专利名称：一种疏血通注射剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种以中药水蛭和地龙为原料制备中药注射剂的制备方法。
背景技术：
心脑血管病疾病是危害人民生命健康比较严重的一种疾病，其发病率、致残率和病死率均占各类疾病之首。由于环境的污染、饮食习惯的改变、生活节奏的加快，在我国心脑血管病发病呈明显上升趋势，而且发病人群逐渐年轻化。目前临床上使用的治疗心脑血管疾病中药制剂以口服制剂为主，口服制剂虽然有一定的疗效，但由于通过消化系统吸收，起效缓慢，生物利用度低，疗程长，尚不能满足临床用药的需要。
由水蛭和地龙两味药制成的中药注射剂-疏血通注射液，在临床上广泛用于治疗心脑血管疾病，取得了较好的疗效王建，等疏血通治疗不稳定型心绞痛96例疗效观察，中西医结合心脑血管病杂志2005，3(3)207；范吉平，等疏血通注射液治疗缺血性脑血管病的临床研究，北京中医药大学学报，2002，25(5)53。发明名称为“治疗心脑血管疾病的注射剂的制造方法及其产品”(专利号03148281.3；注射剂的商品名为“疏血通”)是分别将水蛭和地龙于低温下浸渍15-30小时后经匀浆、又在-15℃以下经反复冷冻解融至少2次以上后制成。由于需要在低温下生产，工艺复杂，因而生产成本高，成品价格昂贵，患者不易接受。目前也有学者研究和改进疏血通注射剂的制备方法。如公开号为CN1660145A、发明名称为“一种疏血通冻干粉针制剂新制备方法”和公开号为CN1651079A、发明名称为“一种疏血通冻干粉针制剂及其制备方法”，但这些方法也都需要在低温下生产，在一定程度上存在着同样的缺陷。
发明内容
本发明的目的在于提供一种疏血通注射剂的制备方法，该方法采用加热的方式提取原料药的有效部位，其生产过程不需冷冻和解融，至少减少2次以上的生产工序，而且工艺简单，生产周期短，生产成本低，易于工业化大生产。
为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案一种疏血通注射剂的制备方法，该方法选用水蛭和地龙为原料药，其特征在于，采用加热的方法提取原料药的有效部位，经脱色、超滤制得疏血通注射剂，具体包括以下步骤1)原料药的重量配比水蛭600～400份、地龙400～600份；2)按原料药的重量配比取水蛭和地龙，混匀，用溶剂浸泡，使其表面充分展开并洗净，再加原料重量的0.5～2倍量溶剂捣碎，得水蛭和地龙的混合物；3)取水蛭和地龙的混合物，在60～100℃加热提取1～3次，每次加混合物重量的溶剂量2～5倍，提取1～2小时，合并提取液，并在提取液中加1～2倍量的乙醇，搅匀，冷藏4～16小时，滤过，减压回收乙醇，得滤液A；4)取滤液A，加0.3％～1％滤液量的活性炭脱色，滤过，得滤液B；5)取滤液B，通过分子量为5万的超滤柱，得滤液C；6)取滤液C，按常规方法制成疏血通注射剂。
本发明所述的溶剂为生理盐水或水、注射用水的任意一种或两种混合使用；所述原料药水蛭和地龙、辅料乙醇要求符合《中国药典》2005年版的规定；所述的按常规方法制成的注射剂，包括小容量注射液、大容量注射液(大输液)和粉针剂(冻干粉针剂)。
所述的注射剂，在制备过程中可根据需要加入一定的附加剂，如甘露醇、山梨醇、聚维酮K30、葡萄糖、氯化钠、右旋糖酐、乳糖、泊洛沙姆、精氨酸等氨基酸、环糊精及其衍生物等其中的一种或几种组合。
采用本发明的方法制备的疏血通注射剂，具有活血化瘀、通经活络的功能，用于瘀血阻络所致的中风中经络急性期，症见半身不遂，口眼歪斜，言语謇塞。急性期脑梗塞等上述症候者。也可用于心血管等疾病的治疗。
