专利名称：：一种稳定的抗IgE人源化单抗制剂的制作方法
技术领域：
：本发明属于生物
技术领域：
，更具体地，本发明公开了一种生物制剂。
背景技术：
：哮喘是一种常见病，仅在美国用于各种类型哮喘治疗上的直接和间接的费用总额为l40亿美元。并且根据美国疾病控制中心(CDC)和卫生统计国家预防中心(PNCHS)的资料，哮喘每年至少引发了2百万起的急诊和超过5千人的死亡。IgE是导致哮喘过敏症状的主要原因，抗IgE人源化单抗是第一个用于治疗哮喘的人源化的治疗性抗体(Xolair)，也是第一个被认可的针对IgE抗体设计的治疗方法，它可以应用于中到重度持续性哮喘的成人和青少年患者，作皮下使用，适用于患中到重度持续性哮喘的成人和青少年(12岁或者12岁以上)患者，他们对四季气源性过敏源皮试反应或者体外反应为阳性，或使用吸入性皮质激素制剂不能缓解症状。研究证实Xolair可以降低上述病人哮喘加重的发生率。抗IgE人源化单抗目前的制剂是以抗IgE人源化单抗为主药，以蔗糖、L-组氨酸、L-组氨酸盐酸盐和吐温-20为辅料制成的冻干制剂，此制剂稳定性不高而且在溶解后液体的粘滞度较高，注射使用不方便，在使用过程中有不少患者表示有很强的疼痛感。无论是贮存还是临床使用相对不便。
发明内容为了解决上述问题，本发明的申请人进行了大量的实验，对可以使用于抗IgE人源化单抗的辅料的类型和用量进行了大量的筛选，得到了相对稳定的方便于临床使用的抗IgE人源化单抗制剂，从而达到了本发明的目的。具体地，本发明公开了一种稳定的抗IgE人源化单抗制剂，由抗IgE人源化单抗、保护剂、缓冲剂、表面活性剂和等渗调节剂组成。本发明公开的制剂，为冻干制剂。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中保护剂是非还原性糖、谷氨酸单钠、组氨酸、三元醇之一或其组合。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中非还原性糖为蔗糖或海藻糖。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中缓冲剂为组氨酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、柠檬酸缓冲液之一。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中缓冲剂为组氨酸缓冲液。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中表面活性剂为吐温-20或吐温-80。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中表面活性剂为吐温-20。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，等渗调节剂为氯化钠。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中抗IgE人源化单抗、保护剂、缓冲剂、表面活性剂和等渗调节剂的含量分别为抗IgE人源化单抗10~100mg/ml，保护剂520mg/ml，缓冲剂3~25mmol，表面活性剂0.05~0.2mg/ml，等渗调节剂0.53mg/ml。本发明公开的上述的抗IgE人源化单抗制剂，其中抗IgE人源化单抗、溶解保护剂、缓冲液、表面活性剂和等渗调节剂的含量分别为抗IgE人源化单抗40mg/ml，保护齐'j8mg/ml，缓冲剂4.9mmo1，表面活性剂0.099mg/ml，等渗调节剂1.28mg/ml。本发明公开的上述制剂，优选冻干制剂，这些冻干制剂按照《中华人民共和国药典》2005年版，二部附录XIXC原料药与药物制剂稳定性试验指导原则进行了稳定性实验，实验结果表明，本发明公开的制剂在4。C保存3年，制剂的体外生物活性在95%以上，本发明公开的制剂在3(TC保存1年，制剂的体外生物活性在95%以上。本发明公开的制剂(冻干)进行了BWFI重建，重建后各组分的含量为重建前的2.5倍，重建制剂在28。C保存三个月，制剂的体外生物活性保持在95%以上。本发明公开的制剂(冻干)溶解后粘滞度较低，注射使用方便，而且在注射过程中患者普遍反映没有疼痛感。具体实施例方式以下结合实施例、实验例进一步说明本发明，下述实施例、实验例不应理解为对本发明的限制。抗IgE人源化单抗按照PrestaLG,LahrSJ,ShieldsRL,PorterJP,GormanCM,FendlyBM,JardieuPMJImmunol.1993Sepl;15l(5):2623-32.HumanizationofanantibodydirectedagainstIgE公开的方法制备，本发明所述的抗IgE人源化单抗不仅仅限于此，本领域的技术人员利用通用的基因工程技术得到的抗IgE人源化单抗也在本发明所述的抗IgE人源化单抗之列。除非特别说明，其它原辅料均为市售药用辅料级别。