 8 449.4±77.1402.3±33.3461.9±45.00.16±0.350.05±0.14TMYX7.2 9 452.3±43.4382.7±31.8440.5±34.40.16±0.20-0.01±0.05*TMYX3.6 10 433.4±23.3372.8±36.2436.1±30.30.16±0.140.08±0.14与NS组比较*P＜0.05实施例3中药板蓝根与益母草提取物药用组合物对小鼠耐缺氧的影响试验方法体重18-21g昆明种小鼠52只，雌雄各半，随机分4组，分别灌服FDS0.72g/kg、TMYX 12.0、6.0g/kg和同容积NS，每天1次，连续给药7天，末次药后1小时，将500ml烧杯扣入盛有水的盘中隔离空气，杯内放一托网，网下放10g碱石灰，网上放一只小鼠，每10分钟通过水下吸杯内气体1ml，用CY-2型测氧仪测定杯内氧分压，直至动物缺氧死亡，记录动物死亡时间。
结果NS组动物存活时间为68.78分钟，给药各组存活时间均延长至85.28-97.33分钟(见表4)，与NS组比较均有显著差异(P＜0.01)。死亡时氧分压NS组为5.50％，TMYX大剂量组下将至5.20％，各组氧分压的变化见表4。表明该药具有明显耐受缺氧、将低氧代谢的作用。
表4 TMYX对小鼠耐受缺氧的影响(n＝13，均数±标准差)组别 剂量(g/kg)存活时间(分钟)NS同体积68.78±11.26FDS 0.72 89.04±22.89**TMYX 12.0 97.33±26.95**TMYX 6.0 85.28±15.71**与NS组比较**P＜0.01实施例4中药板蓝根与益母草提取物药用组合物对大鼠血栓形成的影响试验方法体重250-350g大鼠，雌雄各半，随机分4组，每组10只，分别灌服FDS0.43g/kg、TMYX 7.2、3.6g/kg和同容积NS，每天给药1次，连续10天，末次药后30分钟，以乌拉坦腹腔注射麻醉、剥离左颈总动脉和右颈外静脉，用颈动脉-颈外静脉血管旁路法进行血栓形成实验。比较在各药药物作用下，在动脉血流中15分钟内丝线上形成的血栓湿重。
结果NS组血栓湿重18.98mg，FDS、TMYX大小剂量组血栓湿重下降至14.37-13.88mg(见表5)，血栓形成抑制率分别为24.29％、26.87％和25.08％(P＜0.01)，表明该药具有显著抑制血栓形成的作用。
表5 TMYX对大鼠血栓形成的影响(n＝10，均数±标准差)组别 剂量(g/kg生药)血栓湿重(mg) 抑制率(％)NS 同容积18.98±3.66FDS0.43 14.37±1.39**24.29TMYX 7.2 13.88±1.45**26.87TMYX 3.6 14.22±2.19**25.08与NS组比较**P＜0.01实施例5中药板蓝根与益母草提取物药用组合物对大鼠纤溶酶活性的影响方法体重200-300g大鼠，雌雄各半，随机分4组，分别灌服FDS 0.43g/kg、TMYX 7.2、3.6g/kg和同容积NS，每天1次，连续给药6天，末次药后1小时，由腹主动脉取血，枸橼酸钠抗凝、分离、测定优球蛋白溶解时(ELT)，再按U＝10000/ELT计算纤溶酶活性单位。
结果NS组酶活性为271.85U，给药各组酶活性均显著增加(见表6)，与NS组比较差异显著(P＜0.05-0.01)，TMYX大剂量比临床同剂量的FDS作用强，表明该药有显著增加纤溶酶活性作用。
表6 TMYX对大鼠纤溶酶活性的影响((n＝10，均数±标准差)组别 剂量(g/kg生药)酶活性(U)NS同体积271.85±91.92FDS 0.43 368.02±58.02*TMYX 7.2 436.70±67.14**TMYX 3.6 372.85±81.97*与NS组比较*P＜0.05，**P＜0.01实施例6中药板蓝根与益母草提取物药用组合物对微循环的影响试验方法体重20-23g小鼠70只，雌雄各半，随机分4组，分别灌服FDS 0.72g/kg、TMYX 12.0、6.0g/kg和同容积NS，每天给药1次，连续7天，末次药后40分钟，以1g/kg乌拉坦腹腔注射麻醉，于腹中部开腹1-1.5cm，轻轻拉出一段小肠放微循环观察板上，保温37℃，用光学显微镜(40倍)，以光点同步法观察和记录肠系膜微血管血流速度。然后以0.4ml/10秒的速度尾静脉注射伤寒副伤寒甲乙菌苗(细菌毒素)20ml/kg，记录给毒素前血流速度、给毒素后血流平均停止时间、平均最低流速(一般在注射毒素后0.5分钟左右)和5分钟内每分钟血流速度，并与给毒素前作为100％)比较各时间血流速度恢复百分率。
结果注射细菌毒素后造成机体微循环障碍，微血管血流，甚至出现短时间血流停止，因此血流停止时间也反应微循环障碍程度。NS组血流停止时间平均为24.6秒，给药各组血流停止时间显著减少至5.8-10.8秒(见表7)。给毒素后NS组最低流速仅为注射毒素前的43.7％，给药各组恢复至64.3-70.2％，2分钟时给药各组已恢复至91.7-97.2％，给毒素后5分钟内TMYX与同剂量的FDS血流速度恢复率与NS组比较均有显著差异(P＜0.05-0.01)，表明该药有显著改善微循环的做作用。
小结中药板蓝根与益母草药用组合物TMYX可使冠状动脉结扎所致大鼠心肌梗塞面积显著缩小，使缺血性心电图有明显改善，能显著降低血清肌酸磷酸激酶活性和乳酸含量，显著提高红细胞电泳速度。表明该药能减轻急性心肌缺血大鼠心肌的损伤，改善无氧代谢和改善血液流变学。能显著延长小鼠缺氧存活时间，降低氧代谢。实验还证明，该药可显著抑制血栓形成、增加纤溶酶活性和改善微循环。表明该药经口服给药具有显著活血化瘀作用，为该药治疗心血管病提供了实验依据。
实施例7中药板蓝根与益母草药用组合物对犬心肌缺血/再灌注损伤的保护作用实验目的通过与复方丹参对比的方法，在应用犬复制心肌缺血/再灌注损伤模型的基础上，观察TMYX对心功能、血流动力学指标、心肌耗氧量、心率紊乱、心肌酶和心肌超微结构的影响，以及对离体心脏冠脉流量、血小板聚集、血液粘度等的影响，为临床应用提供了实验依据。
受试药物实验是用不加赋型剂的TMYX成药粉加5倍量蒸馏水，于70℃水浴上搅拌提取1小时，离心，残渣加3倍量水，提取1小时，合并提取液，弄缩至200％(生药)浓度，放冷，经3号垂熔漏斗过滤，即成澄明溶液，供注射给药用。
