专利名称：一种中药制剂颗粒及其鉴别、含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种维血宁颗粒制剂，同时还涉及维血宁颗粒制剂的鉴别、含量测定方法，属于医药技术领域。
背景技术：
维血宁颗粒是一种具有滋补肝肾、凉血清热功效的经典中药制剂，主治血小板减少症及血热所致的出血。其主要成分在中国药典以及申请号为01100251.4、名称为《纳米维血宁制剂药物》的中国专利申请中均有记载，包括仙鹤草、虎杖、熟地黄、太子参、鸡血藤、地黄、白芍、墨莲旱。在将其制成颗粒剂时，长期以来一直采用加入蔗糖的方法，制成的维血宁颗粒检测项目只有粒度、水分、装量差异、微生物限度等常规项目，无法切实控制其质量。并且由于加入蔗糖，因此糖尿病或高脂血症患者始终是禁忌对象，此外还加大了包装量(每袋20克)。鉴于存在以上问题，因此原剂型存在质量难以控制、适用范围受限、服用剂量大等问题。
发明内容
本发明的要解决的技术问题是针对以上现有技术存在的缺点，研制出一种便于采取科学鉴别测定手段控制其质量的维血宁颗粒，并且该维血宁颗粒应当适用范围较广，同时本发明还给出具有专属性、可以切实控制维血宁颗粒制备质量的鉴别、含量测定方法。
为了解决以上技术问题，本发明的维血宁颗粒包括如下中药成分混合、煎煮、浓缩、醇沉浓缩后所得到的中药浸膏仙鹤草、虎杖、熟地黄、太子参、鸡血藤、地黄、白芍、墨旱莲，还包括加入所述中药浸膏的辅料，所述辅料为至少乳糖、甘露醇、可溶性淀粉中的一种，所述中药浸膏与辅料的重量比例为1∶1～10。
经验表明，乳糖、甘露醇或可溶性淀粉作为辅料不影响某些特定鉴别测定方法的准确性。经反复实验摸索，申请人找到本发明维血宁颗粒的下述三种可行鉴别方法。
鉴别方法之一的步骤为A、制备供试品溶液1)、取维血宁颗粒3～10g，最好为5g，分别加水及1～5mol/L硫酸溶液3～10ml，最好为5ml；2)、置水浴上加热，回流提取，放冷、滤过；3)、滤液用氯仿提取，分取氯仿液，蒸干；4)、残渣加氯仿1～3ml，最好为1ml溶解，作为供试品；B、制备对照品溶液5)、取大黄素1～10mg，最好为5mg，加甲醇制成溶液1～10ml，最好为5ml，作为对照品溶液；C、照薄层色谱法试验鉴别6)、吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；7)、以苯—甲酸乙酯—甲酸为展开剂，展开、取出晾干；8)、通过照薄层色谱法对照试验鉴别；步骤8)的具体作法为以下步骤之一a、直接比对供试品色谱，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的黄色斑点，判定为合格；b、置于紫外灯光下检视，显相同颜色的荧光斑点，判定为合格。
鉴别方法之二的步骤为A、制备供试品溶液
1)、取维血宁颗粒5～15g，最好为10g，研细，加乙醇20～40ml，最好为30ml，超声处理10～30分钟后，最好为20分钟，滤出；2)、滤液蒸干，残渣加乙醇1～5ml，最好为2ml使溶解，作为供试品；B、制备对照溶液3)、取芍药甙1～10mg，最好为5mg，加乙醇1～10ml，最好为5ml，制成溶液，作为对照溶液；C、照薄层色谱法试验鉴别4)、吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；5)、以氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸为展开剂，展开、取出晾干；6)、喷以香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；7)、直接比对供试品色谱，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，判定为合格。
鉴别方法之三的步骤为A、制备供试品溶液1)、取维血宁颗粒5～15 g，最好为10g，研细，用石油醚(60℃～90℃)20～40ml，最好为30ml，超声提取二次(30ml/20分钟、30ml/15分钟)、合并石油醚提取液、过滤；2)、滤液蒸干，残渣加氯仿1～5ml，最好为1ml，使溶解，作为供试品溶液；B、制备对照溶液3)另取仙鹤草对照药材2～10g，最好为4.5g，加水，煎煮，放冷、滤过，滤液用石油醚(60℃～90℃)超声提取二次(30ml/20分钟、30ml/15分钟)，合并石油醚提取液、过滤，蒸干，残渣加氯仿1～5ml，最好为1ml，制成对照药材溶液。
4)、照薄层色谱法(参见中国药典2000年版一部附录)试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；5)、以正己烷—醋酸乙酯—冰醋酸为展开剂，展开、凉干；6)、喷以20％硫酸乙醇溶液，置加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色得斑点，判定为合格。
此外，申请人还研究出维血宁颗粒中白藜芦醇含量的测定方法，其步骤如下A、供试品溶液的制备1)、精密称取本品8g，研细；2)、加醋酸乙酯，超声提取5次(25ml/20分钟、25ml/10分钟、25ml/10分钟、20ml/10分钟、20ml/10分钟)，合并醋酸乙酯提取液；3)、将醋酸乙酯提取液置水浴上蒸干；4)、残渣加甲醇使溶解，并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；5)、用0.45um的滤膜滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得；B、对照品溶液的制备6)、精密称取白藜芦醇对照品适量，通常为10～25mg，加甲醇制成每1ml含0.24mg的溶液，即得。
C、测定7)、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪中测定峰面积，检测波长为303nm；8)、本品每1ml含虎杖以白藜芦醇(C20H22O8)计，不得少于15ug，理论板数按白藜芦醇峰计算应不低于5000。
