专利名称：一种新的溶菌酶复方注射制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种溶菌酶复方新的制剂方式。该制剂是含有溶菌酶和四环素类抗生素的复方注射制剂，包括注射用粉针、注射用冻干粉针、注射液、大输液，其中含有1mg-100g/支的溶菌酶和相应比例量的四环素类抗生素。该制剂临床上适用于各种感染性疾病的治疗，以及与其他抗生素合用增强疗效，用于各种难治的感染病症以及癌症的辅助治疗。
背景技术：
溶菌酶(Lysozyme，Mrcopeptide-N-acetylmuramoylhydrolase，Muramidase，Mucopeptide glycohydrolase，EC3.2.1.17)是人体内源性活性酶，它广布于人体心、肝、脾、肺、肾等多种器官组织中，是人体非特异性免疫中一种重要的体液免疫因子。研究发现，溶菌酶对革兰氏阳性菌有较强的杀灭作用，最新的研究发现其有良好的抗病毒活性，溶菌酶的抗菌作用是通过作用于N-乙酰氨基葡萄糖及N-乙酰胞壁酸之间的β-1，4键，使细菌细胞壁中的粘多糖成分水解，导致细胞壁破裂，细胞内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶抗病毒作用是通过与带负电荷的病毒蛋白结合，与RNA、DNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。
强力霉素(多西环素，脱氧土霉素，多喜霉素，Doxycycline，6-甲基-4-(二甲氨基)-3，5，10，12，12a，-五羟基-1，11-二氧代-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-八氢-2-并四苯甲酰胺盐酸盐半乙醇半水合物)，是一种半合成四环素类衍生物，是土霉素6位上的羟基人工脱氧而成，这种结构上的变化，在药理性能上表现出一些优点，不仅抗菌活性高(抗菌活性比四环素强2-10倍)，耐药菌株少(对四环素耐药菌株如金黄色葡萄球菌仍有效)，与天然四环素类无明显交叉耐药性，而且半衰期长达15-22小时。经各种途径吸收后，其在体内广泛分布，在肝，肾，骨和牙中浓度最高。40％以上的强力霉素在体内代谢，代谢物无微生物活性，且大部分经胆汁和肠分泌从粪便中排除，因此肾功能不全患者使用本品后在体内无明显积聚现象，故本品对肾功能损害患者的抗感染治疗尤为适宜。
强力霉素抗菌谱广，除对常见的革兰氏阳性球菌、阴性杆菌具有一定抗菌作用外，还对衣原体，立克次体，支原体和螺旋体等原虫有抑制作用。近来的研究还发现除了良好的抑菌作用外，强力霉素还有抗逆转录作用，另外还可抑制金属蛋白酶，从而减少癌细胞明胶分解和癌细胞转移。
我们在对此溶菌酶和强力霉素复方制剂的研究中发现，强力霉素和溶菌酶两者均是广谱抗菌药物，两者合用抗菌效果增强，除对革兰氏阳性菌和阴性菌有作用外，还可抑制立克次体、支原体、病毒等感染。同时，强力霉素具有一定的镇咳、祛痰和平喘作用，对敏感菌所致的上呼吸道、老年慢性支气管炎等有较好的疗效，在治疗慢性支气管炎疗效较好。溶菌酶是鸡蛋清提取物本身几无副作用，强力霉素相对于其他抗生素副作用小，该复方的主要副作用很小，主要为胃肠道反应如恶心、呕吐、腹泻，仅占服药人数的1/5不到。
同时我们研究也发现，复方中溶菌酶属于蛋白质口服较难被吸收，起效慢，生物利用度较低。而强力霉素作用维持时间长，口服后吸收较快，3小时后就可发挥最大效应，主要由肾脏缓慢排泄，成人一次口服200毫克，24小时内排出32％，48小时内排出41％，有效血药浓度比四环素、士霉素长，更适合治疗慢性炎症。由于制剂的形式决定了口服制剂存在溶菌酶吸收差、起效慢而强力霉素吸收快维持时间长的两者在吸收和代谢上的差异。
