专利名称：包括i.a.维生素c,镁,绿茶提取物的延缓心血管疾病的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及缓解哺乳动物病理状态的药物组合物和方法。本发明提供了缓解哺乳动物病理状态的药物组合物，该药物组合物包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，维生素C，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种选自载体，稀释剂以及赋形剂所组成的组的药学上可接受的成分，其中不含有可接受成分的药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％绿茶提取物。本发明还提供了使用该药物组合物的治疗方法。
本申请是2003年9月5日提交的美国申请号第10/657,019号的部分继续申请，因此将其引入作为参考。
在西方国家和全世界心血管疾病是死亡的主要原因。不利的心血管事件多数由冠状动脉和大脑动脉发生粥样硬化病变引起。动脉平滑肌细胞的异常生长是发生动脉粥样硬化的最重要的步骤之一。出于对病理性刺激的反应，平滑肌细胞首先从动脉壁的中层向内膜层移动，然后在内膜层增殖。这些事件在动脉粥样硬化斑块的最初形成中是至关重要的。在许多心血管疾病包括高血压，动脉粥样硬化，心肌缺血，梗塞和中风中在内膜层中发生粥样硬化病变(R.Ross，CellularMechanisms of Atherosclerosis，Atherosclerosis Review，103，第25卷，195-200页)。因此，需要预防使平滑肌细胞生长的病理性刺激。急性或慢性低水平的炎症反应，均是使刺激和加速粥样硬化病变的发生的恶化因素。作为动脉粥样硬化过程的一部分，血管壁包括内皮组织会发生单核细胞浸润。在动脉壁内存在的单核细胞会蓄积被氧化的脂质，结果过度负载脂质，变成泡沫细胞。泡沫细胞是粥样硬化病变的主要特征之一。因此需要在动脉壁中减少或延缓这些泡沫细胞的形成，和单核细胞从血流到动脉壁的募集。出于对由动脉平滑肌细胞分泌的炎症介质的发应，单核细胞附着于动脉壁。这些介质包括MCP-1。粘附分子例如P-选择蛋白和ICAM-1的表达有利于单核细胞最初附着于动脉壁然后在动脉壁内渗透的过程。炎症反应级联还包括白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1(IL-1)的表达和分泌。这些介质具有至少两种作用。它们触发全身炎症反应包括进一步的单核细胞的募集反应。另一个作用是该细胞因子能够影响平滑肌细胞的自分泌反应，这意味着这些细胞能够在恶性的病理细胞刺激循环中连续释放这些炎症介质。因此，还需要减少炎症反应介质例如IL-1，IL-6，MCp-1和其它的表达和释放。
因此，长期需要提供安全和有效的主要是缓解哺乳动物中使心血管异常，以及与慢性或低水平炎症反应有关的病理性组分(pathological composition)的药物组合物和方法。还需要治疗动脉粥样硬化和炎症的化合物和物质，它们不具有副作用。还需要延缓动脉粥样硬化，动脉硬化发生的化合物和物质，以及使用低成本的非药物的物质和化合物而不是昂贵的药物来延缓慢性和低水平的炎症反应。
因此，本发明的主要技术问题可以看作是提供符合上述要求的手段和方法。特别地，本发明的一个目标是提供用于缓解哺乳动物病理状态的药物组合物。病理状态包括动脉粥样硬化和动脉硬化。
通过权利要求书和下文中描述的实施方案解决了上述技术问题，即治疗了病理状态。因此，本发明提供了治疗病理状态的药物组合物和方法。
因此，本发明提供缓解哺乳动物病理状态的药物组合物，该药物组合物包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，维生素C，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种选自载体，稀释剂以及赋形剂组成的组的药学上可接受的成分，其中不含有药学上可接受成分的药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％绿茶提取物。
优选地，本发明涉及的哺乳动物是人，狗，猫或马。更优选地，人是指经绝后的妇女。
本发明提供缓解哺乳动物中与动脉粥样硬化，动脉硬化有关的病理状态，以及与慢性或低水平炎症反应有关的病理状态的方法，包括给需要治疗的哺乳动物施用有效量的药物组合物的步骤，所述药物组合物包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，维生素C，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种选自载体，稀释剂以及赋形剂组成的组的药学上可接受的成分，其中不含有药学上可接受成分的药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％绿茶提取物。
