专利名称：具有血管活性肠肽的生物学活性的化合物在治疗结节病中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及作为用于治疗与结节病相关的疾病的治疗药物的高度生物学和药理学活性的肽。根据本发明的方法，可用于治疗所述疾病的肽包括至少一种特殊的高度保守的氨基酸残基序列，该序列似乎在肺和小动脉高压事件中发挥重要作用。可以证实的是，具有所述特殊序列的已知的天然存在的肽″血管活性肠肽(VIP)和“垂体腺苷酸环化酶-激活多肽(PACAP)”，是有效的药物，可将其成功地用于治疗结节病。此外，本发明公开了用于在所述方法中治疗结节病的药物组合物。
背景技术：
肺的结节病主要是一种间质性肺病，其中炎症过程累及肺泡、小支气管和小血管。这些个体一般具有呼吸困难，特别是运动时，并且具有干咳。咯血很少见，也很少有痰。
随着结节病的进展，在受影响的组织中出现小的肿块，或者肉芽肿。在少数病例中，肉芽肿不愈合和消失，组织容易保持发炎并且产生瘢痕(纤维化)。
20-30％的结节病患者具有持续的肺损伤。10-15％的患者中结节病可以转为慢性。
结节病的症状可以由许多因素导致，包括肉芽肿的“质量效应”；免疫复合物脉管炎(如在结节红斑中所出现的)；代谢活性肉芽肿；和甚至在肉芽肿病变缓解之后持续的纤维化变形。
肺是该疾病的主要靶点。大约88％的结节病患者具有肺累及。通常通过比较目前的胸片与起病时拍摄的胸片来对胸内结节病进行分期。胸内结节病分为4期。大约8％的结节病患者处于0期。在该期，在多系统累及存在下，胸片是正常的。肺功能检查的结果通常是正常的，大多数患者自发缓解。约51％的患者(包括描述于举例说明的病例中的患者)为1期。在该期，胸片显示双侧肺门淋巴结病，有或没有右气管旁淋巴结增大。
肺功能检查的结果是正常的，只是扩散量降低，但机械性正常。大多数患者无症状，或具有肺以外的症状。大多数患者(70-75％)在两年内缓解，但仅仅10-15％进展到2期。
29％的结节病患者处于2期。在该期，胸片显示肺门淋巴结病，伴有弥散的肺浸润。与胸片显示的异常的严重程度相比，体征和症状通常较轻。也可存在多发肺结节或浸润。肺功能检查证明是限制性疾病，扩散量降低，也可以存在由支气管累及导致的阻塞性改变。这些患者中的一半自发缓解，但25-30％保持在2期或进展到3期。在患有3期结节病的患者中，胸片显示弥散的肺浸润，没有肺门淋巴结病。
仅有约12％的患者处于3期。胸片通常显示纤维化，肺体积缩小，膈上升，以及“蜂窝状”(细纤维化遍布间质肺组织)。
患有3期结节病的患者可以具有轻微的症状(即，咳嗽、呼吸困难、轻度体重减轻)或严重的问题，包括肺动脉高压、cor pulmonale和呼吸衰竭。许多3期患者在肺功能检查中具有内在的限制性改变，但由于支气管累及，许多也具有阻塞性改变。3期患者通常进行慢性过程，肺纤维化等合并症是常见并且不可逆的。在该期，肺外表现也是常见的，特别是皮肤累及6。在3期的最多30％患者中，结节病在2年内自发缓解。
表1显示在诊断时结节病的分期和胸片结果。在结节病患者中观察到的其它胸内胸片表现包括可以表现为广泛或斑片状的浸润、肺不张、结节样空洞、胸膜增厚、胸膜渗出和钙化。
表1
结节病的治疗目的包括缓解干扰器官功能的炎性病变，防止肺纤维化和减轻症状。如果患者处于1期或2期病变，肺功能检查正常并且没有威胁生命的体征或症状，仅仅需要观察，因为结节病通常是自限性疾病并且不需要特殊治疗。如果患者在任一期具有全身症状或者肺功能恶化，或患者处于或进展至3期病变，则需要治疗。
皮质类固醇仍然是治疗的主要手段，但没有证明它们可以延长寿命。存在一些不同的方案。为了诱导疾病缓解，可以以每日40-60mg剂量，分次施用的强的松开始，共施用6-8周，然后在4-6个月的时间内逐渐减少到15-20mg的剂量。已经采用每隔一日40-60mg剂量的强的松进行初始治疗，具有很好的结果。3，8患者然后可以以每日5-10mg的剂量进行维持，以便在长达一年的时间内抑制疾病活动。如果具有以下形式的结节病，患者应该接受治疗高钙血症和高尿钙、损坏外形的皮肤病变、眼部结节病(该症状可以用局部和/或全身甾体类药物治疗)、心脏结节病、神经系统结节病和其它确定是临床严重的器官累及。8在中断皮质类固醇治疗后，25-40％的结节病患者在2-3个月内缓解。如果这样，应该重复临床检查和实验室检验。一些专家采用“脉冲治疗”，其中在急性恶化期以3g/日的剂量静脉内施用甲基强的松，共施用三天。