一种纳米七叶皂苷注射制剂及其制备方法

专利名称：一种纳米七叶皂苷注射制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种纳米七叶皂苷注射制剂及其制备方法。
背景技术：
娑罗子为七叶树科植物欧洲七叶树、日本七叶树、中国天师栗的果实或种子，其无效成分为脂肪油、淀粉、纤维等，脂肪油主要为油酸和硬脂酸的甘油酯；其有效成分为七叶皂苷，是属于三萜皂苷化合物，它具有消炎，抗渗出，恢复毛细血管通透性，提高静脉张力，改善血循环，兼有扩张动脉，扩张冠脉，增加耐缺氧能力，促进脑功能恢复等作用，临床应用主要是其钠盐，即注射用七叶皂苷钠，但在临床应用中，出现大量的严重不良反应1.致肝损害；2.致过敏性水泡型组织坏死；3.致血尿；4.引起全身过敏性皮疹；5.致过敏性休克；6.致急性肾功能衰竭；7.致心动过缓；8.致静脉损害。《天津药学》，Tianjin Pharmacy，2004年4月，第16卷第2期，48-50因此，医药科研研究人员应将七叶皂苷进行制剂研究，开发出一种起效迅速、安全性高的七叶皂苷制剂；七叶皂主要含有α、β两种异构体，其中β-七叶皂苷是主要活性成分，β-七叶皂苷以七叶皂苷A、B为主，但β-七叶皂苷水溶液在100℃时，C-21、C-22、C-21、C-28羟基可发生乙酰基转移，转化成α-七叶皂苷，使七叶皂苷有效部位活性降低《世界科学技术—中医药现代化》2004年第3期，45-46，因此，在提取纯化七叶皂苷有效部位的过程中，应注意温度的控制；查阅文献和专利，在提取七叶皂苷的过程中，多采用醇提，没有控制提取温度，并且将无效成分油脂类成分保留，加大了纯化过程的困难；在纯化过程中，有报道采用有机溶剂萃取法，有报道采用D101型或NKA-9型大孔吸附树脂柱进行乙醇洗脱，在处理回收有机溶剂的过程中，也没有很好控制温度，因此会导致七叶皂苷中β-七叶皂苷的含量降低。
脂质体是将药物包封于类脂质双分子层形成的薄膜中间所制成的超微型球状载体制剂。构成脂质双分子层(载体)的物质主要有磷脂(卵磷脂、脑磷脂、豆磷脂)和胆固醇等，由于它们的分子结构中既有亲水基团又有疏水基团，当构成球形类脂双层结构时，其疏水基团相对构成的结构将药物包封起来。脂质体作为药物的载体具有以下优点(1)这种载体能保护被包裹物；(2)能有效地控制药物释放；(3)通过改变脂质体大小和电荷，可以控制药物在组织内的分布与在血液中的清除率；(4)改变某种物理因素，例如改变用药局部的pH、病变部位的温度等能明显改变脂质体膜的通透性，促使脂质体选择性的释放药物；(5)脂质体进入体内后主要被网状内皮系统吞噬，能激活机体的自身免疫功能，并使药物主要在脑、肝和骨髓等组织器官中积累，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物毒性；(6)脂质体本身对人体无毒性和免疫抑制作用。因此，脂质体在许多疾病，尤其是脑部疾病治疗中显示出明显的优越性。
查阅文献和专利，未检索到纳米七叶皂苷注射制剂的资料。

