专利名称：一种治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种新藤黄酸中药制剂及其制备方法，尤其涉及到一种治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂及其制备方法。
背景技术：
藤黄(Gamboge)系藤黄科(Gittiferae)植物(Garcinia hanburyi Hook.f.)所分泌的干燥树脂。呈红黄色或橙红色，圆柱形或不规则的块状物，质脆易碎。主要产于柬埔寨、泰国、越南以及印度等地区。《海药本草》始载“酸涩有毒”、主治虫牙蛀齿，点之便落“，历代以藤黄为主要成分的膏、丸、散计有多种。现代中医临床应用藤黄也较为广泛，单用或与其它药物合用治疗痈肿初起、创疡、带状疱疹、骨髓炎、毛囊炎等取得良好疗效。美国药典曾收载该品，酸性成分为藤黄树脂中主要活性成分。1955年M.Amorosa在Ann.Chim.Itay 54，40(1955)文献首次报道了获得藤黄酸成分，并采用核磁共振技术确定了藤黄酸的分子结构。吕归宝等在《药学学报》1984，19(8)P636-639，篇名“藤黄中新藤黄酸的分离及其结构”的文章中报道了从藤黄中分离得到新藤黄酸，并用紫外、红外广谱、核磁共振等方法对其结构进行了鉴定。1991年曲宝玺等在《中国肿瘤临床》1991，18(1)，P50-52，篇名为“藤黄II号抗癌作用的实验研究”中报道了以新藤黄酸给予模型小鼠，表明该药对小鼠移植性肿瘤有明显抑制作用，与藤黄酸相比具有更高的治疗指数，对部分类型的恶性肿瘤具有更好的治疗效果。新藤黄酸是一种具有较高价值的潜在抗肿瘤治疗药物，但是只有用2％吐温80配制的新藤黄酸水溶液，稳定性差，临床使用十分不便。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，该注射用新藤黄酸制剂具有良好的溶解性和稳定性，原材料来源丰富，易于工业化生产，产品质量易于控制，经济实用。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂的制备方法，该制备方法工艺简单。
本发明解决其技术问题采用的技术方案一种治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，以新藤黄酸为活性成分，其余成分为助溶剂、赋形剂、注射用水，其原料质量份配比范围新藤黄酸1～100份助溶剂 1～100份赋形剂 1～200份注射用水0～5000份。
上述原料优选质量份配比范围新藤黄酸10～80份助溶剂 10～40份赋形剂 5～70份注射用水0～4200份。
上述原料优选质量份配比范围新藤黄酸30～50份助溶剂 15～35份赋形剂 25～60份注射用水0～3000份。
所述制剂是注射剂，所述的注射剂为溶液型注射剂、乳浊型注射剂、注射用冻干粉针、注射用灭菌粉剂或片剂中的任何一种。
所述的助溶剂选用油酸山梨坦、聚山梨酯类、普流罗尼克、聚乙二醇、聚乙烯醇、丙二醇、乙醇、甘油、有机酸及其钠盐、酰胺及胺类、聚维酮、L-精氨酸、赖氨酸、葡甲胺、碳酸氢钠、碳酸钠、亚硫酸氢钠、依地酸二钠、氢氧化钠、硼酸钠、蜂胶中的一种或几种。
所述的助溶剂为L-精氨酸、赖氨酸或葡甲胺中的任何一种或几种。
所述的赋形剂选用氯化钠、甘露醇、右旋糖酐中的一种或几种。
本发明的另一个技术问题所采用的技术方案注射用新藤黄酸制剂制备方法，其特征在于它包括如下步骤
A、按上述质量份配比称取原料新藤黄酸，加入注射用水搅匀；B、加入助溶剂，溶解至澄清；C、加入赋形剂，搅拌溶解；D、加入活性炭，搅拌、脱炭、过滤、分装，即制成新藤黄酸注射液。
上述的B步加入助溶剂后采用超声溶解。