其小容量注射剂用法静脉滴注使用，每日4-8ml(相当于生药2-4g)，加于5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液250～500ml中，缓慢滴入，或遵医嘱。
粉针剂用法用适量注射用水溶解后，同小容量注射剂用法。
大容量注射剂用法静脉滴注使用，每日250～500ml，(相当于生药2-6g)。
本发明与专利号03148281.3的制法相比，具有以下优点(1)生产周期缩短。本发明的工艺中，不需冷冻和解融至少2次以上的工序，即可缩短生产周期30-60小时以上。
(2)生产成本降低。本发明的工艺中，在60～100C加热提取共1～6小时，所用的乙醇可回收使用；与专利03148281制法中在-15℃以下冷冻和解融15～30小时至少2次以上相比，能源消耗较少，节约能源，生产成本大大降低。
(3)生产工艺实用性强。本发明的生产工艺简单，一般制药企业均可实施。
(4)经动物试验表明，本发明的主要药效与市售的“疏血通注射液”相比，药效一致，有些药效指标略强于疏血通注射液。
具体实施例方式
以下通过发明人给出的实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的详细说明，但并不限于这些实施例。
实施例1注射液的制备1)原料药的重量配比为水蛭500g、地龙500g。
2)取水蛭和地龙，混匀，用生理盐水500ml左右浸泡约2小时，使其表面充分展开，再用生理盐水冲洗干净，再加生理盐水500ml捣碎成匀浆，得水蛭和地龙的混合物；3)取水蛭和地龙的混合物，加生理盐水煎煮2次，每次加的生理盐水为水蛭和地龙的混合物的3.5倍量、每次提取2小时，合并提取液，减压浓缩至约1000ml，加1倍量乙醇，搅匀，冷藏15小时，滤过，减压回收乙醇，得滤液A；4)取滤液A，加0.5％滤液量的活性炭脱色，滤过，得滤液B；5)取滤液B，通过分子量为5万的超滤柱，得滤液C；6)取滤液C，用注射用水调整总体积至2000ml，灌封，每支2ml，灭菌，检测，包装，即得。
实施例2注射液的制备1)原料药的重量配比为水蛭600g、地龙400g。
2)取水蛭和地龙，混匀，用水800ml左右浸泡约3小时，使其表面充分展开，再用水冲洗干净，再加水600ml捣碎成匀浆，得水蛭和地龙的混合物；3)取水蛭和地龙的混合物，加水煎煮3次，每次加水为水蛭和地龙的混合物的2倍量、各提取1小时，合并提取液，减压浓缩至约800ml，加2倍量乙醇，搅匀，冷藏4小时，滤过，减压回收乙醇，得滤液A；4)取滤液A，加0.3％滤液量的活性炭脱色，滤过，得滤液B；5)取滤液B，通过分子量为5万的超滤柱，得滤液C；6)取滤液C，用注射用水调整总体积至2000ml，灌封，每支2ml，灭菌，检测，包装，即得。
实施例3冻干粉针剂的制备1)原料药的重量配比为水蛭500g、地龙500g。
2)取水蛭和地龙，混匀，用生理盐水600ml浸泡2小时，使其表面充分展开并用生理盐水冲洗干净，再加500ml生理盐水捣碎成匀浆，得水蛭和地龙的混合物；
3)取2)项下的混合物，在100℃加热提取2次，每次加生理盐水4倍量、提取2小时，合并提取液，减压浓缩至1200ml，加1200ml乙醇，搅匀，冷藏16小时，滤过，减压回收乙醇，得滤液A；4)取滤液A，加0.8％滤液量的活性炭脱色，滤过，得滤液B；5)取滤液B，通过分子量为5万的超滤柱，得滤液C；6)取滤液C，加入甘露醇120g、葡萄糖80g，用注射用水调整总体积至2000ml，灌封，每支2ml，冻干，压盖，检测，包装，即得冻干粉针剂。
实施例4冻干粉针剂的制备1)原料药的重量配比为水蛭400g、地龙600g。
