专利名称：一种含有银杏叶提取物和栀子提取物的药物组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物，特别是涉及一种含有银杏叶提取物和栀子提取物的药物组合物及其应用。
背景技术：
脑卒中又称“脑血管意外”，是一种急性非外伤性局部脑供血障碍引起的局灶性神经损害，分为缺血性和出血性两大类。其中缺血性脑卒中是严重危害老年人健康的一种疾病，也是老年人致残和丧失生活自理能力的主要原因。脑卒中在我国老年人群中的发病率及死亡率均居各种老年病之首。脑卒中属中医学“中风”范畴，多由于风痰瘀血、痰阻清窍等引起，治以活血理气，化瘀通络等法。
冠心病(coronary heart di sease，CHD)是冠状动脉性心脏病的简称。是一种由于冠状动脉固定性(动脉粥样化硬化)或动力性(血管痉挛)狭窄或阻塞，发生冠状循环障碍，引起心肌氧供需之间失衡而导致心肌缺血缺氧或坏死的一种心脏病，亦称缺血性心脏病。冠心病由于其发病率高，死亡率高，严重危害着人类的身体健康，从而被称作是“人类的第一杀手”。祖国医学认为胸痹心痛证(冠心病、心绞痛)是由于瘀阻脉络、脑窍，致气血不通，气虚是促成血瘀的条件，故气虚血瘀是冠心病的主要病机。因而中医治疗冠心病心绞痛常施用活血通络、补气化瘀之药剂。
活血化瘀通络是祖国医学治疗脑卒中、冠心病、心绞痛的共同治法，常用中成药有冠心苏合丸、苏冰滴丸、速效救心丸、复方丹参片、丹参滴丸、冠心丹参片、冠心片、丹参片、血塞通制剂、银杏叶制剂、灯盏细辛及灯盏花素制剂等，这类药具有活血化瘀、宣阳通痹、开胸祛痰之效，疗效确切，且长期服用无副作用，为西药所不能及。
银杏叶制剂是近代知名的活血化瘀通络的天然药物，是目前国际上心脑血管病用量最大的天然药物之一，也是国际上近代植物药开发的热点之一，特别是在德国等西欧国家，银杏叶产品的开发水平已经属于领先地位。我国的银杏叶资源丰富，但开发水平却相对落后，大多厂家主要进行的还是银杏叶单味制剂的仿制或改变剂型的低水平重复生产和研究据悉国内生产银杏叶制剂的制药公司约150家，其中片剂和胶囊近100家；2002-2006年申报银杏叶仿制或改剂型的制药公司近200家，主要剂型有片剂、胶囊、分散片，软胶囊，滴丸，颗粒，缓释片，咀嚼片，微丸，自微乳化软胶囊，口腔崩解片及注射剂。
可见，单味银杏叶制剂的低水平重复研究及生产已日趋饱和，竞争日益激烈，要在银杏叶制剂方面有所建树，可着眼于创制银杏新复方制剂，使其功效优于单味银杏制剂。这对深入开发和充分利用我国丰富的银杏资源，提高银杏制剂的科技含量及自主创新水平具有重要意义。
我们的发明是银杏叶(或银杏叶提取物)与栀子(或栀子提取物)的组合物，其功效优于单味银杏叶，目前尚未有该组合物的制剂产品或相关文献报道。
发明内容
本发明的目的是在传统中医药理论的基础上，运用现代科技，开发一种组方精简、独特，有效成分明确，质量可控，安全有效的药物组合物，具体指银杏叶(或银杏叶提取物)与栀子(或栀子提取物)组成的药物组合物，该组合物的药效优于单味银杏的药效。
本发明的另一目的是提供上述药物组合物在制备治疗缺血性脑病、冠心病、心绞痛等心脑血管疾病的药物中的应用。
本发明的目的可以通过以下措施来达到 一种含有银杏叶提取物和栀子提取物的药物组合物，该药物组合物的提取物中主要活性成分为银杏叶的黄酮类化合物及内酯类化合物和栀子的环烯醚萜苷类化合物，其中总黄酮醇苷、萜类内酯和总环烯醚萜苷这三类活性成分的含量总和不低于提取物总重量的30％，优选不低于提取物总重量的40％，最优选不低于提取物总重量的50％。
该药物组合物的组分I为银杏叶或银杏叶提取物，组分II为栀子或栀子提取物，其中各组分用量为银杏叶50～300重量份，银杏叶提取物1～8重量份，栀子25～250重量份，栀子提取物1～25重量份。
本发明的药物组合物在制备治疗缺血性脑病的脑血管疾病的药物中的应用。
本发明的药物组合物在制备治疗冠心病或心绞痛类心血管疾病的药物中的应用。
本发明的目的具体可以通过以下措施来达到 本发明的药物组合物由银杏叶(或银杏叶提取物)与栀子(或栀子提取物)组成。具体由银杏叶50-300重量份(或银杏叶提取物1-8重量份)与栀子25-250重量份(或栀子提取物1-25重量份)组成，且较优的组成为银杏叶75-250重量份(或银杏叶提取物1.5-6重量份)与栀子50-200重量份(或栀子提取物1.5-20重量份)更优的组成为银杏叶100-200重量份(或银杏叶提取物2-4重量份)与栀子75-150重量份(或栀子提取物2-15重量份)。该药物组合物的提取物中主要活性成分为银杏叶的黄酮类及内酯类化合物，栀子的环烯醚萜苷类化合物，其中三类活性成分即银杏叶的总黄酮醇苷、萜类内酯及栀子的总环烯醚萜苷的含量总和不得低于提取物总重量的30％，且这三类活性成分较优的含量总和不得低于提取物总重量的40％，更优的含量总和不得低于提取物总重量的50％。