阳性对照药复方丹参注射液(简称FDS)，上海第一制药厂生产(200％生药浓度)。
动物健康杂状，由白求恩医科大学动物室提供；Wistar种大鼠，豚鼠，均由辽宁省药品检验所动物室提供，动物含格证号辽动管证字022号。
仪器RM-6000型四道生理记录仪，所用插件分别为浮地式生物电放大器(AP-601G)、载玻放大器(AP-621G)、血压记录器(AP-611G)、心率计数器(AT-601G)；MF-1200型电磁流量计；记忆示波器(VC-10A)；KR-II型呼吸机；除颤器；JEM-1200型透射电镜；722分光光度计；生化自动分析仪。
实验与结果一、对犬心肌缺血/再灌注损伤的保护作用方法1、动物模型与分组给药 健康杂种犬，体重10.0-14.5kg，雌雄各半，随机分为假手术组(SOG)、生理盐水对照组(NSG)、中药板蓝根与益母草药用组合物TMYX小剂量组(TMYX1，200mg/kg)、中药板蓝根与益母草药用组合物TMYX大剂量组(TMYX2，400mg/kg)和复方丹参对照组(FDS，400mg/kg)，每组6只动物。3％戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉注射行全身麻醉，背位固定。左颈总动脉插管与压力换能器相接，经载波放大器描记动脉血压。气管插管以备开胸后接呼吸机行正压人工呼吸(12-16次/分钟)。右侧卧位固定，于左第IV肋间开胸，剪开心包，提心包膜将其缝于胸壁呈摇篮状。分离升主动脉，于主动脉根部安放电磁流量计探头，记录心输出量(CO)。左室心尖部造口插管直达左室腔，荷包缝合固定，插管接压力换能器，经载波放大器记录左室压力(LVP)曲线，测取左室内压峰值(LVSP)，将LVP电信号经直流放大10倍，描记LVP曲线基部，定标敏度2.6kPa(20mmHg)/20mm，读取左室舒末压(LVEDP)。将LVP电信号输入微分器，描记dp/dt曲线，测取左室内压最大变化速率(±dp/dtmax)，上述指标通过RM-6000型生理记录仪同步记录。分离冠状动脉左前降支(LAD)主干中上1/3处，穿线备用。手术操作完毕，待所有观测指标稳定后，记录正常指标。将穿线与一直径2mm的硬塑料管一起结扎LAD主干中上1/3处，造成心肌局部缺血，结扎60分钟抽出塑料管，恢复冠状血流，制成再灌注损伤模型。于缺血后30分钟静脉点滴给药(30-40滴/分钟)。分别记录实验前、缺血60分钟、再灌60分钟、120分钟、240分钟时的各项心功能和血流动力学指标。因描记上述曲线受呼吸影响，各项指标均于呼气末测取。实验过程中，连续监测心电图II导联的变化，以及时发现心律失常的发生。心室纤颤发生时以直流电复律。
2、观察指标
(1)心功能、血流动力学指标血压(BP)、心率(HR)、心输出量(CO)、左室内压峰值(LVSP)、左室舒末压(LVEDP)、左室内压上升最大速率(+dp/dtmax)、左室内压下降最大速率(-dp/dtmax)心脏指数(CI)、心搏指数(SI)、总外周阻力(TPVR)、左室作功指数(LVWI)。
按下列公式计算各参数心脏指数(CI，ml/分钟/m2)＝CD/体表面积(m2)心率指数(SI，ml/stroke/m2)＝CI/HR左室作功指数(LVWI，g/stroke/m2)＝SI(MAP-LVEDP)*13.6/1000总外周阻力(TPVR，kPa，S/L)＝MBP(kPa)*79.92/CO(L/分钟)(2)心肌耗氧量测定①在上述摸型基础上，分离冠状动脉，于冠脉根部安放电磁流量计，记录冠脉血流量。②动脉血氧含量与冠状窦血氧含量的测定。分别取实验前、缺血60分钟、再灌120分钟、240分钟的颈动脉和冠状窦的血液，取血前注射器用肝素生理盐水冲洗，采血后立即将注射器针头插入橡皮塞，以隔绝空气。应用血气自动分析仪测定血氧含量，并计算动-静脉氧差。③心肌氧摄取率与耗氧量，参照下式计算心肌氧摄取率(％)＝(动脉血氧ml％-冠状窦血氧ml％)/动脉血氧ml％*100心肌耗氧量(ml.100g-1.分钟-1)＝冠状动脉血流(ml.100g-1.分钟-1)*(动脉血氧ml％-冠状窦血氧ml％)(3)心律失常监测与评分标准为观察再灌后心律失常的发生率等，除定时描记心电图外，于再灌后进行连续240分钟的心电图描记。心律失常记为室性早搏(PVC)、室速(VT，即连发室早＞7，频率＜720次/分钟)、室颤(VF，室性异位节律＞720次/分钟或不规则的室颤波)，其相应的对数值用lgPVC、lgVT和lgVF表示。并参照Johnston等提供的评分标准进行打分和评价，详见表7。
表7再灌心律失常评分标准评分标准0 0-9个PVC1 10-49个PVC2 ≥50个PVC或依次自发性转复的VT3 VT＞1次，总持续时间≤40S4 VF≥1次，总持续时间为41-80S5 VT或VF，总持续时间为81-120S6 VT或VF，总持续时间＞120S7 再灌注后≥15分钟时发生的致命性VF8 再灌注后4-14分钟时发生的致命性VF9 再灌注后1-3分钟发生的致命性VF10 再灌注后＜1分钟时发生的致命性VF(4)心肌细胞的电镜观察于再灌注240分钟后，取缺血中心区的心肌，常规制片，JEM-1200型透射电镜下观察。
(5)血清酶测定分别于实验前、再灌240分钟时取血，分离血清，应用生化自动分析仪测定血清谷草转氨酶(GOD)和肌酸磷酸激酶(CK)。
(6)心肌过氧化脂质(LPO)与超氧化物歧化酶(SOD)应用TBA-分光光度法测定心肌LPO含量[4]；用邻苯三酚-硝基四氮唑蓝法[5]测定心肌超氧化物歧化酶。
3.统计方法实验结果均以均数±标准差表示，计量资料的组间比较应用Student’st检验，计量资料的实验前后比较采用配对t检验。
结果1.对心肌缺血/再灌注损伤犬心功能和血流动力学的影响。结果见表8-10。
表8 TMYX对心肌缺血/再灌注犬MBP、HR、TPVR的影响(均数±标准差)缺血 再灌注实验前 60分钟 60分钟 120分钟 240分钟SOG 11.2±1.511.4±1.311.7±3.010.9±1.0 11.3±2.0NSG 11.3±2.410.7±2.310.6±13 8.8±2.4 8.1±0.4MBP TMYX111.4±13 9.5±1.1 9.6±0.4 10.5±0.4*10.5±1.2*(kPa)TMYX211.7±0.99.1±1.1 9.3±22 103±1.4*10.9±1.2*