将上述D步所制成的新藤黄酸注射液冷冻干燥，即制成注射用新藤黄酸冻干粉针。
本发明所用原料新藤黄酸具有抗肿瘤作用，本发明所用新藤黄酸可使用背景技术中的吕归宝等在《药学学报》1984，19(8)P636-639，篇名“藤黄中新藤黄酸的分离及其结构”的文章中报道了从藤黄中分离得到新藤黄酸所公开的方法制备，也可使用如下方法制备取藤黄粉末100g，研细，加丙酮300～700mL，65℃水浴回流10～180min，静置，倒出上清液，再依据上述方法分别加丙酮300～600mL、100～500mL继续提取，共3次，合并提取液。减压回收丙酮，浓缩至约50～200mL，用100～700g硅胶吸附，挥干丙酮；另取已活化硅胶300～1800g，以苯湿法装入层析柱中，最后装入拌药硅胶，硅胶柱用二倍柱体积的苯洗脱，再用苯-乙酸乙酯(3～15∶1)洗脱至无色，收集苯-乙酸乙酯(3～15∶1)洗脱部分，减压回收至干。按照上述方法通过硅胶G柱层析(氯仿装柱)，以氯仿-甲醇-二乙胺(6～20∶0.5～4∶0.5～6)洗脱，收集流分，新藤黄酸部分以稀盐酸酸化，得亮黄色沉淀，滤取沉淀，水洗到中性，抽干，得亮黄色无定形固体新藤黄酸原料。
本发明注射用新藤黄酸制剂配方的筛选新藤黄酸为亮黄色结晶性粉末，在乙醇、甲醇等有机溶剂中溶解，水中不溶，在氢氧化钠、碳酸氢钠等碱性溶液中溶解，但不稳定，易于水解，故选择合适的助溶剂是制剂的关键。我们选择了多种助溶剂，新藤黄酸在氢氧化钠和碳酸氢钠中溶解最快，但溶液在室温放置4～8小时后颜色变深，提示药物已经发生降解。表面活性剂对本品有较好的助溶效果，水溶液室温放置6天，颜色改变不明显，高效液相色谱测定新藤黄酸含量基本无改变。酸性、中性氨基酸对本品基本无助溶效果。碱性氨基酸如L-精氨酸及赖氨酸对新藤黄酸助溶效果显著，水溶液室温放置6天，颜色改变不明显，高效液相色谱测定新藤黄酸含量基本无改变。葡甲胺助溶效果也较好。L-精氨酸、赖氨酸或葡甲胺为本制剂的优选助溶剂，L-精氨酸为本制剂的最优助溶剂，实验结果见表1。
表1助溶剂对新藤黄酸溶解的影响(100mg∶10mL)
新藤黄酸100mg加助溶剂L-精氨酸后，采用冷冻干燥，冻干粉呈现易碎、松散的网格状，复溶时溶液有乳光，澄明度差，因此我们加入不同赋形剂并进行了筛选，结果见表2。
表2新藤黄酸助溶剂筛选结果(1)
从上表可看出，新藤黄酸加助溶剂L-精氨酸时，选用甘露醇、氯化钠、乳糖、右旋糖酐做为赋形剂较为理想。
新藤黄酸100mg加助溶剂赖氨酸后，采用冷冻干燥，冻干粉呈现易碎、松散的块状，复溶时溶液略有乳光，澄明度检查不合格，因此我们加入不同赋形剂并进行了筛选，结果见表3。
表3新藤黄酸助溶剂筛选结果(2)
从上表可看出，新藤黄酸加助溶剂赖氨酸时，选用甘露醇、氯化钠、右旋糖酐做为赋形剂较为理想。
因此本发明的赋形剂优选甘露醇、氯化钠、右旋糖酐；最优选甘露醇。
以高效液相色谱进行成分测定表明，本发明的注射用新藤黄酸配方的组合物具有良好的稳定性，可长时间室温放置，特别是在冻干粉中充入N2可长时间保存不变质，复溶<p>表1
通过三次独立实验，结果显示注射用新藤黄酸对动物和人肿瘤细胞株的半数抑制浓度(IC50)均在10μg/ml以下。根据国家药监局相关标准(《新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、毒理学)》1993；《新药(中药)临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、毒理学)》1993)，当药物对体外培养癌细胞的半数抑制浓度(IC50)＜10μg/ml以下时，即可判断药物有显著的抗肿瘤活性，因此，由实验结果可以判断注射用新藤黄酸对恶性肿瘤细胞有明显的细胞毒作用。
实验例2.
