专利名称：一种中药组合物在制备保护损伤的血管内皮的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体地，涉及一种中药组合物在 制备保护损伤血管内皮药物中的应用，属中药应用领域。
背景技术：
内皮细胞己被认为不仅是一层血管壁内面的屏障,而是具有多种生理功 能的组织或器官。它可分泌释放多种生物活性物质调节血管张力和平滑肌生 长,参与凝血及抗血栓形成,影响血管通透性和物质交换。正是由于这些发现， 对于内皮细胞功能的研究越来越令人瞩目。用药物等手段对内皮细胞的内环 境及其分泌物进行调整，从而逆转内皮功能失调，已成为心血管疾病治疗领 域的一个新的研究方向。近年对血管内皮的研究使人们重新认识血管内皮的 功能和多种心血管疾病的发病机理，积极寻找血管内皮功能障碍的早期诊断 与治疗的方法具有重要意义。凋亡即细胞的程序性死亡,是一种基因控制的细胞自主死亡过程，多种基 因及其表达产物与细胞凋亡过程有着密切关系。大量的研究证明重要是是通 过以下三个方面抑制心肌细胞的凋亡。 一是干预了心肌细胞凋亡的诱导因 素。在许多心血管疾病中，诱导凋亡的主要因素有缺血、缺氧、氧自由基等。 二是干预了心肌细胞凋亡通路，目前较一致的观点认为，心肌细胞的凋亡通 路，最为重要的是线粒体途径。在凋亡诱导因素的作用下，线粒体内f丐超载, 氧化型谷胱甘肽含量增高,导致线粒体内膜的通透性转运孔开放，内膜的跨膜电位消失，继之使得凋亡活性物质(主要是细胞色素C和凋亡诱导因子〉释放, 依次激活Caspase-9， Caspase-3，从而启动凋亡通路。三是干预心肌细胞凋亡 的调控机制心肌细胞凋亡受到正、反两方面机制的调控。Bcl-2基因表达增强 能够抑制心肌细胞凋亡，而p53、 Bax、 Fas等基因表达增强，则促进了心肌 细胞凋亡。本发明是在第01131203.3号中国专利和第200410048292.2号专利申请的基础上进行的改进发明，在此全文引用该两专利文件记载的内容。本发明提 供了一种中药组合物在制备保护损伤的血管内皮的药物中的应用。发明内容本发明目的是提供一种中药组合物在制备保护损伤的血管内皮的药物 中的应用。本发明还提供了该中药组合物制备降低血液粘度的药物中的应用。 本发明还提供了该中药组合物在制备降低组织中活性氧化物质水平药 物中的应用。本发明还提供了该中药组合物在制备降低组织中P53mRNA水平的药物 中的应用。本发明还提供了该中药组合物在制备抑制细胞凋亡的药物中的应用。 本发明的另一个目的是提供该中药组合物在制备保护损伤的血管内皮的药物中的应用中的活性成分。本发明应用中，所述中药组合物由如下重量份的原料药制成 人参3-10水蛭3-11 土鳖虫5-10乳香(制)1-5 赤芍3-9降香l-5 檀香l-5全蝎3-9 蝉蜕3-12蜈蚣l-3冰片l-7酸枣仁(炒)3-10;优选地，该中药组合物由如下重量份的原料药制成人参6水蛭10 全蝎7土鳖虫7 蝉蜕7乳香(制)2 蜈蚣l 冰片5赤芍5 降香2 酸枣仁(炒)5;或:人参10檀香2人参6 檀香2水蛭8 全蝎9水蛭11全蝎3土;:虫7 :7土鳖虫7 蝉蜕7乳香(制)2 蜈蚣1 冰片乳香(制)2 蜈蚣1 冰片赤芍5 降香2 ; 酸枣仁(炒)5;赤芍降香2 "5;本发明中药组合物中，原料药材的拉丁名及其加工方法来自《中药大 辞典》(1977年7月，第一版，上海科学技术出版社)和《中国药典》(2005)。本发明的应用中，所述中药组合物各原料中的一种或几种，可单独或 同时被相同药性、功效的中药原料药替换，替换后，组合物制剂和作用不 发生变化。本发明的应用中，该中药组合物的活性成分由下列成分组成a平均粒径小于100pm的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕及制乳香药粉；b冰片药粉；c由降香和檀香提取的挥发油； d人参用乙醇提取后的醇提液经浓縮后的醇提浸膏； e提取成分c后的降香和檀香药渣的水提液、赤芍和炒酸枣仁加水煎煮 后的水提液以及提取成分d后的人参药渣的水提液过滤、混匀后浓縮成的水提浸膏。本发明的应用中，所述中药组合物剂型为胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、 软胶囊或滴丸剂。本发明中药组合物制剂还可以按常规的制剂工艺，例如，范碧亭《中药 药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)记载的制备工艺，制成药剂 学可接受的任意常规剂型，例如胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、软胶囊、滴 丸等。本发明的应用中，所述中药组合物为胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、软 胶囊、滴丸制剂中的一种，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加 入药学可接受的辅料，例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、 甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括淀粉、预胶化淀粉、乳糖、 甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括淀粉、预胶化淀粉、 微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交 