本发明提供缓解哺乳动物中与动脉粥样硬化，动脉硬化有关的病理状态，以及与慢性或低水平炎症反应有关的病理状态的方法，包括给需要治疗的哺乳动物施用有效量的药物组合物的步骤，所述药物组合物包括进一步的以下比例的化合物约25,000份赖氨酸，约15,000份脯氨酸，约8,000份精氨酸，约80,000份抗坏血酸，约30,000份镁，约50,000份绿茶提取物，约15,000份的N-乙酰基-半胱氨酸，约5份硒，约50份铜，以及约200份锰，其中该药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％的绿茶提取物。应该理解本发明所指的份数不是绝对值。更确切地，它们用来限定其中物质存在的比例。例如，如果组合物包括12.5份赖氨酸和7.5份脯氨酸，则如本发明所提及，该组合物含有的赖氨酸和脯氨酸的比例为25,000份赖氨酸(12.5的2,000倍)和15,000份脯氨酸(7.5的2,000倍)。更优选地，如上所述施用的药物组合物包括约25mg赖氨酸，约15mg脯氨酸，约8mg精氨酸，约80mg抗坏血酸，约30mg镁，约50mg绿茶提取物，约15mgN-乙酰基-半胱氨酸，约5mcg硒，约50mcg铜，和约200mcg锰，其中该药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％的绿茶提取物。
本发明提供缓解哺乳动物中与动脉粥样硬化，动脉硬化有关的病理状态，以及延缓与慢性或低水平炎症反应有关的病理状态的方法，包括给需要治疗的哺乳动物施用有效量的药物组合物的步骤，所述药物组合物包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，维生素C，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种选自载体，稀释剂以及赋形剂组成的组的药学上可接受的成分，其中该药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％绿茶提取物。
任选地，该组合物的有效量为约0.3mg/kg赖氨酸，0.2mg/kg脯氨酸，0.1mg/kg精氨酸，1.1mg/kg维生素C，0.4mg/kg镁，0.7mg/kg绿茶提取物，以及0.2mg/kg N-乙酰基-半胱氨酸的日剂量。
优选地，该药物组合物为口服或肠胃外形式。更优选地，口服形式为片剂或胶囊。优选地，可由口服，静脉内或肠胃外施用药物组合物。
本发明提供治疗与慢性或低水平炎症反应有关的病理状态的组合物，其包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，抗坏血酸，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰。
治疗慢性或低水平炎症反应的方法可以随不同范围的副反应在个体之间变化。但是这通常包括口服施用活性组合物，该组合物包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，维生素C，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种选自载体，稀释剂，以及赋形剂组成的组的药学上可接受的成分，其中不含有药学上可接受成分的药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％的绿茶提取物。优选地，在单个药丸中该组合物包括以下比例的下列化合物约25,000份赖氨酸，约15,000份脯氨酸，约8,000份精氨酸，约80,000份抗坏血酸，约30,000份镁，约50,000份的绿茶提取物，约15,000份N-乙酰基-半胱氨酸，约5份硒，约50份铜以及约200份锰，其中该药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％的绿茶提取物。更优选地，单个药丸包括约25mg赖氨酸，约15mg脯氨酸，约8mg精氨酸，约80mg抗坏血酸，约30mg镁，约50mg绿茶提取物，约15mg N-乙酰基-半胱氨酸，约5mcg硒，约50mcg铜以及约200mc g锰，其中该药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％的绿茶提取物。
通过施用单个药丸或胶囊，该组合物可递送的剂量为约0.3mg/kg赖氨酸，0.2mg/kg脯氨酸，0.1mg/kg精氨酸，1.1mg/kg维生素C，0.4mg/kg镁，0.7mg/kg绿茶提取物，和0.2mg/kgN-乙酰基-半胱氨酸。任选地每天重复施用药丸或胶囊以有效延缓慢性或低水平的炎症。