银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶，银杏叶提取物主含银杏黄酮类及内酯类有效成分，具活血化瘀通络之功效，用于瘀血阻络引起的胸痹心痛、中风、半身不遂、舌强语謇，冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，具泻火除烦，清热利尿，凉血解毒之功效。用于热病心烦，黄疸尿赤，血淋涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡等症。栀子提取物的主要活性成分为环烯醚萜苷类。二者合用，有效成分明确且符合传统中医理论。
在本发明的银杏叶和栀子的组合物中，银杏叶可由市购或自制的银杏叶提取物代替，且银杏叶提取物中总黄酮醇苷和萜类内酯的含量总和一般在20％以上，本发明优选30％以上，更优选40％以上；栀子可由市购或自制的栀子提取物代替，且栀子提取物中总环烯醚萜苷的含量一般在30％以上，优选40％以上，更优选50％以上。
我们的组方依据是在传统中医药理论基础上，结合现代研究结果，将银杏叶(或银杏叶提取物)和栀子(或栀子提取物)有机的组合，可开发成一种组方精简、独特，有效成分明确，质量可控，安全有效的治疗缺血性脑病、冠心病、心绞痛等心脑血管疾病的药物。
具体实施例方式 实施例1 药材处理方式 以银杏叶或栀子为原料时，需要经过提取、纯化处理，用所得提取物制成制剂。以银杏叶提取物或栀子提取物为原料时可直接投料制成制剂。
银杏叶的处理取银杏叶粉碎，加10-15倍量的60％-80％乙醇，回流提取2-3次，合并提取液，减压回收乙醇至无醇，并浓缩至约1.5g生药/ml的浓缩液，将浓缩液上D101大孔树脂柱，先用水洗去杂质，然后用70％乙醇进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得银杏叶提取物。依据中国药典2005年版一部银杏叶提取物含量测定项下，采用高效液相色谱法测定提取物中总黄酮醇苷含量为26.8％，萜类内酯含量为8.7％。
栀子的处理取栀子粉碎，加4-6倍量的60％-90％乙醇，回流提取2-3次，合并提取液，减压回收乙醇至无醇，并浓缩至约1.5g生药/ml的浓缩液，将浓缩液上D101大孔树脂柱，先用水洗去杂质，然后用70％乙醇进行洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，即得栀子提取物。参照姚干等文献(姚干，何宗玉，方积年.大孔吸附树脂纯化栀子中总环烯醚萜苷和栀子苷的研究，中草药，2006年第37卷第1期57-61页)，采用紫外分光光度法测定提取物中总环烯醚萜苷的含量为75.8％。
实施例2 取银杏叶50g(或银杏叶提取物1g)、栀子25g(或栀子提取物1g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例2 取银杏叶50g(或银杏叶提取物1g)、栀子50g(或栀子提取物4g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例3 取银杏叶75g(或银杏叶提取物2g)、栀子50g(或栀子提取物2g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例4 取银杏叶75g(或银杏叶提取物2g)、栀子75g(或栀子提取物4g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例5 取银杏叶100g(或银杏叶提取物2g)、栀子50g(或栀子提取物2g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例6 取银杏叶100g(或银杏叶提取物2g)、栀子75g(或栀子提取物4g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例7 取银杏叶100g(或银杏叶提取物4g)、栀子100g(或栀子提取物6g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例8 取银杏叶150g(或银杏叶提取物4g)、栀子75g(或栀子提取物4g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例9 取银杏叶150g(或银杏叶提取物6g)、栀子150g(或栀子提取物10g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例10 取银杏叶200g(或银杏叶提取物4g)、栀子100g(或栀子提取物8g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例11 取银杏叶200g(或银杏叶提取物4g)、栀子200g(或栀子提取物16g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例12 取银杏叶300g(或银杏叶提取物8g)、栀子250g(或栀子提取物25g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