发明内容
基于上述原因，我们通过大量的实验研究，对娑罗子先采用超声水提取，控制温度不超过50℃，低温静置除去油脂类无效成分，再采用乙醇超声提取，控制温度不超过50℃，在纯化过程中，我们采用AB-8型大孔吸附树脂柱进行制备，本发明所有浓缩过程采用旋转刮膜蒸发仪进行，控制温度不超过50℃，在整个提取纯化过程中，很好的控制了温度，防止七叶皂苷有效部位中活性成分β-七叶皂苷转化为无效成分α-七叶皂苷。
将得到七叶皂苷有效部位进行化学性质和物理性质的分析，根据其性质与优选的乳化剂、脂质混合，控制好温度，制备成纳米七叶皂苷，与药用辅料混合制备成水针剂、输液剂、粉针剂，药效学研究，本发明纳米七叶皂苷注射制剂具有安全性高、药理作用好的特点。
本发明将七叶皂苷制成纳米制剂的目的是要解决降低不良反应，达到起效快和维持良好的血药浓度。
本发明的目的是提供一种纳米七叶皂苷注射制剂；本发明的另一目的是提供制备纳米七叶皂苷注射制剂的方法。
本发明通过以下技术方案实现一、工艺制法(1)七叶皂苷有效部位的提取取娑罗子，粉碎，放入超声提取罐中，控制提取温度25℃-50℃，提取2-4次，每次5-15分钟，残渣备用，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩，控制浓缩温度40℃-50℃，真空度为0.1-0.2个大气压，浓缩到40℃-50℃时相对密度为1.15-1.25，将浓缩液在0℃-4℃静置24-48小时，除去浓缩液表面的油脂层，将除去油脂层的浓缩液与残渣合并，加入无水乙醇，使含醇量为50％-70％，放入超声提取罐中，控制温度25℃-50℃，提取2-4次，每次15-45分钟，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃-50℃，真空度为0.1-0.2个大气压，得到浓缩液；取上述浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用4-8倍的柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用60％-90％的乙醇洗脱，控制洗脱液无皂苷反应，收集洗脱液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃-50℃，真空度为0.1-0.2个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到七叶皂苷有效部位；(2)纳米七叶皂苷的制备处方为七叶皂苷有效部位8-12重量份，脂质48-142重量份、乳化剂32-58重量份；
取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量七叶皂苷、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至70-90℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在70-90℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷输液制剂；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米七叶皂苷冻干粉针制剂。
纳米七叶皂苷注射制剂的制备方法中的脂质为硬脂酸。
纳米七叶皂苷注射制剂的制备方法中乳化剂为大豆卵磷脂。
二.检测分析1.七叶皂苷中β-七叶皂苷(七叶皂苷A计)含量测定根据《中华人民共和国药典》(2005年一部，206页)含量测定的方法进行检测分析，实验结果见表12.七叶皂苷制剂中β-七叶皂苷(七叶皂苷A计)含量测定根据《中华人民共和国药典》(2005年一部，206页)含量测定的方法进行检测分析，实验结果见表1
表1含量比较

结论通过上述实验表明，本发明工艺具有实际意义。
三.优选实验优选依据《中国药典》2005年版附录XIX E“微囊、微球与脂质体制剂指导原则”中的方法。H-7000型透射电镜仪(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相关光谱仪(英国Malvern公司)；LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)；TGL-18G型台式高速离心机。
实验方法取本发明七叶皂苷有效部位与不同脂质三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、单硬脂酸、硬脂酸，不同乳化剂大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、聚山梨醇、泊洛沙姆进行纳米药物制备，得到纳米七叶皂苷进行实验；方案1三硬脂酸甘油酯、大豆卵磷脂；方案2三棕榈酸甘油酯、大豆卵磷脂；方案3三月桂酸甘油酯、大豆卵磷脂；方案4三窬酸甘油酯、大豆卵磷脂；方案5单硬脂酸、大豆卵磷脂；方案6硬脂酸、大豆卵磷脂；
方案7三硬脂酸甘油酯、蛋黄卵磷脂；方案8三棕榈酸甘油酯、蛋黄卵磷脂；方案9三月桂酸甘油酯、蛋黄卵磷脂；方案10三窬酸甘油酯、蛋黄卵磷脂；方案11单硬脂酸、蛋黄卵磷脂；方案12硬脂酸、蛋黄卵磷脂；方案13三硬脂酸甘油酯、聚山梨醇；方案14三棕榈酸甘油酯、聚山梨醇；方案15三月桂酸甘油酯、聚山梨醇；方案16三窬酸甘油酯、聚山梨醇；方案17单硬脂酸、聚山梨醇；方案18硬脂酸、聚山梨醇；方案19三硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆；方案20三棕榈酸甘油酯、泊洛沙姆；方案21三月桂酸甘油酯、泊洛沙姆；方案22三窬酸甘油酯、泊洛沙姆；方案23单硬脂酸、泊洛沙姆；方案24硬脂酸、泊洛沙姆；1.形态观察及粒径将上述纳米药物在透射电镜下进行形态观察，观察指标为呈何种状态、大小是否均匀，表面是否光滑、有无粘连，分别取1000-2000个纳米药物进行测定粒径大小、是否正态分布，实验结果见表2表2 不同组别形态及粒径比较

