5-ht6激动剂用于治疗和预防神经退化性疾病的用途的制作方法

专利名称：：5-ht6激动剂用于治疗和预防神经退化性疾病的用途的制作方法
技术领域：
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背景技术：
：谷氨酸是中枢神经系统中的主要神经递质并且在神经可塑性中起重要作用。谷氨酸的过高细胞外水平与急性神经退化性疾病和慢性神经退化性疾病的病理生理学均相关，急性神经退化性疾病有例如中风、短暂性缺血发作或脊椎/脑部创伤等，慢性神经退化性疾病有例如癫痫、阿兹海默氏病(Alzheimer'sDisease)、肌萎縮性侧索硬化、亨庭顿氏病(Huntington'sdisease)、帕金森氏病(Parkinson'sDisease)、AIDS痴呆症和视网膜病、抑制谷氨酸释放的化合物预计可用于治疗其中谷氨酸功能紊乱起作用的慢性疾病，例如慢性神经退化、阿兹海默氏病、亨庭顿氏病、帕金森氏病、肌萎縮性侧索硬化、癫痫、精神分裂症、AIDS痴呆症或视网膜病。另外，抑制或减弱谷氨酸的释放的化合物也可提供潜在的神经保护剂，来治疗由中风、短暂性缺血发作或脑部/脊椎创伤导致的缺血2或由其中必须使血流停止一段时间的手术(例如，心脏桥接手术)导致的缺血3。仅在美国便有约500-600万人患有慢性或急性神经退化性疾病。因此，需要一种能有效治疗和预防神经退化性疾病的化合物。因此，本发明的一目的是提供一种治疗或预防神经退化性疾病的方法。本发明的另一目的是提供一种神经保护剂来源。通过下文所给出的详细阐述可更加明了本发明的其他目的和特征。
发明内容本发明提供一种用于在有需要的患者中治疗神经退化性疾病的方法，其包括向所述患者投与治疗有效量的5-羟色胺-6激动剂。本发明也提供一种用于治疗神经退化性疾病的医药组合物，其包括医药上可接受的载剂和有效量的5-羟色胺-6激动剂。图l图1是通过神经丝ELISA测得的5-HT6激动剂(测试化合物B)对神经元存活的神经保护作用示意图。图2图2是5-HT6激动剂(测试化合物B)对神经突生长的神经保护作用示意图，其中数据以总神经突长度表示。图3是5-HT6激动剂(测试化合物C)在小脑颗粒神经元中抗OGD诱发的神经元细胞死亡的神经保护作用示意图。Mi图4是5-HT6激动剂(测试化合物C)在小脑颗粒神经元中抗钾撤停诱发的细胞凋亡的神经保护作用示意图。Ml图5是5-HT6激动剂(测试化合物B)对经培养大脑皮质神经元中脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白质水平上的作用示意图。具体实施例方式紊乱的谷氨酸释放并且尤其是过量的谷氨酸释放与急性神经退化性疾病和慢性神经退化性疾病的病理生理学均相关，急性神经退化性疾病有例如中风、短暂性缺血发作或脊椎/脑部创伤等，慢性神经退化性疾病有例如癫痫、阿兹海默氏病、肌萎縮性侧索硬化、亨庭顿氏病、帕金森氏病、AIDS痴呆症或视网膜病。另外，在缺血性脑部损伤后的脑部，内源性GABA功能似乎显著减弱(GreenA.R.等人，NeuroscienceLetters,1992,138，141-144;和GreenA.R.等人，Neuropharmacology,2000.39,1483-1493)。研究表明，能刺激GABA能功能的药物(例如，GABA激动剂)当与能降低谷氨酸能神经传递的药剂(例如谷氨酸拮抗剂)组合时具有神经保护作用(Lyden等人，JournalofNeurotrauma，1995,12(2),223-230。此外，已证明脑源性神经营养因子(BDNF)这一蛋白质神经生长因子家族的成员可促进神经元的神经保护和神经再生。(Binder,D.K.和Scharfman，H.E.，GrowthFactors,2004，22(3)，第123-131页)。因此，可增加BDNF水平的化合物可促进神经元的存活和可塑性并且相应地展示出神经保护作用。(Nagappan，G.和Lu，B.，TrendsinNeurosciences,2005，28(9)，第464-471页)。令人惊奇地，已发现5-HT6受体激动剂可有效地增加细胞外GABA浓度并降低由缺血诱发剂造成的谷氨酸释放。