联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、 二氧化硅等；助悬剂包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟 丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤 维素等；甜味剂包括糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫6味剂包括甜味剂及各种香精；防腐剂包括尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括PEG6000， PEG4000，虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药剂学，需在制备这些剂型 时加入药学可接受的其它辅料(范碧亭《中药药剂学》，上海科学出版社1997 年12月第1版中各剂型记载的辅料)。本发明胶囊剂优选通过以下制备方法制成将上述配比的水蛭、全蝎、 蝉蜕、土鳖虫、蜈蚣等五味药洗净，低温烘干，备用；檀香、降香提取挥发 油，药渣及水溶液备用；人参用70%乙醇加热回流提取二次，第一次3小时， 第二次2小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味；人参药渣与檀香、降香的 药渣以水溶液合并，加入赤芍、酸枣仁(炒)，加水煎煮二次，第一次3小 时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.20-1.25 (60°C) 的清膏，加入上述人参醇提液，混匀，低温干燥，粉碎成细粉；乳香(制) 与水蛭等五味共粉碎成细粉；冰片研细，分别与上述细粉配研，混匀，喷入 挥发油，混匀，装入胶囊，即得。或者，本发明胶囊剂优选通过以下制备方法制成a) 原料药的重量比为人参3-10份、水蛭3-ll份、土鳖虫5-10份、制乳 香l-5份、赤芍3-9份、降香l-5份、檀香l-5份、全蝎3-9份、蝉蜕3-12份、蜈 蚣l-3份、冰片l-7份、炒酸枣仁3-10份；b) 药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净 选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上; 粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于IOO待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c) 提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加水煎煮， 水提液过滤后，待浓缩成浸膏.，人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回 收乙醇后，浓縮成醇提浸膏，水提液过滤与所有的水提液混匀后浓缩成水提 浸膏；d) 制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤C)所得提取浸膏喷入 制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发 油，混匀后由胶囊充填机充填，制成胶囊。或者，本发明胶囊剂优选通过以下制备方法制成a) 原料药的重量比为人参3-10份、水蛭3-ll份、土鳖虫5-10份、乳香 (制)l-5份、赤芍3-9份、降香l-5份、檀香l-5份、全蝎3-9份、蝉蜕3-12份、蜈蚣l-3份、冰片l-7份、炒酸枣仁3-10份；b) 药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净 选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上; 粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于IOO待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c) 提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加水煎煮， 水提液过滤后，待浓縮成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回 收乙醇后，浓縮成醇提浸膏，水提液过滤与所有的水提液混匀后浓縮成水提 浸膏，将浸膏直接喷雾干燥成喷雾粉；d) 制剂工艺将超微粉碎粉与步骤c)所得喷雾干燥粉一起加到沸腾制粒干燥机中，再 喷溶媒制成颗粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香 提取的挥发油，混匀后由胶囊充填机充填，制成胶囊。本发明应用中，本发明组合物的用量，按原料药总重量计，为每次0.8-3 克，每日服用2-4次，优选为每次Ul-2.22克，每日服用三次。为阐明本发明中药组合物保护损伤的血管内皮的活性，用按实施例l方 法制得的胶囊内容物干粉(以下称本发明药物)进行了下列动物试验。一、材料和方法1动物及分组SD大鼠50只，(中国科学院上海实验动物中心购买)，月龄10周，体 重220 240g，雌雄不拘，分成假手术组IO，内皮损伤组20只、内皮损伤加本发明药物组20只，每个组又分为l天、3天、7天和14天四个时间段。动物饲普通饮食，自由饮水。2. 