专利名称：超临界co的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种超临界CO2提取雷公藤有效成分萜类化合物的方法及组成，属于中药雷公藤药效成分的提取分离技术。
背景技术：
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook f.)系卫矛科雷公藤属植物，中药大辞典记载，具有祛风除湿、通络止痛、消肿止痛、解毒杀虫的功效，临床用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎和红斑狼疮等自身免疫性疾病，近年来用于器官移植的抗排斥反应治疗，均取得了较好疗效。现代研究相继发现雷公藤有抗炎、抗免疫、抗生育、抗肿瘤、抗菌活性等作用。至今从雷公藤中已分离出200多种化学单体，其中二萜类、倍半萜生物碱类、三萜类为主要活性成分。
在雷公藤制剂研究方面，有市售雷公藤多甙片及雷藤片；90年代以后，雷公藤制剂研究发展迅猛，特别在缓释、控释方面的研究，对提高雷公藤疗效、降低毒副作用将产生重要作用。目前雷公藤制剂有雷公藤总萜片、雷公藤微囊片、雷公藤滴丸、雷公藤双层栓、雷公藤巴布剂。
雷公藤化学成分复杂，药理作用广泛，有重要的临床应用价值。但由于雷公藤毒副作用较大，限制了临床应用的推广。应进一步加强对雷公藤的药物化学和药理作用及临床应用的研究，提取、纯化、合成出高效低毒的有效成分或衍生物，提高其安全性和应用价值，为雷公藤的进一步开发利用奠定基础。
传统雷公藤有效成分提取的方法主要有水提醇沉法、水提氯仿萃取法、醇提醋酸乙酯萃取法等，依据物质的极性“相似相溶”原理以不同极性的溶剂去溶解提取极性与其相似的成分。传统提取方法存在明显的缺点(1)提取效率低很多有效成分有时只提取出来一部分，剩余部分却随药渣倒掉，造成中草药资源的浪费；(2)生产周期长，生产效率较低；(3)选择性不好许多无效杂质和毒性成分随有效成分一同提取出来，有效成分的浓度低，毒性成分含量较高，多种溶剂提取工艺均无法克服毒性大的缺点；(4)有效成分易被破坏由于温度高、与空气接触等，使药物中热敏性成分、易氧化成分受到破坏；
(5)药品质量和档次较低亲脂性有效成分提取后有机溶剂有残留。
发明内容
本发明的目的在于提供一种超临界CO2提取雷公藤有效成分萜类化合物的方法及组成，该方法提取的雷公藤有效成分萜类化合物的药效高而毒副作用低。
本发明是通过以下技术方案加以实现的，一种超临界CO2提取雷公藤有效成分萜类化合物的方法，其特征在于包括以下过程将雷公藤粉碎至10～200目，按雷公藤与乙醇质量比2∶1-1.5浸于质量浓度55～85％的乙醇夹带剂中，在萃取釜以超临界CO2为溶剂进行萃取，其操作条件为温度为30～50℃，压力为20-40MPa，CO2流速为10-30kg/h，进行萃取60～150min。
以上述方法提取雷公藤有效成分萜类化合物的组成，其特征在于包括倍半萜生物碱、松香烷型二萜和三萜羧酸类，三类化合物的质量比为倍半萜生物碱30-50％，松香烷型二萜25-45％，三萜羧酸类5-15％；另外，雷公藤甲素的质量含量为0.05-0.15％，雷公藤红素质量含量为0.1-0.5％。
本发明与其他提取方法相比较，工艺过程简单，有效地调节萃取物中三类有效化学成分的比例，明显区别于传统工艺的提取；有效成分提取率高，雷公藤甲素提取率为200-400％。药效为市售产品的3-4倍，而毒性为市售产品的20-50％。
图1为本发明实施例1超临界CO2萃取物的高效液相色谱分析图。
图中△生物碱类；○松香烷型二萜类；*三萜羧酸类。
三类化合物占指纹图谱总峰面积90.15％，其中倍半萜生物碱45.65％，松香烷型二萜类35.5％，三萜羧酸类9.0％具体实施方式
下列实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明，在不背离本发明的主旨和原则的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落如本发明的待批权利要求范围之内。
实施例1用超临界二氧化碳萃取循环装置完成萃取，取10-120目产于湖南岳阳的雷公藤药材粉末180.53克装于萃取器里，以CO2为溶剂，设定萃取柱、分离器的温度分别为40-45℃和35℃、压力分别为25MPa和5MPa、CO2用量与原料比约为100，夹带剂加入质量75％乙醇108毫升，萃取时间1.67h，得到萃取物1.95克，萃取率1.08％。