3吸入的甾体类已经用于结节病患者以缓解症状，但还没有证明该治疗减缓疾病进展。吸入和口服的支气管扩张剂、补充的氧和合成的“液体”眼泪也被用于减轻症状。局部的眼用甾体类已经被用于减轻结节病的眼部表现。如果结节红斑和关节炎的症状存在于2期病变的患者中，可以使用非甾体类抗炎药，如吲哚美辛(Indocin)，剂量为25mg，每日三次。8已经报道了更新的疗法。每隔一日给予200mg剂量的羟基氯喹(Plaquenil)，共施用9个月，可以用于治疗皮肤结节病，但可以持续损害眼，因此，必须经常进行眼部检查。还发现羟基氯喹也可以帮助控制高钙血症。1以每周一次7.5-15mg的低剂量施用的氨甲喋呤(Rheumatrex)已被证明有益于治疗难治性结节病，特别是肌肉骨骼和皮肤型。1也存在其它疗法，但只进行了很少的对照试验苯丁酸氮芥(Leukeran)、环磷酰胺(Cytoxan)和硫唑嘌呤(Imuran)。在很少见的情况下，在患有严重、难治性疾病的患者中进行肺移植，其结果不同。一些患者在移植的肺中具有肉芽肿病变的复发。
血管活性肠肽(VIP)VIP是由以下氨基酸序列组成的具有28个氨基酸的肽(从N到C末端)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQID NO.1).
健康的个体具有低浓度的VIP(＜40pg/ml血清)。
VIP是一种广泛分布的肽激素，它能介导多种生理学反应，包括胃肠分泌，胃肠血管和呼吸道平滑肌松弛，脂肪细胞中的脂解，垂体激素分泌以及在注射到中枢神经系统中之后的激动和过热。在生理学状态下，VIP起着神经内分泌介质的作用。某些新的发现表明，VIP还能调控正常细胞以及恶性肿瘤细胞的生长和增殖(Hultgardh，Nilsson A.，Nilsson，J.，Jonzon，B.等，血管活性肠多肽的生长抑制特性。Regul.Pept.22，267-274.1988)。所述生物学作用是通过位于各种细胞的表面膜上的特异性受体(VIP-R)介导的(IshiharaT.Shigemoto，R.，Mori，K.等，血管活性肠多肽的新型受体的功能性表达和组织分布。Neuron 8，811-819.1992)。VIP可能对来自成神经细胞瘤，乳腺癌，肺癌和结肠癌的肿瘤细胞产生刺激和营养作用(例如，Moody等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90，4345，1993)，通过反馈机制诱导它的自身的受体。在某些场合下，VIP产生了对有丝分裂的剂量依赖型刺激(Wollman等，Brain Res.，624，339，1993)。业已证实VIP和它的生物学功能性类似物和衍生物具有血管平滑肌松弛活性(Maruno，K，Absood，A.，和Said，S.I.VIP能抑制人气道平滑肌细胞的基础和组胺刺激的增殖。Am.J.Physiol.268，L1047-LI051，1995)，毛生长活性，细胞程序死亡活性强化的持续的支气管扩张活性，而又没有明显的心血管副作用，并且能有效治疗与支气管痉挛相关的失调或疾病，包括哮喘，高血压，阳痿，局部缺血，干眼病和精神疾病，如Alzheimer′s病的某些病例(例如，参见WO9106565，EP 0536741，US 3,880,826，EP 02 04447，EP 04 05242，WO 9527496，EP 0463450，EP0613904，EP 0663406，WO 9735561，EP0620008)。
业已在气管和支气管的气道上皮上检测到VIP受体。它还在毛细管周围的巨噬细胞中，在气管和支气管的结缔组织中，在肺泡壁中，以及在肺静脉和肺动脉的内膜下表达。肽能神经纤维被认为是肺中的VIP的来源(例如Dey，R.D.，Shannon-WA，Jr，和Said，S.I.VIP-免疫活性神经在狗，猫和人类受试者的气道和肺血管中的定位。Celland Tissue Research 220，231-238.1981；Said，S.I.哮喘中的血管活性肠多肽(VIP)。Ann.N.Y.Acad.Sci.629，305-318.1991)。VIP能降低肺血管系统的阻力(例如Hamasaki，Y.，MoVarad，和Said，S.I.对猫肺动脉的松弛作用与乙酰胆碱，异丙肾上腺素，和PGE1的比较。J.Appl.Physiol.54，1607-1611，1983；Iwabuchi，S.，Ono，S.，Tanita，T等，血管活性肠肽在分离的大鼠肺中导致一氧化氮依赖型肺血管扩张。