实施例13 取银杏叶300g(或银杏叶提取物8g)、栀子250g(或栀子提取物8g)，其中原药材按实施例1方法处理，提取物加淀粉适量，制粒，填充胶囊或制成片剂100粒。
本发明的药效学研究如下 摘要以插线法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，以大鼠脑梗塞率、脑含水量及血液流变学为指标，观察不同提取样品对大鼠脑缺血的保护作用。
1实验材料 1.1动物SD大鼠，清洁级，300g左右，♂，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号SCXK(沪)2003-0003。饲养环境为清洁级，合格证号SYXK(苏)2002-0007。
1.2供试品样品A(实施例1所得的银杏叶提取物)，样品B(实施例1所得的栀子提取物)及样品C(将按实施例10的配比由实施例1所得的银杏叶提取物和栀子提取物，即银杏叶提取物4g与栀子提取物8g的组合物)，临用前以蒸馏水配成所需浓度的混悬液。尼莫地平片，20mg/片，批号060502，广东华南药业有限公司生产。
1.3试剂进口纤维蛋白原检测试剂盒，批号060761，法国思达高诊断公司，注册证号国食药监械(进)字2005第3401631号。
1.4仪器LBY-N6A型自清洗旋转式粘度计，PLSC2000-4型血凝仪，北京普利生公司产。
2实验方法 2.1尼龙栓子的制备 参考Zealonga方法，将一长40mm，直径0.2mm的尼龙线的一端加热为光滑的球形。用酒精擦干净并于距球端18.5mm处标记，置于生理盐水中备用。
2.2大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型的复制及分组给药取雄性SD大鼠，体重约300g，随机分为6组，每组10只。即伪手术组、模型组(给予等容积的生理盐水)、阳性药组(尼莫地平片10mg/kg)、样品A、B和C组，于手术前灌胃给药七日，每日一次，给药容积为10ml/kg。于末次给药半小时后用10％水合氯醛(300mg/kg，ip)麻醉，仰卧于手术台上，颈正中切开，分离右侧颈总动脉(CCA)，颈外动脉(ECA)，颈内动脉(ICA)，用0号线结扎并剪断ECA的分支，分离ICA的颅外分支翼突腭动脉。夹闭CCA、ICA，将准备好的尼龙栓自ECA插入，经CCA分叉处通过ICA入颅至大脑前动脉(ACA)，尼龙线插入深度约为18mm。中动脉阻断(MCAO)4小时后再灌注时外拉尼龙线使其球端回至ECA内即可恢复大脑中动脉的血供。MCAO后24小时用10％水合氯醛(300mg/kg，ip)麻醉大鼠，以腹主动脉采血测定血液流变学指标取血4ml以肝素抗凝，常规法测定血沉和压积，以血液流变仪测定全血粘度后，3000转离心10分钟分离血浆并测定血浆粘度，另采血1ml以3.8％枸椽椽酸钠1∶9抗凝，3000转离心10分钟分离血浆以普利生血凝仪测定血浆中纤维蛋白原含量。最后，断头取脑，将脑置冷生理盐水(2～3℃)中10分钟，去除嗅球、小脑和低位脑干后，冠状切四刀，切成五片。第一刀在脑前极与视交叉连线中间；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。然后迅速将脑片置5ml含有1％TTC的磷酸缓冲溶液中，避光温孵30分钟，其中每隔7～8分钟翻动一次，经染色后，正常脑组织呈玫瑰红色，而梗塞组织呈白色，且界限分明。
2.3检测指标 (1)血液流变学指标检测以普利生血液粘度计测定全血及血浆粘度，以普利生血凝仪测定血浆中纤维蛋白原水平，并计算血沉及压积。
(2)TTC染色测量脑梗塞面积分离并称重梗塞区域，求出梗塞区重量占脑重的百分比，即脑梗塞率。
(3)测定脑含水量MCAO后24小时断头取脑，称湿重；106℃烘干至恒重，即干重，按下列公式计算脑含水量。
脑含水量(％)＝脑湿重(g)-脑干重(g)/脑湿重(g)×100％ 2.4数据统计 数据采用均值±SD表示，均与模型组比较，进行组间t检验统计。
3实验结果 由表1可见，预防性给药7天后，不同提取样品组对脑缺血再灌注模型大鼠有一定的保护作用。样品B和C对脑组织含水量有明显降低作用(P＜0.05～0.01)，样品A、B、C均可以显著减小大鼠脑梗塞率(P＜0.01)，表明各提取样品对因缺血引起的脑损伤均有一定保护作用，其中样品C作用更为显著。