另外，现在己发现，5-HT6激动剂可有效地增加经培养大脑皮质神经元中脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白质的水平。这些发现有力地表明，5-HT6激动剂具有神经保护性质，包括促进神经元的存活和可塑性，且可能是治疗和预防神经退化性疾病的有效治疗剂。有利地，使用选择性5-HT6激动剂来治疗神经退化性疾病可能具有最小的副作用。5-HT6受体在脑部、外周器官系统(例如心血管系统)中之独有定位将不受5-HT6激动剂的影响。另外，5-HT6激动剂的特异性可能使作用快速产生并且增强治疗功效。5-HT6激动剂在本文中定义为具有以下性质的任何化合物，即如藉由业内习知的常用结合分析方法所测定能与5-HT6受体结合，并且与血清素相比其展示出25%或以上、优选地50%或以上、更优选地70%或以上、尤其90%或以上的3'，5'-环一磷酸腺苷(cAMP)在5-HT6受体位点的积聚。尤其适用于本发明中之5-HT6激动剂是那些在WO99/47516、英国专利第2,341,549号、美国专利第6,770,642号、美国专利第6,767,912号、美国专利第6,800,640号、美国专利第6,727,246号和美国专利第2003-0236278号中阐述的化合物。美国专利第6,770,642号、美国专利第6,767,912号、美国专利第6,800,640号、美国专利第6,727,246号和美国专利第2003-0236278号以引用方式并入本文中。制备适用于本发明方法中之5-HT6激动剂的方法在上述专利和专利申请案以及美国专利第4,940,710号中阐述。适用于本发明方法中的优选5-HT6激动剂包括那些在WO99/147516、英国专利第2,341,549号、美国专利第6,770,642号和美国专利第2003-0236278号中揭示并且具有式I结构的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>X是CH或N;和112各自独立地为H、卤素、CN、OC02Ru、C02Ri3、CONRwR^CNR!6NRnR！8、SOmRI9、NR2。R21、OR22、COR23或各自视情况经取代的C,-C6垸基、(^2-(:6烯基、C2-C6炔基、C3-Q环垸基、杂环垸基(cycloheteroalkyl)、芳基或杂芳基；R3在X为CH时为S02R8，或在X为N时为(CH2)nNReR7;R4为H、卤素，或为各自视情况经取代的d-C6垸基、d-C6垸氧基、芳基或杂芳基；R5在X为CH时为(CHANR6R7，或在X为N时为S02R8;n为2或3的整数；Re和117各自独立地为H或为各自视情况经取代的CrQ烷基、(:2-(:6烯基、C2-C6炔基、CVC6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，或R6和R7可与它们所连结的原子一起形成视情况含有选自O、N或S的另外杂原子的视情况经取代5至7元环；Rs为视情况经取代的芳基、杂芳基或在桥头具有N原子并且视情况含有1、2或3个选自N、O或S的另外杂原子的8至13元双环或三环环系统；m为0或为1或2的整数；R12、R13、R^和R23各自独立地为H或为各自视情况经取代的d-C6垸基、C2-C6烯基、Q-C6炔基、CVC6环垸基、杂环垸基、芳基或杂芳基；R14、1115和1122各自独立地为H或视情况经取代的CVC6垸基；且R16、R17、R18、R加和1121各自独立地为H或视情况经取代的CVQ垸基；或R2Q和R21可和它们所连结的原子一起形成视情况含有另一选自O、N或S的杂原子的5至7元环；或其立体异构体或其医药上可接受的±卜JULn说明书和权利要求书中所用术语卤素意指F、Cl、Br或I，且术语杂环垸基意指一含有1或2个杂原子并视情况含有一双键的5至7元环系统，所述杂原子可相同或不同且选自N、0和S。涵盖于如本文所定义术语中的杂环垸基环系统实例是下列各环，其中Xi是NR、O或S;且R是H或如下文所述的可选取代基类似地，说明书和权利要求书中所用术语杂芳基意指一含有1、2或3个杂原子的5至10元芳族环系统，所述杂原子可相同或不同且选自N、O或S。所述杂芳基环系统包括吡咯基、唑基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并异噁唑基或诸如此类。