根据调研发现，目前强力霉素和溶菌酶市场上均有单方的口服制剂和注射制剂，据此，我们开发了该复方的注射制剂，发现溶菌酶强力霉素注射制剂能够改善口服制剂的缺陷，有效提高该复方的疗效，达到如下目的1、起效快，注射制剂直接进入循环，避免了溶菌酶口服吸收差的问题，两者能够同时在体内在血药浓度动态变化上达到协同，同时又发挥了强力霉素体内维持时间长的特征，达到兼有时间依赖效果和浓度依赖效果的杀菌目的。2、副作用小，避免了口服强力霉素对胃肠道的刺激作用。
在此基础上，我们对四环素类抗生素和溶菌酶的组合配方进行了研究，发现溶菌酶配合四环素类抗生素的复方，制备的注射制剂比口服制剂有更好的疗效。
本发明涉及四环素类抗生素和溶菌酶的复方，其中所选用的溶菌酶可以是用已知的方法将溶菌酶制备成钠盐、钾盐、钡盐、钙盐等其他形式的金属盐，以及这些盐可以形成的各种水化合物或结晶。其中溶菌酶可以是单聚体，也可以是二聚体或者多聚体，或者是从植物、动物提取的也可以是基因工程制备的。
其中所选用的四环素类抗生素可以是土霉素、甲烯土霉素、脱氧土霉素、四环素、氢吡四环素、赖氨四环素、米诺环素、强力霉素、去甲金霉素等。用已知的方法通过强力霉素与相应的酸进行反应得到强力霉素的可药用盐。它包括盐酸盐、乙酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、连二硫酸盐、磷酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、延胡索酸盐、双羟萘酸盐、氯苯氧基乙酸盐、羟乙酸盐、门冬氨酸盐、甲磺酸盐、马来酸盐、对氯苯氨基异丁酸盐、甲酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、环己烷羧酸盐、己酸盐、辛酸盐、十六酸盐、十八酸盐、十八烷酸盐、苯磺酸盐、三甲氧基苯甲酸盐、对甲苯磺酸盐、金刚烷羧酸盐、谷氨酸盐、吡咯烷酮羧酸盐、萘磺酸盐、1-葡糖磷酸盐、palmaoate、glycoxylate。在这些盐中，特别优选盐酸盐、延胡索酸盐、双羟萘酸盐和氯苯氧基乙酸盐。
本发明所描述的注射制剂包括注射液、注射用粉针、注射用冻干粉针、大输液等剂型。
用常规方法，将活性成分与缓冲液、稳定剂、防腐剂、增溶剂、张度剂和悬浮剂进行混合，得到注射制剂。根据已知的技术，随后将这些混合成分的灭菌，然后包装成静脉注射、肌肉注射的形式。
缓冲液可以使用基于有机磷酸盐的缓冲液、生理盐水、葡萄糖注射液等，用来平衡pH。
悬浮剂可以采用甲基纤维素、羟乙基纤维素、阿拉伯胶和羧甲基纤维素钠。增溶剂可以是聚氧乙烯、吐温80、姻酰胺或Macrogol固化的蓖麻油。
稳定剂可以是亚琉酸钠、焦亚硫酸钠、甘露糖醇、麦芽糖、硫酸软骨素、环糊精、糊精、明胶、人血清白蛋白、乳糖、糖苷、低分子右旋糖苷等。
防腐剂可以是对一羟苯甲酸钠、抗坏血酸、甲酚和氯甲酚等。
根据本发明所定义的药物复方，可以是药物组合物的形式存在，其中两种活性成分是同一个组合物中的基本组分混合在一起的，或者指含有两个独立组合物成分的药盒，第一个组合物中含有溶菌酶、或其任一形式的药学上可以接受的活性成分、或其可药用盐作为唯一的活性成分，第二个组合物中含有四环素类抗生素、或其前体或代谢产物等任一形式的活性成分、或其可药用盐或其一水或多水化合物作为唯一的活性成分。当药物联合呈药盒形式时，构成药盒的两种组合物的给药尽管是单独进行的，但是为了联合治疗，是同时进行的。