本发明的药物组合物显示可有效抑制平滑肌细胞的增殖。因此该组合物在诸如抗高血压药的应用中具有临床意义。通过减少平滑肌细胞增殖，该组合物可用作血管扩张剂和减少末梢血管总阻力。此外，本发明的药物组合物显示了可抑制平滑肌增殖，平滑肌增殖是动脉粥样硬化发生和发展的一个原因。在下面的体外试验中本发明显示了本发明组合物作为增殖抑制剂的药力效果(通过掺入3H-脱氧胸腺嘧啶苷进行测定)。因此，该组合物可减少动脉粥样硬化的发病。本发明的药物组合物还可抑制平滑肌的移动，因此减少动脉粥样硬化的发生和发展。在动脉粥样硬化过程中，在形成新内膜的发病机制中中层的平滑肌细胞向内膜的趋化性移动是重要的第一步。PDGF被认为是促进平滑肌细胞移动的关键物质(Russel R.(1986)N.Engl.J.Med.314488-500)。因此本发明公开的组合物在体内抑制肌内膜形成的能力部分地与直接抑制血管平滑肌从中膜向内膜的物理迁移有关。因此，在另一个实施方案中，本发明提供包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，抗坏血酸，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种选自药学上可接受的赋形剂的药物组合物，该药物组合物用于抑制哺乳动物，优选人的平滑肌细胞的增殖，特别用于抑制那些有发生心脏疾病危险的人的血管平滑肌细胞的增殖；该组合物可用于抑制动脉粥样硬化的发生。在另一个实施方案中，本发明还提供一种治疗方法，该方法用于抑制哺乳动物，优选人的平滑肌细胞的增殖和移动，尤其是用于预防那些有发生心脏疾病危险的人的血管平滑肌细胞的增殖的方法，该方法可用于抑制动脉粥样硬化的发生；上述方法包括给需要该组合物的患者施用有效剂量的本发明公开的药物组合物，该药物组合物包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，抗坏血酸，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种药学上可接受的赋形剂。本发明的药物组合物显示可有效抑制由许多种类的不同促细胞分裂剂所介导的血管平滑肌细胞的增殖和移动。
本发明的组合物可有效抑制雌激素诱导的平滑肌细胞增殖和侵袭。它们可调节血压和动脉粥样硬化(atheroscloerotic)斑块的发生。各成分例如赖氨酸和脯氨酸的组合效果可以预防严重的结缔组织降解，这又可减少增殖和侵袭过程。此外，绿茶提取物和维生素C由于它们的抗氧化特性也可以减弱结缔组织的降解。已经令人惊奇地发现，在本发明组合物中存在的成分可协同对抗心血管降解和癌症发生中雌激素的作用。有利地，提供一种安全和有效缓解哺乳动物上述病理性组分的药物组合物和治疗方法，其察觉不到与本发明化合物和物质有关的副反应。此外，本发明的药物组合物和治疗方法以及用途使用低成本的非药物物质和化合物而不是昂贵的药物。
当在这里使用时，术语“缓解”用来指减少，抑制，减弱或治疗本发明涉及的病理状态所具有的综合症。通过监测上述病理状态所具有的症状，缓解对于临床医师而言是显而易见的。在标准的教科书如Stedman或Pschyrembel中对上述症状有详细记载。优选地缓解指显著的减少，抑制，减弱或治疗。显著性可以通过常规的统计学方法例如Student氏t测验，卡方检验及其他方法进行测定。优选地，本发明所涉及的综合症是经绝后接受雌激素治疗的妇女通常具有的那些。“雌激素治疗综合症”是公知的术语，在这里主要指在接受雌激素替代疗法的妇女中存在的心血管和肿瘤问题包括高血压，动脉粥样硬化(atheroscloerosis)和乳癌。
术语“有效量”指能够缓解本文所述各种病理状态症状的本发明组合物的量。
术语“药学可接受的”指必须与制剂中其它成分相容，对受者无毒的载体、稀释剂和赋形剂。
″Wt％″指成分占组合物总重量的比例；例如25wt％的赖氨酸指组合物总重量的25％由赖氨酸组成。
术语″大约″指所涉及的值可在一定范围变化。但是上述值必须足够以达到本发明所涉及组合物的效果。通过常规的技术包括在附加的实施例中涉及的那些测定方法可测定给定的化合物的值能否达到这些效果。优选地，上述值在由本发明所涉及的统计学检验方法所计算的标准偏差范围内变化。更优选地，上述值的变化是±20％，±15％，±10％，±5％，±2％，±1％或±0.5％。更优选地，术语“大约”指具体的值。
当在这里使用时，″赖氨酸″包括赖氨酸盐，优选羟赖氨酸和羟赖氨酸盐。典型地，以大约0.3mg/kg的日剂量施用L-赖氨酸。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用L-赖氨酸。对于体重为72kg的普通个体，推荐的每单一施用赖氨酸的总的量为约25毫克(mg)。
当在这里使用时，″脯氨酸″包括脯氨酸，脯氨酸盐，羟脯氨酸和羟脯氨酸盐。典型地，以大约0.2mg/kg的日剂量施用L-脯氨酸。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用L-脯氨酸。对于体重为72kg的普通个体，推荐的每单一施用脯氨酸的总的量为约15毫克(mg)。