FDS 10.9±0.99.3±1.09.2±1.79.8±1.69.5±1.0*SOG 143±20 145±17 139±20 140±23 137±17HR NSG 146±16 152±31 164±28 151±31 158±23(beat/分钟)TMYX1146±15 152±14 134±21 132±26 129±15TMYX2137±31 121±19 114±23 111±24 106±27FDS 142±15 141±17 123±24 118±21 118±19SOG 382±79 387±66 346±59 384±90 382±71TPVR NSG 382±89 461±223471±207597±279633±26(kPa.S/L) TMYX1387±54 413±57 465±76 485±58 536±49TMYX2346±66 321±77 370±109397±146480±114*FDS 384±7 396±53 419±101433±100436±69*与NSG比，*P＜0.059 TMYX对心肌缺血/再灌注犬CO、CI、SI的影响(均数±标准差)缺血 再灌注实验前 60分钟 60分钟 120分钟 240分钟SOG 2.4±0.22.3±0.32.3±0.42.3±0.42.4±0.5CONSG 2.4±0.31.8±0.71.7±0.61.4±0.51.1±0.4(L/分)TMYX12.4±0.21.9±0.31.7±0.31.8±0.21.6±0.2*TMYX22.3±0.41.9±0.51.7±0.41.7±0.31.7±0.2*FDS 2.3±0.41.8±0.31.8±0.41.7±0.31.7±02*SOG 3.4±0.73.6±0.53.5±0.43.7±0.83.4±0.3CINSG 3.4±0.82.8±1.02.6±0.92.1±0.81.7±0.6(L/分/m2)TMYX13.6±0.52.8±0.52.6±0.42.6±0.42.4±0.3*TMYX23.5±0.42.9±0.62.6±0.52.6±0.52.4±0.5*FDS 3.7±0.82.9±0.62.9±0.72.5±0.32.8±0.5*SOG 23.1±3.0 24.6±5.0 26.6±5.2 26.2±5.4 23.6±1.2SINSG 23.0±5.8 20.3±9.9 19.2±6.7 16.0±5.5 14.6±6.5(ml/stroke/m2) TMYX124.8±5.2 18.8±4.0 19.5±5.1 20.7±5.4 21.9±3.9*TMYX226.6±7.4 23.8±3.4 22.8±4.8 24.0±5.2 22.2±4.7*FDS 26.2±5.5 20.3±3.2 23.5±5.9 23.6±7.3 24.1±6.5**
SOG 4.73±1.05.22±1.54.90±1.05.17±0.6 4.80±1.0LVWI NSG 4.72±0.93.23±1.42.85±1.12.31±0.7 1.62±0.7(g/stroke/m2) TMYX15.23±1.53.30±0.8 3.38±1.13.77±1.1*3.99±0.9**TMYX24.82±1.13.39±0.72.87±0.23.65±0.5*4.15±0.6**FDS 5.16±0.93.39±0.63.72±1.23.84±0.9**4.01±1.1**与NSG比较，*P＜0.05，**P＜0.01表10 TMYX对心肌缺血/再灌注犬LVSP、LVEDP、±dp/dtmax的影响(X±SD)缺血 再灌注实验前 60分钟 60分钟 120分钟240分钟SOG 18.8±1.919.3±1.0 17.9±3.018.7±1.5 18.9±1.9NSG 18.9±2.515.1±2.1 14.5±2.814.9±1.4 12.5±0.5LVSP TMYX119.5±0.816.6±1.6 15.9±1.317.5±1.6*16.9±1.7**(kPa)TMYX217.5±2.114.1±1.9 13.5±1.115.6±2.1 16.1±2.9*FDS 18.1±1.514.9±1.6 14.6±2.716.2±2.1 15.8±1.8*SOG 0.53±0.10.60±0.3 0.40±0.40.64±0.2 0.51±0.1LVEDPNSG 0.52±0.11.04±0.5 1.22±0.61.73±0.5 1.96±0.5(kPa)TMYX10.51±0.40.67±0.4*0.8±0.4*10.4±0.4*0.87±0.3**TMYX20.40±0.30.91±0.4 0.89±0.4*0.92±0.5**0.89±0.3**FDS 0.60±0.20.58±0.5*0.78±0.5*0.78±0.5**0.64±0.3**SOG 388±109 418±91 369±62 399±45386±111+dp/dtmaxNSG 387±112 296±125227±55 226±122 186±51(kPa/s) TMYX1369±62 284±44 253±63 302±60282±54*TMYX2336±43 227±75 248±93 269±47290±52*FDS 418±90 351±131320±171 333±194 278±104SOG 263±50 249±63 260±98 250±64261±49-dp/dtmaxNSG 264±49 158±79 136±47 187±74124±50(kPa/s) YMYX1249±65 173±59 133±61 187±48158±43*TMYX2202±47 138±62 127±89 147±50151±36FDS 260±144 184±104169±106 164±119 160±53*与NSG比较，*P＜0.05，**P＜0.01
由表8可见，NSG再灌后MBP逐渐下降，TPVR逐渐升高。TMYX和FDS的MBP在给药后一过性轻微下降后逐渐恢复正常，TMYX略高于FDS。再灌240分钟时，TMYX2的FDS的TPVR均显著低于NSG(P＜0.05)。提示TMYX和FDS维持相对正常血压并非通过增加总外周阻力。