本发明溶菌酶复方含有治疗有效量的各种话性成分。因此，溶菌酶和四环素类抗生素的各自用量比值相应地变化。优选地，溶菌酶与四环素类抗生素或其可药用盐的重量比值范围为20∶1-1∶20，优选5∶1-1∶5。
当溶菌酶和四环素类抗生素或其可药用盐混合后在同一单位制剂中时，单位剂量优选的含有1mg-100g的溶菌酶，优选地采用10mg-1000mg的溶菌酶量，和1mg-100g的四环素类抗生素，优选地采用10mg-1000mg的四环素类抗生素量。制剂的给药剂量自然地取决于给药模式、治疗适应症和患者的年龄及体质体重。在本发明专利中，虽然采用强力霉素作为范例进行描述，但其所对应的内容是包涵了所有四环素类抗生素的。
参照下面的实施实例来描述本发明的药物组合物的应用和请求保护的用途优点。
实施实例实例一溶菌酶复方注射制剂用原料的制备来自鸡蛋清、人尿/眼泪中提取的、或生物工程表达的人源化的溶菌酶原料，经过精制纯化，去热源，无菌处理，经过动物试验检查，达到注射用品标准。
采用符合药用标准的强力霉素原料，无菌条件下重结晶，并提高纯度符合注射用标准，制备成无菌注射用强力霉素原料。
实例二溶菌酶复方注射液的制备注射用溶菌酶无菌原料20g，注射用强力霉素无菌原料100g，溶于20升注射用盐水，搅拌溶解充分混合均匀，调节pH值为5.5～7.0，搅匀，测定pH值、澄明度及含量合格后，用0.22μm微孔滤膜滤过至澄明，每瓶按1ml的量无菌分装于10000瓶2ml管制瓶中，密封，按注射液生产工艺程序操作，其中每支注射液中含有20mg溶菌酶和100mg强力霉素。按注射液生产规程进行目检、化验、包装等工序的操作，化验合格后，移入成品库。
实例三溶菌酶复方注射液的制备注射用溶菌酶无菌原料50g，注射用强力霉素无菌原料100g，溶于50升注射用葡萄糖溶液，搅拌溶解充分混合均匀，调节pH值为5.5～7.0，搅匀，测定pH值、澄明度及含量合格后，用0.22μm微孔滤膜滤过至澄明，每瓶按1ml的量无菌分装于10000瓶5ml管制瓶中，密封，其中每支注射液中含有50mg溶菌酶和100mg强力霉素。按注射液生产规程进行目检、化验、包装等工序的操作，化验合格后，移入成品库。
实例四溶菌酶复方大输液的制备注射用溶菌酶无菌原料50g，注射用强力霉素无菌原料100g，溶于100升注射用盐水，搅拌溶解充分混合均匀，调节pH值为5.5～7.0，搅匀，测定pH值、澄明度及含量合格后，用0.22μm微孔滤膜滤过至澄明，每瓶按100ml的量无菌分装于1000瓶100ml输液瓶中，密封，无菌过滤后分装，密封，按大输液生产工艺程序操作，其中每支输液中含有50mg溶菌酶和100mg强力霉素。按大输液生产规程进行目检、化验、包装等工序的操作，化验合格后，移入成品库。
实例五溶菌酶复方大输液的制备注射用溶菌酶无菌原料100g，注射用强力霉素无菌原料200g，溶于100升注射用盐水，搅拌溶解充分混合均匀，调节pH值为5.5～7.0，搅匀，测定pH值、澄明度及含量合格后，用0.22μm微孔滤膜滤过至澄明，每瓶按250ml的量无菌分装于400瓶大输液，密封。其中每支输液中含有250mg溶菌酶和500mg强力霉素。按大输液生产规程进行目检、化验、包装等工序的操作，化验合格后，移入成品库。
实例六溶菌酶复方注射用粉针的制备采用注射用溶菌酶无菌原料20g，注射用强力霉素无菌原料100g，两者充分混合均匀，分装，密封，按无菌粉针生产工艺程序操作，制备成10000瓶无菌粉针，其中每瓶含有20mg溶菌酶和100mg强力霉素。按冻干粉针剂生产规程进行目检、化验、包装等工序的操作，化验合格后，移入成品库。