当在这里使用时，″精氨酸″包括精氨酸和精氨酸盐。典型地，以大约0.1mg/kg的日剂量施用L-精氨酸。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用L-精氨酸。对于体重为72kg的普通个体，推荐的每单一施用精氨酸的总的量为约8毫克。
当在这里使用时，″维生素C″包括抗坏血酸，抗坏血酸盐及其衍生物。当在这里使用时，抗坏血酸和维生素C可互换，优选地包括抗坏血酸钙，抗坏血酸镁或抗坏血酸棕榈酸盐。典型地，以大约0.4mg/kg的日剂量施用抗坏血酸.可以口服剂型一天一次，两次或三次施用抗坏血酸。对于体重为72kg的普通个体，推荐的每单一施用精氨酸的总的量为约80毫克。在本申请中所请求保护的不同化合物可以共价键合的化合物的形式或作为物理混合物或以任何其它组合的形式一起使用。
本发明提供了包括抗坏血酸化合物，脯氨酸，赖氨酸或其任意组合的药物组合物。因此本发明不限于抗坏血酸，脯氨酸或赖氨酸，而包括任何可使用的与本发明优选的用途一致的等价结构。
当在这里使用时，″绿茶提取物″指在绿茶中存在的多酚化合物。在绿茶中存在的多酚化合物可达30％干重。它们包括黄烷醇，黄烷双醇，类黄酮，以及酚酸。黄烷醇是绿茶中最丰富的多酚，就是通常已知的儿茶素。绿茶提取物中主要的儿茶素包括1)(-)-表儿茶素，2)(-)-表儿茶素-3-没食子酸酯，3)(-)-表没食子儿茶素，和4)(-)-表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)。在这些儿茶素中，EGCG是在绿茶中存在的主要多酚成分。当在这里使用时，绿茶提取物含有约80％重量的多酚并且不含有咖啡因。
可以大约0.7mg/kg的日剂量施用绿茶提取物。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用绿茶提取物。对于平均体重为72kg的个体，推荐的每日施用绿茶提取物的总的量为约50毫克。
当在这里使用时，″N-乙酰基-半胱氨酸″包括半胱氨酸或胱氨酸(半胱氨酸的二聚体)以及半胱氨酸的盐。可以大约0.2mg/kg的日剂量施用N-乙酰基-半胱氨酸。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用N-乙酰基-半胱氨酸。对于平均体重为72kg的个体，推荐的每单一施用N-乙酰基-半胱氨酸的总的量为约15毫克。
本发明进一步提供矿物质和/或微量元素。微量元素有助于催化产生结缔组织所需的这些大分子。本发明优选的微量元素是铁，铜，锌，锰，钴，钼，硒，铬，镍，锡，氟或钒。
可以大约0.7mg/kg的日剂量施用镁。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用镁。对于平均体重为72kg的个体，推荐的每单一施用镁的总的量为约30毫克。
可以大约0.00007mg/kg的日剂量施用硒。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用硒。对于平均体重为72kg的个体，推荐的每单一施用硒的总的量为约5mcg。
可以大约0.0007mg/kg的日剂量施用铜。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用铜。对于平均体重为72kg的个体，推荐的每单一施用铜的总的量为约50mcg。
可以大约0.04mg/kg的日剂量施用锰。可以口服剂型一天一次，两次或三次施用锰。对于平均体重为72kg的个体，推荐的每单一施用锰的总的量为约200mcg。
根据本发明，组合物中某些组分的存在量很高。与组合物总重量相比，维生素C的存在量为20-30wt％(与不包括载体，赋形剂，填充剂，添加剂等的组合物总重量相比)。绿茶提取物的存在量为11-25wt％(与组合物总重量相比)，镁的存在量为7-9％(与组合物总重量相比)。
组合物任选地包括一种或多种以下物质维生素A，维生素D3，维生素E，维生素B1，维生素B2，烟酸，维生素B6，叶酸，维生素B12，生物素，泛酸，钙，磷，锌，铬，钼，Pottasium，柑橘生物类黄酮，肌醇，L-卡尼汀，辅酶Q10，氨基葡萄糖，牛磺酸和硫酸软骨素。优选地上述组合物包括下列比例的物质191IU(国际单位)的维生素A，20IU的维生素D3，10IU的维生素E，1,500份维生素B1，1,500份维生素B2，10,000份烟酸，1,500份维生素B6，75份叶酸，3.3份维生素B12，10份生物素，5,000份泛酸，15,000份钙，2,500份磷，2,500份锌，5份铬，0.5份钼，5,000份Pottasium，15,000份柑橘生物类黄酮，5,000份肌醇，5,000份L-卡尼汀，2,500份辅酶Q10，25,000份氨基葡萄糖(N-乙酰基-D-氨基葡糖)，50,000份牛磺酸，和15,000硫酸软骨素。更优选地，这些物质任选地为大约下述量191IU(国际单位)维生素A，20IU维生素D3，10IU维生素E，1.5mg维生素B1，1.5mg维生素B2，10mg烟酸，1.5mg维生素B6，75mcg叶酸，3.3mcg维生素B12，10mcg生物素，5mg泛酸，15mg钙，2.5mg磷，2.5mg锌，5mcg铬，0.5mcg钼，5mgPottasium，15mg柑橘生物类黄酮，5mg肌醇，5mg L-卡尼汀，2.5mg辅酶Q10，25mg氨基葡萄糖(N-乙酰基-D-氨基葡糖)，50mg牛磺酸和15mg硫酸软骨素。
