专利名称：治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法和质控方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法和质控方法，属于药品的技术领域。
背景技术：
心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等已成为人类健康的头号杀手，在许多国家里已成为人口死亡的主要原因之一；据调查，近年来的发病率有逐年增高趋势，且有不断年轻化趋势，中、青年患者不断增加，心脑血管疾病已成为危害我国人民健康的常见病、多发病。而目前治疗药物主要集中在纯中药制剂和西药两方面，中西药联用多是临床医生根据疾病情况选择适当中药制剂配合相应功能的西药诊治，而西药的副作用较大，不适于这种慢性病的长期服用，纯中药制剂大多以原生药或经简单提取后的浸膏入药，致使服用量较大，同时由于诸多因素影响，使临床疗效波动较大。鉴于这些情况，寻找更好的、配伍简单、治疗效果理想，毒副作用小的有效治疗药物就成了人们急需解决的问题。
丹参作为常用中药，用于治疗或预防心脑血管疾病历史悠久，近年来更是受到业界人士的青睐；曲克芦丁具有抑制红细胞、血小板聚集，防止血栓形成，增加血氧饱和度，改善微循环，促进新血管生成，增进侧支循环，增加脑血流量等作用，主要用于心脑血管疾病的治疗。目前单味丹参制剂如丹参注射液在治疗心脑血管疾病方面已得到认可，但由于制备工艺比较传统，提取纯度不高，质量可控性相对较差，使得丹参制剂在临床上的应用受到了很大程度的限制，为此，本申请人进行了深入研究，采用在治疗心脑血管疾病方面疗效较好的丹参总酚酸有效部位入药，配伍曲克芦丁，研究筛选丹参总酚酸有效部位与曲克芦丁最优的配伍比例，进一步研究制剂成型性和稳定性问题，进而为患者提供一个新的用药选择。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，该药物组合物由曲克芦丁和丹参总酚酸组方，成分明确，质量可控，既能抑制血小板聚集，又能益气行血，标本兼治，产生明显协同作用，疗效明显提高；本发明的目的还在于提供该药物组合物不同剂型的制备方法和质量控制方法。急性缺血性脑卒中治疗的关键是缩小缺血半暗带，曲克芦丁为芦丁经羟乙基化得到的以7，3，4-三羟乙基芦丁为主的混合物。曲克芦丁可抑制红细胞、血小板聚集，防止血栓形成，同时能增加血氧饱和度，改善微循环，促进新血管生成，增进侧支循环，从而增加脑血流量，增加半暗带区域的供血，改善血流动力学的各项指标，改善临床症状和体征。丹参总酚酸是丹参药材中的主要活性成分，现代研究表明，丹参总酚酸与心脑血管疾病药物中的关联度最大，丹参注射液在心脑血管疾病方面的疗效已得到认可，为此，本发明在实验筛选的基础上，采用曲克芦丁与丹参总酚酸配伍做成制剂，优选出最佳的组方及工艺，得到的产品，经药效学试验表明，协同增效，较单独的丹参制剂，曲克芦丁制剂疗效均有显著提高。
本发明所采用的技术方案是一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，按照重量份数计算，它是主要由曲克芦丁1份和丹参总酚酸0.05～15份组成。准确讲，按照重量份数计算，它是主要由曲克芦丁1份和丹参总酚酸0.1～10份组成。优选组方为，按照重量份数计算，它是主要由曲克芦丁1份和丹参总酚酸0.2～5份组成。
所述组合物剂型为直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、微丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片、分散片剂、膜剂、舌下含片等药剂学上所有可以接受的剂型。优选的剂型包括直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及滴丸剂、微丸剂、口服液体制剂、口腔崩解片、分散片剂、舌下含片。
所述的组合物制剂可以在将丹参总酚酸和曲克芦丁中的一种或两种制备成脂质体或前体脂质体的基础上制得。
丹参总酚酸有效部位是市售的或采用如下方法制备的取丹参药材，加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，滤液浓缩得丹参粗提物，在此基础上采用乙醇沉淀法、水返溶法、柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得丹参总酚酸有效部位。