实例七溶菌酶复方注射用粉针的制备采用注射用溶菌酶无菌原料50g，注射用强力霉素无菌原料100g，两者充分混合均匀，分装，密封，按无菌粉针生产工艺程序操作，制备成10000瓶无菌粉针，其中每瓶含有50mg溶菌酶和100mg强力霉素。按冻干粉针剂生产规程进行目检、化验、包装等工序的操作，化验合格后，移入成品库。
实例八溶菌酶复方注射用冻干粉针的制备采用注射用溶菌酶无菌原料20g，注射用强力霉素无菌原料100g，低分子右旋糖苷100g，溶于10000ml注射液中，搅拌溶解充分混合均匀，调节pH值为5.5～7.0，搅匀，测定pH值、澄明度及含量合格后，用0.22μm微孔滤膜滤过至澄明，每瓶按1ml的量无菌分装于10000瓶2ml管制瓶中，于冻干机内降温至-40℃，开启真空系统，以每小时2-4℃自然升温至35℃停机、压塞、出箱、轧盖，按无菌冻干粉针生产工艺程序操作，其中每瓶含有20mg溶菌酶和100mg强力霉素。按冻干粉针剂生产规程进行目检、化验、包装等工序的操作，化验合格后，移入成品库。
实例九溶菌酶复方注射用冻干粉针的制备采用注射用溶菌酶无菌原料20g，注射用强力霉素无菌原料100g，β-环糊精80g，溶于10000ml注射液中，搅拌溶解充分混合均匀，调节pH值为5.5～7.0，搅匀，测定pH值、澄明度及含量合格后，用0.22μm微孔滤膜滤过至澄明，每瓶按1ml的量无菌分装于10000瓶2ml管制瓶中，于冻干机内降温至-40℃，开启真空系统，以每小时2-4℃自然升温至35℃停机、压塞、出箱、轧盖，按无菌冻干粉针生产工艺程序操作，其中每瓶含有20mg溶菌酶和100mg强力霉素。按冻干粉针剂生产规程进行目检、化验、包装等工序的操作，化验合格后，移入成品库。
实例十溶菌酶和四环素类抗生素复方抗菌活性比较按照1∶1重量比例将溶菌酶和四环素类抗生素等比例混合，制备成如下复方1、复方A溶菌酶+甲烯土霉素；2、复方B溶菌酶+脱氧土霉素3、复方C溶菌酶+氢吡四环素4、复方D溶菌酶+赖氨四环素5、复方E溶菌酶+米诺环素6、复方F溶菌酶+强力霉素7、复方G溶菌酶+去甲金霉素采用临床分离的菌株，测定各个复方的抑菌效果，如下表表1、溶菌酶复方抑菌效果(MIC，mg/ml)
表2、溶菌酶复方对支原体抑菌效果(MIC，μg/ml)
权利要求
1)一种溶菌酶复方注射制剂，该制剂临床上适用于各种感染性疾病的治疗，以及与其他抗生素合用增强疗效，用于各种难治的感染病症以及癌症的辅助治疗。
2)根据权利要求1描述的制剂，其特征在于该制剂是含有一种或多种辅助剂或/和赋型剂的药物组合，其中含有溶菌酶和四环素类抗生素组成，其中溶菌酶可以是单聚体，也可以是二聚体或多聚体，或者是从植物、动物提取的也可以是基因工程制备的，或者是上述来源的溶菌酶的各种盐的形式，如钠盐、钾盐、钡盐、钙盐等其他形式的金属盐，以及这些盐可以形成的各种水化合物或结晶。其中四环素类抗生素可以是任意一种可药用的盐，包括盐酸盐、乙酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、连二硫酸盐、磷酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、延胡索酸盐、双羟萘酸盐、氯苯氧基乙酸盐、羟乙酸盐、门冬氨酸盐、甲磺酸盐、马来酸盐、对氯苯氨基异丁酸盐、甲酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、环己烷羧酸盐、己酸盐、辛酸盐、十六酸盐、十八酸盐、十八烷酸盐、苯磺酸盐、三甲氧基苯甲酸盐、对甲苯磺酸盐、金刚烷羧酸盐、谷氨酸盐、吡咯烷酮羧酸盐、萘磺酸盐、1-葡糖磷酸盐、palmaoate、glycoxylate。优选盐酸盐、延胡索酸盐、双羟萘酸盐和氯苯氧基乙酸盐。