本发明的组合物可用于治疗或抑制特点为过度平滑肌细胞增殖(平滑肌细胞过度增殖)的心血管疾病。由临床医师使用常规技术能够确定一种疾病的特点是否为过度平滑肌细胞增殖。这样的常规技术包括基于体内抗体的技术，活组织检查后的组织学的组织样品分析或组织样品的流式细胞计量术。该组合物特别适合用于治疗经常由平滑肌细胞过度增殖引起的高血压和动脉粥样硬化。动脉粥样硬化与胆固醇代谢有关。已知弱化的结缔组织可促进动脉壁中斑块的形成。因此本发明提供了有效量的抗坏血酸化合物，赖氨酸和脯氨酸以增强结缔组织。已知抗坏血酸可刺激由成纤维细胞和相关细胞合成胶原，弹性蛋白以及其它结缔组织大分子。氨基酸赖氨酸和脯氨酸是合成结缔组织分子所需的主要氨基酸。
所需剂量根据施用途径，存在的症状的严重程度以及特定的治疗对象而变。通过口服施用推荐的日剂量的组合物。推荐的日剂量为约0.3mg/kg赖氨酸，0.2mg/kg脯氨酸，0.1mg/kg精氨酸，1.1mg/kg维生素C，0.4mg/kg镁，0.7mg/kg绿茶提取物以及0.2mg/kg N-乙酰基-半胱氨酸。任选每天重复施用药丸或胶囊以有效延缓慢性或低水平的炎症。
本发明的组合物可通过不同途径施用包括，但不限于口服，静脉内或经肠胃外施用。口服，静脉内或经肠胃外施用的准确剂量可以变化，这基于经验和受治疗的单个患者而确定。优选地，药物组合物为单元剂型如片剂或胶囊。在这样的剂型中可将组合物分成含有适宜数量活性成分的单位剂量；单位剂型可以是包装的组合物，例如包装的粉末，小瓶或安瓿。单位剂型本身可以是例如胶囊，药丸或片剂或其可以是包装形式的适宜数目的任何这样的组合物。
本发明的另一个方面是提供有效量的组合物和药学上可接受的载体，稀释剂或赋形剂。
本发明的另一个方面是提供包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，抗坏血酸，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜和锰的药物组合物。
可通过本领域已知的方法，使用众所周知的和易购的成分制备本发明的药物制剂。例如，可将本发明组合物的成分和通常的赋形剂，稀释剂或载体一起配制形成片剂，胶囊，混悬液，粉末等。适合这样的制剂的赋形剂，稀释剂以及载体的的实例包括下列物质填充剂和增量剂例如淀粉，糖，甘露醇以及硅衍生物；粘合剂例如羧甲基纤维素和其它纤维素衍生物，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂例如甘油；崩解剂例如碳酸钙和碳酸氢钠；延缓溶解的试剂例如石蜡；重吸收促进剂例如季胺类化合物；表面活性剂例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；吸附载体例如高岭土和膨润土；以及润滑剂例如滑石粉，硬脂酸钙和硬脂酸镁以及固体聚乙二醇。
可将本发明的治疗化合物配制成可使其使用最佳化或便于其使用的药物组合物。特别地，药物组合物含有治疗动脉粥样硬化，动脉硬化，以及延缓慢性或低水平炎症反应的有效量。这样的药物组合物经常含有药学上可接受的载体或稀释剂，以及如果适合，含有赋形剂。
还可将该组合物配制成便于口服施用的酏剂或溶液，或适合肠胃外施用，例如通过肌内、皮下或静脉内途径施用的溶液。理想的制剂形式是丸剂，片剂，胶囊，锭剂，液体或类似的剂型。该组合物很适合配制成持续释放剂型，诸如此类。可以这样配制该制剂以使它们只释放活性成分或优选地可在一段时间内在特定的生理部位释放活性成分。可由例如聚合物质或蜡制备包衣，外壳或保护基质。
可通过本领域已知的方法，使用众所周知的和易购的成分制备本发明的药物制剂。例如，可将含有或不含有雌激素或孕激素化合物的配方I的化合物和通常的赋形剂，稀释剂或载体一起配制形成片剂，胶囊，混悬液，粉末等。适合这样的制剂的赋形剂，稀释剂以及载体的的实例包括下列物质填充剂和增量剂例如淀粉，糖，甘露醇以及硅衍生物；粘合剂例如羧甲基纤维素和其它纤维素衍生物，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂例如甘油；崩解剂例如碳酸钙和碳酸氢钠；延缓溶解的试剂例如石蜡；重吸收促进剂例如季胺类化合物；表面活性剂例如鲸蜡醇，单硬脂酸甘油酯；吸附载体例如高岭土和膨润土；以及润滑剂例如滑石粉，硬脂酸钙和硬脂酸镁以及固体聚乙二醇。
还可将该混合物配制成便于口服施用的酏剂或溶液，或适合肠胃外施用，例如通过肌内、皮下或静脉内途径施用的溶液。另外，该混合物很适合配制成持续释放剂型，诸如此类。可以这样配制该制剂以使它们只释放活性成分或优选地可在一段时间内在特定的生理部位释放活性成分。可由例如聚合物质或蜡制备包衣，外壳或保护基质。