由表9、表10可见，NSG的CO、CI、SI、LVWI、LVSP、和±dp/dtmax等随着缺血/再灌注时间的延长呈进行性下降，LVEDP则进行性增高，提示心肌收缩性和舒张功能下降，心脏泵功能受损，主要通过增加外周阻力维持血压。TMYX大小剂量组及FDS的CO、CI、SI和LVWI不如NSG变化明显，再灌240分钟时，均显著高于NSG(P＜0.05-0.01)。表明TMYX和FDS可提高缺血/再灌注时心脏泵功能。代表心脏收缩期功能指标的LVSP、+dp/dtmax和代表心脏舒张期功能指标的LVEDP、-dp/dtmax检测结果证明，TMYX有与FDS类似的改善缺血/再灌注时心肌收缩性的效应。
2、对心肌缺血/再灌注损伤犬心肌氧摄取率与心肌耗氧量的影响(1)对心肌氧摄取率的影响在心肌缺/再灌注损伤条件下，NSG心肌氧摄取率下降，再灌240分钟时显著低于SOG(P＜0.05)，而TMYX和FDS则有增加缺血/再灌注心肌细胞摄取氧的作用，见表11。
表11 TMYX对心肌氧摄取率(％)的影响(均数±标准差)缺血再灌注实验前60分钟120分钟 240分钟SOG 51.2±4.9 46.3±2.2 48.0±1.7 50.5±3.6NSG 48.5±6.2 42.5±12.644.5±15.438.8±16.0#TMYX147.7±16.154.6±8.1 56.8±7.6 57.8±8.1*YMYX247.3±7.6 49.9±10.158.6±8.3 58.2±0.8*FDS 49.9±7.8 55.1±10.061.4±9.2 66.1±5.0**与NSG比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与SOG比较，#P＜0.05(2)对心肌耗氧量的影响NSG再灌后心肌耗氧量逐渐下降，再灌240分钟时显著低于SOG(P＜0.01)，而TMYX和FDS均显著高于NSG(P＜0.01)，见表12。
表12 TMYX对心肌耗氧量(ml/100g/分钟)的影响(均数±标准差)缺血再灌注实验前 60分钟 120分钟 240分钟SOG 584.7±44.9 552.0±33.8 574.1±55.6 568.9±32.2NSG 578.1±133.6492.4±163.0408.5±156.9#273.5±149.6##TMYX1582.0±92.5 495.5±115.3538.1±101.4 546.3±67.2**TMYX2555.3±57.9 508.1±143.7563.5±84.2 550.2±122.9**FDS 583.1±41.3 564.0±99.1 564.2±91.7 535.5±61.1**与NSG比较，**P＜0.01；与SOG比较，#P＜0.05，##P＜0.01(3)对血氧含量与动、静脉血氧含量差的影响由表13可见，动脉血氧含量各组间均无明显差异(P＞0.05)。但是，TMYX和FDS的静脉血氧含量均呈低值，使动-静脉氧差增大。提示该两种药物具有提高心肌细胞摄取与利用氧的能力。
表13 YMYX对动、静脉血氧含量差的影响(均数±标准差)缺血 再灌注实验前 60分钟 120分钟 240分钟SOG 18.9±0.919.5±0.719.2±0.4 19.0±0.5NSG 18.1±1.019.7±3.019.1±1.1 18.6±1.1AO2CT TMYX119.1±1.619.1±2.420.1±2.7 19.7±2.2(ml/dl)TMYX218.9±0.718.3±1.318.7±1.2 18.7±1.4FDS 18.9±1.719.1±2.518.8±1.5 17.7±1.7SOG 9.8±1.1 10.6±0.89.9±0.6 9.6±0.9VO2CT NSG 9.3±1.3 11.3±2.710.7±3.0 11.4±3.2(ml/dl)TMYX19.1±1.8 8.7±2.2 8.6±2.5 8.4±2.2TMYX29.9±1.6 9.2±2.2 7.6±1.5 7.8±0.8FDS 9.5±2.0 8.6±2.4 7.2±1.5 6.0±1.1*SOG 9.1±0.6 9.4±0.2 9.3±0.3 9.4±0.6A-V氧差NSG 8.8±1.3 8.4±2.3 8.4±3.0 7.2±3.6(ml/dl)TMYX110.0±1.110.4±1.911.5±1.6 11.3±2.1TMYX29.0±2.2 9.1±1.5 11.1±1.8*10.9±1.4FDS 9.4±1.2 10.5±2.411.6±2.4 11.7±1.4与NSG比较，*P＜0.05](4)对冠脉血流量的影响随缺血/再灌注时间的延长，NSG的冠脉血流量呈进行性下降，YMTX和FDS虽略有下降，但再灌240分钟时显著高于NSG(P＜0.05)，见表14。
表14 TMYX对冠脉血流量(ml/分钟)的影响(均数±标准差)缺血再灌注实验前60分钟120分钟 240分钟SOG 62.3±6.7 60.5±4.6 60.0±6.254.4±4.6NSG 62.8±10.355.8±12.847.3±8.334.8±11.8##TMYX158.2±3.0 47.5±5.5 47.0±4.948.5±4.2*TMYX260.2±15.155.7±10.552.0±9.752.7±10.7*FDS 63.3±10.054.2±12.248.2±8.947.3±4.8*与NSG比较，*P＜0.05；与SOG比较，##P＜0.013、对缺血/再灌注损伤所致心律失常的影响再灌后各组PVC发生率达到100％。VT+VF的发生率，NSG达到100％，各治疗组均有不同程度的降低，以TMYX2为最低。心律失常的严重程度也以NSG为最重，TMYX，最轻，详见表15。
表15 TMYX对缺血/再灌注损伤所致心律失常的影响(均数±标准差)lgPVC lg(VT+VF) 评分 (VT+VF)发生率SOG0 0 0 0NSG2.4±0.2 1.3±0.3 5.2±0.4100TMYX12.0±0.4 0.7±0.6 3.7±1.866.7TMYX21.7±0.3 0.1±0.3**1.8±1.1**16.7**FDS1.5±0.3 0.6±0.6 2.8±1.6*66.7与NSG比较，*P＜0.05，**P＜0.014、对血清酶水平的影响如表16所示，TMYX有降低心肌缺血/再灌注犬血清GOT和CK水平的作用，尤以TMYX2为最显著。