术语芳基意指例如具有6-14个碳原子的碳环芳族环系统，例如苯基、萘基、蒽基或诸如此类。本文所用术语卤代烷基意指一具有1至2n+l个可相同或不相同的卤素原子的0^2。+1基团，且如本文所用术语卤代烷氧基意指一具有1至2n+l个可相同或不相同的卤素原子的OCnH2^基团。涵盖于本文所定义术语中于桥头具有一N原子且视情况含有1、2或3个选自N、O或S的额外杂原子的8至13元二环或三环环系统的实例是下列环系统，其中W2是NR、O或S;且R是H或如本文所述的可选取代基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>在说明书和权利要求书中，当指明术语例如Q-C6垸基、C2-Q烯基、C2-CV炔基、cvc7环垸基、杂环垸基、芳基或杂芳基视情况可经取代时，视情况存在的所述取代基可以是一或多个、例如2或3个在研制医药化合物或改进所述化合物中通常采用的旨在影响其结构/活性、持续性、吸收、稳定性或其他有益性质的取代基。所述取代基的具体实例包括卤素原子、硝基、氰基、羟基、烷基、卤代垸基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、垸基氨基、二烷基氨基、甲酰基、垸氧基羰基、羧基、烷酰基、烷硫基、烷基亚磺酰基、垸基磺酰基、氨基酰胺基、苯基、苯氧基、节基、节氧基、杂环基(例如杂芳基或杂环垸基)或环烷基，优选是卤素原子或低碳烷基。通常，可存在0至3个取代基。当任一前述取代基表示垸基取代基基团或包含烷基取代基作为基团的一部分时，其可以是直链或具支链的且可包含多至12个、优选地多至6个、更优选地多至4个碳原子。式I化合物可根据英国专利第2，341，549号、美国专利第6,770,642号和美国专利第2003-0236278号中所述方法制备。适用于本发明方法中的更优选5-HT6激动剂为1-磺酰基色胺衍生物，其包括其中X为CH、n为2、并且R8为各自视情况经取代的苯基或咪唑并[2,l-b][l，3]噻唑基的那些式I化合物。适用于本发明方法中的另一组更优选5-HT6激动剂为3-磺酰基氮杂fl引哚，其包括那些其中X为N、n为2、并且Rs为各自视情况经取代的苯基或咪唑并<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>[l，3]噻唑基的式I化合物。尤其适用于本发明方法的式I5-HT6激动剂化合物有:2-U-[6-氯咪唑并[2，l-b][1，3]噻唑-5-基)磺酰基]-lH-吲哚-3-基)乙胺；(2-(3-[(2，5-二甲氧基苯基)磺酰基]-lH-吡咯并[2，3七]吡啶-1-基}乙基)胺；N-(2-(3-[(3-氟苯基)磺酰基]-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-l-基)乙基)-N，N-二甲胺；2-Ul-(苯基磺酰基)-lH-吲哚-3-基]乙基l-N，N-二甲胺；其医药上可接受的盐；或其立体异构体。展示出5-HT6受体激动剂活性的化合物可与例如下列酸形成酸加成盐习用医药上可接受的酸，例如乙酸、磷酸、硫酸、氢氯酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、乙酸、乳酸、酒石酸、水杨酸、硝酸、磺酸、对甲苯磺酸、甲垸磺酸或诸如此类。因此本发明方法涵盖5-HT6受体激动剂的盐。本发明方法包括5-HT6激动剂化合物的酯、氨基甲酸酯或其他常见前药形式，它们通常是5-HT6激动剂化合物的功能衍生物并且可容易在活体内转化成所述活性部分。因此，本发明方法涵盖用5-HT6激动剂(例如式I化合物)或用未具体揭示但施用后可在活体内转化成5-HT6激动剂的化合物来治疗神经退化性疾病。所包括的还有5-HT6激动剂化合物的代谢产物，所述代谢产物被定义为在将所述激动剂导入一生物系统时所产生的活性物质。展示出5-HT6受体激动剂活性的化合物可以一或多种立体异构体形式存在。所述各种立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、阻转异构体和几何异构体。所属
技术领域：
