依那西普的稳定液体制剂的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请日为2012年06月01日、申请号为201280026919. 7、发明名称为"依 那西普的稳定液体制剂"的发明专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及一种依那西普（etanercept，重组p75sTNFR:Fc融合蛋白）的稳定的 液体制剂，具体地，涉及一种液体制剂，其包含一种或多种选自下组的稳定剂：甲硫氨酸、赖 氨酸、组氨酸及其药学上可接受的盐，稳定剂的量足以降低储存过程中依那西普副产物形 成。
【背景技术】
[0003] 依那西普是一种生物炎症调节剂，其作为TNF-a的竞争性抑制剂，结合细胞表面 TNF-a受体，抑制TNF-a介导的免疫反应。依那西普是分子量约150kDa的大分子，是两个 Fc融合蛋白通过二硫键连接的同型二聚体，其中各Fc融合蛋白由偶联于人免疫球蛋白G亚 类 1 的Fc部分的人可溶性p75TNF受体构成（Goldenberg，ClinicalTherapeutics，21(l): 75-87,1999;Moreland等人，Ann.Intern.Med.，130 (6) :478_486,1999) 〇
[0004] 该原型融合蛋白最早在20世纪90年代初由BruceA.Beutler(德克萨斯大学西 南医学中心，UniversityofTexasSouthwesternMedicalCenter)合成，并在 2002 年由 安进公司（Amgen)以依那西普（Enbrel)为商品名上市。依那西普是一种TNF-a抑制剂， 用于治疗类风湿关节炎、银肩病和强直性脊柱炎，并为治疗脉管炎、阿尔茨海默病和克罗恩 病而进行临床试验。
[0005]与蛋白药物相似，抗体药物具有非常短的半衰期，不利的温度、剪切应力、振动、冻 融、紫外线照射、过度的PH变化、有机溶剂和微生物污染易于引起化学和物理变性。化学变 性包括二聚体离解、氧化、脱酰胺化、异构化和多聚化，受到构成抗体的氨基酸和含有抗体 的溶剂条件（盐、PH和温度）的影响。物理变性包括丧失三级结构、单体的共价/非共价 凝聚和粘附，受到由包含抗体的周围环境，如溶剂，复杂的蛋白结构，如电荷分布以及热稳 定而改变的蛋白表面疏水区域（patch)的影响。抗体的物理或化学变性导致其生理活性丧 失。由于变性是不可逆的过程，一旦变性，抗体可能无法将其天然性质恢复至初始状态，从 而导致其疗效降低。还有提示说单体聚集引起免疫反应。因此，对含有生理有效量的抗体但 无聚集体的制剂已进行了许多研宄（Ishikawa等，Biol.Pharm.Bull.，33 (8) : 1413-1417， 2010 ;Levin等编，《治疗性单克隆抗体产品的发展》（TheDevelopmentofTherapeutic MonoclonalAntibodyProducts)，波士顿（马萨诸塞州）：BPTC公司（BioProcess TechnologyConsultants,Inc)，第 9 章）。
[0006] 防止液体制剂中蛋白质变性有许多方法可用。在某些蛋白药物中，通过冻干解决 稳定性问题。例如，美国专利号7, 592, 004公开了达利珠单抗（daclizumab)的冻干制剂，其 用5至25mM的组氨酸缓冲液（pH5. 5至6. 5)，0. 005至0. 03 %的非离子表面活性剂（聚山 梨醇酯）和100至300mM的非还原性糖（蔗糖）使之稳定。美国专利公开号2010-0158925 公开了西妥昔单抗的冻干制剂，其用组氨酸缓冲液和乳糖酸（lactobionicacid)使之稳 定。然而，冻干过程产生冷冻和干燥应激（stress)，如冰晶形成、pH变化以及高浓度的溶 质，这些应激可导致抗体变性。此外，由于冷冻干燥过程在生产中需要大容量的冻干机，大 规模生产时生产成本升高。在使用前将冻干产品在无菌水性介质中溶解使之重建也带来不 便。