3)根据权利要求2描述的制剂，其特征在于该制剂是其所含有的抗生素可以是四环素类抗生素中的任意一种或任意两种，如土霉素、甲烯土霉素、脱氧土霉素、四环素、氢吡四环素、赖氨四环素、强力霉素、米诺环素、去甲金霉素等。优选地采用强力霉素、米诺环素、去甲金霉素等。
4)根据权利要求2描述的制剂，其特征在于该制剂是含有1mg-100g/支溶菌酶，优选地，溶菌酶含量在10mg-1000mg之间。
5)根据权利要求2描述的制剂，其特征在于溶菌酶和四环素类抗生素的各自用量比值根据制剂形式和用途相应地变化，两者可药用盐的重量比值范围为20∶1-1∶20，优选地5∶1-1∶5。
6)根据权利要求2描述的制剂，其特征在于该制剂是含有一种或多种辅助剂或/和赋型剂，其辅助剂/赋形剂可以是缓冲液、稳定剂、防腐剂、增溶剂、张度剂和悬浮剂，这些辅助剂/赋形剂包括基于有机磷酸盐的缓冲液、生理盐水、葡萄糖注射液等；甲基纤维素、羟乙基纤维素、阿拉伯胶和羧甲基纤维素钠；聚氧乙烯、吐温80、姻酰胺或Macrogol固化的蓖麻油；亚琉酸钠和焦亚硫酸钠；对一羟苯甲酸钠、抗坏血酸、甲酚和氯甲酚；低分子右旋糖苷等，以及其他任意可以药用的辅料。
7)根据前述权利要求所描述的制剂，其特征在于该制剂是注射用粉针、注射用冻干粉针、注射液、大输液等注射制剂形式。
8)根据权利要求7描述的制剂，其特征在于该制剂所描述的注射液是按如下方法制备的首先制备两种无菌注射用溶菌酶和强力霉素原料，然后将两种原料和辅料溶于注射液中充分混合，调节pH、澄明度及含量合格后无菌过滤分装密封后，制备成1-20ml容量的注射液。其中注射液可以是生理盐水、葡萄糖注射液或其他可药用的溶液。上面的制备方法中是以强力霉素作为四环素类抗生素为范例的，强力霉素可以用权利要求3所描述的任意一种抗生素所替代。
9)根据权利要求7描述的制剂，其特征在于该制剂所描述的注射用粉针制剂是按如下方法制备的采用两种无菌注射用溶菌酶和强力霉素原料加上药用辅料充分混合，分装密封后，制备成注射用粉针。上面的制备方法中是以强力霉素作为四环素类抗生素为范例的，强力霉素可以用权利要求3所描述的任意一种抗生素所替代。
10)根据权利要求7描述的制剂，其特征在于该制剂所描述的冻干粉针制剂是按如下方法制备的采用注射用无菌原料溶菌酶、强力霉素和药用辅料充分溶解于注射液中，调节pH值、澄明度及含量合格后无菌过滤分装，冻干后密封，制备成无菌冻干粉针。上面的制备方法中是以强力霉素作为四环素类抗生素为范例的，强力霉素可以用权利要求3所描述的任意一种抗生素所替代。
11)根据权利要求7描述的制剂，其特征在于该制剂所描述的大输液制剂是按如下方法制备的首先制备两种无菌注射用溶菌酶和强力霉素原料，然后将两种原料和药用辅料溶于注射液中充分混合，调节pH值、澄明度及含量合格后无菌过滤分装密封后，制备成50-500ml容量的注射液。其中注射液可以是生理盐水、葡萄糖注射液或其他可药用的溶液。上面的制备方法中是以强力霉素作为四环素类抗生素为范例的，强力霉素可以用权利要求3所描述的任意一种抗生素所替代。
全文摘要
本发明涉及一种新的溶菌酶复方制剂方式。该制剂是含有溶菌酶和四环素类抗生素的复方注射制剂，包括注射用粉针、注射用冻干粉针、注射液、大输液，其中含有1mg－100g/支的溶菌酶和相应比例量的抗生素。该制剂临床上适用于各种感染性疾病的治疗，以及与其他抗生素合用增强疗效，用于各种难治的感染病症以及癌症的辅助治疗。
文档编号A61P35/00GK1785428SQ200410052570
公开日2006年6月14日 申请日期2004年12月8日 优先权日2004年12月8日
发明者王霆, 孙明杰 申请人:广州威尔曼新药开发中心有限公司