专利名称：抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制剂的制备方法，具体是一种抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法。用于生物工程领域。
背景技术：
幽门螺杆菌在人群中具有较高的感染率，发达国家达50％左右，发展中国家可达80％左右。由于部分幽门螺杆菌感染者会发展为慢性胃炎、十二指肠肠炎、消化性溃疡、胃癌、粘膜相关性淋巴瘤疾病，世界卫生组织癌症中心于1994年宣布幽门螺杆菌为第一类致癌因子。根除幽门螺杆菌感染可以降低胃癌的发病率和死亡率。临床治疗幽门螺杆菌及相关性胃炎常用的方法是将抑制胃酸分泌的药物与多种抗生素联用，一般幽门螺杆菌的清除率达80-90％。但由于化学治疗方法容易出现细菌耐药的情况，对胃病患者的副作用较大，且不能达到预防的效果，反复感染更易引起严重后果。自1992年Yokoyama等发现卵黄抗体能治疗仔猪大肠杆菌性腹泻以来，卵黄抗体已广泛应用于消化道疾病的防治中。卵黄中的IgY耐消化道屏障，性质稳定。
经对现有技术的文献检索发现，中国专利申请号01129140，发明名称抗幽门螺杆菌细胞毒素鸡卵黄抗体制备及其应用，公开号1354187，该专利研制了抗幽门螺杆菌细胞毒素鸡卵黄抗体，但是该专利需对卵黄抗体进行提纯后使用，制备工艺繁琐，成本高。
发明内容
本发明针对现有技术的不足和缺陷，在强化免疫的基础上，提供一种抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法，使其建立抗幽门螺杆菌抗体效价检测方法，将具有生物活性的卵黄抗体制备成无副作用的能直接饮用的口服生物制剂或利于保存的粉剂。该制剂也可作为保健品或生物制药的原料。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明将幽门螺杆菌疫苗强化免疫供试鸡后用胶乳凝集试验进行效价测定，当效价达1∶40以上时收集免疫卵，效价低于1∶40时进行第三次免疫。收获卵黄用无菌蒸馏水对倍稀释，用乳酸液调pH4.4进行酸处理去除杂蛋白、0.7％邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素处理和-40℃冻融处理，去除脂质，抽滤液放56℃水浴箱处理30分钟，经微生物检验合格后即成安全的口服生物制剂。其幽门螺杆菌IgY的得率达90％以上，活性不受任何影响，喷雾干燥成粉剂后IgY的活性不变。
本发明的基本原理是利用家禽作为生物反应器生产各类生物活性物质。当供试鸡免疫后即产生特异性抗体，血液中的抗体逐渐进入卵黄并蓄积。该抗体稳定，经口服后能抵抗胃酸的破坏，活性物质封闭胃中的特异性病原入侵受体或直接中和特异性病原体或毒素，从而达到预防和治疗的目的。
本发明的有益效益是感染幽门螺杆菌的病人，可直接口服生物制剂替代药物治疗，也可辅助其他消化道类疾病的治疗，添加于保健品中口服，可预防幽门螺杆菌的感染。该方法成本低，见效快，无副作用，不会产生耐药性菌株。
具体实施例方式
实施例1饲养无特定病原级经产蛋鸡，第一次免疫幽门螺杆菌疫苗，免疫剂量每头份0.5ml。间隔10天进行第二次免疫，免疫剂量为1ml。免疫14天后，用胶乳凝集试验进行效价测定，当效价达1∶40以上时收集免疫卵，无菌获取卵黄，用乳酸液调pH4.4进行酸处理去除杂蛋白、0.7％邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素处理和-40℃冻融处理，以去除脂质，抽滤液放56℃水浴箱处理30分钟经微生物检验合格后备用，或将抽滤液喷雾干燥，粉剂封装保存。其免疫球蛋白的得率达90％以上。
实施例2饲养无特定病原级经产蛋鸡，第一次免疫幽门螺杆菌疫苗，免疫剂量每头份0.5ml。间隔10天进行第二次免疫，免疫剂量为1ml。免疫14天后，用胶乳凝集试验进行效价测定，当效价低于1∶40时，进行第三次免疫，免疫剂量为1ml，14天后收集免疫卵，其后抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法同实施例1。
幽门螺杆菌阳性病人，每天口服生物制剂，连用2周，能有效清除幽门螺杆菌，或制备于保健品，或用于治疗幽门螺杆菌的药物中。
权利要求
1.一种抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法，其特征在于，将幽门螺杆菌疫苗强化免疫供试蛋鸡后用胶乳凝集试验进行效价测定，收获卵黄用无菌蒸馏水对倍稀释，用乳酸液进行酸处理去除杂蛋白、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素处理和冻融处理，去除脂质，抽滤液水浴箱处理和微生物检验合格后即成安全的口服生物制剂。
2.根据权利要求1所述的抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法，其特征是，所述的效价测定，当效价达1∶40以上时收集免疫卵，效价低于1∶40时进行第三次免疫。
3.根据权利要求1所述的抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法，其特征是，所述的酸处理，pH值为4.4，邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素为0.7％邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素。
4.根据权利要求1所述的抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法，其特征是，所述的冻融处理温度为-40℃。
5.根据权利要求1所述的抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法，其特征是，所述的抽滤液放56℃水浴箱处理30分钟。
全文摘要
一种抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法，用于生物工程领域。本发明将强化免疫卵黄用无菌蒸馏水对倍稀释，用乳酸液进行酸处理去除杂蛋白、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素处理和冻融处理，去除脂质，抽滤液水浴箱处理，经微生物检验合格后即成安全的口服生物制剂。本发明的有益效益是感染幽门螺杆菌的病人，可直接口服生物制剂替代药物治疗，也可辅助其他消化道类疾病的治疗，添加于保健品中口服，可预防幽门螺杆菌的感染。该方法成本低，见效快，无副作用，不会产生耐药性菌株。
文档编号A61K39/395GK1660424SQ200410093088
公开日2005年8月31日 申请日期2004年12月16日 优先权日2004年12月16日
发明者刘永德, 徐建雄, 汪毅 申请人:上海交通大学