2)取水蛭和地龙，混匀，用注射用水1000ml浸泡2小时，使其表面充分展开并用注射用水冲洗干净，再加1000ml注射用水捣碎，得水蛭和地龙的混合物；3)取2)项下的混合物，在100℃加热提取3次，每次加生理盐水2倍量、提取1小时，合并提取液，减压浓缩至1200ml，加1200ml乙醇，搅匀，冷藏16小时，滤过，减压回收乙醇，得滤液A；4)取滤液A，加1％滤液量的活性炭脱色，滤过，得滤液B；5)取滤液B，通过分子量为5万的超滤柱，得滤液C；6)取滤液C，加入右旋糖苷100g、甘露醇80g，用注射用水调整总体积至2000ml，灌封，每支2ml，冻干，压盖，检测，包装，即得冻干粉针剂。实施例5大容量注射剂的制备1)原料药的重量配比为水蛭400g、地龙600g。
2)取水蛭和地龙，混匀，用生理盐水1000ml左右浸泡约3小时，使其表面充分展开，再用生理盐水冲洗干净，再加生理盐水900ml捣碎成匀浆，得水蛭和地龙的混合物；3)取2)项下的混合物，加生理盐水煎煮2次，每次加生理盐水3.5倍量、提取2小时，合并提取液，减压浓缩至约1100ml，加1200ml乙醇，搅匀，冷藏10小时，滤过，减压回收乙醇，得滤液A；4)取滤液A，加0.6％滤液量的活性炭脱色，滤过，得滤液B；5)取滤液B，通过分子量为5万的超滤柱，得滤液C；6)取滤液C，用生理盐水调整总体积至40000ml，灌封，每瓶100ml，灭菌，检测，包装，即得。
实施例6大容量注射剂的制备1)原料药的重量配比为水蛭400g、地龙600g。
2)取水蛭和地龙，混匀，用水500ml左右浸泡约4小时，使其表面充分展开，再用水冲洗干净，再加水800ml捣碎成匀浆，得水蛭和地龙的混合物；3)取2)项下的混合物，加水于60℃加热提取2次，每次加水4倍量、提取3小时，合并提取液，减压浓缩至约1000ml，加1300ml乙醇，搅匀，冷藏9小时，滤过，减压回收乙醇，得滤液A；4)取滤液A，加0.9％滤液量的活性炭脱色，滤过，得滤液B；5)取滤液B，通过分子量为5万的超滤柱，得滤液C；6)取滤液C，用生理盐水和调整总体积至50000ml，灌封，每瓶250ml，灭菌，检测，包装，即得。
为证明新方法制备的注射剂的安全性和有效性，发明者使用按上述实施例1提供的方法制备得到的注射剂进行了毒理和主要药效学试验，结果如下试验目的采用整体动物试验，观察SXT注射液的急性毒性和抗脑缺血作用，反映SXT注射液的功效与主治，为进一步研究提供实验依据。
试验材料1.试验药物本发明注射液(以下简称“SXT注射液”)，规格2ml/支。
2.对照药品、主要试剂疏血通注射液，规格2ml/支，批号0401212，由牡丹江友博药业有限责任公司生产。
3.试验器材JA1003型电子天平，上海精科天平生产。
4.试验动物ICR品系小白鼠，雌雄各半，体重18～22g，质量合格证陕医动证字08-004号，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。动物按性别分笼饲养，食固体饲料，食水自由，饲料由西安交通大学医学院实验动物中心提供。室温18～20℃，相对湿度60％～70％。
试验方法及结果一、急性毒性试验取小鼠每4只为一组进行预试，观察小鼠的急性中毒反应，摸索死亡率为0％的最大剂量和死亡率为100％的最小剂量，测得SXT注射液静脉注射死亡率为100％的最小剂量(LD100)为23.69ml/kg，死亡率为0％的最大剂量(LD0)为7.5ml/kg，组间剂量比定为1∶0.75。