的技术人员会了解，一种立体异构体当相对于其他立体异构体富集或当与其他立体异构体分离开来时可更具活性或可展现有益作用。另外，所属
技术领域：
的技术人员知晓如何分离、富集或选择性制备所述立体异构体。因此，本发明方法涵盖5-HT6激动剂化合物、其立体异构体和其医药上可接受的盐。所述激动剂化合物可以立体异构体混合物、单个立体异构体或以光学活性或对映异构体纯形式存在。因此，本发明提供一种在有需要的患者中有效治疗和预防神经退化性疾病的方法，其包括向所述患者提供治疗有效量的上文所述5-HT6激动剂。在本发明一实施例中，提供一种在有需要的患者中增加脑源性神经营养因子蛋白质的方法，其包括向所述患者提供治疗有效量的上文所述5-HT6激动剂。所述5-HT6激动剂可通过经口或非经肠施与方式或以任一已知有效施与治疗剂的习用方式来提供给有其需要的患者。本文所用治疗有效量是足以提供一定程度的神经保护作用或足以治疗、预防或缓解与神经退化或者过度的或紊乱的谷氨酸释放有关的症状的量。适合用本发明方法治疗的神经退化性疾病包括慢性神经退化性疾病和急性神经退化性疾病二者。慢性神经退化性疾病包括但不限于阿兹海默氏病、肌萎縮性侧索硬化、亨庭顿氏病、帕金森氏病、AIDS痴呆症、癫痫或视网膜病。急性神经退化性疾病包括但不限于中风、头部或脊椎创伤或窒息。中风包括急性血栓栓塞性中风、局灶性脑缺血和全脑缺血、瞬时脑缺血发作或其他伴有脑部缺血的脑血管病。其他急性神经退化性疾病与下列有关脑部创伤、脊椎创伤、全身性缺氧、组织缺氧(包括胎儿缺氧)、低血糖症、低血压以及在手术期间由栓塞、高灌注或组织缺氧导致的类似损伤。本发明方法可用于多种事件中，包括在手术、尤其心脏手术期间，用于头颅出血的事件中，用于围产儿窒息中，用于心动停止中，或癫痫持续状态，尤其是流向脑部的血流中止一段时间的情况下。在治疗神经退化性疾病中所提供的治疗有效量可根据下列因素而有所变化患者的体型、年龄和反应方式、病症严重程度、主治医师的判断及诸如此类。一般而言，每日经口施与的有效量可以是约0.01至1,000mg/kg，优选地约0.5至500mg/kg，且非经肠施与的有效量可以是约0.1至100mg/kg，优选地约0.5至50mg/kg。在实际应用中，所述5-HT6激动剂通过以固体或液体形式施与所述5-HT6激动剂化合物或其前体来提供，其或单独施与或与一或多种习用医药载剂或赋形剂组合施与。因此，本发明提供一种用于治疗和预防神经退化性疾病的医药组合物，其包括医药上可接受的载剂和有效量的上文所述5-HT6激动剂。适用于本发明组合物的固体载剂包括一或多种可起调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填充剂、滑动剂、压縮助剂、粘结剂、锭剂崩解剂或封装材料作用的物质。在粉剂中，载剂可为与微细5-HT6激动剂化合物混合在一起的微细固体。在锭剂中，所述5-HT6激动剂化合物可与具有必需的压缩性质的载剂以适宜比例混合并以期望形状和尺寸压制。所述粉剂和锭剂可包含多至99重量呢的所述5-HT6激动剂化合物。适用于本发明组合物的固体载剂包括磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、糖类、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧基甲基纤维素纳、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡和离子交换树脂。可于本发明组合物中采用任一适用于制备溶液、悬浮液、乳液、糖浆和酏剂的医药上可接受的液体载剂。可将所述5-HT6激动剂化合物溶解于或悬浮于医药上可接受的液体载剂中，例如水、有机溶剂或医药上可接受的油或脂肪或其混合物。所述液体组合物可包含其他适宜医药添加剂，例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂、渗透调节剂或诸如此类。适用于经口和非经肠施与的液体载剂实例包括水(尤其是包含例如纤维素衍生物等上述添加剂的水，优选地是羧基甲基纤维素钠溶液)、醇类(包括一元醇和多元醇，例如二醇类)或其衍生物、或油类(例如，精制椰子油和花生油)。对于非经肠施与，载剂也可以是油酯，例如油酸乙酯或肉豆蔻酸异丙酯。