2.包封率和载药量测定采用上述检测分析方法对不同方案的纳米药物进行七叶皂苷含量测定，并用下述公式计算包封率和载药量包封率(％)＝(投药量-游离药物量)/投药量×100％；载药量(％)＝(投药量-游离药物量)/纳米药物的重量×100％。
实验结果见表3。
表3 包封率和载药量比较


3.稳定性考察将不同方案纳米药物分别置于小瓶内，密封。于冰箱(3-5℃)、室温(20-25℃)和37℃(RH75％)的环境中放置，于3月观测纳米药物的外观、大小、再分散性等。结果见表4。
表4 稳定性实验比较


4.血脑屏障研究取新西兰家兔，体重约2.5kg，雌雄不限。静脉注射给药，于给药后20分钟抽取0.5ml脑脊液进行实验。取脑脊液0.25ml加溶剂混悬15min后，静置15min，以10000r/min离心1min，取上清液20μl进样，以七叶皂苷为指标测定，实验结果见表5(以方案6为标准指标，即100％)表5 不同组别脑脊液中药物浓度


实验结论通过上述优选实验，我们确定脂质为硬脂酸，乳化剂为大豆卵磷脂；通过上述实验表明，本发明纳米药物可见呈圆球体，大小较均匀，表面光滑，无粘连，根据纳米药物的光学显微照片测定了1500个，平均粒径为65±10nm，最大粒径为120nm，最小粒径为10nm，且粒径分布符合正态分布规律，包封率为92.0％，载药量为10.1％，稳定性好，通过血脑屏障作用好。
四.毒理实验实验1急性毒性实验实验药物本发明纳米七叶皂苷注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；市售注射用七叶皂苷钠(烟台绿叶制药有限公司)实验动物健康小鼠18-22g，，雌雄各半；实验方法取小鼠，分为市售注射用七叶皂苷钠组、本专利纳米七叶皂苷注射组，腹腔给药，按照体表面积换算成小鼠给药剂量，每天给药3次，连续7天，观察小鼠死亡情况，记录数据，按改良寇氏法计算LD50值实验结果见表6表6 小鼠用药LD50值比较

实验2溶血性考察实验药物本发明纳米七叶皂苷注射制剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；市售注射用七叶皂苷钠(烟台绿叶制药有限公司)
实验方法2％红细胞混悬液的制备取兔耳缘静脉取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血。加10倍量的生理盐水溶液，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水溶液洗涤2-3次，至上清液不呈红色时为止。将所得的红细胞用用生理盐水配成浓度为2％的混悬液，即得。
试验方法取试管6支，按表中的配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水溶液，混匀，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的药液(以第6管为空白对照)，摇匀后，置37℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，共观察2小时。结果见表7。
表7 各组别配比量

结果以第3试管为准，各管均未染有红色，显微镜下观察未见有红细胞破裂，说明本品不溶血，安全性好。
实验3血管刺激性考察实验方法取健康大耳家兔9只，将动物固定于兔箱内，用酒精将皮肤消毒后，于右侧耳缘静脉处注射纳米七叶皂苷注射制剂5mg/kg，于另一侧对应部位注射同一体积的等渗葡萄糖水作为对照。每日注射1次，连续3次，观察兔耳缘静脉反应。于末次给药24h后将兔放血处死，取下两耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm处，解剖取出静脉，做组织切片检查，观察注射部位的反应。
结果试验过程中，肉眼观察两耳静脉注射部位处，未见红肿、热等刺激表现。表明给药组切片部位组织形态无明显差异，未见本品毒性所致的病理形态学改变(血管结构正常，无内皮细胞损伤，无血栓形成及其他病理性变化)。
结论通过上述实验表明，本发明纳米七叶皂苷注射制剂比市售注射用七叶皂苷钠安全性更好。
四.药理实验试药与动物注射用七叶皂苷钠(烟台绿叶制药有限公司)；本发明纳米七叶皂苷注射制剂(由广东天之骄药物开发有限公司实验室制备)；胶原酶，美国Sigma公司生产，新西兰家兔，体重约2.5kg；大耳家兔，体重约2.5kg；SD大鼠，体重180-220g；昆明种小鼠，体重18-22g。
实验1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响取昆明种小鼠50只，18-22g，剪去右耳周围的毛，随机分为五组，即空白对照组，注射用七叶皂苷钠阳性对照组，本发明纳米七叶皂苷注射制剂组。用微量移液器吸取受试药液(给药量为2.25mg/kg，粉针剂用注射用水稀释)涂于右耳耳廓两侧，一日三次，连续给药五日，每次给药剂量2mg/kg，于末次给予30min后，以25μl二甲苯涂于右耳耳廓两侧，15min后脱臼处死，用6mm的打孔器将小鼠双耳相同部位打孔取材，分别精密称重，以两耳重量差值作为肿胀度指标，比较药物组与溶剂组的差异，并求出抑制率，结果见表8。
表8 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(n＝10，x±s)


