专利名称：：一种稳定的抗egfr嵌合抗体的液体制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及生物制剂领域，更具体地，本发明公开了一种稳定的抗体的液体制剂。
背景技术：
：抗EGFR嵌合抗体是小鼠抗表皮生长因子抗体的可变区与人抗体Gl重链和轻链恒定区的免疫球蛋白组成，特异性地与正常和肿瘤细胞的表皮生长因子受体(EGRF,HERl,c-ErbB-l)相结合，竞争性抑制表皮生长因子受体与其他配体如转化生长因子ot的结合。其与生长因子受体的结合阻断磷酸化作用和与受体相关联激酶的活性，抑制细胞生长，诱导细胞凋亡，并减少基质金属蛋白酶和血管内皮生长因子的产生。表皮生长因子受体是跨膜糖蛋白，属于I型受体酪氨酸激酶，I型受体酪氨酸激酶包括表皮生长因子HER1，HER2，HER3和HER4.表皮生长因子受体不断由许多正常上皮组织如皮肤和毛囊上皮组织所表达出来。在结肠癌和直肠癌患者体内可检测到过度表达的表皮生长因子受体。动物体内体外试验表明抗EGFR嵌合抗体可抑制肿瘤细胞的存活和生长从而抑制表皮生长因子受体的过度表达。目前Imclone公司生产的抗EGFR嵌合抗体:Erbitux已经应用于临床，FDA批准的适应症为转移性结肠癌。据报道，在依立替康或依立替康与5-氟尿嘧啶合用的基础上加用抗EGFR嵌合抗体比单纯用其化疗抗肿瘤的效果好。Imclone公司生产的Erbitux为液体制剂，由重组抗体、氯化钠、磷酸盐缓冲液组成，其PH为7.27.4，该制剂禁止震动或稀释，不能作静脉注射使用，只能由输液泵或注射器输入体内，稳定性很差，保存和使用极为不便。
发明内容本发明公开了一种抗EGFR嵌合抗体的液体制剂，含有抗EGFR嵌合抗体、表面活性剂、等渗调节剂和缓冲液。本发明公开的上述液体制剂，还含有溶液稳定剂。本发明公开的上述液体制剂，其中抗EGFR嵌合抗体、表面活性剂、溶剂稳定剂、等渗调节剂和缓冲液的含量分别为抗EGFR嵌合抗体210mg/ml，表面活性剂0.010.1mg/ml，溶液稳定剂010mg/ml，等渗调节剂210mg/ml，缓冲液215mmo1。本发明公开的上述液体制剂，其中表面活性剂为吐温-80。本发明公开的上述液体制剂，其中溶液稳定剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖之一。本发明公开的上述液体制剂，其中溶液稳定剂为蔗糖。本发明公开的上述液体制剂，其中等渗调节剂为氯化钠。本发明公开的上述液体制剂，其中缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris、组氨酸缓冲液之一。本发明公开的上述液体制剂，其中缓冲液为由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠组成的磷酸盐缓冲液。本发明公开的上述液体制剂，其中含抗EGFR嵌合抗体10mg/ml，溶液稳定剂10mg/ml，等渗调节剂8mg/ml，缓冲液lOmmol，表面活性剂0.07mg/ml。本发明的申请人将用于冻干制剂的溶液稳定剂用于液体制剂，令人惊奇地发现，本发明公开的液体制剂可以明显的减少药品长期放置后产生的颗粒，稳定性很好，省去了药品使用前过滤的烦琐步骤，同时也可以使用药更安全。具体实施例方式以下实施例、实验例仅仅对本发明进行进一步的说明，不应理解为对本发明的限制。抗EGFR嵌合抗体制备参见CancerImmunol.Immunotherapy37，343-3491993，本发明所述的抗EGFR嵌合抗体不仅仅限于这一种，本领域的技术人员利用通用的基因工程技术得到的抗EGFR嵌合抗体也在本发明所述的抗EGFR嵌合抗体之列。其它辅料如果没有特别说明，均为市售药用级别。实施例抗EGFR嵌合抗体的液体制剂的制备实施例1:组分抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体蔗糖Na2HP04.12H20NaH2P04.H20氯化钠吐温-801Omg/ml10mg/ml2.51mg/ml0.41mg/ml8mg/ml0.07mg/ml制备方法:纯化过程的最后一步纯化采用分子排阻层析的方法，流动相如下:Na2HP04.12H20NaH2P04.H20氯化钠2.51mg/ml0.41mg/ml8mg/ml经过该步骤纯化获得重组抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体的原液。原液中重组抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体的浓度应大于10mg/ml。制剂的配制根据原液的体积计算所需的蔗糖及吐温80的用量(终浓度分别为10mg/ml及0.07mg/ml)，并加入原液中。调整溶液中所有组分的浓度，使各组分含量如下抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体Na2HP04.12H20NaH2P04.H20氯化钠吐温-80lOmg/ml10mg/ml2.51mg/ml0.41mg/ml8mg/ml0.07mg/ml得到获得半成品；将半成品无菌分装入西林瓶中，加盖橡胶塞及铝塑盖，获得成品。