以重量百分比计算，口服制剂中酚酸类成分的含量不低于制剂中扣除曲克芦丁量、制剂辅料量和水分量后的总固体量的50％，注射制剂中酚酸类成分的含量不低于扣除曲克芦丁量、制剂辅料量和水分量后的总固体量的70％；曲克芦丁含量应为制剂标示量的90.0％～110.0％。
注射用无菌块状物这样制备取曲克芦丁、丹参总酚酸加注射用水搅拌使溶解，滤过，滤液煮沸后加入0.5％(W/V)的活性炭，保持微沸30分钟，稍冷过滤，滤液调pH值至5.0～6.5，煮沸，冷藏(4℃)过夜，粗滤、精滤；将甘露醇加注射用水配制成120mg/ml溶液，与上述滤液混匀，滤过，加注射用水至规定量，分装，冷冻干燥，预冻温度-45℃，预冻时间10h；开始抽真空，并升温至-40℃，保持8h；并在12～72小时内逐步差速梯度升温至10℃，保持2h，升温至20℃，保持2h，升温至30℃，保持2h，即得。
所述的组合物主要用于治疗冠心病心绞痛、心肌梗死、心肌缺血、肺心病、动脉硬化、脑血栓、脑梗塞、中风及中风后遗症、血栓性静脉炎、毛细血管出血、肝肾综合症等疾病。
所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物的质量控制方法包括以下全部或部分内容(1)指纹图谱测试，包括以丹参酚酸类成分特征为主的指纹图谱；(2)丹参药材、丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、曲克芦丁中全部或部分的鉴别测试方法；(3)丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、总酚酸、曲克芦丁中全部或部分成分的含量测试方法。
与现有技术相比，本发明药物组合物由曲克芦丁和丹参总酚酸有效部位组方，丹参酚酸类成分具有明显的抑制血小板聚集、抗凝、溶纤及抗脂质过氧化的作用，是丹参活血化瘀的活性成分；曲克芦丁可抑制血小板聚集，防止血栓形成等作用；二者组方，纯度高、成分明确，质量可控，同时克服了纯中药制剂疗效波动大，西药不良反应多的缺点，能确保临床疗效稳定和用药安全，丹参总酚酸配伍曲克芦丁标本兼治，协同增效减毒，比单用丹参制剂或曲克芦丁制剂疗效均有明显提高。
为证明本发明提供的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验。
实验例1对不同配比药效学比较研究1、药物法所致血栓形成模型试验健康雄性小鼠144只，体重25～35g，分为9组，分组见下表，每组16只，按下表所示给予相应药物，灌胃给药1小时后尾静脉注射胶原蛋白(250μg/只)与肾上腺素(9μg/只)的混合诱导剂，注射后即观察5分钟之内小鼠死亡数或15分钟内小鼠偏瘫的未恢复数，计算药物对小鼠脑血栓的保护率，结果见表1。
表1对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓形成的影响
由表1可知，丹参总酚酸和曲克芦丁不同配比的药物对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓有保护作用，该作用的强弱程度与药物的配比有关，其中以丹参总酚酸∶双嘧达莫＝0.2～5∶1的处方药理作用较强且用量较低。
2、对兔血小板聚集性的影响取家兔45只，体重3～5kg，雄性，分为9组，分组见下表，每组5只，按下表所示给予相应药物，给药前自心脏取血测定血小板表面活性和聚集性，于耳缘静脉注射相应药物或等量生理盐水，1小时后复查血小板表面活性或聚集性。结果见表2。
表2对血小板聚集性的影响
由表2可知，丹参总酚酸和曲克芦丁不同配比的药物能显著降低血小板表面活性或聚集性作用，该作用的强弱程度与药物的配比有关。
表1、表2表明丹参总酚酸配伍曲克芦丁能够产生协同增效作用，药效比单用同剂量曲克芦丁或丹参总酚酸均有明显提高，曲克芦丁和丹参总酚酸不同配比的药物均能显著增加疗效，但作用的强弱程度与药物的配比有关；从实验结果分析，丹参总酚酸和曲克芦丁的最佳配比为曲克芦丁1份，丹参总酚酸0.2～5份。
实验例2注射剂成型工艺研究2.1pH值对注射液的影响为适应人体生理需要，同时考虑药液中各类成分的性质，本申请人对6种不同pH值的注射液40℃放置3个月，分别考察其稳定性。结果见下表。
结果表明，本发明合理的pH值范围为5.0～6.5。
2.2活性炭用量对注射液影响注射剂在生产过程中由于溶剂、原料、容器等带有热原性物质，使注射剂的安全性降低，因此在制备注射剂的过程中需要清除热原性物质。本申请人采用活性炭吸附法，一方面吸附热原性成分，同时助滤和脱色，还可改善制剂的外观性状，因活性炭对其用量进行了考察。