为无菌溶液或悬浮液的本发明组合物适用于肌内、腹膜腔内或皮下注射。无菌溶液也可经静脉施与。适用于经口施与的本发明组合物可呈液体或固体组合物形式。为使理解更为清楚并且更清楚地阐明本发明，下文对其具体实例加以阐述。下列实例仅具有阐述性质而不应将其理解成以任何方式对本发明范围和基本原理加以限制。对多种5-HT6配体的5-HT6结合亲和性和cAMP产生的测定A)对测试化合物5-HT6结合亲和性的评价以下列方法评价测试化合物对血清素5-HT6受体的亲和性。收集表达克隆的人类5-HT6受体的Hela培养细胞并以低速(1，000xg)离心10.0分钟以去除培养基。将收集的细胞悬浮于一半体积的新鲜的磷酸盐缓冲生理盐水溶液中并再次以相同速率离心。重复此操作。然后将收集到的细胞于10体积50mMTris.HCl(pH7.4)和0.5mMEDTA中匀浆。将匀浆液以40,000xg离心30.0分钟并收集沉淀。将所得沉淀重悬于10体积Tris.HCl缓冲液中并再次以相同速率离心。将最终得到的沉淀悬浮于少量Tris.HCl缓冲液中并于10至25pl体积等份中测定组织蛋白质含量。根据Lowry等人在J.Biol.Chem.193:265(1951)中所述方法用牛血清白蛋白作为蛋白质测定的标准物。调整悬浮细胞膜体积以得到组织蛋白质浓度为1.0mg/ml的悬浮液。将所制备的膜悬浮液(IO倍浓缩)等分成l.Oml体积的小份，并在用于后续结合实验之前保存在-70。C下。结合实验以96孔微滴定板形式以200pl的总体积实施。向每一孔中添加下列混合物于含有10.0mMMgCI2和0.5mMEDTA的50mMTris.HCl缓冲液(pH7.4)中制备的80.0|il培育缓冲液和20[3H]-LSD(S.A.，86.0Ci/mmol，购自AmershamLifeScience),3.0nM。[3H]LSD对人类血清素5-HT6受体的离解常数KD是2.9nM，如通过利用[SH]LSD的不断增加浓度的饱和结合所测定。本反应通过最终添加100.0pl组织悬浮液来起始。在10.0pM美赛西平(methiothepin)存在下测量非特异性结合。测试化合物以20.0pi体积添加。使所述反应于室温下在暗处持续120min，其间将已结合的配体-受体复合体于配有一PackardFiltermate196Harvester的96孔Unifilter上过滤除去。在向各浅孔中添加40.0|ilMicroscint-20闪烁剂后，将附着于过滤片上的已结合复合体在空气中干燥并在配有6个光电倍增管检测器的PackardTopCo皿t③中测量放射活性。将Unifilter板加热密封并在PackardTopCount③中计数，其中氚效率为31.0%。将对5-HT6受体的特异性结合定义为总结合放射活性减去在10.0未标记美赛西平存在下的结合量。将不同浓度测试化合物存在下的结合表示为不存在测试化合物时特异性结合的百分比。将结果以log呢结合对log测试化合物浓度作图。用计算机辅助程序Prism⑧进行数据点的非线性回归分析，得到测试化合物的IQ。和Ki值二者，其中置信界限为95%。绘制数据点的线性回归线，根据下列公式自所述线性回归线测定ICso值并测定Ki值Ki=IC50/(1+L/KD)其中L是所用放射性配体的浓度且KD是所述配体对受体的离解常数，二者皆以nM表示。使用本分析，测定下列Ki值并将其与那些由已知可对5-HT6受体展现结合的代表性化合物得到的数值加以比较。所述数据示于下表I中。B)使用cAMP积聚测定5-HT6激动剂活性使用含有稳定转染入HELA细胞中的人类5-HT6受体的24孔板测量细胞内cAMP水平。在分析开始后，抽吸出细胞维持的培养基并将细胞在37'C下在KREBS缓冲液中预培养15分钟。在此初始培养后，抽吸出缓冲液并在37'C下在含有100nMIBMX(3-异丁基-l-甲基黄嘌呤)的KREBS缓冲液中实施另外的培养。随后，在37'C下用在10—6至10-11M间的测试化合物浓度将细胞培养10分钟。通过添加0.5M高氯酸中止分析。经由cAMPSPA筛选试剂盒通过放射性免疫分析测定细胞内cAMP水平。使用GraphPadPrism(GraphPadSoftware,SanDiego，CA)以图表形式分析数据。