体夕卜活性检领!j方法参见HumanizationofanAntibodyDirectedAgainstIgE.LeonardC.Presta,'*StevenJ.Lahr，*RobertShields,JamesP.Porter,*CorneliaM.Corman,§BrianM.Fendly,*andPaulaM.JardieutImmunol.1993Sep1;151(5):2623-32)实施例抗IgE人源化单抗的制剂的制备实施例1配方组分含量抗IgE人源化单抗40mg/ml蔗糖8mg/mlL-组氨酸0.356mg/mlL-组氨酸盐酸盐一水合物0.553mg/ml吐温-200.099mg/ml氯化钠1.28mg/ml制备过程重组抗IgE人源化单克隆抗体纯化最后一步采用分子排阻层析，流动相为:L-组氨酸0.356mg/mlL-组氨酸盐酸盐一水合物0.553mg/ml氯化钠1.28mg/ml经过该步骤纯化获得重组抗IgE人源化单克隆抗体的原液。原液中重组抗IgE人源化单克隆抗体的浓度应大于40mg/ml。制剂的配制根据原液的体积计算所需的蔗糖及吐温20的用量(终浓度分别为8mg/ml及0.099mg/ml)，并加入原液中。调整溶液中所有组分的浓度，使^组分抗IgE人源化单抗蔗糖L-组氨酸L-组氨酸盐酸盐一水合物吐温-20氯化钠获得半成品，将半成品无菌分装塑盖，获得成品。组分含量如下40mg/ml8mg/ml0.356mg/ml0.553mg/ml0.099mg/ml1.28mg/ml、西林瓶中，冷冻干燥并加盖橡胶塞及铝实施例2(Xolair)配方组分抗IgE人源化单抗L-组氨酸L-组氨酸盐酸盐一水合物吐温-20制备方法同实施例1实施例3:40mg/ml28.736mg/ml0.356mg/ml0.553mg/ml0.099mg/ml配方组分含量抗IgE人源化单抗20mg/ml蔗糖4mg/ml琥珀酸0.283mg/ml琥珀酸二钠六水合物1.08mg/ml吐温-200.05mg/ml氯化钠0.64mg/ml制备方法同实施例1。实施例4组分含量抗IgE人源化单抗80mg/ml蔗糖16mg/ml柠檬酸一水合物0.0768mg/ml拧檬酸钠4.608mg/ml吐温-800.198mg/ml氯化钠2.56mg/ml制备方法同实施例1。实施例5组分含量抗IgE人源化单抗40mg/ml蔗糖6.4mg/mlL-组氨酸L-组氨酸盐酸盐一水合物制备方法同实施例1。组分抗IgE人源化单抗蔗糖L-组氨酸L-组氨酸盐酸盐一水合物吐温-20氯化钠制备方法同实施例1。实施例7组分抗IgE人源化单抗蔗糖L-组氨酸L-组氨酸盐酸盐一水合物吐温-20氯化钠制备方法同实施例1。0.356mg/ml0.553mg/ml60mg/ml9.6mg/ml0.534mg/ml0.830mg/ml0.1485mg/ml1.92mg/ml40mg/ml16mg/ml0.356mg/ml0.553mg/ml0.099mg/ml1.28mg/ml实验例实施例1-7所得到的样品为N0.1-7进行稳定性实验，实验结果见表l:表l:体外生物活性结果<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>从以上结果可以看出，本发明公开的制剂和其重建制剂具有很好的稳定性，而且本发明公开的制剂在溶解后粘滞度较低，注射使用方便，而且在注射过程中患者普遍反映没有疼痛感，从而达到了本发明的目的。权利要求1.一种含抗IgE人源化单抗的制剂，由抗IgE人源化单抗、保护剂、缓冲剂、表面活性剂和等渗调节剂组成。2.权利要求1所述的制剂，为冻干制剂。3.权利要求1所述的制剂，其中保护剂是非还原性糖、谷氨酸单钠、组氨酸、三元醇之一或其组合。4.权利要求3所述的制剂，其中非还原性糖为蔗糖或海藻糖之一。5.权利要求1所述的制剂，其中缓冲剂为组氨酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、柠檬酸缓冲液之一。6.权利要求5所述的制剂，其中缓冲剂为组氨酸缓冲液。7.权利要求l所述的制剂，其中表面活性剂为吐温-20或吐温-80。8.权利要求7所述的制剂，其中表面活性剂为吐温-20。9.权利要求l所述的制剂，其中等渗调节剂为氯化钠。10.权利要求1所述的制剂，其中各组分的含量分别为抗IgE人源化单抗10~100mg/ml，保护剂520mg/ml，缓冲剂3~25mmol，表面活性剂0.05-0.2mg/ml，等渗调节剂0.5-3mg/ml。11.权利要求10所述的制剂，其中各组分的含量分别为抗IgE人源化单抗40mg/ml，保护剂8mg/ml，缓冲剂4.9mmo1，表面活性剂0.099mg/ml，等渗调节剂1.28mg/ml。全文摘要本发明公开了一种稳定的抗IgE人源化单抗制剂，由抗IgE人源化单抗保护剂、缓冲剂、表面活性剂和等渗调节剂组成。本发明公开的制剂具有稳定、便于使用的优点。文档编号A61K39/395GK101199845SQ20061014728公开日2008年6月18日申请日期2006年12月14日优先权日2006年12月14日发明者盛侯,庚寇,晶李,皓王,郭亚军申请人:上海国健生物技术研究院