[0007] 作为解决这些局限性的替代方法，是在液体制剂中加入稳定剂以提高抗体稳定 性。表面活性剂、血清白蛋白、多糖，氨基酸、聚合物、盐等是已知的用于蛋白（包括抗体） 的稳定剂（Wang，Int.J.Pharm.，185 :129-188,1999;Wang等，J.Pharm.Sci.，96(1) : 1-26， 2007)〇
[0008] 美国专利公开号2011-0070231公开了一种IgG抗体的稳定的液体组合物，其中， 所述稳定的药物液体制剂在20至60mM的琥珀酸盐缓冲液（pH5. 5至6. 5)，0. 02至0. 04% 的聚山梨酯和75至150mM的氯化钠中含有50mg/ml或更高的达利珠单抗。
[0009] 美国专利公开号2011-0020328公开了一种治疗有效量的抗⑶20抗体制剂，其中， 所述药学上稳定的组合物包含10至IOOmM的醋酸钠，25至IOOmM的氯化钠，0. 5%至5%的 精氨酸游离碱，〇. 02至0. 2mM的EDTA和0. 01至0. 2%聚山梨醇酯80,其pH为5. 0至7. 0。
[0010] 美国专利号7, 785, 592公开了一种稳定的制剂，其中，通过使用组氨酸缓冲液和 甘氨酸而不利用离子盐和表面活性剂使得75mg/mL或更高的帕利珠单抗稳定，其在2至8°C 下至少稳定15个月。
[0011] 美国专利号6, 991，790公开了一种稳定的水性药物制剂，包含治疗有效量的抗 体、pH约4. 8至5. 5的醋酸盐缓冲液、表面活性剂和多元醇，不含等渗剂（如氯化钠）。
[0012] 美国专利号7, 648, 702公开了一种液体制剂，其中用10至200mM的L-精氨酸作 为抗凝剂来稳定与人免疫球蛋白Gl(IgGl)的Fc部分连接的人p75肿瘤坏死因子受体的融 合蛋白。只有该专利使用依那西普作为活性成分。
[0013] 然而，考虑到各个活性成分的理化性质，应采用适当的稳定剂，以制备稳定的制 剂。当组合利用稳定剂时，它们之间的竞争和不利影响可能导致不利的效果。此外，抗体的 浓度应在适于稳定的范围内，且其浓度高于蛋白质药物浓度。因此，稳定溶液中的抗体需要 更努力和小心（Shire等，J.Pharm.Sci.，93 ⑶：139〇-14〇2,2〇04)。
[0014] 鲜有关于依那西普的稳定液体制剂的研宄，发明人所知的用于稳定依那西普的唯 一方法是在液体制剂中使用L-精氨酸。因此，迫切需要开发一种新的液体制剂，其能够长 时间稳定地维持依那西普的活性，与已知的含有L一精氨酸的制剂相比，能更有效地稳定 依那西普。
【发明内容】
[0015] 技术问题
[0016] 本发明人作出许多努力来开发一种制备能稳定维持依那西普活性的液体制剂的 方法。结果发现，一种或多种选自下组的稳定剂：甲硫氨酸、赖氨酸和组氨酸在稳定溶液中 依那西普方面效果显著，从而完成了本发明。
[0017] 技术方案
[0018] 本发明的目的是提供一种水性制剂，其包含溶液中的稳定剂，用于降低储存过程 中依那西普副产物的形成以及长时间维持依那西普的活性。
[0019] 本发明的有益效果
[0020] 就长期储存而言，本发明的液体制剂能有效地防止依那西普副产物的形成和稳定 地维持其药学功效。因此，不需要在施用前重建，无菌制剂可给予患者以确保患者的安全。 因此，预计其可应用于需要依那西普的诸领域。
[0021] 本发明的最佳实施方式
[0022] 为实现上述目的，在一方面，本发明提供一种液体制剂，其包含一种或多种选自下 组的稳定剂：甲硫氨酸、赖氨酸、组氨酸及其药学上可接受的盐。
[0023] 本发明的制剂可为依那西普的液体制剂，包含依那西普、一种或多种选自下组的 稳定剂：甲硫氨酸、赖氨酸、组氨酸及其药学上可接受的盐。
[0024] 该制剂减少了储存过程中因变性而产生的依那西普副产物，提高了储存稳定剂。
[0025] 作为稳定剂，甲硫氨酸、赖氨酸、组氨酸及其药学上可接受的盐在制剂中的含量可 为 0? 1 至 250mM。
[0026] 依那西普在制剂中的含量可为1至100mg/mL。
[0027] 该制剂还可包含一种或多种选自下组的材料：缓冲液、等渗剂、赋形剂和防腐剂。
[0028] 所述缓冲液可选自下