除非另外定义，这里使用的所有科学术语具有与本领域普通技术人员的通常理解相同的含义。下文描述了示例性的方法和材料，可以使用它们的等价物。这里提及的所有出版物和参考文献均完整引入作为参考。
附图表示
图1表示与相同浓度的EGCG相比XR296对抑制平滑肌细胞生长的影响。在人平滑肌细胞中掺入的[3H]脱氧胸腺嘧啶苷是de novo DNA合成和细胞生长的指示物。以对照组值(100％)的百分数表示掺入的脱氧胸腺嘧啶苷。
图2表示与相同浓度的抗坏血酸相比XR296对抑制平滑肌细胞生长的影响。在人平滑肌细胞中掺入的[3H]脱氧胸腺嘧啶苷是de novoDNA合成和细胞生长的指示物。以对照组值(100％)的百分数表示掺入的脱氧胸腺嘧啶苷。
图3表示本发明组合物(XR296)(100mcg/ml)和某些单个组分以XR296中存在的浓度对TNFα刺激的平滑肌细胞分泌IL-6的影响的比较图。
图4表示本发明组合物(XR296)(20mcg/ml)和其某些单个组分以相当于在4倍该浓度(80mcg/ml)的XR296中存在的浓度对脂多糖诱导的平滑肌细胞分泌IL-1β的影响的比较图。
图5表示本发明组合物(XR296)(20mcg/ml)和该组合物的某些单个组分以相当于在160mcg/ml的XR296中的浓度对10ng/ml TNFα刺激的平滑肌细胞分泌MCP-1的影响的比较图。
图6表示本发明组合物(XR296)(2.2mcg/ml，6.7mcg/ml，和20mcg/ml)和其某些单个组分以相当于在4倍该浓度(80mcg/ml)的XR296中存在的浓度对脂多糖诱导平滑肌细胞分泌P-选择蛋白的影响的比较图。
图7表示本发明组合物(XR296)(20mcg/ml)和该组合物的某些单个组分以相当于在160mcg/ml的XR296中的浓度对10ng/ml TNFα刺激的平滑肌细胞分泌ICAM-1的影响的比较图。
提供以下实施例以进一步解释本发明。这并不意味着通过以下任何一个实施例限制本发明的范围。应该理解公开的优选实施方案不是用于限制本发明，而是说其包括的所有改进和可供替代的组成均在本发明的精神和范围内。
实施例试验原理和方案平滑肌细胞生长速率测定原理如上所述，平滑肌细胞的过度生长速率与加速的动脉粥样硬化过程直接相关。根据在培养期间掺入细胞DNA的氚标记的代谢前体的量来对de novo DNA合成(即掺入[3H]胸腺嘧啶脱氧核苷)进行估算以估计培养细胞的生长速率。
以平滑肌细胞增殖为标志的心血管疾病进程出于对病理性刺激的反应，平滑肌细胞首选从动脉壁的中层向内膜层移动，然后在内膜层增殖。这些事件在动脉粥样硬化斑块的最初形成中是至关重要的。在许多心血管疾病包括高血压，动脉粥样硬化，心肌缺血，梗塞和中风中在内膜层中发生粥样硬化病变(R.Ross，Cellular Mechanisms of Atherosclerosis，Atherosclerosis Review，103，第25卷，195-200页)。本发明的组合物用于抑制平滑肌细胞的侵袭和增殖，由此延缓动脉粥样硬化和动脉硬化进程。
在以下试验中使用的“组合物”指含有特定量的以下特定成分的组合物赖氨酸1克，脯氨酸750mg，精氨酸500mg，抗坏血酸710mg，镁50mg，绿茶提取物1克，N-乙酰基-半胱氨酸200mg，硒30mcg，铜2mg，锰1mg。首先将含有上述组合物的胶囊用培养基质溶解，在使用前稀释至适宜浓度。
图1所示数据表示对平滑肌细胞的体外实验。如图1中所示，表示与相同浓度的EGCG相比XR296对抑制平滑肌细胞生长的影响。在人平滑肌细胞中掺入的[3H]脱氧胸腺嘧啶苷是de novo DNA合成和细胞生长的指示物。图2表示与相同浓度的抗坏血酸相比XR296对抑制平滑肌细胞生长的影响。在人平滑肌细胞中掺入的[3H]脱氧胸腺嘧啶苷是de novo DNA合成和细胞生长的指示物。以对照组值(100％)的百分数表示掺入的脱氧胸腺嘧啶苷。
平滑肌细胞细胞生长速率测定人主动脉平滑肌细胞(SMC)的细胞培养由Clonetics获得。在37℃含有5％CO2的潮湿气氛中将SMC在添加100单位/ml的青霉素，0.1mg/ml链霉素(此后是DMEM)和10％FBS(v/v)的Dulbecco′s改良Eagle培养基中培养，当达到融合时，将其分成1∶3至1∶5。在试验中使用5-8代的SMC。
通过向细胞遗传物质中掺入[3H]-脱氧胸腺嘧啶苷测定SMC增殖。在添加2％FBS的0.5ml DMEM中以每cm210,000个细胞的浓度将细胞接种于24孔板。如试验方案所述，每24小时给附着的细胞提供新鲜的生长介质和添加剂。每天在加入到细胞培养以前通过用DMEM溶解到10mg/ml，剧烈涡旋1分钟，通过0.2μm无菌过滤器过滤直接制备XR296储备液。3天后通过在试验的最后24小时向细胞培养中加入1μCi/ml的[3H]脱氧胸腺嘧啶苷测定细胞增殖。用冷的pH7.2的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞三次，然后在4℃用10％三氯醋酸培养15分钟，用冷乙醇洗涤，风干，用0.5N氢氧化钠溶解，然后用盐酸中和。将样品和闪烁液混合，使用液体闪烁计数器(型号6500LS，BeckmanInstruments，USA)计数。以每孔d/min表示掺入细胞DNA的放射活性。