注射用新藤黄酸对体外培养的人肺癌A549细胞的细胞毒作用(时间-效应关系)1.实验材料(1)实验用药注射用新藤黄酸，0.2g/支；5-FU，0.25g/支，江苏南通制药总厂，批号031203(2)肿瘤细胞株人肺癌A549细胞。
2.实验方法细胞培养于含10％小牛血清的高糖型DMEM培养液中，稀释成4～5×103细胞/mL。在磁力搅拌条件下以8头加样枪接种于96孔培养板中，每孔190μL，置于37℃、5％CO2培养箱中，饱和湿度条件培养24h，待细胞贴壁后，实验组各孔分别加入10μL浓度为3.0μg/mL的注射用新藤黄酸溶液；西药阳性对照药物组5-FU的浓度为10μg/mL；每批实验同时设溶剂对照孔。各组给药后，分别再继续培养24、48、72、94、120、144h，对注射用新藤黄酸、5-FU阳性对照组以及溶剂对照组各取8孔，每孔加浓度为5mg/mL MTT生理盐水溶液20μL，继续培养4h，然后弃去培养基，加150μL DMSO充分溶解10min，8头加样枪移取DMSO溶液加于另一全新微孔培养板中，按MTT法在酶标仪中测定各孔的光密度(OD)值，抑制率按下式计算
实验重复三次，抑制率值为三次平均值。
3.实验结果注射用新藤黄酸对体外培养的人肺癌A549细胞的细胞毒作用(时间-效应关系)实验结果见表5.表6.表7.
表5藤黄酸对人肺癌A549细胞的时间-效应关系(实验一)
表6新藤黄酸对人肺癌A549细胞的时间-效应关系(实验二)
表7新藤黄酸对人肺癌A549细胞的时间-效应关系(实验三)
由上述实验结果可知，本发明新藤黄酸对体外培养的人肺癌A549细胞增殖具有明显的时间-效应关系，作用强度随给药时间的延长而增加。对肺癌A549细胞的抗增殖作用强度与作用时间确切相关。对细胞增殖的抑制作用与临床标准用药5-FU相当。
实验例3.
本发明对小鼠移植性肿瘤的抗肿瘤作用
1.实验材料实验用药注射用新藤黄酸，0.2g/支5-FU，0.25g/支，江苏南通制药总厂，批号0312032.实验方法给药途径灌胃给予新藤黄酸制剂，每日1次。
给药周期荷实体瘤昆明种小鼠接种肿瘤细胞后次日开始给药，连续给药7天，20天后处死动物称取瘤重。荷腹水瘤昆明种小鼠接种肿瘤细胞后次日开始给药，连续给药7天，计算小鼠存活时间。
3.实验结果注射用新藤黄酸对荷S-180腹水瘤及实体瘤小鼠的抗肿瘤作用实验结果见表8.注射用新藤黄酸对荷H22腹水瘤及实体瘤小鼠的抗肿瘤作用实验结果见表9.