与空白对照组比较*p＜0.05，与阳性对照组比较**p＜0.01；结果表明，本发明纳米七叶皂苷注射制剂对小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用，说明该制剂有明显的抗炎作用。
实验2对鸡蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响采用大鼠足跖肿胀试验来观察本发明纳米七叶皂苷注射制剂的抗炎消肿作用。SD大鼠50只，体重180-220g，雄性，随机分成五组，即空白对照组，注射用七叶皂苷钠阳性对照组，本发明纳米七叶皂苷注射制剂组。各组按相应剂量涂于足跖，于致炎前每日涂3次，连续五日，每次给药剂量1.75mg/kg，末次给药后30分钟，在大鼠足跖部皮下注射新鲜配制的1％鸡蛋清0.05ml致炎，用足跖容积测定仪测量致炎前后大白鼠足跖关节以下的容积变化，计算并比较致炎后0.5h、1h、2h、4h各组大鼠致炎前后足体积的差值为肿胀度，比较各组肿胀度的差异，结果见表9。
表9 对琼脂致大鼠足跖肿胀的影响(n＝10，x±s)

与空白对照组比较*p＜0.05，与阳性对照组比较**p＜0.01；结果表明，本发明纳米七叶皂苷注射制剂组在给药后1h-4h均抑制大鼠足跖肿胀的作用，说明该制剂具有明显的消肿作用。
实验3纳米七叶皂苷注射制剂对大鼠脑出血后脑水肿的抑制作用实验方法取体重180-220g，雄性大鼠60只，随机分成空白对照组、脑出血模型组阴性对照组，注射用七叶皂苷钠阳性对照组和试药组，每组动物10只。除正常组外，动物经戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉后，头部固定在立体定向仪上，切开顶部皮肤，参照大鼠脑立体定位图谱，按Rosenberg的方法，脑出血组及各治疗组在立体定向下给左侧尾壳核注入胶原酶0.4IU/2μl，对照组则注入等体积生理盐水；注入胶原酶后4h时，阳性对照组腹腔注射七叶皂苷钠注射液2.25mg/kg，试药组腹腔注射纳米七叶皂苷注射制剂2.25mg/kg；在24h时断头处死动物，迅速取出大脑半球，按左、右脑分成前、中、后等长度三段，采用干湿法测定脑组织含水量，结果见表10。
表10 纳米七叶皂苷注射制剂治疗前后不同脑区含水量的变化