内皮损伤模型的制作大鼠麻醉后，腹卧固定消毒。药物缓释泵(OsmoticPump，Model2ml2)由 日本Alzet公司生产(美国健康医疗国际公司购买)；AngII (血管紧张素II， Sigma公司)。AngII溶液的配制AngII(醋酸盐，Sigma)用0.01mol/L醋酸 生理盐水稀释分装后-8(TC保存，Angn释放剂量为200ng/min/kg。每只泵均 加入2mlAnglI溶液，药物缓释泵释放速度为l(Vl/h。术后肌注青霉素三天预 防感染。内皮损伤组在背部皮下埋置AngII缓释泵，内皮损伤加本发明药物 组也埋置AngII缓释泵，但在埋泵前3天和埋泵后用本发明药物溶液灌胃。3. 剂量和配制方法。本发明药物溶液的配制方法本发明药物用0.5%羧甲基纤维素钠 (CMC-Na)溶解，浓度0.04g/ml;本发明药物溶液浓度均按lml/100g动物体重给药，每天灌胃一次。 二、取材及检测指标1分别在埋泵后的第l天、3天、7天、14天和28天，动物麻醉后处死取 材。自下而上依次剪开左侧肋软骨，暴露胸腔，剪开心包，右心室抽血(每 只动物约可以采血6 8ml)，用作血清学检测。用Liang—500型毛细管血粘 度测定仪测定血液粘度。2透射电镜标本处理程序取出肾动脉，肝素生理盐水洗涤数次。2.5% 戊二醛前固定2h、l。/。锇酸后固定l 2h。缓冲液漂洗20min。分别用70。/。、80。/。、 90%、 100%丙酮梯度脱水，每次10min。环氧树脂Epon812包埋、烤箱内45 。C(12h)、 60。C(36h)。半薄切片定位，超薄切片于铜网上。醋酸双氧铀和柠 檬酸铅染色。菲力普(Philips)TECNAI-12型透射电镜观察拍照。3肾脏组织中活性氧化物质(ROS)的测定方法将肾组织用PBS匀 浆，过滤得到细胞悬液(lxl06/ml),在细胞悬液中加入乙酰乙酸二氯氢化荧 光素二酯，终浓度5iimol/L，置于37'C避光孵育30min后，用磷酸缓冲液冲洗 三遍，再用磷酸缓冲液制成50(V1的细胞悬液，流式细胞仪上测定过氧化物 反应的荧光强度，细胞内可被ROS氧化为二氯荧光黄(DCF)而被检测。4 RT-PCR检测肾脏组织中P53水平用Trizolkit—歩法提取肾脏组织 的总RNA。加入DEPC水10ul—35tU溶解RNA。 RNA变性电泳，分光光度 计检测260/280吸光度比值，计算RNA浓度。P53引物合成由上海生物工程公 司合成，用去离子水溶解为12.5uM(终浓度为10pmol/)il左右)。P53序列Sense: 5'TGGCTCCTCCCCAACATCTTATC3'; Anti-sense: 5'CTTCCTCTGTCCGA CGGTCTCTC3'。长度297 bp，最佳退火温度55度。GAPDH: Sense: 5' TGGTGAAGGTCGGTGTGAAC3'， ANTI-SENSE: 5'TTCCCATTCTCAGCCTTGAC3'，长度190bp。 PCR反应体系25ul:模板 cDNA 1 ti 1、 10mM dNTP 0.5 u 1、 Primer (sense) 0.5 ul、 Primer (antisense) 0.5 ul、 Taq酶(5U/ul) 0.5 ul、 10X buffer w他MgCL2 2.5卩1加H20至总体积25 U 1。 29个循环。琼脂糖电泳，比较两组不同时间段条带的灰度值，绘直方图。二、 结果1本发明药物对肾脏组织中ROS的影响本发明药物对不同时间段肾脏组织中的ROS均有所下降，其中以第3天、第7天下降最为明显。2肾脏组织中P53mRNA水平本发明药物组的P53mRNA明显低于内皮损伤组。3肾动脉透射电镜观察在内皮损伤组，可以见到内皮细胞不同程度 的充血，肿胀，剥脱，在某些部位还可见到内弹力板的暴露，但在本发明药 物组仅有轻微的内皮改变。而合并本发明药物组内皮损伤程度较轻微。四、结论本发明药物具有降低血粘度，降低肾脏组织ROS水平和P53mRNA水 平，抑制细胞凋亡，对损伤内皮细胞有一定的保护作用。
图l 本发明药物对肾脏组织中ROS的影响。可见本发明药物对不同时 间段肾脏组织中的ROS均有降低作用，其中以第3天、第7天下降最为明显。图2 本发明药物对肾脏组织中P53mRNA含量的的影响；本发明药物 组与内皮损伤组相比，l天、3天和7天的本发明药物组的P53mRNA表达均低 于内皮损伤组，并且在3天和7天明显，以7d组最为明显。图3 肾动脉透射电镜观察A对照组可见内皮细胞(E)完整，内弹力板(IEL)清晰，L为管腔。B为内皮损伤ld组；C为ld内皮损伤加本发明 药物组D为内皮损伤3d组；E为3d内皮损伤加本发明药物组F为内皮损伤7d 组；G为7d内皮损伤加本发明药物组。见内皮损伤组有不同程度的脱落，肿 胀；而合并本发明药物组内皮损伤程度较轻微。
具体实施方式