以平滑肌细胞中细胞因子表达为标志的自分泌炎症反应原理细胞因子的表达和其涉及的炎症反应是已知的。最近人们公认在心血管疾病中出现的血管和平滑肌病状是动脉粥样硬化和高血压期间的炎症反应之一。白介素-6是触发炎症过程的关键细胞因子之一。在病理性刺激下平滑肌细胞中的白介素-6的过度表达可能进一步加重炎症性病变。本发明的组合物用于抑制平滑肌细胞中细胞因子(特别是白介素-6)的过度产生。通过抑制平滑肌细胞中白介素-6的表达，本发明组合物可用作治疗动脉粥样硬化的药物，延缓低水平慢性炎症和炎症反应的影响。
如图3所示，虽然某些成分如抗坏血酸，N-乙酰基半胱氨酸，绿茶提取物，氨基酸如脯氨酸，赖氨酸和精氨酸以比本发明组合物XR296其它成分相对较大的量存在，但实际上镁，锰，铜和硒的存在提供了额外的有益效果。因此，所有成分包括矿物质的存在可提供协同效果，而由其它成分单独或彼此组合但不含有镁，硒，锰和铜则无法提供协同效果。
细胞因子表达测定细胞因子(IL-6，IL-1β，MCP-1，P-选择蛋白和ICAM-1)的产生的水平是炎症反应刺激的标志。另外，这些细胞因子的产生刺激炎症反应的不同阶段。例如IL-6和IL-1β是基础炎症反应的介质，MCP-1是吸引单核细胞从血流到动脉壁的化学引诱物，P-选择蛋白和ICAM-1介导白细胞附着于动脉壁细胞(内皮和平滑肌细胞)。
细胞培养塑料器皿由Costar提供，细胞介质组分由GIBCO提供。其它试剂购自Sigma。在37℃和5％CO2中将人主动脉平滑肌细胞(SMC；Clonetics)在添加青霉素/链霉素和10％胎牛血清(FBS)的DMEM中培养，试验使用第5-8代的细胞。对于细胞因子表达试验，以每孔50,000个细胞将SMC接种于24孔板，生长至汇合。用0.5ml不含有血清的添加0.1％牛血清蛋白和指定量的营养混合物的DMEM替换细胞培养介质。24小时后，用新鲜的含有相同数量的营养混合物和刺激物，10ng/mL肿瘤坏死因子α(TNFα)或0.1mg/mL细菌脂多糖(LPS)或不含刺激物作为对照的新鲜DMEM/BSA介质替换培养介质。在24小时中，收集培养调理介质(incubation conditioned media)，分别在-80℃冷冻以用于细胞因子测定。在37℃用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞层和用0.1NNaOH溶解2小时后，通过BCA蛋白微量法(Pearce)测定细胞蛋白。每孔细胞蛋白的含量与在任何使用的试验条件的未添加样品的对照没有显著性差异表明未消弱细胞生存力。根据制造商的试验方案使用ELISA试剂盒(Quantikine，R&D系统)测定培养调理介质中的细胞因子水平。所有试验测定至少两次，设三复孔。代表性试验的结果以试验样品中平均细胞因子浓度(+/-SD)的形式提供。
如图3所示，比较了本发明组合物(XR296)(100mcg/ml)和某些单个组分以XR296存在的浓度对TNFα刺激的平滑肌细胞分泌IL-6的影响。
图4表示本发明组合物(XR296)(20mcg/ml)和某些单个组分以相当于在4倍该浓度(80mcg/ml)的XR296中存在的浓度对脂多糖诱导的平滑肌细胞分泌IL-1β的影响的比较图。
图5表示本发明组合物(XR296)(20mcg/ml)和该组合物的某些单个组分以相当于在160mcg/ml的XR296中的浓度对10ng/ml TNFα刺激的平滑肌细胞分泌MCP-1的影响的比较图。
图6表示本发明组合物(XR296)(2.2mcg/ml，6.7mcg/ml，和20mcg/ml)和某些单个组分以相当于在4倍该浓度(80mcg/ml)的XR296中存在的浓度对脂多糖诱导平滑肌细胞分泌P-选择蛋白的影响的比较图。
图7表示本发明组合物(XR296)(20mcg/ml)和该组合物的某些单个组分以相当于在160mcg/ml的XR296中的浓度对10ng/ml TNFα刺激的平滑肌细胞分泌ICAM-1的影响的比较图。
权利要求
1.一种药物组合物，包括赖氨酸、脯氨酸、精氨酸、维生素C、镁、绿茶提取物、N-乙酰基-半胱氨酸、硒、铜、锰和一种选自载体、稀释剂以及赋形剂组成的组的药学上可接受的成分，其中不含所述可接受成分的该药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％绿茶提取物。
2.一种组合物在制备用于缓解或延缓其特点为过度平滑肌细胞增殖(平滑肌细胞过度增殖)的心血管疾病的药物组合物中的用途，该组合物包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，维生素C，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种选自载体，稀释剂以及赋形剂组成的组的药学上可接受的成分，其中不含所述可接受成分的该药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％绿茶提取物。