另取小鼠50只，随机分为5组，每组10只。各组静脉注射等容积SXT注射液0.3ml/10g，剂量依次为7.5、10、13.33、17.77、23.69ml/kg，观察七天内小鼠一般状况、毒性反应及死亡情况。结果表明，静脉注射后小鼠静卧不动，随即死亡，死前无其他异常表现。死亡者为急性死亡，多发生在给药后数分钟内。未死亡者很快恢复，其它未见特殊表现。对死亡小鼠逐只做尸检，肉眼未见心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、膀胱、胸腔、腹腔等主要脏器及体腔有颜色和形态异常，结果见表1。
表1SXT注射液腹腔注射急性毒性试验结果
按Bliss`s法计算LD50，SXT注射液小鼠静脉注射LD50为14.02ml/kg，95％可信限为12.52～15.71ml/kg。
二、主要药效学试验(一)对小鼠断头后喘息时间的影响健康ICR小鼠，雌雄各半，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。第一组为阴性对照组，给等容积生理盐水；第二组为阳性对照组，给疏血通注射液5ml/kg；第三、四、五组为SXT注射液组，分别给SXT注射液1.25、2.5、5ml/kg。各组皆腹腔注射给药，，20ml/kg，1次/日连续给药3天。末次给药30min后断头，记录从断头至喘息停止的时间，结果见表2。
表2SXT注射液对小鼠断头后喘息时间的影响(x±s，n＝10)
与阴性对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01由表2可见，SXT注射液轻度延长小鼠断头后喘息时间，与阴性对照组比较，中、大剂量组有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，说明SXT注射液有轻度的抗脑缺氧作用。阳性对照药疏血通注射液亦有轻度的抗脑缺氧作用，与同剂量SXT注射液比较，作用稍弱。
(二)对颈总动脉结扎小鼠存活时间的影响健康ICR小鼠，雌雄各半，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。第一组为阴性对照组，给等容积生理盐水；第二组为阳性对照组，给市售的疏血通注射液5ml/kg；第三、四、五组为SXT注射液组，分别给SXT注射液1.25、2.5、5ml/kg。各组皆腹腔注射给药，，20ml/kg，1次/日连续给药3天。末次给药30min后，在麻醉下结扎小鼠双侧颈总动脉，记录小鼠存活时间，结果见表3。
表3SXT注射液对颈总动脉结扎小鼠存活时间的影响(x±s，n＝10)
与阴性对照组比较，**p＜0.01由表3可见，SXT注射液延长颈总动脉结扎小鼠的存活时间，与阴性对照组比较，大剂量组有显著性差异(P＜0.01)，说明SXT注射液有抗脑缺氧作用。阳性对照药疏血通注射液亦有一定的抗脑缺氧作用。
(三)对亚硝酸钠诱导的实验性脑缺氧的影响健康ICR小鼠，雌雄各半，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。第一组为阴性对照组，给等容积生理盐水；第二组为阳性对照组，给市售的疏血通注射液5ml/kg；第三、四、五组为SXT注射液组，分别给SXT注射液1.25、2.5、5ml/kg。各组皆腹腔注射给药，20ml/kg，1次/日连续给药3天。末次给药30min后各组小鼠ip亚硝酸钠400mg/kg(4％，0.1ml/10g)，记录小鼠存活时间。结果见表4。
表4SXT注射液对亚硝酸钠诱导的实验性脑缺氧的影响(x±s，n＝10)
与阴性对照组比较，**p＜0.01
由表4可见，SXT注射液延长亚硝酸钠诱导的实验性脑缺氧小鼠的存活时间，与阴性对照组比较，中、大剂量组有显著性差异(P＜0.01)，说明SXT注射液有抗脑缺氧作用。阳性对照药疏血通注射液亦有一定的抗脑缺氧作用，与同剂量SXT注射液比较，作用稍弱。