以雷公藤生药中雷公藤甲素、雷公藤红素含量测定方法-索氏甲醇提取法，雷公藤生物总碱索氏95％乙醇提取法得到的雷公藤甲素、雷公藤生物总碱、雷公藤红素的量为基准，与超临界萃取得到的雷公藤甲素、雷公藤生物总碱、雷公藤红素的量作比较，定义提取率为提取率(％)＝(超临界流体萃取量/索氏提取量)×100％。
本实施例有效成分萃取物的各项性能检测结果如下(1)超临界萃取物各项参数和各成分的萃取效率指标
由此得出，超临界流体萃取工艺可以有效的增加松香烷型二萜类成分的提取率，同时降低主要毒性成分之一雷公藤红素的提取率，针对性地将三类有效成分比例控制在合理的范围，从而达到协同增效和减毒的作用。
(2)超临界萃取物中雷公藤甲素、雷公藤总生物碱以及雷公藤红素的含量采用本实验室建立的高效液相色谱法测定本工艺条件下的萃取物中雷公藤甲素质量含量0.090％，雷公藤红素质量含量0.348％，总生物碱的质量含量为30.42％。
实施例2用超临界二氧化碳萃取循环装置进行萃取，取10-120目产于湖南岳阳的雷公藤药材粉末180.78克装于萃取器里，以CO2为溶剂，设定萃取柱、分离器的温度分别为40-45℃和35℃、压力分别为25MPa和5MPa、CO2用量与原料约为100，夹带剂加入质量80％乙醇108毫升，萃取时间1.67h，得到萃取物1.70克，出膏率0.94％。
本实施例有效成分萃取物的各项性能检测结果如下(1)超临界萃取物各项参数和各成分的萃取效率指标
(2)超临界萃取物中雷公藤甲素、雷公藤总生物碱以及雷公藤红素的含量采用本实验室建立的高效液相色谱法测定本工艺条件下的萃取物中雷公藤甲素质量含量0.079％，雷公藤红素质量含量0.213％，总生物碱的质量含量为23.04％。
实施例3用超临界二氧化碳萃取循环装置进行萃取，取10-120目的湖南岳阳产的雷公藤药材粉末180.65克装于萃取器里，以CO2为溶剂，设定萃取柱、分离器的温度分别为40-45℃和35℃、压力分别为25MPa和5MPa、CO2用量与原料约为100，夹带剂加入质量60％乙醇108毫升，萃取时间1.67h，得到萃取物1.31克，出膏率0.72％。
本实施例有效成分萃取物的各项性能检测结果如下(1)超临界萃取物各项参数和各成分的萃取效率指标
(2)超临界萃取物中雷公藤甲素、雷公藤总生物碱以及雷公藤红素的含量采用本实验室建立的高效液相色谱法测定本工艺条件下的萃取物中雷公藤甲素质量含量0.077％，雷公藤红素质量含量0.197％，总生物碱的质量含量为24.42％。有效成分萃取物(实施例1)的有关药效和毒性实验雷公藤超临界萃取物对淋巴细胞转化的抑制作用Control(ConA)＝0.248±0.010，无ConA＝0.111±0.012刺激指数2.23地塞米松(OD)＝0.093±0.017；抑制率＝62.5％
ED50＝5.08μg/mL，细胞数为5×106个/mL
A厂家产雷公藤片淋转实验Control(ConA)＝0.476±0.021
ED50＝19.94μg/mLB厂家产雷公藤片淋转实验Control(ConA)＝0.476±0.021
ED50＝14.6μg/mL体外淋巴细胞转化实验计算得出雷公藤超临界萃取物的ED50为5.08μg/mL，A雷公藤片的ED50为19.94μg/mL，B雷公藤片的ED50为14.60μg/mL.达到了提高药效的目的。
毒性实验取本法雷公藤有效成分萃取物，以昆明种小鼠的半数致死量作为毒性考察指标，测定半数致死量(LD50)值。实验共分五组，每组10只小鼠。应用简化几率法计算得出LD50。
雷公藤有效成分萃取物的LD50为312.54±34.21mg/kg；A厂家产雷公藤片中雷公藤多甙的LD50为159.7±14.3mg/kg。降低毒性约1倍。
权利要求
1.一种超临界CO2提取雷公藤有效成分萜类化合物的方法，其特征在于包括以下过程将雷公藤粉碎至10～200目，按雷公藤与乙醇质量比2∶1-1.5浸于质量浓度55～85％的乙醇夹带剂中，在萃取釜以超临界CO2为溶剂进行萃取，其操作条件为温度为30～50℃，压力为20-40MPa，CO2流速为10-30kg/h，进行萃取60～150min。
2.一种按权利要求1所述的超临界CO2提取雷公藤有效成分萜类化合物方法提取的化合物的组成，其特征在于包括倍半萜生物碱、松香烷型二萜和三萜羧酸类，三类化合物的质量比为倍半萜生物碱30-50％，松香烷型二萜25-45％，三萜羧酸类5-15％；另外，雷公藤甲素的质量含量为0.05-0.15％，雷公藤红素质量含量为0.1-0.5％。
全文摘要
本发明公开了一种超临界CO
文档编号A61P37/00GK1915280SQ20061001559
公开日2007年2月21日 申请日期2006年9月6日 优先权日2006年9月6日
发明者段宏泉, 李淑芬, 周雯, 李红茹, 滕杰, 张彦文 申请人:天津医科大学