Respiration 64，54-58，1997；Saga，T.和Said，S.I.血管活性肠肽能松弛分离的人支气管，肺动脉和肺实质。Trans.Assoc.Am.Physicians.97，304-310，1984)。进一步的研究表明了VIP-R在肺内的高速度表达，它体现为在注射了99mTc-VIP的PPH患者的肺中放射性标记过的VIP的高水平摄取(例如Raderer，M.Kurtaran，A.，Hejna，M.等。在患有结肠直肠癌的患者体内的123I-标记过的血管活性肠肽受体闪烁照相术。Br.J.Cancer78，1-5，1998；Raderer，M.Kurtaran，A.，Yang，Q.等，在患有胰腺癌的患者体内的碘123血管活性肠肽受体扫描。J.Nucl.Med.39，1570-1575，1998；Raderer，M.Kurtaran，A.，Leimer，M.等。使用(123)I-血管活性肠肽和(111)I-DTPA-D-Phel-octreotide在194位类癌患者中的肽受体闪烁照相术的值Vienna University Experience，1993-1998，J.Clin.Oncol.18，1331-1336，2000；Virgolini，I.，Kurtaran，A.，Raderer，M.等，血管活性肠肽受体闪烁照相术，J.Nucl.Med.36，1732-1739，1995)。
垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)
PACAP是从绵羊下丘脑中分离的神经肽，它由含有以下38个氨基酸残基的序列组成(从N-到C-末端)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ssr-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(SEQ ID No.2).
业已鉴定了两种形式的肽PACAP-38和C-末端截短的PACAP-27。与VIP具有68％同源性的PACAP-27具有以下序列(从N-到C-末端)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(SEQ ID No.3)PACAP在刺激腺苷酸环化酶方面非常有效，因此，能提高各种细胞中腺苷3，5-环单磷酸(cAMP)的水平。所述化合物起着下丘脑激素，神经递质，神经调节剂，血管松弛剂，和神经营养因子的作用。PACAP在垂体细胞中的主要调控作用，似乎是调节垂体激素和/或控制垂体腺细胞生长和分化的调控蛋白的基因表达。所述作用似乎是通过旁分泌或自分泌作用直接或间接表现的。PACAP在内分泌系统中已发挥重要作用，它是作为来自肾上腺髓质的肾上腺素的有效的促分泌素。该化合物还能刺激胰岛素的释放。在精子形成期间，PACAP在睾丸生殖细胞中的阶段特异性表达，表明了它在生殖细胞成熟方面的调控作用。在卵巢中，PACAP是在排卵前滤泡的颗粒细胞中瞬时表达的，并且似乎与卵巢中的LH-诱导的细胞事件相关，包括抑制滤泡细胞程序死亡。在中枢神经系统中，PACAP起着神经递质或神经调节剂的作用。更重要的是，PACAP是神经营养因子，它可能在脑发育期间发挥重要作用。在成人脑中，PACAP似乎起着神经保护因子的作用，它能减轻由各种刺激导致的神经损伤。PACAP广泛分布于脑和外周器官中，主要分布于内分泌胰腺，性腺，和呼吸道和泌尿生殖道中。业已表征了两种类型的PACAP结合位点。I型结合位点具有对PACAP的高亲和力(以及对VIP的低的多的亲和力)，而II型结合位点对PACAP和VIP具有类似的亲和力。PACAP受体的分子克隆，业已证实了三种不同受体亚型的存在。这些受体是PACAP-特异性PAC1受体，它是与若干种传导系统偶联的，以及两种PACAP/VIP-不同的VPAC1和VPAC2受体，它们主要与腺苷酰环化酶相关。PAC1受体在脑和垂体以及肾上腺中的含量特别丰富，而VPAC受体主要是在肺，肝，和睾丸中表达。
发明概述本发明首次描述了VIP、PACAP和具有VIP或PACAP的生物活性的化合物用于治疗结节病的临床相关性。VIP和PACAP是在中枢神经系统的多个部分合成的人类肽，例如特殊的脑区，如海马和皮质，以及垂体腺和外周神经节。另外，VIP是由免疫细胞和某些肿瘤细胞(例如胰腺癌)分泌的。
本发明的目的是提供已知化合物的新用途，以及新的化合物，可将其用于预防和/或治疗结节病，以及使用所述化合物的方法。