注与阴性对照组比较*P＜0.05；结果显示，在相同剂量下，试验组与阴性对照组比较差异有显著性意义，实验结果说明纳米七叶皂苷注射制剂对大鼠脑出血后脑水肿的抑制作用强于注射用七叶皂苷钠。
五、制备实施例实施例1(1)七叶皂苷有效部位的提取取娑罗子503克，粉碎，放入超声提取罐中，控制提取温度25℃，提取2次，每次5分钟，残渣备用，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩，控制浓缩温度40℃，真空度为0.1个大气压，浓缩到40℃时相对密度为1.15，将浓缩液在0℃静置24小时，除去浓缩液表面的油脂层，将除去油脂层的浓缩液与残渣合并，加入无水乙醇，使含醇量为50％，放入超声提取罐中，控制温度25℃，提取2次，每次15分钟，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃，真空度为0.1个大气压，得到浓缩液；取上述浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用4倍的柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用60％的乙醇洗脱，控制洗脱液无皂苷反应，收集洗脱液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃，真空度为0.1个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到七叶皂苷有效部位8克；七叶皂苷有效部位中β-七叶皂苷含量为85％。(2)纳米七叶皂苷的制备处方为七叶皂苷有效部位8克，脂质硬脂酸48克、乳化剂32大豆卵磷脂克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量七叶皂苷、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至70℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在70℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷水针制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷输液制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米七叶皂苷冻干粉针制剂1000瓶。纳米粒径为10-120纳米实施例2(1)七叶皂苷有效部位的提取取娑罗子632克，粉碎，放入超声提取罐中，控制提取温度50℃，提取4次，每次15分钟，残渣备用，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩，控制浓缩温度50℃，真空度为0.2个大气压，浓缩到50℃时相对密度为1.25，将浓缩液在4℃静置48小时，除去浓缩液表面的油脂层，将除去油脂层的浓缩液与残渣合并，加入无水乙醇，使含醇量为70％，放入超声提取罐中，控制温度50℃，提取4次，每次45分钟，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度50℃，真空度为0.2个大气压，得到浓缩液；取上述浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用8倍的柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用90％的乙醇洗脱，控制洗脱液无皂苷反应，收集洗脱液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度50℃，真空度为0.2个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到七叶皂苷有效部位12克；七叶皂苷有效部位中β-七叶皂苷含量为50％。(2)纳米七叶皂苷的制备处方为七叶皂苷有效部位12克，脂质硬脂酸142克、乳化剂大豆卵磷脂58克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量七叶皂苷、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至90℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在90℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备
水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷水针制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷输液制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米七叶皂苷冻干粉针制剂1000瓶。纳米粒径为10-120纳米实施例3(1)七叶皂苷有效部位的提取取娑罗子571克，粉碎，放入超声提取罐中，控制提取温度40℃，提取3次，每次10分钟，残渣备用，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩，控制浓缩温度45℃，真空度为0.15个大气压，浓缩到45℃时相对密度为1.20，将浓缩液在2℃静置36小时，除去浓缩液表面的油脂层，将除去油脂层的浓缩液与残渣合并，加入无水乙醇，使含醇量为60％，放入超声提取罐中，控制温度40℃，提取3次，每次30分钟，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度45℃，真空度为0.15个大气压，得到浓缩液；取上述浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用6倍的柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用75％的乙醇洗脱，控制洗脱液无皂苷反应，收集洗脱液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度45℃，真空度为0.15个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到七叶皂苷有效部位10克；七叶皂苷有效部位中β-七叶皂苷含量为72.3％。(2)纳米七叶皂苷的制备
处方为七叶皂苷有效部位10克，脂质硬脂酸95克、乳化剂大豆卵磷脂46克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量七叶皂苷、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至80℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在80℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀6次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷水针制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷输液制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米七叶皂苷冻干粉针制剂1000瓶。纳米粒径为10-120纳米实施例4(1)七叶皂苷有效部位的提取取娑罗子529克，粉碎，放入超声提取罐中，控制提取温度30℃，提取2次，每次8分钟，残渣备用，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩，控制浓缩温度42℃，真空度为0.12个大气压，浓缩到43℃时相对密度为1.18，将浓缩液在1℃静置30小时，除去浓缩液表面的油脂层，将除去油脂层的浓缩液与残渣合并，加入无水乙醇，使含醇量为55％，放入超声提取罐中，控制温度30℃，提取2次，每次20分钟，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度42℃，真空度为0.13个大气压，得到浓缩液；取上述浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用5倍的柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用65％的乙醇洗脱，控制洗脱液无皂苷反应，收集洗脱液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度43℃，真空度为0.13个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到七叶皂苷有效部位9克；七叶皂苷有效部位中β-七叶皂苷含量为80％。(2)纳米七叶皂苷的制备处方为七叶皂苷有效部位9克，脂质硬脂酸56克、乳化剂大豆卵磷脂40克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量七叶皂苷、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至75℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在75℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷水针制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷输液制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米七叶皂苷冻干粉针制剂1000瓶。纳米粒径为10-120纳米