3.根据权利要求2的用途，其中上述疾病为动脉硬化或动脉粥样硬化。
4.一种组合物在制备用于缓解或延缓炎症反应的药物组合物中的用途，该组合物包括赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，维生素C，镁，绿茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，铜，锰和一种选自载体，稀释剂以及赋形剂组成的组的药学上可接受的成分，其中不含所述可接受成分的该药物组合物含有7-9wt％的镁，20-30wt％的抗坏血酸以及11-25wt％绿茶提取物。
5.权利要求2至4任一项的用途，其中该药物组合物可经口服、静脉内或肠胃外施用。
6.权利要求1的药物组合物或权利要求2至5任一项的用途，其中该组合物以如下比例提供下述化合物，约25,000份赖氨酸，约15,000份脯氨酸，约8,000份精氨酸，约80,000份抗坏血酸，约30,000份镁，约50,000份绿茶提取物，约15,000份的N-乙酰基-半胱氨酸，约5份硒，约50份铜，以及约200份锰。
7.权利要求1的药物组合物或权利要求2至5任一项的用途，其中该组合物提供的剂量为约25mg赖氨酸，约15mg脯氨酸，约8mg精氨酸，约80mg抗坏血酸，约30mg镁，约50mg绿茶提取物，约15mgN-乙酰基-半胱氨酸，约5mcg硒，约50mcg铜，和约200mcg锰。
8.权利要求1的药物组合物或权利要求2至5任一项的用途，或权利要求6的药物组合物或用途，其中所述组合物提供的日剂量为约0.3mg/kg赖氨酸，0.2mg/kg脯氨酸，0.1mg/kg精氨酸，1.1mg/kg维生素C，0.4mg/kg镁，0.7mg/kg绿茶提取物，以及0.2mg/kg N-乙酰基-半胱氨酸。
9.权利要求1的药物组合物或权利要求2至5任一项的用途，或权利要求6或7的药物组合物或用途，其中所述组合物进一步含有一种或多种的以下物质维生素A，维生素D3，维生素E，维生素B1，维生素B2，烟酸，维生素B6，叶酸，维生素B12，生物素，泛酸，钙，磷，锌，铬，钼，Pottasium，柑橘生物类黄酮，肌醇，L-卡尼汀，辅酶Q10，氨基葡萄糖，牛磺酸和硫酸软骨素。
10.权利要求8的药物组合物或用途，其中所述组合物包括以下比例的所述物质191IU(国际单位)的维生素A，20IU的维生素D3，10IU的维生素E，1,500份维生素B1，1,500份维生素B2，10,000份烟酸，1,500份维生素B6，75份叶酸，3.3份维生素B12，10份生物素，5,000份泛酸，15,000份钙，2,500份磷，2,500份锌，5份铬，0.5份钼，5,000份Pottasium，15,000份柑橘生物类黄酮，5,000份肌醇，5,000份L-卡尼汀，2,500份辅酶Q10，25,000份氨基葡萄糖(N-乙酰基-D-氨基葡糖)，50,000份牛磺酸，和15,000硫酸软骨素。
11.权利要求8的药物组合物或用途，其中该组合物包括以下比例的下述物质约191IU维生素A，约20IU维生素D3，约10IU维生素E，约1.5mg维生素B1，约1.5mg维生素B2，约10mg烟酸，约1.5mg维生素B6，约75mcg叶酸，约3.3mcg维生素B12，约10mcg生物素，约5mg泛酸，约15mg钙，约2.5mg磷，约2.5mg锌，约5mcg铬，约0.5mcg钼，约5mg Pottasium，约15mg柑橘生物类黄酮，约5mg肌醇，约5mgL-卡尼汀，约2.5mg辅酶Q10，约25mg氨基葡萄糖(N-乙酰基-D-氨基葡糖)，约50mg牛磺酸和/或约15mg硫酸软骨素。
12.权利要求1的药物组合物，权利要求2至5任一项的用途，或权利要求6至9的药物组合物或用途，其中该药物组合物是口服形式。
13.权利要求10的组合物或用途，其中该口服形式为片剂，丸剂或胶囊。
14.权利要求1的药物组合物，权利要求2至5任一项的用途，或权利要求6至9中任一项的药物组合物或用途，其中该药物组合物为肠胃外形式。
全文摘要
本发明提供一种药物组合物，其包括赖氨酸、脯氨酸、精氨酸、维生素C、镁、绿茶提取物、N－乙酰基－半胱氨酸、硒、铜、锰和一种选自载体、稀释剂以及赋形剂组成的组的药学上可接受的成分，其中不含有可接受成分的药物组合物含有7－9wt％的镁，20－30wt％的抗坏血酸以及11－ 25wt％绿茶提取物。还公开了使用该药物组合物治疗心血管疾病的方法，更优选用于治疗经绝后的妇女。
文档编号A61K31/401GK1845729SQ200480025258
公开日2006年10月11日 申请日期2004年8月18日 优先权日2003年9月5日
发明者马赛厄斯·拉思, 阿莱克桑德拉·尼德兹维奇, 瓦迪姆·伊瓦诺夫, 瓦西德·鲁米 申请人:马赛厄斯·拉思