令人吃惊的是，业已发现包括高度保守的十肽序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-VaL-Lys-Lys-Tyr-Leu的肽或多肽在给患有结节病的症状和病症的患者施用时表现出高效力。包括该序列，并且一共具有10-60，优选10-38，更优选10-28或10-23个氨基酸残基的化合物，具有与VIP或PACAP非常类似或相同的生物学功能，后者也包括所述高度保守的序列。本发明的另一个结果是，VIP，PACAP以及它的截短形式，例如PACAP-27，也是用于预防和治疗结节病的很有效的化合物，它能抑制和/或调控在人体内造成所述疾病的细胞过程。
一般来说，发现VIP-和PACAP-样肽和多肽可以具有上述治疗功能和效力，它们具有以下氨基酸序列(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中A，B是任何天然存在的氨基酸残基，A和B是彼此独立的；并且，n，m是0-25的整数；n和m是彼此独立的。m的值优选为4-18，更优选5-15，最优选10-15。
其中(A)n(如果n＞2)包括位于N-末端方向的靠近(1-10氨基酸残基)上述十肽序列的三肽序列His-Ser-Asp和/或Phe-Thr-Asp的多肽或肽具有增强了的活性。
因此，这样的多肽，其中(A)n(如果n＞2)表示(X)o-Phe-Thr-Asp-(Y)p，且(X)o(如果o＞2)表示(X′)q-His-Ser-Asp-(X″)r其中X，Y，X′，X″是任何天然存在的氨基酸残基；并且o，p是0-11的整数，而r，q是0-4的整数，具有特别高的效力。o和p的优选值为0-8，更优选1-5。r的优选值为0-2。
属于所述通式的优选例子有His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.1，VIP)；His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(SEQ ID No.2，PACAP-38)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(SEQ ID No.3，PACAP-27)；本发明还公开了属于上述通式的化合物(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中，A，B是任何天然存在的氨基酸残基，A和B是彼此独立的；并且n，m是0-25的整数，n和m是彼此独立的，其前提是，排除了VIP，PACAP和PACAP-27(截短的PACAP)。
所述新型肽的优选例子有(i)Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)；(ii)Phe-Thr-Asp-X1-X2-X3-X4-X5-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-
Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.5)；(iii)Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.6)；(iv)Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.7)；(v)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.8)；(vi)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lts-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.9)；(vi)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.10)；(vii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11(-X12)(SEQ ID No.11)，(viii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22(SEQ ID No.12)；其中X1-X22是任何天然存在的氨基酸残基。