实施例2:组分抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体Na2HP04.12H20NaH2P04.H20氯化钠吐温-80用量5mg/ml2.51mg/ml0.41mg/ml8.48mg/ml0.01mg/ml配制方法同实施例1实施例3:组分用量EGFR嵌合抗体5mg/ml蔗糖5mg/ml氯化钠4mg/ml十二水合磷酸氢二钠1.26mg/ml单水合磷酸二氢钠0.21mg/ml吐温-800.04mg/ml配制方法同实施例1实验例稳定性实验活性检领!j方法参见:Dual-AgentMolecularTargetingoftheEpidermalGrowthFactorReceptor(EGFR)CombiningAnti-EGFRAntibodywithTyrosineKinaseInhibitor.ShyhminHuang,EricA.Armstrong,SergioBenavente,PrakashChinnaiyanandPaulM.Harari.CancerRes.2004Augl;6《l":5355-62.CombinedEpidermalGrowthFactorReceptorTargetingwiththeTyrosineKinase(IMC-C225).SuperiorityOverSingle-AgentReceptorTargeting.PabloMatar,FedericoRojo2,Ra61Cassia3,GemaMoreno-Bueno3,SerenaDiCosimo4,Jos色Tabemero1，MartaGuzm&n1,SoniaRodriguez1,JoaquinArribas1，Jos6Palacios3andJos6Baselga、ClinCancerRes.2004Oct1;10(19):6487-501.TheEffectsofCetuximabAloneandinCombinationWithRadiationand/or12，2ChemotherapyinLungCancer.DavidRaben,BarbHelfrich,DanielC.Chan,FortunatoCiardiello5,LiMinZhao2,WilburFranklin3,AnnaE.Bar6n4，ChanZeng4，TimK.Johnson1andPaulA.Bunn，Jr2.ClinCancerRes.2005Jan15;11(2Ptl):795-805.NOl-3分别为按上述实施例1-3得到的产品(每个实施例得到的产品都分别进行了三批次的实验，表中的结果为三批次的平均结果)，活性实验结果见表l:表l:体外生物活性结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>从以上结果可以看出，本发明公开的制剂具有稳定性好的优点，达到了本发明的目的。权利要求1.一种含抗EGFR嵌合抗体的液体制剂，含有抗EGFR嵌合抗体、表面活性剂、等渗调节剂和缓冲液。2.权利要求1所述的液体制剂，还含有溶液稳定剂。3.权利要求1和2任一所述的液体制剂，其中抗EGFR嵌合抗体、表面活性剂、溶剂稳定剂、等渗调节剂和缓冲液的含量分别为抗EGFR嵌合抗体2~10mg/ml，表面活性剂0.01~0.1mg/ml，溶液稳定剂010mg/ml，等渗调节剂210mg/ml，缓冲液215mmo1。4.权利要求1所述的液体制剂，其中表面活性剂为吐温-80。5.权利要求2所述的液体制剂，其中溶液稳定剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖之一。6.权利要求5所述的液体制剂，其中溶液稳定剂为蔗糖。7.权利要求1所述的液体制剂，其中等渗调节剂为氯化钠。8.权利要求1所述的液体制剂，其中缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris、组氨酸缓冲液之一。9.权利要求8所述的液体制剂，其中缓冲液为由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠组成的磷酸盐缓冲液。10.权利要求3所述的液体制剂，其中抗EGFR嵌合抗体、表面活性剂、溶剂稳定剂、等渗调节剂和缓冲液的含量分别为抗EGFR嵌合抗体10mg/ml，表面活性剂0.07mg/ml，溶液稳定剂10mg/ml，等渗调节剂8mg/ml，缓冲液lOmmol。全文摘要本发明公开了一种稳定的抗EGFR嵌合抗体的液体制剂，含有抗EGFR嵌合抗体、表面活性剂、等渗调节剂和缓冲液。文档编号A61K39/395GK101199844SQ200610147279公开日2008年6月18日申请日期2006年12月14日优先权日2006年12月14日发明者盛侯,李博华,皓王,郭亚军,钱卫珠申请人:上海国健生物技术研究院