表16 TMYX对血清GOT、CK的影响(均数±标准差)GOT(u/L) CK(u/L)实验前 再灌240分钟 实验前 再灌240分钟
SOG 109.1±10.0127.7±19.3 908.3±94.0992.6±83.3NSG 110.3±9.5 458.4±158.1##925.6±93.02431.8±167.5##TMYX1127.3±71.0320.5±164.2 942.8±55.61682.2±170.0TMYX2113.2±9.4 212.0±107.8*867.2±24.5898.5±269.0*FDS 112.0±11.4234.8±57.4 998.4±68.61116.8±298.8*与NSG比较，*P＜0.05；与SOG比较，##P＜0.015、对心肌过氧化脂质含量和超氧化物歧化酶活性的影响如表17所示，TMYX和FDS有轻度的降低缺血/再灌犬心肌LPD含量和提高SOD活性的作用。
表17 TMYX对心肌LPD和SOD和影响(均数±标准差)LPO(nmol/g)SOD(u/mg)SOG 203.7±39.224.3±5.0NSG 260.8±49.617.5±3.1TMYX1223.2±19.721.9±5.5TMYX2221.8±12.124.7±4.9FDS 234.2±24.622.6±5.7实施例8中药板蓝根与益母草药用组合物对离心豚鼠心脏冠脉流量的影响方法健康豚鼠，体重300-400g，雌雄兼用。钝击后脑致昏，迅速开胸，摘出心脏，按Langendorff法测定冠脉流量。实验分为3组，通脉益心小剂量组(TMYX1，200mg/次)、通脉益心大剂量组(TMYX2，400mg/次)和复方丹参对照组(FDS，400mg/次)，给药容积均为0.2ml。分别从侧管一次注射受试药物，测定给药后10分钟内的每分钟流量，取极植，计算冠脉流量增加百分率。
结果TMYX的两个剂量组及FDS均能显著增加离体豚鼠心脏的冠脉流量，TMYX的扩冠作用明显优于FDS(P＜0.001)，见表18。
表18 TMYX对离体豚鼠心脏冠脉流量的影响(均数±标准差)药物剂量 动物 冠脉流量(ml/分钟) 冠脉流量增加百分率(mg/次)(只) 给药前给药后(％)TMYX40095.58±0.0513.7±0.30***139.40±5.78###TMYX20095.10±0.0513.23±0.30***133.21±2.91###FDS 40095.92±0.067.70±0.10***029.24±1.39
与给药前比较，***P＜0.001；与FDS比较，###P＜0.001实施例9中药板蓝根与益母草药用组合物对大鼠血小板聚集的影响1.体外实验方法雄性大鼠，体重200-300g，戊巴比妥钠(30m/kg)腹腔注射麻醉，背位固定。颈总动脉取血，以3.8％枸橼酸钠抗凝(血与抗凝剂之比为1∶9)，1000rpm离心5分钟，取上清液为富血小板血浆(PRP)，余者以4000rpm离心10分钟，取上清液为贫血小板血浆(PPP)，以PPP调PRP，使血小板计数为4-5*108ml-1。取PRP及PPP血浆各20μl，置BS-634型血小板聚集仪上，保温3分钟，加样品溶液20μl，对照管加pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)，仪PPP管调100％透光率，然后在PRP管加3.0μmol的ADP20μl，测得5分钟内血小板聚集率。
结果TMYX两个剂量组及FDS均能明显抑制ADP诱导的大鼠体外血小板聚集。TMTX的抑制作用明显优于FDS(P＜0.05)，其反应量效关系，见表19。
表19 TMYX对ADP诱导的大鼠体外血小板聚集的影响(均数±标准差)药物 剂量(mg/ml)样本数平均聚集率 聚集抑制率(％)PBS - 3164.47±2.04TMYX 4001434.09±2.55***，#47.12TMYX 2001051.10±2.75**19.58FDS 4001149.29±5.50**23.54与对照组比较，**P＜0.01，***P＜0.001；与FDS比较，#P＜0.052.体内实验方法体重200-300g雄性大鼠，随机分为4组，分别静脉注射TMYX 1728、864mg/kg、FDS 1728mg/kg和同体积生理盐水，给药20分钟后颈动脉取血，以ADP为诱导剂，测定血小板聚集反应。
结果TMYX 1728mg/kg剂量组能明显抑制大鼠体内血小板聚集，而TMXY864mg/kg剂量组及FDS未显示出抑制作用，见表20。
表20TMYX对ADP诱导的大鼠体外血小板聚集的影响(均数±标准差)药物 剂量(mg/kg)动物(只)平均聚集率聚集抑制率(％)NS- 9 53.77±2.65TMYX 1728 11 28.50±23.77**，## 46.99TMYX 3649 53.25±2.81 0.97FDS 1728 8 60.32±4.40 0与对照组比较，**P＜0.01；与FDS比较，##P＜0.01实施例10中药板蓝根与益母草药用组合物对大鼠血黏度的影响方法体重200-300g大鼠，雌雄各半，随机分为4组，分别腹腔注射TMYX3456、1728mg/kg、FDS 3456mg/kg和同体积生理盐水，每日一次，给药一周。末次给药后40分钟，以戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉，颈总动脉采血，12,500u/ml肝素溶液0.1ml加全血4ml，用SDE-4型自动电子计时粘度计测定全血粘度、血浆粘度、全血还原粘度。
结果TMYX两个剂量组均能显著降低大鼠全血粘度，且呈量效关系，而FDS作用不明显，见表21。