总之，本发明的目的是提供以下主题·用于治疗人肺中与结节病症状直接或间接相关的疾病或病症的用途或方法，包括给予患者具有血管活性肠肽(VIP)或垂体腺苷酸环化酶-激活多肽(PACAP)的生物学活性的化合物，所述化合物优选是包括高度保守的序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)的肽或多肽，更优选地，它们包括His-Ser-Asp(SEQ ID No.14)和/或Phe-Thr-Asp(SEQ ID No.13)。
·一种相应的用途和方法，其中在施用所述肽和/或多肽后，肺动脉压降低10％以上，更优选降低20％以上，最优选降低10-30％。
·一种相应的用途和方法，其中在施用所述化合物后，舒张压降低5-25％，更优选降低10-20％，收缩压降低10-30％，更优选降低10-25％。
详细说明本发明的具有治疗作用的合适的化合物是那些具有与VIP或PACAP相同，以及减弱了的或增强了的生物学活性的化合物。本发明的优选化合物具有相同或增强了的生物学活性。属于这一类型的所有化合物包括以下序列Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ IDNo.4)。
本发明还包括所披露的具有相同生物学活性的肽和多肽的衍生物。
术语“相同的生物学活性”表示与所述肽和多肽，优选VIP或PACAP的相关的特性相当的生物学，生理学或治疗活性或功能。
术语“衍生物”表示或多或少直接源于诸如VIP或PACAP的相应的肽的肽化合物，并且通过某些添加，缺失，突变或修饰进行过改变，而没有改变所述母体肽的生理学特性。例如，合适的VIP衍生物披露于以下文献中WO 8905857，WO 9106565，EP 0663406和WO 9729126(Fmoc保护的VIP)。所述术语还包括本发明肽和多肽的偶联物，所述偶联物包括与诸如脂质体的亲脂实体偶联的母体肽或多肽。例如，VIP-脂质体产物披露于WO 9527496或WO 9735561中，并且在生物利用度和蛋白水解降解方面具有改善了的特性。另外，该术语还包括片段，略微修饰过的片段，包括截短的形式。
术语“类似物”表示与本发明的多肽和肽，优选VIP相比具有不同的结构和组成的化合物，不过，它不具有改变了的生物学特性。VIP类似物可以是天然的或合成的肽，不过也可以是非肽。本发明的VIP类似物优选是肽。已知VIP类似物的例子披露于以下文献中EP0325044(环状肽)，EP 0225020(线性肽)，EP 0536741(环状VIP修饰)，EP 0405242，EP 0184309和EP 0613904。所述术语还包括VIP或PACAP同源物，它们不是VIP或PACAP，不过与VIP具有很高的结构类似性。本发明的VIP同源物是PACAP本身，以及它的截短的形式PACAP-27。该术语还包括这样的同源物，它像VIP那样能够形成两亲性螺旋。优选的VIP/PACAP同源物是包括一个或多个共有序列的肽。其例子包括肽组氨酸异亮氨酸(PHI)，肽组氨酸甲硫氨酸(PHM)，人生长激素释放因子(GRF)，垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)，胰泌素和胰高血糖素。
术语“稳定化形式”表示衍生物或类似物，其中，所述亲本肽进行过改变，以便在血液和血清中获得更高的稳定性和更长的半衰期。如果所述多肽被酶活性分解的话，所述稳定化形式是优选的。可能的稳定化形式有环状肽或多肽，如环状VIP或环状-PACAP，融合蛋白，优选Fc-融合蛋白或聚乙二醇化多肽，如聚乙二醇化的VIP或PACAP。用于生产所述多肽的方法为本领域所熟知。可以通过连接化学部分，保护多肽和肽免受蛋白水解作用。所述连接能有效阻断蛋白水解酶与所述蛋白主链本身发生物理接触，并因此防止降解。聚乙二醇就是一种这样的化学部分，业已证实它能抑制蛋白水解作用(Sada等，J.Fermentation Bioengineering 71137-139，1991)。除了防止蛋白水解裂解之外，业已发现生物学活性蛋白的化学修饰在某些场合下能提供额外的优点，如提高所述治疗蛋白的稳定性和循环时间，并且降低免疫原性(US.4,179,337；Abuchowski等，Enzymes as Drugs；J.S.Holcerberg和J.Roberts，eds.pp.367-383，1981；Francis，Focus on Growth Factors 34-10；EP 0401384)。与非聚乙二醇化的化合物相比，添加聚乙二醇，在生理学pH下提高了本发明的肽和多肽的稳定性。与盐相比，聚乙二醇化的多肽/蛋白也得到了稳定。