活性炭用量考察表
由表可知，三者均可以满足注射剂的相关要求，但从药液外观来看，选择活性炭用量为0.5％和1.0％的比较合适；从转移率来判断，0.1％用量和0.5％用量略好一点，综合考虑以上因素，以使用药液体积0.5％的活性炭脱色为佳。
2.3冻干支架剂种类的筛选支架剂种类筛选
由表可知，在其他条件相同的情况下，大部分辅料均可制成冻干粉针，但是从成品率、成型状况和样品的复溶性角度综合考察，单独使用甘露醇的效果好于其它几种辅料，即可满足注射剂各项要求，同时尽量减少添加过多辅料。
试验例3滴丸基质筛选本发明人通过大量的试验，对提取物制备成滴丸所需的基质进行考察，以滴丸外观、主药与基质的融合情况、丸重差异等为考察指标，优化筛选了影响滴丸质量的基质，试验结果如表。
方法将基质置小烧杯内，加热至80～90℃，待全部熔融后，加入曲克芦丁和丹参总酚酸的混合物料，考察基质与物料的融合情况，选择融合情况较好的处方进行滴制(滴制条件料温75℃，冷却剂为二甲基硅油，滴距3～7cm，滴速30～45滴/分)。
表基质筛选试验
从上述表格可以看出，大部分基质都可以满足制剂成型的需要，但以PEG4000和聚氧乙烯单硬脂酸酯的组合条件最优。
实验例4微丸工艺考察微丸直径小于2.5mm，类于颗粒性质，生物利用度高，本申请人在研制本发明产品微丸时，最大的困难就是吸湿性强而流动性差，可塑性差，难以成型。采用本申请人筛选得到的微丸制造技术和辅料使得产品易于崩解，生物利用度高，性质良好。
吸湿性试验结果
结果表明，采用淀粉作辅料合理可行。
具体的实施方式本发明的实施例1曲克芦丁10g丹参总酚酸100g取曲克芦丁、丹参总酚酸加注射用水搅拌使溶解，滤过，滤液煮沸后加入0.5％(W/V)的活性炭，保持微沸30分钟，稍冷过滤，滤液调pH值至5.0～6.5，煮沸，冷藏(4℃)过夜，粗滤、精滤；将甘露醇加注射用水配制成120mg/ml溶液，与上述滤液混匀，滤过，加注射用水至规定量，分装，冷冻干燥，预冻温度-45℃，预冻时间10h；开始抽真空，并升温至-40℃，保持8h；并在12～72小时内逐步差速梯度升温至10℃，保持2h，升温至20℃，保持2h，升温至30℃，保持2h，即得含有1份曲克芦丁和10份丹参总酚酸的冻干无菌块状物。
本发明的实施例2曲克芦丁10g丹参总酚酸1g取曲克芦丁，丹参总酚酸加注射用水搅拌使溶解，滤过，滤液调节pH值为5.0～7.0，加入0.5％经活化的针用活性炭，煮沸吸附，除炭，精滤，滤液加注射用水至规定量，在4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，分装到安瓿瓶中，灭菌，分装，即得含有1份曲克芦丁和0.1份丹参总酚酸的小容量注射液或注射用浓溶液。
本发明的实施例3曲克芦丁10g丹参总酚酸50g取曲克芦丁、丹参总酚酸，加入适量注射用水溶解，过滤，滤液加入规定量的葡萄糖或氯化钠，混合溶解后按体积加入0.4％的针用活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至适量，调pH值至5.5～7.0，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水至全量，分装，灭菌，即得含有1份曲克芦丁和5份丹参总酚酸的葡萄糖或氯化钠静脉输液。
本发明的实施例4曲克芦丁15g丹参总酚酸3g取曲克芦丁、丹参总酚酸，加适量注射用水，搅拌使溶解，滤液调pH值至5.5～7.0，加注射用水至规定量，混匀，加入0.5％的针用活性炭，煮沸30分钟，粗滤，再用0.45μm和0.22μm微孔滤膜滤过，分装到搪瓷盘中，冷冻干燥，第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为2小时；第三阶段继续降温至-40℃，约需2小时，保持此温度2小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序，在-40℃恒温下-抽真空，缓慢升温，2～4℃/h，至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在低压条件下，升温干燥以除去残余水分，时间约为14～16小时，保持35℃以上干燥1.5小时，在无菌条件下分装到西林瓶中，即得含有曲克芦丁1份和丹参总酚酸0.2份的冻干注射用无菌粉末。