以上过程中，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水—冰醋酸(22∶85∶1)为流动相。
本发明通过对维血宁颗粒剂型的改进，寻找到可以切实控制其制备质量、具有专属性的鉴别及含量测定方法，从而实现了以科学手段控制其质量的目的，并且由于以乳糖、甘露醇或可溶性淀粉取代蔗糖，因此本发明的维血宁颗粒打破了对糖尿病或高血脂患者的禁忌，解决了长期以来适用范围受限的问题。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例一本实施例的维血宁颗粒称取仙鹤草625克、虎杖500克、熟地黄500克、太子参250克、鸡血藤625克、地黄500克、白芍312克、墨旱莲187克，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成相对密度1.10(80℃)，放冷，加乙醇使含醇量至70％，搅匀，静置，滤取上清液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.20(80℃)，加入1～10倍清膏重量的乳糖，制粒，干燥，得黄棕色、味微苦的维血宁颗粒1000克。
之后按照以下步骤进行检测鉴别制备供试品溶液1)、取维血宁颗粒5g，分别加水及1～5mol/L硫酸溶液5ml；2)、置水浴上加热，回流提取，放冷、滤过；3)、滤液用氯仿提取，分取氯仿液，蒸干；4)、残渣加氯仿1ml；溶解，作为供试品；制备对照品溶液
5)、取大黄素为5mg，加甲醇5ml；制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验鉴别6)、吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；7)、以苯—甲酸乙酯—甲酸为展开剂，展开、取出晾干；8)、通过照薄层色谱法对照试验鉴别，可以选择如下步骤之一A、直接比对供试品色谱，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的黄色斑点，判定为合格；B、置于紫外灯光下检视，显相同颜色的荧光斑点，判定为合格。
实施例二本实施例的维血宁颗粒与实施例一的不同之处在于用甘露醇取代乳糖或用乳糖和甘露醇按一定比例作为辅料来制剂，以改善口味。之后按以下步骤鉴别制备供试品溶液1)、取维血宁颗粒10g，研细，加乙醇30ml，超声处理20分钟后滤过；2)、滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品；制备对照溶液3)取芍药甙5mg，加乙醇5 ml制成溶液，作为对照溶液；照薄层色谱法试验鉴别4)、吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；5)、以氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸为展开剂，展开、取出晾干；6)、喷以香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；7)、直接比对供试品色谱，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，判定为合格。
实施例三本实施例的维血宁颗粒与实施例一、例二的不同之处在于用可溶性淀粉取代乳糖、甘露醇或乳糖和甘露醇按一定比例的混合物为辅料来制剂，以改善口味。之后按以下步骤进行鉴别和含量测定制备供试品溶液1)、取维血宁颗粒10g，研细，用石油醚(60℃-90℃)30ml，超声提取二次(30ml/20分钟、30ml/15分钟)、合并石油醚提取液、过滤；2)、滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；制备对照溶液3)另取仙鹤草对照药材4.5g，加水50ml煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液用石油醚(60℃-90℃)30ml，超声提取二次(30ml/20分钟、30ml/15分钟)，合并石油醚提取液、过滤，蒸干，残渣加氯仿1ml，制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录)试验4)吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；5)、以正己烷—醋酸乙酯—冰醋酸为展开剂，展开；6)、取出，晾干，喷以20％硫酸乙醇溶液，置加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应得位置上，显相同颜色得斑点，判定为合格。
此外，当需要对维血宁颗粒中白藜芦醇含量进行测定时，步骤如下1.色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈—水—冰醋酸(22∶85∶1)为流动相；检测波长为303nm。理论板数按白藜芦醇峰计算应不低于5000。
2.对照品溶液的制备精密称取白藜芦醇对照品适量，通常为10～25mg，加甲醇制成每1ml含0.24mg的溶液，即得。
3.供试品溶液的制备3.1精密称取本品8g，研细；3.2加醋酸乙酯，超声提取5次(25ml/20分钟、25ml/10分钟、25ml/10分钟、20ml/10分钟、20ml/10分钟)，合并醋酸乙酯提取液。
3.3醋酸乙酯提取液，置水浴上蒸干；3.4残渣加甲醇使溶解，并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；3.5.用0.45um的滤膜滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得；4.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
5.本品每1ml含虎杖以白藜芦醇(C20H22O8)计，不得少于15ug。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。