术语“融合蛋白”表示包括本发明多肽，优选VIP或VIP衍生物或类似物，如PACAP的化合物，特别是稳定化形式的化合物，它是与另一种肽或蛋白融合的。所述蛋白优选是免疫球蛋白分子，更优选它的片段，最优选IgG分子，优选IgG1的Fc部分。在WO 200024278中披露了一种Fc-VIP融合蛋白，并且在血清和血液中具有延长了的半衰期。另一种例子是Fc-PACAP和FC-PACAP-27。
可以将本发明的化合物用作药物或用作诊断方式，评估个体的病理学状况。
术语“个体”优选表示哺乳动物，特别是人。将所述化合物用于药物组合物和制剂中，所述组合物通常包括可以药用的载体，赋形剂，或稀释剂。用于制备和施用本发明化合物的技术，可以从以下文献中查阅到″Remington′s Pharmaceutical Sciences″Mack PublishingCo.，Easton PA。
在本文中，术语“可以药用的载体”表示惰性的，无毒的固体或液体填料，稀释剂或包衣材料，它不会与所述活性化合物或所述患者产生不利的反应，或任何其他制剂，如片剂，丸剂，糖衣药丸，胶囊，凝胶，糖浆，糊剂，和悬浮液等。合适的，优选液体载体为本领域所熟知，如无菌水，盐水，葡萄糖水溶液，糖溶液，乙醇，甘油和油，包括来自石油，动物，植物的油或合成的油，例如，花生油，大豆油和矿物油。
本发明的制剂能够以含有肠胃外施用常用的常规无毒可以药用的载体，稀释剂，佐剂和媒介物的单位剂量形式施用。
在这里，术语“肠胃外”包括皮下，静脉内，关节内，和气管内注射和输液技术。肠胃外组合物和组合最优选是以药团形式或以恒定的输液形式按照已知方法通过静脉内途径施用的。
其它施用途径，如口服施用或通过吸入或鼻喷雾施用也是适合的。
用于口服的片剂和胶囊包括常规赋形剂，如粘接剂，填料，稀释剂，成片剂，润滑剂，崩解剂，以及湿润剂。可以按照本领域众所周知的方法对片剂进行包衣。
对于吸入，优选以气溶胶形式携带本发明的化合物。气溶胶及其制备方法是本领域公知的。如果必须治疗直接的肺部症状，能够通过含有本发明的肽或多肽，例如VIP或PACAP的吸入器施用的气溶胶是优选的。
本发明的单位剂量可以包括每日所需的本发明化合物的量，或构成所述需要的剂量的小的多个剂量。特定患者(哺乳动物，包括人)的最佳的治疗上可以接受的剂量和用药次数，取决于多种因素，如所使用的具体活性材料的活性，年龄，体重，一般健康状况，性别，饮食，施用时间和途径，清除速度，酶活性，治疗的目标，即治疗或预防，以及要治疗的疾病的性质。因此，在受治疗患者(体内)的组合物和组合中，本发明化合物的每天的药理学有效剂量为大约5ng-200μg/kg体重，优选20ng-20μg/kg体重。
出乎意料的是，正如在以下实施例中所证实的，发现上文所定义的以及在权利要求书中所限定的肽或多肽，上述所有VIP和PACAP，在治疗结节病方面具有有益作用。以上数据证实了用于治疗尚不能有效治疗的疾病的明显改进。本发明的一个优点是，所有包括上文所述高度保守的十肽序列的所有实验过的多肽是有效的。
实施例实施例1一名患有严重的3期结节病和继发性肺动脉高压的患者正在进行皮质类固醇furosemid和抗凝剂的治疗。在VIP吸入治疗(每天200μg溶于12ml 0.9％NaCl，每次吸入4×3ml)期间和之后进行右侧心导管插入(Swan-Ganz，Baxter，Irvine，CA，USA)以测量平均肺动脉压(mPAP)、心输出量(CO)、平均动脉压(MAP)、肺毛细血管楔压(PCWP)、混合静脉氧饱和度(SvO2％)和全身动脉氧分压(PaO2％)，共进行12周。在VIP治疗(每天200μg溶于12ml 0.9％NaCl)期间和之后根据标准方法测量结节病患者的FEV 1(1秒用力呼气体积)、FVC(用力肺活量)，TLC(总肺容量)，AaD02(动脉-肺泡氧差)。通过MicroDropMaster Jet(MPV，Truma，Germany)吸入VIP 12周，使用3μm的粒度，以便提供所述物质的肺泡沉积。
用VIP治疗12周之前和之后的结节病患者的血液动力学和肺功能参数概括于表2。
在6分钟步行实验中，患者从治疗前的210米改善为治疗后的350米。
表2
参考文献1.Newman LS，Rose CS，Maler LA.Sarcoidosis.N Engl J Med 1997；3361224-34.