表8注射用新藤黄酸对荷S-180腹水瘤及实体瘤小鼠的抗肿瘤作用(x±s)(n＝12)
与0.9％NaCl组比较，*表示p＜0.05；**表示p＜0.01与5-FU组比较，△表示p＜0.05；△△表示p＜0.01表9注射用新藤黄酸对荷H22腹水瘤及实体瘤的抗肿瘤作用(x±s)(n＝12)
与0.9％NaCl组比较，*表示p＜0.05；**表示p＜0.01与5-FU组比较，△表示p＜0.05；△△表示p＜0.01结果显示，对于S-180肿瘤细胞株所致实体瘤和腹水瘤，注射用新藤黄酸可抑制其增殖，疗效确切，在实验剂量其抑瘤效果优于10mg.kg-15-FU(下同)的治疗效果(p＜0.01)。对荷H22肝癌细胞株所致实体瘤和腹水瘤，注射用新藤黄酸有显著的抗肿瘤作用，疗效确切，在实验剂量其抑瘤效果优于10mg.kg-15-FU(下同)的治疗效果(p＜0.01)。
实验例4.
本发明对艾氏腹水癌小鼠的抗肿瘤作用1.实验材料实验用药注射用新藤黄酸，0.2g/支2.实验方法给药途径腹腔注射给予注射用新藤黄酸制剂。
给药周期荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后次日开始给药，给药方法按表中所示。
3.实验结果注射用新藤黄酸腹腔给药对艾氏腹水癌的抑制作用实验结果见表10.
表10注射用新藤黄酸腹腔给药对艾氏腹水癌的抑制作用(x±s)(n＝10)
实验例5.
本发明对其它小鼠腹水癌的抗肿瘤作用1.实验材料实验用药注射用新藤黄酸，0.2g/支2.实验方法给药途径腹腔注射给予注射用新藤黄酸制剂。
给药周期荷瘤昆小鼠接种肿瘤细胞后次日开始给药，给药方法按表中所示。
3.实验结果注射用新藤黄酸腹腔给药对其它小鼠腹水癌的抑制作用实验结果见表11表11注射用新藤黄酸腹腔给药对ARS、P388小鼠腹水癌的抑制作用(x±s)(n＝6)
实验例6.
本发明对其它小鼠实体瘤的抗肿瘤作用1.实验材料实验用药注射用新藤黄酸，0.2g/支2.实验方法给药途径、给药周期荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后次日开始给药，给药方法按表中所示。
3.实验结果注射用新藤黄酸对U14鼠宫颈癌、Lewis肺癌、Ma737乳腺癌、Ma737乳腺癌、La795肺腺癌、La795肺腺癌小鼠实体瘤的抑制作用实验结果见表12.
表12注射用新藤黄酸对小鼠实体瘤的抑制作用(x±s)(n＝10)
下面结合具体实施例来详细说明本发明。
具体实施例方式
本发明的详细组分由下列实施例给出，但本发明的保护范围，不仅局限于此。
通过下述实施例进一步说明本发明。
实施例1注射用新藤黄酸制剂，其原料质量份配比范围新藤黄酸20份、L-精氨酸20份、甘露醇40份、注射用水1000份。
取处方量新藤黄酸置于适当容器中，加适量注射用水(总体积的80％)，搅拌混匀，加入L-精氨酸超声溶解至澄清，加入甘露醇，搅拌溶解，然后加入1％针用炭，搅拌30min，脱炭，加注射用水至足量，检验含量合格后，无菌环境中首先以0.45μm微孔滤膜过滤，然后再以0.22μm微孔滤膜过滤，滤液分装于青霉素瓶中，每瓶10mL，半加塞，装盘，置于冻干箱中，插入温度传感器，关闭箱门开机冷冻干燥，密塞，出箱，轧盖，检查，得注射用新藤黄酸冻干粉。
实施例2注射用新藤黄酸制剂，其原料质量份配比范围新藤黄酸20份、L-精氨酸20份、右旋糖酐40份、注射用水1000份。