本发明的实施例5曲克芦丁1g丹参总酚酸15g取曲克芦丁、丹参总酚酸，加入适量注射用水溶解，滤液按体积加入0.5％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至适量，调pH值至5.5～7.0，煮沸，4℃冷藏过夜，加注射用水至全量，粗滤、精滤，在进风温度为180℃，出风温度为50℃，气流速度为18m·s-1的条件下喷雾干燥，分装，即得含有1份曲克芦丁和15份丹参总酚酸的喷雾干燥无菌粉末。
本发明的实施例6曲克芦丁100g丹参总酚酸5g将曲克芦丁与丹参总酚酸混合均匀，加入7％的聚乙烯吡咯烷酮、3％微晶纤维素、甘露醇适量，压制成片，即得含有1份曲克芦丁和0.05份丹参总酚酸的口崩片。
本发明的实施例7曲克芦丁10g丹参总酚酸30g将曲克芦丁10g、丹参总酚酸30g、PEG4000和聚氧乙烯单硬脂酸酯(2∶1)80g混合均匀，置不锈钢容器内，混匀，加热至全部熔融后，保温30min，机械高速搅拌10min至均匀，转移至滴丸机，以二甲基硅油或液体石蜡为冷却剂，滴制，收集滴丸，除去表面的二甲基硅油或液体石蜡，包装，即得含有1份曲克芦丁和3份丹参总酚酸的滴丸剂。
本发明的实施例8曲克芦丁6g丹参总酚酸30g将曲克芦丁与丹参总酚酸混合均匀，按主药∶辅料＝2.4∶1的比例加入交联聚乙烯吡咯烷酮和低取代羟丙基纤维素复合辅料混合均匀，制软材，制粒，干燥，整粒，压片，即得含有1份曲克芦丁和5份丹参总酚酸分散片。
本发明的实施例9曲克芦丁3g丹参总酚酸21g将曲克芦丁与丹参总酚酸混合均匀，加入适量淀粉、糊精，制粒，干燥，加硬脂酸镁，包衣，即得含有1份曲克芦丁和7份丹参总酚酸的片剂。
本发明的实施例10曲克芦丁5g丹参总酚酸5g将曲克芦丁与丹参总酚酸混合均匀，加入2倍量淀粉和2倍量糊精和适量滑石粉，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装胶囊，即得含有1份曲克芦丁和1份丹参总酚酸的胶囊剂。
本发明的实施例11曲克芦丁5g丹参总酚酸30g将曲克芦丁与丹参总酚酸混合均匀，按药物量∶基质量＝1∶2加入大豆油，混匀；胶皮的配方为明胶∶甘油∶水∶二氧化钛＝100g∶70g∶100g∶1g，配料化胶条件为称量配料，投入化胶罐中，冷浸30分钟后逐渐升温至65±5℃，搅拌5小时并同时抽真空除气泡，待胶料均匀后放料，滤过后装入胶囊机之胶料桶中；药料装入胶囊机之物料桶中，调试压丸机，压丸干燥，即得含有1份曲克芦丁和6份丹参总酚酸软胶囊剂。
本发明的实施例12曲克芦丁4g丹参总酚酸8g将曲克芦丁、丹参总酚酸混匀，加药用淀粉、维晶纤维素适量，混匀，滚圆法制丸，包装，即得含有1份曲克芦丁和2份丹参总酚酸的微丸剂。
本发明的实施例13双嘧达莫10g丹参总酚酸2g将丹参总酚酸、双嘧达莫混合均匀，溶于磷酸盐缓冲液(0.1M)中备用，将一定比例的豆磷脂、胆固醇溶于十八胺溶液中，加入上述药物的磷酸盐缓冲液溶液中，水浴式超声仪处理10min，得脂质体混悬液，磷酸盐缓冲液定容，过滤除菌，无菌分装，即得脂质体注射液。
本发明的实施例14双嘧达莫4g丹参总酚酸20g将丹参总酚酸、双嘧达莫混合均匀，溶于磷酸盐缓冲液(0.1M)中备用，将一定比例的豆磷脂、胆固醇溶于十八胺溶液中，加入上述药物的磷酸盐缓冲液溶液中，水浴式超声仪处理8min，得脂质体混悬液，低温冷冻干燥后，过180目筛，无菌分装，即得前体脂质体粉针剂。
以上实施例中的曲克芦丁是可直接购买的市售商品，丹参总酚酸可以用市售的或是本发明提供的丹参醇提取物、水提取物、水提醇沉提取物、半仿生提取物、超临界萃取物等等，但是供口服的丹参总酚酸中酚酸类成分的含量不低于50％，供注射用的丹参总酚酸中酚酸类成分的含量不低于70％。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于按照重量份数计算，它是主要由曲克芦丁1份和丹参总酚酸0.05～15份组成。
2.按照权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于按照重量份数计算，它是主要由曲克芦丁1份和丹参总酚酸0.1～10份组成。
3.按照权利要求1或2所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于按照重量份数计算，它是主要由曲克芦丁1份和丹参总酚酸0.2～5份组成。