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序列表<110>Mondobiotech SA<120>具有血管活性肠肽的生物学活性的化合物在治疗结节病中的用途<130>PMB-0207 INT<160>14<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>28<212>PRT<213>人<400>1His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20 25<210>2<211>38<212>PRT<213>人<400>2His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys20 25 30Gln Arg Val Lys Asn Lys35
<210>3<211>27<212>PRT<213>人<400>3His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu20 25<210>4<211>10<212>PRT<213>人<400>4Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu1 5 10<210>5<211>23<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(8)<223>X是任何天然存在的氨基酸残基<400>5Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys1 5 10 15Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20<210>6
<211>23<212>PRT<213>人<400>6Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys1 5 10 15Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn20<210>7<211>18<212>PRT<213>人<400>7Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys1 5 10 15Tyr Leu<210>8<211>23<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X是任何天然存在的氨基酸残基<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)<223>X是任何天然存在的氨基酸残基
<400>8His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>9<211>23<212>PRT<213>人<400>9His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>10<211>23<212>PRT<213>人<400>10His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu20<210>11<211>28<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X是任何天然存在的氨基酸残基
<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)<223>X是任何天然存在的氨基酸残基<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(24)..(28)<223>第24-27位的X可以是任何天然存在的氨基酸残基。
第28位的X可以是H或任何天然存在的氨基酸残基<400>11His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln1 5 10 15Mat Ala Val Lys Lys Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25<210>12<211>38<212>PRT<213>人<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(4)..(5)<223>X是任何天然存在的氨基酸残基<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(9)..(13)<223>X是任何天然存在的氨基酸残基<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(24)..(38)<223>X是任何天然存在的氨基酸残基<400>12His Ser Asp Xaa Xaa Phe Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Lys Gln1 5 10 15Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa20 25 30Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa35<210>13<211>3<212>PRT<213>人<400>13Phe Thr Asp1<211>14<211>3<212>PRT<213>人<400>14His Ser Asp权利要求
1.一种化合物在制备用于治疗患有与结节病直接或间接相关的疾病或病症的患者的药物中的用途，其中，所述化合物是包括以下氨基酸序列的肽或多肽Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)。
2.如权利要求1的用途，其中，所述肽或多肽还包括至少一种下列氨基酸序列His-Ser-Asp(SEQ ID No.14)；Phe-Thr-Asp(SEQ ID No.13)。
3.如权利要求1的用途，其中，所述肽或多肽还包括以下氨基酸序列His-Ser-Asp(SEQ ID No.14)和Phe-Thr-Asp(SEQ ID No.13)。
4.如权利要求1的用途，其中，所述肽或多肽具有以下氨基酸序列(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中A，B是任何天然存在的氨基酸残基，A和B是彼此独立的；并且n，m是0-2 5的整数；n和m是彼此独立的。
5.如权利要求4的用途，其中，如果n＞2，(A)n具有以下序列(X)o-Phe-Thr-Asp-(Y)p其中X，Y是任何天然存在的氨基酸残基，X和Y是彼此独立的；并且o，p是0-11的整数，o和p是彼此独立的。