表21 TMYX对大鼠血液粘度的影响(均数±标准差)药物 剂量 动物 全血粘度 血浆粘度 全血还原粘度(mg/kg)(只)NS - 9 4.57±0.2 1.72±0.108.50±0.58TMYX 3456 8 3.85±0.29**，## 1.60±0.06*7.30±0.52***，#TMYX 1728 8 4.12±0.23**1.64±0.087.67±0.42**FDS 3456 10 4.31±0.311.61±0.06*7.86±0.48*与对照组比较，**P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001与FDS组比较，#P＜0.05，##P＜0.01小结摘要在应用犬复制心肌缺血/再灌注损伤病理模型的基础上，观察TMYX对犬心功能、血流动力学、心肌耗氧量、心律、心肌酶及心肌超微结构的影响，主要实验结果如下1、心功能、血流动力学的监测结果表明，TMYX可明显增强缺血/再灌注犬心脏的舒缩功能，如增加心输出量(CO)、左室内压峰值(LVSP)及左室内压最大变化速率(±dp/dtmax)等，并降低缺血/再灌注犬左室舒张末期压力(LVEDP)。
2、对心肌氧摄取率与心肌耗氧量的影响氧摄取率NSG于缺血/再灌注后下降，以再灌240分钟最为明显，TMYX1(200mg/kg)、TMYX2(400mg/kg)和FDS(400mg/kg)则于再灌后逐渐增加，再灌240分钟各治疗组均显著地高于NGS(P＜0.01)；②心肌耗氧量NSG缺血/再灌注240分钟明显下降(P＜0.05)，但TMYX1、TMYX2和FDS均维持于实验前和SOG水平。进一步分析证明，TMYX和FDS是通过促进心肌细胞对氧的摄取、降低静脉血氧含量、相对增加冠脉血流量、进而保持心肌耗氧量于正常水平。这对于改善心肌细胞的能量代谢、增强心功能具有重要意义。
3、TMYX的抗心率失常效应NGS室性早搏(PVC)、室性心动过速(VT)与心室纤颤(VF)发生率达100％，TMYX1和FDS均为66.7％，TMYX2为16.7％。参照Johnston的标准对再灌后心律失常进行评分，NGS为最高(5.2±0.4)；FDS为2.8±1.6；TMYX1为3.7±1.8；TMYX2为1.8±1.2。可见，TMYX2在防治心肌缺血/再灌注所致的心律失常方面，优于FDS。
4、心肌细胞的超微结构观察与血清酶水平测定通过对缺血/再灌中心区的透射电镜观察和血清GOT与CK的检测证明，TMYX对心肌细胞的超微结构和膜结构具有与FDS类似的保护作用。TMYX尚有与FDS类似的降低心肌过氧化脂质和提高超氧化物歧化酶活性的作用，以TMYX2最为明显。
实验还证明，TMYX能显著增加离体豚鼠心脏冠脉流量、抑制大鼠血小板聚集、降低大鼠血液粘度等。表明该药具有保护心肌、增加循环、改善血液流变学等作用，为该药治疗心血管病提供了实验依据。
本实验证明TMYX对心肌缺血/再灌犬具有明显保护作用，其保护效应及机制总结如下1、TMYX2(400mg/kg)具有非常明显的抗再灌后心律失常作用，并优于FDS，是预防心肌缺血/再灌时室颤发生的有效药物，有重要的开发价值。
2、具有与FDS类似的改善缺血/再灌时心脏舒缩功能的作用，使心输出量、心脏作功和平均动脉压等维持再接近正常水平，于再灌240分钟TMYX和FDS治疗组显著的高于生理盐水对照组。
3、具有与FDS类似的保护心肌细胞超微结构和膜结构的作用。电镜下NSG可见心肌细胞的肌原纤维溶解，线粒体明显肿胀，脊消失，空泡变性，严重者出现崩解。TMYX和FDS具有稳定细胞膜减少心肌内酶释放的作用，这是TMYX改善心肌缺血/再灌时心功能的细胞学基础。
4、TMYX可明显促进心肌细胞摄取与利用氧，表现在缺血/再灌后，TMXY和FDS治疗组静脉血氧含量明显降低，动—静脉氧差增大，心肌氧摄取率显著地高于NSG。心肌耗氧量和冠脉血流量维持于正常水平，而NSG随缺血/再灌时间的延长明显下降，两组比较差异显著。TMYX改善再灌心肌的能量代谢，对于改善心功能具有重要意义。
实验结果还表明，TMYX可显著增加离体豚鼠心脏冠脉流量；改善冠脉循环，无论体外或体内实验均能明显抑制大鼠血小板聚集，显著降低大鼠全血、血浆和全血还原粘度。证明该药具有保护心肌、增加循环、改善血液流变学的作用，为该药治疗心血管病提供了实验依据。
实施例11中药板蓝根与益母草药用组合物最大耐受量试验摘要 给小鼠灌服最大药量一日两次不产生死亡，故测不出LD50。测得一日两次给药的最大耐受量为361.2g/kg(生药)，相当与临床日用剂量的602倍。
受试药物中药板蓝根与益母草药用组合物TMYX由实施例1中方法制备提供。为不加赋型剂的浸膏粉。临床日用剂量为30g生药，人体重按50kg计，相当于0.6g/kg(生药)。
动物 体重18-20g昆明种小鼠，雌雄各半，由辽宁省医药工业研究院提供。
最大耐受量测定 取上述小鼠15只，均分三组，禁食不禁水16小时，分别灌服322.2％、387.0％、451.5％(生药)浓度中药板蓝根与益母草药用组合物0.4ml/10g体重，6小时后重复给药一次，观察三天，结果仅大剂量组出现短时间自发活动减少、呼吸困难，无其它中毒反应，各组均无死亡。该药451.5％(生药)浓度为粘稠溶液，为能灌胃给药的最大浓度，故测不出LD50。
另取上述小鼠20只，雌雄各半，禁食不禁水16小时，灌服451.5％(生药)浓度中药板蓝根与益母草药用组合物0.4ml/10g体重(剂量为180.6g/kg生药)，6小时后重复给药一次，结果给药后部分动物活动减少，呼吸困难，12小时后恢复正常，无其它中毒反应，观察一周无死亡。经大体解剖检查，主要脏器无异常。一日内两次给药总剂量为361.2g/kg(生药)，为最大耐受量，人体重按50Kg计，最大耐受量相当于临床日用剂量的602倍。
实施例12中药板蓝根与益母草药用组合物II和III的制备(1)取板蓝根1500克，益母草500克，粉碎后加75％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取两小时；第二次加3.5倍量，提取两小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.08(60℃)。加乙醇使含醇量达到65％，静置12小时后离心。取上清液减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，按照浸膏重可溶性淀粉6.3∶2加入可溶性淀粉，干燥，得到成品组合物II(代号TMYXII)。