权利要求
1.一种维血宁颗粒，包括仙鹤草、虎杖、熟地黄、太子参、鸡血藤、地黄、白芍、墨旱莲8味中药经过煎煮、浓缩、醇沉浓缩后所得到的中药浸膏，以及辅料，其特征在于所述辅料为至少乳糖、甘露醇、可溶性淀粉中的一种，所述中药浸膏与辅料的重量比例为1∶1～10。
2.根据权利要求1所述维血宁颗粒的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤A、制备供试品溶液1)、取维血宁颗粒3～10g，分别加水及1～5mol/L硫酸溶液3～10ml；2)、置水浴上加热，回流提取，放冷、滤过；3)、滤液用氯仿提取，分取氯仿液，蒸干；4)、残渣加氯仿1～3ml溶解，作为供试品；B、制备对照品溶液5)、取大黄素1～10mg，加甲醇制成溶液1～10ml，作为对照品溶液；C、照薄层色谱法试验鉴别6)、吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；7)、以苯-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开、取出晾干；8)、通过照薄层色谱法对照试验鉴别。
3.根据权利要求2所述维血宁颗粒的鉴别方法，其特征在于所述步骤8)的具体作法为直接比对供试品色谱，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的黄色斑点，判定为合格。
4.根据权利要求2所述维血宁颗粒的鉴别方法，其特征在于所述步骤8)的具体作法为置于紫外灯光下检视，显相同颜色的荧光斑点，判定为合格。
5.根据权利要求1所述维血宁颗粒的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤A、制备供试品溶液1)、取维血宁颗粒5～15g，研细，加乙醇20～40ml，超声处理10～30分钟后，滤出；2)、滤液蒸干，残渣加乙醇1～5ml，作为供试品；B、制备对照溶液3)、取芍药甙1～10mg，加乙醇1～10ml，制成溶液，作为对照溶液；C、照薄层色谱法试验鉴别4)、吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；5)、以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开、取出晾干；6)、喷以香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；7)、直接比对供试品色谱，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，判定为合格。
6.根据权利要求1所述维血宁颗粒的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤A、制备供试品溶液1)、取维血宁颗粒5～15g，研细，用石油醚20～40ml，超声提取二次、合并石油醚提取液、过滤；2)、滤液蒸干，残渣加氯仿1～5ml使溶解，作为供试品溶液；B、制备对照溶液3)另取仙鹤草对照药材2～10g，加水，煎煮，放冷、滤过，滤液用石油醚超声提取二次，合并石油醚提取液、过滤，蒸干，残渣加氯仿1～5ml，制成对照药材溶液。C、照薄层色谱法试验鉴别4)、照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上；5)、以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开、凉干；6)、喷以20％硫酸乙醇溶液，置加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色得斑点，判定为合格。
7.根据权利要求1所述维血宁颗粒中白藜芦醇含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤A、供试品溶液的制备1)、精密称取本品8g，研细；2)、加醋酸乙酯，超声提取5次，合并醋酸乙酯提取液；3)、将醋酸乙酯提取液置水浴上蒸干；4)、残渣加甲醇使溶解，并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；5)、用0.45um的滤膜滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得；B、对照品溶液的制备6)、精密称取白藜芦醇对照品10～25mg，加甲醇制成每1ml含0.24mg的溶液，即得；C、测定7)、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪中测定峰面积，检测波长为303nm；8)、本品每1ml含虎杖以白藜芦醇(C20H22O8)计，不少于15ug，理论板数按白藜芦醇峰计算不低于5000为合格。
8.根据权利要求7所述维血宁颗粒中白藜芦醇含量的测定方法，其特征在于以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-冰醋酸22∶85∶1为流动相。
全文摘要
本发明涉及一种维血宁颗粒制剂，同时还涉及维血宁颗粒制剂的鉴别、含量测定方法，属于医药技术领域。该颗粒制剂包括如下中药成分混合、煎煮、浓缩、醇沉浓缩后所得到的中药浸膏仙鹤草、虎杖、熟地黄、太子参、鸡血藤、地黄、白芍、墨旱莲，还包括加入所述中药浸膏的辅料，所述辅料为至少乳糖、甘露醇、可溶性淀粉中的一种，中药浸膏与辅料的重量比例为1∶1－10。通过制备供试品溶液、制备对照溶液、照薄层色谱法试验鉴别等步骤即可鉴别测定。本发明实现了以科学手段控制其质量的目的，并且由于以乳糖、甘露醇或可溶性淀粉取代蔗糖，因此本发明的维血宁颗粒打破了对糖尿病或高血脂患者的禁忌，解决了长期以来适用范围受限的问题。
文档编号A61P7/04GK1759869SQ20051003789
公开日2006年4月19日 申请日期2005年2月28日 优先权日2005年2月28日
发明者朱正顺, 华新农, 吴文英 申请人:江苏天士力制药有限公司