6.如权利要求5的用途，其中，如果o＞2，(X)o具有以下序列(X′)q-His-Ser-Asp-(X″)r其中X′，X″是任何天然存在的氨基酸残基，X′和X″是彼此独立的；并且r，q是0-4的整数，r和q是彼此独立的。
7.如权利要求4的用途，其中，所述肽或多肽的序列选自下组(i)Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)；(ii)Phe-Thr-Asp-X1-X2-X3-X4-X5-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.5)；(iii)Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.6)；(iv)Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.7)；(v)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.8)；(vi)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Ash-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.9)；(vi)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.10)；(vii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11(-X12)(SEQ ID No.11)；(viii)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQID No.1，VIP)；(ix)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu(SEQID No.3，PACAP-27)；(x)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22(SEQ ID No.12)；(xi)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys(SEQ ID No.2，PACAP-38)；其中X1-X22是任何天然存在的氨基酸残基。
8.如权利要求7的用途，其中，任意所述肽或多肽是稳定化形式。
9.如权利要求1-8中任意一项的用途，其中所述肽或多肽具有VIP或PACAP、或其任意生物学活性衍生物、截短形式、类似物或融合蛋白的生物学功能，或与VIP或PACAP、或其任意生物学活性衍生物、截短形式、类似物或融合蛋白功能上相似。
10.如权利要求1-9中任意一项的用途，其中所述药物是作为可用于吸入的气溶胶提供。
11.一种治疗人肺中与结节病直接或间接相关的疾病或病症的方法，包括给患者施用包括以下氨基酸序列的肽或多肽Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)。
12.如权利要求11的方法，其中，所述肽或多肽还包括至少一种下列氨基酸序列His-Ser-Asp(SEQ ID No.14)；Phe-Thr-Asp(SEQ ID No.13)。
13.如权利要求11的方法，其中，所述肽或多肽具有以下氨基酸序列(A)n-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-(B)m其中A，B是任何天然存在的氨基酸残基，A和B是彼此独立的；并且n，m是0-25的整数；n和m是彼此独立的。
14.如权利要求13的方法，其中，如果n＞2，(A)n具有以下序列(X)o-Phe-Thr-Asp-(Y)p其中X，Y是任何天然存在的氨基酸残基，X和Y是彼此独立的；并且o，p是0-11的整数，o和p是彼此独立的。
15.如权利要求14的方法，其中，如果o＞2，(X)o具有以下序列(X′)q-His-Ser-Asp-(X″)r其中X′，X″是任何天然存在的氨基酸残基，X′和X″是彼此独立的；并且r，q是0-4的整数，r和q是彼此独立的。
16.如权利要求13的方法，其中，所述肽或多肽的序列选自下组(i)Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.4)；(ii)Phe-Thr-Asp-X1-X2-X3-X4-X5-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.5)；(iii)Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(SEQ ID No.6)；(iv)Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.7)；(v)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.8)；(vi)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.9)；(vi)His-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu(SEQ ID No.10)；(vii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11(-X12)(SEQ ID No.11)；(viii)His-Ser-Asp-X1-X2-Phe-Thr-Asp-X3-X4-X5-X6-X7-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22(SEQ ID No.12)；其中X1-X22是任何天然存在的氨基酸残基。
17.如权利要求11-16中任意一项的方法，其中，任意所述肽或多肽是稳定化形式。
18.如权利要求11-17中任意一项的方法，其中所述肽或多肽具有VIP或PACAP、或其任意生物学活性衍生物、截短形式、类似物或融合蛋白的生物学功能，或与VIP或PACAP、或其任意生物学活性衍生物、截短形式、类似物或融合蛋白功能上相似。
19.如权利要求11-18中任意一项的方法，其中所述药物是作为可用于吸入的气溶胶提供。
全文摘要
本发明涉及作为用于治疗与结节病相关的疾病的治疗药物的高度生物学和药理学活性的肽。根据本发明的方法，可用于治疗所述疾病的肽包括至少一种特殊的高度保守的氨基酸残基序列，该序列似乎在肺和小动脉高压事件中发挥重要作用。可以证实的是，具有所述特殊序列的已知的天然存在的肽″血管活性肠肽(VIP)和“垂体腺苷酸环化酶－激活多肽(PACAP)”，是有效的药物，可将其成功地用于治疗结节病。此外，本发明公开了治疗患有结节病的患者的方法。
文档编号A61K38/00GK1658896SQ03813424
公开日2005年8月24日 申请日期2003年6月5日 优先权日2002年6月10日
发明者D·贝维克 申请人:蒙杜生物科技安斯塔特实验室