实施例5(1)七叶皂苷有效部位的提取取娑罗子611克，粉碎，放入超声提取罐中，控制提取温度45℃，提取4次，每次14分钟，残渣备用，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩，控制浓缩温度48℃，真空度为0.19个大气压，浓缩到48℃时相对密度为1.24，将浓缩液在3℃静置40小时，除去浓缩液表面的油脂层，将除去油脂层的浓缩液与残渣合并，加入无水乙醇，使含醇量为65％，放入超声提取罐中，控制温度45℃，提取3次，每次40分钟，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度48℃，真空度为0.19个大气压，得到浓缩液；取上述浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用7倍的柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用85％的乙醇洗脱，控制洗脱液无皂苷反应，收集洗脱液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度49℃，真空度为0.18个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到七叶皂苷有效部位11克；七叶皂苷有效部位中β-七叶皂苷含量为55％。(2)纳米七叶皂苷的制备处方为七叶皂苷有效部位11克，脂质硬脂酸130克、乳化剂大豆卵磷脂48克；取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量七叶皂苷、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至85℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在85℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(3)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷水针制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷输液制剂1000瓶；纳米粒径为10-120纳米冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米七叶皂苷冻干粉针制剂1000瓶。纳米粒径为10-120纳米。
权利要求
1.一种纳米七叶皂苷注射制剂，其特征在于它是由七叶皂苷有效部位8-12重量份，脂质48-142重量份、乳化剂32-58重量份制备成的，其中七叶皂苷有效部位中β-七叶皂苷含量为50％-85％；其特征还在于纳米七叶皂苷注射制剂中纳米粒径为10-120纳米。
2.根据权利要求1所述的一种纳米七叶皂苷注射制剂，其制备方法包括以下步骤(1)七叶皂苷有效部位的提取取娑罗子，粉碎，放入超声提取罐中，控制提取温度25℃-50℃，提取2-4次，每次5-15分钟，残渣备用，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩，控制浓缩温度40℃-50℃，真空度为0.1-0.2个大气压，浓缩到40℃-50℃时相对密度为1.15-1.25，将浓缩液在0℃-4℃静置24-48小时，除去浓缩液表面的油脂层，将除去油脂层的浓缩液与残渣合并，加入无水乙醇，使含醇量为50％-70％，放入超声提取罐中，控制温度25℃-50℃，提取2-4次，每次15-45分钟，合并提取液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃-50℃，真空度为0.1-0.2个大气压，得到浓缩液；取上述浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用4-8倍的柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，再用60％-90％的乙醇洗脱，控制洗脱液无皂苷反应，收集洗脱液，旋转刮膜仪中浓缩乙醇至尽，控制浓缩温度40℃-50℃，真空度为0.1-0.2个大气压，得到浓缩液，低温干燥，得到七叶皂苷有效部位；(2)纳米七叶皂苷的制备取相同质量的甘油和poloxamer-188制备成饱和水溶液；取处方量七叶皂苷、乳化剂和脂质，在通氮气条件下加热至70-90℃，在搅拌条件下把加入相同温度甘油和poloxamer-188的饱和水溶液，制成粗乳，在70-90℃通氮气条件下用高压乳匀机在41.4MPa压力下乳匀5-7次，充氮气分装后，迅速冷却形成主药混悬液；(4)制剂制备水针制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明纳米七叶皂苷输液制剂；冻干粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明纳米七叶皂苷冻干粉针制剂。
3.根据权利要求1和2所述之一的一种纳米七叶皂苷注射制剂的制备方法中的脂质为硬脂酸。
4.根据权利要求1和2所述之一的一种纳米七叶皂苷注射制剂的制备方法中乳化剂为大豆卵磷脂。
全文摘要
本发明公开了一种纳米七叶皂苷注射制剂及其制备方法，其特征在于从中药娑罗子中提取七叶皂苷有效部位与优选的药用载体组合制备成纳米七叶皂苷，与药用辅料混合，制备成水针剂、输液剂、粉针剂；其特征还在于控制七叶皂苷有效部位中β－七叶皂苷含量为50％－85％；药效学研究，本发明纳米七叶皂苷注射制剂具有安全性高、药理作用好的特点。
文档编号A61P29/00GK1907291SQ200510089090
公开日2007年2月7日 申请日期2005年8月5日 优先权日2005年8月5日
发明者张晴龙 申请人:张晴龙