4.按照权利要求1～3任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于所述组合物剂型为直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、微丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片、分散片剂、膜剂、舌下含片等药剂学上所有可以接受的剂型。
5.按照权利要求4所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于所述组合物剂型包括直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及滴丸剂、微丸剂、口服液体制剂、口腔崩解片、分散片剂、舌下含片。
6.按照权利要求4～5所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于所述的组合物制剂可以在将丹参总酚酸和曲克芦丁中的一种或两种制备成脂质体或前体脂质体的基础上制得。
7.按照权利要求1～6中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于丹参总酚酸有效部位是市售的或采用如下方法制备的取丹参药材，加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，滤液浓缩得丹参粗提物，在此基础上采用乙醇沉淀法、水返溶法、柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得丹参总酚酸有效部位。
8.按照权利要求4～6中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于以重量百分比计算，口服制剂中酚酸类成分的含量不低于制剂中扣除曲克芦丁量、制剂辅料量和水分量后的总固体量的50％，注射制剂中酚酸类成分的含量不低于扣除曲克芦丁量、制剂辅料量和水分量后的总固体量的70％；曲克芦丁含量应为制剂标示量的90.0％～110.0％。
9.按照权利要求1～5中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于注射用无菌块状物这样制备取曲克芦丁、丹参总酚酸加注射用水搅拌使溶解，滤过，滤液煮沸后加入0.5％(W/V)的活性炭，保持微沸30分钟，稍冷过滤，滤液调pH值至5.0～6.5，煮沸，冷藏(4℃)过夜，粗滤、精滤；将甘露醇加注射用水配制成120mg/ml溶液，与上述滤液混匀，滤过，加注射用水至规定量，分装，冷冻干燥，预冻温度-45℃，预冻时间10h；开始抽真空，并升温至-40℃，保持8h；并在12～72小时内逐步差速梯度升温至10℃，保持2h，升温至20℃，保持2h，升温至30℃，保持2h，即得。
10.按照权利要求1～6中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物的应用，其特征在于所述的组合物用于制备治疗冠心病心绞痛、心肌梗死、心肌缺血、肺心病、动脉硬化、脑血栓、脑梗塞、中风及中风后遗症、血栓性静脉炎、毛细血管出血、肝肾综合症等疾病药物。
11.按照权利要求4～6中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括以下全部或部分内容(1)指纹图谱测试，包括以丹参酚酸类成分特征为主的指纹图谱；(2)丹参药材、丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、曲克芦丁中全部或部分的鉴别测试方法；(3)丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、总酚酸、曲克芦丁中全部或部分成分的含量测试方法。
全文摘要
本发明公开了一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法和质控方法，属于药品的技术领域。它是主要由曲克芦丁和丹参总酚酸有效部位组方，分别制成各种注射制剂及口服制剂剂型；本发明组合物制剂主要用于治疗冠心病心绞痛、心肌梗死、心肌缺血、肺心病、动脉硬化、脑血栓、脑梗塞、中风及中风后遗症、血栓性静脉炎、毛细血管出血、肝肾综合症等疾病，本发明制剂纯度高，成分明确，质量可控，疗效较单独的丹参制剂和曲克芦丁制剂明显提高，同时安全范围大，疗效波动小。
文档编号A61K9/08GK1969949SQ20051011501
公开日2007年5月30日 申请日期2005年11月23日 优先权日2005年11月23日
发明者于文风 申请人:北京奇源益德药物研究所