(2)取板蓝根12公斤，益母草1公斤，粉碎后加40％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取五小时；第二次加3.5倍量，提取五小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.10(60℃)。加乙醇使含醇量达到60％，静置12小时后离心。取上清液减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，按照浸膏重可溶性淀粉2.5∶1加入可溶性淀粉，干燥，得到成品组合物III(代号TMYXIII)。
实施例13中药板蓝根与益母草药用组合物II和III对离心豚鼠心脏冠脉流量的影响方法健康豚鼠，体重300-400g，雌雄兼用。钝击后脑致昏，迅速开胸，摘出心脏，按Langendorff法测定冠脉流量。实验分为3组，TMYX小剂量组(TMYXII-1和TMYXIII-1，200mg/次)、TMYX大剂量组(TMYXII-2和TMYXIII-2，400mg/次)和复方丹参对照组(FDS，400mg/次)，给药容积均为0.2ml。分别从侧管一次注射受试药物，测定给药后10分钟内的每分钟流量，取极植，计算冠脉流量增加百分率。
结果TMYXII和TMYXII的两个剂量组及FDS均能显著增加离体豚鼠心脏的冠脉流量，且二者的扩冠作用明显优于FDS(P＜0.001)，见表22。
表22 TMYXII和TMYXIII对离体豚鼠心脏冠脉流量的影响(均数±标准差)药物 剂量 动物冠脉流量(ml/分钟) 冠脉流量增加百分率(mg/次)(只)给药前给药后(％)TMYXII-2 4008 5.85±0.0810.60±0.42***80.20±3.57##TMYXII-1 2008 5.37±0.099.02±0.30***68.82±2.85##TMYXIII-24008 5.66±0.059.15±0.25***60.67±2.16##TMYXIII-12008 5.29±0.088.43±0.35***58.36±2.85##FDS 4008 5.92±0.067.70±0.10***29.24±1.39与给药前比较，***P＜0.001；与FDS比较，##P＜0.05实施例14中药板蓝根与益母草加入三七药用组合物的制备取板蓝根1445克，益母草220克，三七200克，粉碎后加55％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取两小时；第二次加3.5倍量，提取两小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.08(60℃)。加乙醇使含醇量达到75％，静置12小时后离心。取上清液减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，得浸膏(代号BYSQ)供试。
实施例15中药板蓝限与益母草加入三七药用组合物对小鼠耐缺氧的影响试验方法体重18-21g昆明种小鼠32只，雌雄各半，随机分4组，分别灌服FDS0.72g/kg、BYSQ 12.0、6.0g/kg和同容积NS，每天1次，连续给药7天，末次药后1小时，将500ml烧杯扣入盛有水的盘中隔离空气，杯内放一托网，网下放10g碱石灰，网上放一只小鼠，每10分钟通过水下吸杯内气体1ml，用CY-2型测氧仪测定杯内氧分压，直至动物缺氧死亡，记录动物死亡时间。
结果NS组动物存活时间为66.74分钟，给药各组存活时间均延长至86.57-96.56分钟(见表23)，与NS组比较均有显著差异(P＜0.01)。死亡时氧分压NS组为5.50％，BYSQ大剂量组下将至5.20％。表明该药用组合物具有明显耐受缺氧、将低氧代谢的作用。
表23 BYSQ对小鼠耐受缺氧的影响(n＝8，均数±标准差)组别剂量(g/kg)存活时间(分钟)NS 同体积66.74±10.34FDS 0.72 87.32±22.01**BYSQ12.0 96.56±25.45**BYSQ6.0 86.57±21.31**与NS组比较**P＜0.01实施例16中药板蓝根与益母草加入丹参药用组合物的制备取板蓝根1445克，益母草220克，丹参200克，粉碎后加55％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取两小时；第二次加3.5倍量，提取两小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.08(60℃)。加乙醇使含醇量达到75％，静置12小时后离心。取上清液减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，得浸膏(代号BYDS)供试。
实施例17中药板蓝根与益母草加入红花药用组合物的制备取板蓝根1445克，益母草220克，红花200克，粉碎后加55％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取两小时；第二次加3.5倍量，提取两小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.08(60℃)。加乙醇使含醇量达到75％，静置12小时后离心。取上清液减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，得浸膏(代号BYHH)供试。
实施例18中药板蓝根与益母草加入丹参或红花药用组合物对大鼠血栓形成的影响试验方法体重250-350g大鼠，雌雄各半，随机分4组，每组8只，分别灌服FDS0.43g/kg、BYDS和BYHH7.2、3.6g/kg和同容积NS，每天给药1次，连续10天，末次药后30分钟，以乌拉坦腹腔注射麻醉、剥离左颈总动脉和右颈外静脉，用颈动脉-颈外静脉血管旁路法进行血栓形成实验。比较在各药物作用下，在动脉血流中15分钟内丝线上形成的血栓湿重。
结果NS组血栓湿重17.59mg，FDS、BYDS和BYHH大小剂量组血栓湿重下降至12.15-14.27mg(见表24)，血栓形成抑制率分别为21.43％、20.52％、18.87％、21.15％和19.56％(P＜0.01)，表明该药物组合物具有显著抑制血栓形成的作用。