5-HT6激动剂从而定义为相对于通过添加血清素(100nM)测量的cAMP水平展示出》25%活性的化合物。所述值记录为Emax(9fc)并示于表I中。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实例2对5-HT6激动剂在神经元存活方面的评价在此评价中，自E16大鼠胚胎制备神经元培养物。在经过24小时后，将测试化合物B以不同浓度添加到所述培养物中。在经过72小时后，通过神经丝ELISA测定神经元存活率。数据以总T神经丝含量表示。在此评价中测试化合物B的ECso为50nM。结果示于图1中。结果和讨论如图1中所示，通过在72小时后存在的神经丝的量来测量培养物中神经元的存活率。当与媒剂处理的对照相比时，用测试化合物B处理经培养神经元可增加神经丝含量。能使存活率显著增大的测试化合物B的最低浓度为10nM。实例3对5-HT6激动剂在经培养大脑皮质神经元中神经突生长方面的评价在此评价中，自E16大鼠胚胎制备大脑皮质神经元培养物。在经过24小时后，将测试化合物B以不同浓度添加到所述培养物中。在经过72小时后，通过用微管蛋白抗体(TUJ-1)将细胞染色并用CellomicsArrayScan测量神经突长度，使用增强的神经突生长(EnhancedNeuriteOutgrowth,ENO)算法来测定神经突生长。数据以总神经突长度表示。在此评价中测试化合物B的EC5o为48nM。结果示于图2中。结果和讨论如图2中所示，72小时后定量培养物中经培养神经元的总长度。当与媒剂处理的对照相比时，用测试化合物B处理经培养神经元可增加总神经丝长度。能使总神经突长度显著增加的测试化合物B的最低浓度为10nM。实例4对5-HT6激动剂在小脑颗粒神经元中抗缺氧和缺糖的神经保护作用的评价小脑颗粒神经元(CGN)的制备将自P7大鼠幼崽脑部分离的小脑切成1mm的片并转移到含有在HBSS中的0.3mg/ml胰蛋白酶的试管中。在酶切消化后，以机械方式粉碎所述组织。收集上清液并在1200rpm下离心10分钟。将所产生的沉淀重悬浮在完全培养基(Neurobasal，25nM钾，0.5mML-谷氨酰胺，100U/ml青霉素，100}ig/ml链霉素，10%FBS)中并以0.5x106细胞/孔的密度涂布在24孔板中。24小时后，将培养基更换为完全不含血清的培养基(Neurobasal，25nM钾，0.5mML-谷氨酰胺，100U/ml青霉素，100pg/ml链霉素，B-27补充剂)。CGN中的缺氧缺糖(OGD).-这是一个熟知的与谷氨酸诱发的兴奋毒性有关的缺血样神经元损伤模型T(A.Kaasik等人，Neuroscience(2001)102，第427-432页)。在实验前将培养物在活体外保持14天。将培养物用不同浓度的测试化合物C预处理1小时并转移到无氧室中，在这里将培养基更换为去氧缓冲液并在存在新鲜测试化合物C下保持4小时。在4小时的OGD后，将去氧缓冲液更换为完全培养基。将培养物在存在新鲜测试化合物C下保持24小时。在24小时结束后，通过测量释放到培养基中的乳酸脱氢酶(LDH)测定细胞死亡并以细胞死亡百分率表示。结果示于图3中并以5次实验的平均值+SD表示。Sham条表示使培养物经受调节和培养基的改变而不进行OGD或药物处理而获得的结果。结果和讨论如图3中所示，使CGN培养物经受4小时的OCG可产生50%以上的细胞死亡，这是通过测量释放入培养基中的胞质酶(LDH)获得。用测试化合物C预处理经培养神经元，随后在测试化合物C的存在下使之经受OGD和24小时的回收期，结果神经元细胞死亡以剂量依赖方式降低。提供显著保护的测试化合物C的最低浓度为10nM。用1测试化合物C处理可使神经元死亡降低50%。实例5对5-HT6激动剂在小脑颗粒神经元中抗钾撤停诱发的细胞凋亡的神经保护作用的评价钾撤停，即更换掉CGN培养基中的25nM钾是熟知的由细胞凋亡导致的神经元细胞死亡模型(T.M.Miller和E.M.Johnson,JournalofNeuroscience,(1996)16(23)，第7487-7495页)。在实验前将培养物保持7天。将含25mMK+的完全培养基更换为含5mMK+的完全培养基。将不同浓度的测试化合物C添加到培养物中。24小时后，通过经由ELISA测量DNA断裂来测定凋亡性细胞死亡。