取处方量新藤黄酸置于适当容器中，加适量注射用水(总体积的80％)，搅拌混匀，加入L-精氨酸超声溶解至澄清，加入右旋糖酐，搅拌溶解，然后加入1％针用炭，搅拌30min，脱炭，加注射用水至足量，检验含量合格后，无菌环境中首先以0.45μm微孔滤膜过滤，然后再以0.22μm微孔滤膜过滤，滤液分装于青霉素瓶中，每瓶10mL，密塞，出箱，轧盖，检查，得新藤黄酸注射液。
实施例3注射用新藤黄酸制剂，其原料质量份配比范围新藤黄酸50份、赖氨酸50份、氯化钠100份、注射用水5000份。
取处方量新藤黄酸置于适当容器中，加适量注射用水(总体积的80％)，搅拌混匀，加入赖氨酸或葡甲胺超声溶解至澄清，加入右旋糖酐或氯化钠，搅拌溶解，然后加入1％针用炭，搅拌30min，脱炭，加注射用水至足量，检验含量合格后，无菌环境中首先以0.45μm微孔滤膜过滤，然后再以0.22μm微孔滤膜过滤，滤液分装于青霉素瓶中，每瓶5mL，半加塞，装盘，置于冻干箱中，插入温度传感器，关闭箱门开机冷冻干燥，密塞，出箱，轧盖，检查，得注射用新藤黄酸冻干粉。
实施例4注射用新藤黄酸制剂，其原料质量份配比范围新藤黄酸50份、葡甲胺50份、右旋糖酐100份、注射用水5000份。
取处方量新藤黄酸置于适当容器中，加适量注射用水(总体积的80％)，搅拌混匀，加入赖氨酸或葡甲胺超声溶解至澄清，再加入右旋糖酐或氯化钠，搅拌溶解，然后加入1％针用炭，搅拌30min，脱炭，加注射用水至足量，检验含量合格后，无菌环境中首先以0.45μm微孔滤膜过滤，然后再以0.22μm微孔滤膜过滤，滤液分装于青霉素瓶中，每瓶5mL，密塞，轧盖，检查，得新藤黄酸注射液。
实施例5新藤黄酸注射用片剂，其原料质量份配比范围新藤黄酸50份、L-精氨酸35份、氯化钠60份、注射用水3000份。
取处方量新藤黄酸置于适当容器中，加适量注射用水，搅拌混匀，加入L-精氨酸超声溶解至澄清，再加入氯化钠，搅拌溶解，然后加入1％针用炭，搅拌30min，脱炭，超滤，无菌环境中再加其他已消毒的注射用辅料制粒，烘干，整粒，压片，片剂分装于已消毒容器中，封装，得新藤黄酸注射用片剂。
实施例6新藤黄酸乳浊型注射剂，其原料质量份配比范围新藤黄酸50份、豆磷脂30份、甘油200份、注射用水2000份。
取处方量新藤黄酸、精制豆磷脂、甘油与适量注射用水混合；转入到高速组织捣碎机中，8000转/分搅拌三次，第一次10分钟，第二次5分钟，第三次3分钟，使其分散均匀成初乳剂；缓慢加入剩余的注射用水，再转入到高压乳匀机内，40Mpa匀化三次，过滤得滤液；灌封，灭菌，即得新藤黄酸乳注射液。
实施例7注射用新藤黄酸灭菌粉剂，其原料质量份配比范围新藤黄酸10份、L-精氨酸10份、氯化钠5份、注射用水0份。
取处方量新藤黄酸、L-精氨酸、氯化钠混合均匀，置粉碎机中粉碎，粉末用放射源照射灭菌，分装于已消毒容器中，封装，即制得注射用新藤黄酸灭菌粉剂。
实施例8注射用新藤黄酸冻干粉针，其原料质量份配比范围新藤黄酸80份、L-精氨酸40份、甘露醇70份注射用水4200份。
制备方法同实施例1。
实施例9注射用新藤黄酸溶液型注射剂，其原料质量份配比范围新藤黄酸1份、甘油1份、右旋糖苷1份、注射用水5000份。
制备方法同实施例4。
实施例10注射用新藤黄酸冷干粉针，其原料质量份配比范围新藤黄酸100份、L-精氨酸100份、甘露醇200、份注射用水5000份。
制备方法同实施例1。
权利要求
1.一种治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，其特征在于，以新藤黄酸为活性成分，其余成分为助溶剂、赋形剂、注射用水，其原料质量份配比范围新藤黄酸 1～100份助溶剂1～100份赋形剂1～200份注射用水 0～5000份。
