专利名称：动物干扰素基因工程生物活性制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于杀灭动物体内病毒的生物学组合物技术领域，特别是涉及一种动物干扰素基因工程生物活性制剂。
背景技术：
动物健康带毒、禽流感等病毒的不断变异、非典型新城疫、非典型猪瘟等导致病毒性传染病在动物群中长久存在或其产品的生物污染，一直是困扰我国动物养殖业、制约畜产品国际市场竞争能力的关键问题之一。尤其是近年来免疫抑制病毒感染的不断发生，禽流感等病毒的不断变异，造成动物疫苗免疫效果不佳，非典型新城疫、非典型猪瘟经常发生，动物健康带毒现象非常严重。这使得隐性传染源、动物群生物污染和产品带毒等问题一直未能解决，至今还没有一类化合药物能有效的杀灭家畜病毒、有效的控制鸡病毒性传染病的发生。养殖业生产实践表明，单用疫苗难以彻底控制或净化病毒对畜群的污染，尤其是近年来免疫抑制病毒的污染不断加重，使得疫苗接种常常发生免疫失败。因此，迫切需要能够有效的净化机体内病毒的药物。人类医学利用干扰素治疗病毒病及肿瘤病上的成功，为动物病毒病的有效防治提供了极好的借鉴和广阔的开发应用前景。因此，我们开发研制了该基因工程生物活性新药。
发明内容
本发明的目的是采用先进的基因工程生物技术，研制一种能够显著增强动物机体免疫机能，促进机体杀灭病毒的生物净化剂，以快速、有效地消灭、净化侵入动物体内的病毒，提高动物群的生物安全性，减少病毒性传染病的发生及其给养殖户造成的经济损失，保障畜产品的卫生安全，提高国际市场竞争能力，促进动物养殖业的高效稳定发展。
本发明动物干扰素基因工程生物活性制剂以基因工程干扰素及其诱导因子白介素18和包被调节因子为原料制成，各成分按生物活性效价所占比例如下基因工程干扰素5×105活性单位/ml，白介素18×102活性单位/ml，包被调节因子10活性单位/ml。
对本发明的有益效果分析如下干扰素是动物机体遭受病原入侵后分泌的一种具有免疫调节功能及抗病毒的天然蛋白质，与位于细胞膜上相应受体结合后诱导细胞合成系列抗病毒蛋白，并迅速将信号传递到相邻细胞，使其进入抗病毒状态；干扰素能激活巨噬细胞和NK细胞并增强淋巴细胞对靶细胞的特殊细胞毒性作用，加速清除入侵的病原；同时干扰素可促进抗原提呈细胞(APC)表达I型主要组织相容性复合体(MHC)和II MHC分子，增强动物机对外源性抗原的免疫应答，提高体液免疫水平和细胞免疫水平。
白介素18是新近发现的一种主要由活化的巨噬细胞和肝脏枯否细胞(Kupffer)产生的多功能细胞因子，不仅能够诱导机体产生IFN-γ，还能诱导GM-CSF、IL-2及TNFα等其它Th1型细胞因子的产生，具有促进T淋巴细胞的分化增殖，增强Fas介导的Th1细胞的细胞毒性和NK细胞、CTL细胞的细胞毒作用等多种生物学功能。在抗病原微生物感染、抗肿瘤及抗超敏反应等方面有着广阔的临床应用前景，极具开发新型免疫佐剂和免疫增强剂的潜力。
我们通过几年的试验研究，已成功地克隆到干扰素和白介素18基因，构建了基因工程菌，通过基因重组试验，发现了高效稳定的表达方法，并对其生物活性进行了试验。通过鸡胚抗病毒作用试验证明均具有显著的抗病毒作用。还对鸡、鸭、猪的基因工程干扰素产品进行了动物体内抗病毒试验，也获得了理想的效果。临床试验发现对动物的多种病毒具有明显的干扰、抑制作用，在动物发病前和发病初期使用一次可起到良好的预防或治疗作用，效果优于疫苗紧急接种和药物治疗。对于健康带毒的动物群，用该产品对动物体内病毒进行净化，结合免疫接种和养殖环境净化等综合措施，可望能够提高和保障动物群的生物安全性，具有十分重要的产业化开发价值和广阔的推广应用前景。
干扰素和白介素18都是机体内存在的细胞因子，只是平时含量较少。以该生物制剂20倍常用剂量肌肉注射相应的实验动物，未见任何异常反应和病理变化，对机体无毒副作用。该产品通过生物技术克隆干扰素和白介素18的基因，重组于质粒后植入基因工程酵母菌，再通过发酵生产工艺加工处理后，制备为成品，因此，对环境无任何污染。
具体实施例方式
本发明利用基因工程干扰素及其诱导因子白介素18为原料。我们先后克隆、纯化了鸡、猪、牛的干扰素基因，将其分别重组于质粒，再导入已构建的基因工程酵母菌，通过工程菌的发酵增殖来大量表达干扰素基因产物即基因工程干扰素，通过高效表达和干扰素包被调控技术，最终研制成功了鸡、猪、牛三种具有生物活性的基因工程干扰素新药产品。然后分别用鸡胚成纤维细胞和猪PK细胞对其进行了抗病毒效价测定，活力均达到了5×105活性单位/ml以上。
各成分按生物活性效价所占比例如下基因工程干扰素5×105活性单位/ml，白介素18×102活性单位/ml，通过包被处理，制备为成品。
本发明动物干扰素基因工程生物活性制剂的加工工艺流程干扰素、白介素18基因克隆→重组质粒→基因工程酵母菌→发酵→提纯包被调节因子→溶媒→分装→质检→入库。
本发明使用方法使用时用注射用水稀释至500毫升，肌肉注射鸡1万单位/只；猪5万单位/头；牛10万单位/头1、紧急预防接种前2天，注射一次；2、紧急防治时，每天一次，连用2-3天；3、出栏或运输前3天注射一次，可防止动物健康带毒。
本品可以在2～8℃保存18个月不降低活性。
权利要求
1.一种动物干扰素基因工程生物活性制剂，其特征是以基因工程干扰素及其诱导因子白介素18和包被调节因子为原料制成，各成分按生物活性效价所占比例如下基因工程干扰素5×105活性单位/ml，白介素18×102活性单位/ml，包被调节因子10活性单位/ml。
全文摘要
一种动物干扰素基因工程生物活性制剂，是以基因工程干扰素及其诱导因子白介素18和包被调节因子为原料制成，各成分按生物活性效价所占比例如下基因工程干扰素5×10
文档编号A61P31/00GK1634569SQ20041003605
公开日2005年7月6日 申请日期2004年11月4日 优先权日2004年11月4日
发明者姜正军, 赵宏坤, 陈溥言, 曹瑞兵, 刘刚, 王春民, 胡敬东, 张西雷 申请人:山东华辰生物科技有限公司