(四)对小鼠凝血时间的影响健康ICR小鼠，雌雄各半，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。第一组为阴性对照组，给等容积生理盐水；第二组为阳性对照组，给疏血通注射液5ml/kg；第三、四、五组为SXT注射液组，分别给SXT注射液1.25、2.5、5ml/kg。各组皆腹腔注射给药，20ml/kg，1次/日连续给药3天。末次给药30min后摘除眼球采血，用玻片法测定凝血时间。结果见表5。
表5SXT注射液对小鼠凝血时间的影响(x±s，n＝10)
与阴性对照组比较，*p＜0.05由表5可见，SXT注射液延长正常小鼠凝血时间，与阴性对照组比较，中、大剂量组有显著性差异(P＜0.01)，说明SXT注射液有抗凝血作用。阳性对照药疏血通注射液亦有一定的抗凝血作用，与同剂量SXT注射液比较，作用较弱。
试验结论SXT注射液小鼠静脉注射LD50为14.02ml/kg，95％可信限为12.52～15.71ml/kg。SXT注射液小鼠静脉注射给药，延长小鼠断头后喘息时间、颈总动脉结扎小鼠的存活时间以及亚硝酸钠诱导的实验性脑缺氧小鼠的存活时间，延长正常小鼠的凝血时间，作用略强于同剂量的疏血通注射液。试验结果说明，SXT注射液有抗脑缺血作用和抗凝血作用。
对本发明制备的冻干粉针剂和大容量注射液用同样的方法进行了动物试验，取得了相似的毒理和药效学结果。
权利要求
1.一种疏血通注射剂的制备方法，选用水蛭和地龙为原料药，其特征在于，采用加热的方法提取原料药的有效部位，经脱色、超滤制得疏血通注射剂，具体包括以下步骤1)原料药的重量配比水蛭600～400份、地龙400～600份；2)按原料药的重量配比取水蛭和地龙，混匀，用溶剂浸泡，使其表面充分展开并洗净，再加原料重量的0.5～2倍量溶剂捣碎，得水蛭和地龙的混合物；3)取水蛭和地龙的混合物，在60～100℃加热提取1～3次，每次加混合物重量的溶剂量2～5倍，提取1～2小时，合并提取液，并在提取液中加1～2倍量的乙醇，搅匀，冷藏4～16小时，滤过，减压回收乙醇，得滤液A；4)取滤液A，加0.3％～1％滤液量的活性炭脱色，滤过，得滤液B；5)取滤液B，通过分子量为5万的超滤吸附柱，得滤液C；6)取滤液C，按常规方法制成疏血通注射剂。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的溶剂为生理盐水、水、注射用水的任意一种或两种混合使用。
3.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的疏血通注射剂中还加入有添加剂。
4.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的注射剂为小容量注射液、大容量注射液和粉针剂其中之一。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的添加剂为甘露醇、山梨醇、聚维酮K30、葡萄糖、氯化钠、右旋糖酐、乳糖、泊洛沙姆、精氨酸、氨基酸、环糊精及其衍生物其中的一种或几种组合。
全文摘要
本发明公开了一种疏血通注射剂的制备方法，该方法选用水蛭和地龙为原料药，采用加热的方式提取原料药的有效部位，经脱色、超滤制得疏血通注射剂，该方法的生产过程不需冷冻和解融，至少减少2次以上的生产工序，而且工艺简单，生产周期短，生产成本低，易于工业化大生产。经药效学试验表明，本发明制备的注射剂与市售疏血通注射液主要药效指标一致或略优。
文档编号A61K9/14GK1857321SQ20061004195
公开日2006年11月8日 申请日期2006年3月21日 优先权日2006年3月21日
发明者陈志成, 杨广德 申请人:陈志成