2.根据权利要求1所述的治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，其特征在于其原料优选质量份配比范围新藤黄酸 10～80份助溶剂10～40份赋形剂5～70份注射用水 0～4200份。
3.根据权利要求2所述的治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，其特征在于其原料优选质量份配比范围新藤黄酸 30～50份助溶剂15～35份赋形剂25～60份注射用水 0～3000份。
4.根据权利要求1-3任何一项所述的治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，其特征在于所述制剂是注射剂，所述的注射剂为溶液型注射剂、乳浊型注射剂、注射用冻干粉针、注射用灭菌粉剂或片剂中的任何一种。
5.根据权利要求1-3任何一项所述的治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，其特征在于所述的助溶剂选用油酸山梨坦、聚山梨酯类、普流罗尼克、聚乙二醇、聚乙烯醇、丙二醇、乙醇、甘油、有机酸及其钠盐、酰胺及胺类、聚维酮、L-精氨酸、赖氨酸、葡甲胺、碳酸氢钠、碳酸钠、亚硫酸氢钠、依地酸二钠、氢氧化钠、硼酸钠、蜂胶中的一种或几种。
6.根据权利要求5所述的治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，其特征在于所述的助溶剂为L-精氨酸、赖氨酸或葡甲胺中的任何一种或几种。
7.根据权利要求1-3任何一项所述的治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，其特征在于所述的赋形剂选用氯化钠、甘露醇、右旋糖酐中的一种或几种。
8.权利要求1-7任何一项所述的注射用新藤黄酸制剂制备方法，其特征在于它包括如下步骤A、按权利要求1-7任何一项的质量份配比称取原料新藤黄酸，加入注射用水搅匀；B、加入助溶剂，溶解至澄清；C、加入赋形剂，搅拌溶解；D、加入活性炭，搅拌、脱炭、过滤、分装，即制成新藤黄酸注射液。
9.根据权利要求8所述的注射用新藤黄酸制剂制备方法，其特征在于所述的B步加入助溶剂后采用超声溶解。
10.根据权利要求8或9所述的注射用新藤黄酸制剂制备方法，其特征在于将上述D步所制成的新藤黄酸注射液冷冻干燥，即制成注射用新藤黄酸冻干粉针。
全文摘要
本发明公开了一种治疗肿瘤的注射用新藤黄酸制剂，以新藤黄酸为活性成分，其余成分为助溶剂、赋形剂、注射用水，其原料质量份配比范围新藤黄酸1～100份、助溶剂1～100份、赋形剂1～200份、注射用水0～5000份。本发明还公开了这种注射用新藤黄酸制剂的制备方法，它包括如下步骤A、按质量份配比称取原料新藤黄酸，加入注射用水搅匀；B、加入助溶剂，溶解至澄清；C、加入赋形剂，搅拌溶解；D、加入活性炭，搅拌、脱炭、过滤、分装，即制成新藤黄酸注射液。该注射用新藤黄酸制剂具有良好的溶解性和稳定性，原材料来源丰富，易于工业化生产，产品质量易于控制，经济实用。
文档编号A61P35/00GK1857529SQ20061003476
公开日2006年11月8日 申请日期2006年4月5日 优先权日2006年4月5日
发明者赵爱国 申请人:赵爱国