表1对缺血再灌注大鼠脑组织含水量及脑梗塞率的影响(
) 注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01 由表2可见，大鼠经脑缺血再灌注后，模型组大鼠全血及血浆粘度均明显高于伪手术组(P＜0.01)，而样品B和C对低切变率下的全血粘度有明显降低作用(P＜0.05)，样品C同时能显著降低血浆粘度(P＜0.01)，表明样品B及C对脑缺血再灌注大鼠的血液粘度有一定的降低作用，样品C作用更显著。
表2对缺血再灌注大鼠血液粘度的影响(
) 注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01 由表3可见，大鼠经脑缺血再灌注后，模型组大鼠血沉值及血浆纤维蛋白原水平均明显高于伪手术组(P＜0.05～0.01)，样品A、B和C对异常升高的血沉值均有明显降低作用(P＜0.05～0.01)，样品B、C同时能显著降低血浆纤维蛋白原水平(P＜0.05)，样品C对脑缺血再灌注大鼠的血液流变学有更明显的改善作用。
表3对缺血再灌注大鼠血沉、压积及纤维蛋白原水平的影响(
) 注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01 4实验小结 本实验以线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，以大鼠脑梗塞率、脑含水量及血液流变学为指标，观察不同提取样品对大鼠脑缺血的保护作用。实验结果发现样品A、B、C对中动脉阻断所致脑缺血再灌注模型大鼠的脑梗塞率均有减低作用，但样品C作用最显著；对于血液流变学的改善作用方面，样品A表现出微弱作用，而样品C则作用最明显。由此得出结论，样品C对于大鼠脑缺血再灌注损伤有最显著的防治作用。
结论药效学试验表明，银杏叶与栀子提取物的组合物(样品C)比单用银杏叶提取物(样品A)及单用栀子提取物(样品B)能更显著地保护大鼠脑缺血再灌注损伤，改善血液流变学，而且其效果并非简单的叠加。上述实验表明本发明的组合物与单味银杏叶或栀子比，可更好的用于制成治疗脑缺血，以及冠心病、心绞痛等心脑血管疾病的药物。
权利要求
1、一种含有银杏叶提取物和栀子提取物的药物组合物，其特征是该药物组合物的提取物中主要活性成分为银杏叶的黄酮类化合物及内酯类化合物和栀子的环烯醚萜苷类化合物，其中总黄酮醇苷、萜类内酯和总环烯醚萜苷这三类活性成分的含量总和不低于提取物总重量的30％。
2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征是所述的总黄酮醇苷、萜类内酯和总环烯醚萜苷三类活性成分的含量总和不低于提取物总重量的40％。
3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征是所述的总黄酮醇苷、萜类内酯和总环烯醚萜苷三类活性成分的含量总和不低于提取物总重量的50％。
4、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征是该药物组合物的组分I为银杏叶或银杏叶提取物，组分II为栀子或栀子提取物，其中各组分用量为银杏叶50～300重量份，银杏叶提取物1～8重量份，栀子25～250重量份，栀子提取物1～25重量份。
5、根据权利要求4所述的药物组合物，其特征是药物组合物各组分用量为银杏叶75～250重量份，银杏叶提取物1.5～6重量份，栀子50～200重量份，栀子提取物1.5～20重量份。
6、根据权利要求5所述的药物组合物，其特征是药物组合物各组分用量为银杏叶100～200重量份，银杏叶提取物2～4重量份，栀子75～150重量份，栀子提取物2～15重量份。
7、权利要求1～6任何一项的药物组合物在制备治疗缺血性脑病的脑血管疾病的药物中的应用。
8、权利要求1～6任何一项的药物组合物在制备治疗冠心病或心绞痛类心血管疾病的药物中的应用。
全文摘要
一种含有银杏叶提取物和栀子提取物的药物组合物，该药物组合物的提取物中主要活性成分为银杏叶的黄酮类化合物及内酯类化合物和栀子的环烯醚萜苷类化合物，其中总黄酮醇苷、萜类内酯和总环烯醚萜苷这三类活性成分的含量总和不低于提取物总重量的30％。该药物组合物中组分I为银杏叶或银杏叶提取物，组分II为栀子或栀子提取物，其中各组分用量为银杏叶50～300重量份，银杏叶提取物1～8重量份，栀子25～250重量份，栀子提取物1～25重量份。该组合物具有显著保护脑缺血损伤及改善血液流变学的作用。可用于制成治疗缺血性脑病、冠心病、心绞痛等心脑血管疾病的药物。
文档编号A61P9/00GK101019951SQ200710020029
公开日2007年8月22日 申请日期2007年2月7日 优先权日2007年2月7日
发明者范光斌, 龚祝南, 韦英秋 申请人:韦英秋