表24 BYDS和BYHH对大鼠血栓形成的影响(n＝10，均数±标准差)组别剂量(g/kg生药) 血栓湿重(mg) 抑制率(％)NS 同容积 17.59±4.20FDS 0.4313.82±1.86**21.43BYDS7.2 13.98±1.59**20.52BYDS3.6 14.27±2.06**18.87BYHH7.2 13.87±2.02**21.15BYHH3.6 14.15±2.33**19.56与NS组比较**P＜0.01实施例19中药板蓝根与益母草加入川芎药用组合物的制备取板蓝根1445克，益母草220克，川芎200克，粉碎后加55％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取两小时；第二次加3.5倍量，提取两小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至取密度为1.06-1.08(60℃)。加乙醇使含醇量达到75％，静置12小时后离心。取上清液减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，得浸膏(代号BYCX)供试。
实施例20中药板蓝根与益母草加入葛根总黄酮提取物药用组合物的制备取板蓝根1445克，益母草220克，粉碎后加55％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取两小时；第二次加3.5倍量，提取两小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.08(60℃)。加乙醇使含醇量达到75％，静置12小时后离心。取上清液与葛根总黄酮50克(葛根总黄酮按照本领域常规方式提取得到)合并，减压浓缩至相对密度为1.20-1.22(60℃)，得浸膏(代号BYGH)供试。
实施例21中药板蓝根与益母草加入川芎或葛根总黄酮提取物药用组合物对大鼠血黏度的影响方法体重200-300g大鼠，雌雄各半，随机分为4组，分别腹腔注射BYGH3456、1728mg/kg、FDS 3456mg/kg和同体积生理盐水，每日一次，给药一周。末次给药后40分钟，以戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉，颈总动脉采血，12,500u/ml肝素溶液0.1ml加全血4ml，用SDE-4型自动电子计时粘度计测定全血粘度、血浆粘度、全血还原粘度。
结果BYGH两个剂量组均能显著降低大鼠全血粘度，且呈量效关系，而FDS作用不明显，见表19。
表25TMYX对大鼠血液粘度的影响(均数±标准差)药物 剂量动物全血粘度血浆粘度 全血还原粘度(mg/kg) (只)NS - 8 4.48±0.32 1.69±0.11 8.39±0.42BYGH 34568 3.76±0.43**，## 1.56±0.28*7.31±0.57*BYGH 17288 4.07±0.29**1.60±0.07*7.57±0.48*FDS34568 4.20±0.35 1.62±0.08*7.78±0.45*与对照组比较，**P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001与FDS组比较，#P＜0.05，##P＜0.01实施例22中药板蓝根与益母草提取物药用组合物冻干粉针的制备取板蓝根1445克，粉碎后加55％乙醇回流提取两次，第一次加5倍量，浸泡24小时后，提取两小时；第二次加3.5倍量，提取两小时。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.06-1.08(60℃)。加乙醇使含醇量达到75％，静置12小时后离心。取上清液减压浓缩至无醇味，经微膜过滤后进行灭菌，冷却后，进行冷冻干燥。在-10℃下干燥12小时，得到棕黄色冻干粉末。取益母草220克，同上操作，得到益母草冻干粉末。将二者均匀混合，称重装瓶，灭菌后封装，供药效学试验用。
权利要求
1.一种中药板蓝根与益母草药用组合物提取物，基本上由板蓝根和益母草提取物组成，由下列步骤制备a中药板蓝根和益母草以重量比100∶1至1∶2之间的任何比例混合后，经醇水浸泡提取；b将步骤a得到的提取液过滤，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.06-1.08(60℃)，加醇使醇重量含量达到45％-85％的比例，静置，离心；c将步骤b得到的上清液减压浓缩至60℃时的相对密度为1.20-1.22，得提取物。
2.根据权利要求1的提取物，其中步骤a中的醇水混合物为重量比95％-10％的乙醇和水的混合物；步骤b中的醇是乙醇。
3.根据权利要求2的提取物，其中步骤a中的醇水混合物为75％-35％乙醇和水的混合物；步骤b中加醇使醇重量含量达到75％的比例。
4.根据权利要求3的提取物，其中板蓝根与益母草的重量比为20∶1-1∶1。
5.根据权利要求4的提取物，其中步骤a中醇水浸泡时间不少于12小时。
6.根据权利要求5的提取物，其中板蓝根与益母草的重量比为10∶1-3∶1。
7.根据权利要求6的提取物，其中步骤a中的醇水混合物为55％乙醇和水的混合物。
8.根据权利要求7的提取物，其中板蓝根与益母草的重量比为7∶1。
9.根据权利要求1-8之一的提取物，其中步骤a中的板蓝根和益母草混合物是还可以含有选自三七、丹参、红花、川芎、葛根中的一种或多种的混合物。
10.根据权利要求1-9之一的提取物用于制备治疗冠心病、心绞痛心血管疾病药物的用途。
11.一种用于治疗冠心病、心绞痛的药物组合物，其含有作为活性成分的治疗有效量的权利要求1-9之一的中药板蓝根与益母草药用组合物的提取物和可药用辅料。
12.根据权利要求11的药物组合物，其可以是片剂，颗粒剂，胶囊剂，口服液，冻干粉针或注射液。
全文摘要
本发明涉及一种中药板蓝根与益母草药用组合物提取物及其制备方法和用途，该提取物基本上由板蓝根和益母草提取物组成，由中药板蓝根和益母草的混合物经醇水提取、过滤、减压浓缩、醇沉、静置、离心、干燥等步骤制成，该提取物具有扩张冠状动脉、抗心肌缺血、活血化淤作用，可以期待作为治疗冠心病、心绞痛的药物，该提取物可以用常规方法支持跟踪制剂使用，如片剂，颗粒剂，胶囊剂，口服液，冻干粉针或注射液。
文档编号A61K9/16GK1596923SQ03156968
公开日2005年3月23日 申请日期2003年9月17日 优先权日2003年9月17日
发明者白骅, 赵昱, 于荣敏 申请人:浙江海正药业股份有限公司