凋亡性细胞死亡以％细胞凋亡表示。结果以2次实验的平均值+SD表示并示于图4中。结果和讨论在图4中可看出，将25mM钾更换为5mM钾在经过24小时后可诱发75%的凋亡性神经元细胞死亡。在低钾期间存在测试化合物C可显著地并且以剂量依赖方法减少在此模型中用作细胞凋亡量度的断裂DNA的量。所评价的测试化合物C的低浓度(0.3pM)使细胞死亡降低50%，而在存在3.0(iM测试化合物C下发现几乎百分百的抗细胞凋亡保护。实例6对5-HT6激动剂在经培养大脑皮质神经元中脑源性神经营养因子蛋白质水平上的作用的评价在此评价中，自E16大鼠胚胎制备大脑皮质神经元培养物并将其涂在预涂覆10cmPetri培养皿上。在24小时后，将测试化合物B添加到培养物中。在72小时后通过裂解细胞并使用BDNF三明治ELISA测量脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白质的水平。更具体的说，用抗BDN单克隆抗体涂布ELISA板。阻断非特异性结合并添加50pg的试样蛋白质。添加第二抗BDNF抗体并培养。添加与辣根过氧化物酶偶联的抗IgY抗体并培养。添加TMB溶液并在板式读取器中测量比色反应(450nm的吸光率)。72小时后定量培养物中的BDNF水平。数据以图表形式显示于图6中。结果和讨论如图6中所示，当与媒剂处理的对照相比时，用测试化合物B处理经培养神经元显著增大BDNF蛋白质水平。参者文献iHolt，^V.F.等人，GlutamateinHealthandDisease:TheRoleofInhibitors,NeuroprotectioninCNSDiseases,Bar,P,R.及Beal,M.F.编辑，MarcelDekker公司，NewYork,1997.第87-199页。Engelsen,B.A.等人，AlterationsinExcitatoryAminoAcidTransmittersinHumanNeurologicalDiseaseandNeuropathology,NeurotoxicityofExcitatoryAminoAcids.Guidotti，A.编辑，RavenPress有限公司，NewYork,1990,第311-332页。Ince,RG.,等人，TheRoleofExcitotoxicityinNeurologicalDisease,Res.Contemp.Pharmacother，(1997)，8，第195-212页。Meldrum，B.S.，TheGutamateSynapseasaTherapeuticalTarget:PerspectivefortheFuture,Prog.BrainRes.，(1998)，第441-458页。2Koroshetz，W.J.andMoskowitz,M.A.,EmergingTreatmentforStrokeinHumans,TrendsinPharmacol.Science,(1996),17,第227-233页。Dunn,C.D,R.，Stroke:Trends,TratmentsandMarkets,ScripReports,PJBPublications,RichmondVirginia,1995。3Arrowsmith，J.E.，等人，NeuroprotectionoftheBrainDuringCardiopulmonaryBypass:ARandomizedTrialofRemacemideDuringCoronaryArteryBypassin171Patients,Stroke,(1998)，29，第2357-2362页。权利要求1、一种在有需要的患者中治疗神经退化性疾病的方法，其包括向所述患者提供治疗有效量的5-羟色胺-6激动剂。2、根据权利要求1所述的方法，其中所述5-羟色胺-6激动剂是1-磺酰基色胺衍生物。3、根据权利要求1所述的方法，其中所述5-羟色胺-6激动剂是l-氨基垸基-3-磺酰基氮杂吲哚衍生物。4、根据权利要求1所述的方法，其中所述5-羟色胺-6激动剂是式I化合物，其中X为CH或N;R！和112各自独立地为H、卣素、CN、OC02Ri2、C02R!3、CONR!4R!5、CNRwNRnR比、SOmR19、NR20R21、OR22、COR23或各自视情况经取代的Q-C6烷基、C2-Q烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、杂环垸基(cycloheteroalkyl)、芳基或杂芳基；R3在X为CH时为S02R8，或在X为N时为(CHANR6R7;R4为H、卤素，或为各自视情况经取代的CVC6烷基、d-Q烷氧基、芳基或杂芳基；R5在X为CH时为(CH2)nNR6R7，或在X为N时为S02R8;n为2或3的整数；R6和R7各自独立地为H或为各自视情况经取代的d-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、CVC6环烷基、杂环垸基、芳基或杂芳基，或R6和R7可与它们所连结的原子一起形成视情况含有选自O、N或S的另外杂原子的视情况经取代5至7元环；R8为视情况经取代的芳基、杂芳基或在桥头具有一N原子并且视情况含有1、2或3个选自N、O或S的另外杂原子的8至13元双环或三环环系统；m为0或l或2的整数；R12、R13、Rw和R23各自独立地为H或为各自视情况经取代的d-C6烷基、C2-C6烯基、C2-Q炔基、CVC6环烷基、杂环垸基、芳基或杂芳基；R14、Ru和R22各自独立地为H或视情况经取代的d-C6烷基；且R16、R17、R18、R2o和Ru各自独立地为H或视情况经取代的d-C4垸基；或R20和Ru可和它们所连结的原子一起形成视情况含有另一选自O、N或S的杂原子的5至7元环；或其立体异构体或其医药上可接受的盐。5、根据权利要求4所述的方法，其具有式I化合物，其中X为CH;n为2;并且R8为各自视情况经取代的苯基或咪唑并[2，l-b][l，3]噻唑基。6、根据权利要求4所述的方法，其具有式I化合物，其中X为N;n为2;并且R8为各自视情况经取代的苯基或咪唑并[2，l-b][l，3]噻唑基。7、根据权利要求4所述的方法，其具有选自由下列化合物组成的群组的式I化合物2-(l-[6-氯咪唑并[2，l-b][l，3]噻唑-5-基)磺酰基]-lH-吲哚-3-基)乙胺；(2-(3-[(2，5-二甲氧基苯基)磺酰基]-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶-l-基)乙萄胺；N-(2-(3-[(3-氟苯基)磺酰基]-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶-l-基)乙基)-N,N-二甲胺；2-([l-(苯基磺酰基)-lH-吲哚-3-基]乙基卜N，N-二甲胺；其医药上可接受的盐；及其立体异构体。8、根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述疾病为急性神经退化性疾病。9、根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述疾病为慢性神经退化性疾病。10、根据权利要求8或权利要求9所述的方法，其中所述疾病选自中风；头部创伤；脊椎创伤；窒息；阿兹海默氏病(Alzheimer'sdisease);亨庭顿氏病(Huntington'sdisease);帕金森氏病(Parkinson'sdisease);癫痫；肌萎縮性侧索硬化；AIDS痴呆症；和视网膜病。11、一种用于治疗神经退化性疾病的医药组合物，其包含医药上可接受的载剂和有效量的5-HT6激动剂或权利要求2至8中任一项所述的5-HT6激动剂。12、一种5-HT6激动剂或权利要求2至8中任一项所述的5-HT6激动剂的用途，其用于制备治疗神经退化性疾病用药物。13、根据权利要求12所述的用途，其中所述疾病选自中风；头部创伤；脊椎创伤；窒息；阿兹海默氏病；亨庭顿氏病；帕金森氏病；癫痫；肌萎縮性侧索硬化；AIDS痴呆症；和视网膜病。全文摘要本发明提供用于在有需要的患者中治疗、改善或预防神经退化性疾病的方法，其包括向所述患者投与有效量的5-羟色胺-6激动剂。文档编号A61P25/16GK101098683SQ200580046420公开日2008年1月2日申请日期2005年12月12日优先权日2004年12月14日发明者凯文·蓬,李·欧文·谢克特,玛格丽特·玛丽亚·扎列斯卡申请人:惠氏公司