实施例l:胶囊剂的制备a) 原料药配方为人参 39.6g 水蛭 72.6g 土鳖虫 46. 2g 乳香(制) 13.2g 赤芍33g 降香 13.2g檀香 13.2g 全蝎 19.8g蝉蜕46.2g蜈蚣 6.6g冰片 33g 酸枣仁(炒)33g;b) 药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净 选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上; 粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于 30-40 iim;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c) 提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加适量水煎 煮二次，每次3小时，合并水煎液，水提液过滤后，待浓縮成浸膏；人参用 适量70%的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味， 再用水提取，醇提液浓縮成相对密度为0.9 1.1(60。C)醇提浸膏，水提液过滤 与上述所有水提液混匀后浓縮至相对密度为0.9 1.1(6(TC)的清膏，备用；d) 制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤c)所得提取浸膏喷入 制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发 油，混匀后由胶囊充填机充填，制成1000粒胶囊。适应症用于血管内皮功能保护。用法与用量口服。 一次2 4粒， 一日3次。实施例2:片剂的制备a) 原料药配方为-人参66g 水蛭52.8g 土鳖虫46.2g 乳香(制)13.2g 赤芍33g 降香13.2g 檀香13.2g 全蝎59.4g蝉蜕46.2g蜈蚣6.6g 冰片33g 酸枣仁(炒)33gb) 药材粉碎工艺-将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净 选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上; 粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于 70-90 pm;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c) 提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸枣仁加适量水煎 煮二次，每次3小时，合并水提液，过滤后，待浓縮成浸膏；人参用适量70% 的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，再用水提 取，醇提液浓縮成相对密度在6(TC测定为1.0 1.05醇提浸膏，水提液过滤与 上述所有水提液混匀后浓縮至相对密度为1.0 1.1(60。C)的清膏，备用；d) 制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤c)所得提取浸膏喷入制 粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油， 按常规制剂工艺压制成1000片。本发明药物的用量，为每次2-4片，每日服用三次。 实施例3:丸剂的制备a) 原料药配方为人参39.6g 水蛭66g 土鳖虫46.2g乳香(制)13.2g 赤芍33g 降香13.2g檀香 13.2g 全蝎46.2g 蝉蜕46.2g 蜈蚣6.6g 冰片33g 酸枣仁(炒)33gb) 药材粉碎工艺将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净 选炮制后的制乳香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上;12粗粉后的药粉经各种超微粉碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径10-20 待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配料；c) 提取浓縮和干燥工艺降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和酸麥仁加适量水煎煮二次，每次3小时，合并水提液，过滤后，待浓縮成浸膏；人参用适量70°/。 的乙醇提取二次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，再用水提 取，醇提液浓缩成相对密度为0.9 1.0(6(TC)醇提浸膏，水提液过滤与上述所 有水提液混匀后浓縮至相对密度为1.0 1.1(6(TC)的清膏，备用；d) 制剂工艺在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤C)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油， 按常规制剂工艺，制成1000粒丸剂。本发明药物的用量，为每次2-4粒，每日服用三次。
权利要求
1.一种中药组合物在制备保护损伤的血管内皮的药物中的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成人参3-10 水蛭3-11 土鳖虫5-10 乳香(制)1-5 赤芍3-9降香1-5檀香1-5 全蝎3-9 蝉蜕3-12蜈蚣1-3 冰片1-7酸枣仁(炒)3-10。
2. 如权利要求l所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原 料药制成人参6水蛭10土鳖虫7乳香(制)2赤芍5 降香2 檀香2全蝎7 蝉蜕7 蜈蚣1 冰片5 酸枣仁(炒)5。
3. 如权利要求l所述的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原 料药制成人参6水蛭11 土鳖虫7乳香(制)2赤芍5 降香2 檀香2全蝎3 蝉蜕7 蜈蚣1 冰片5 酸枣仁(炒)5。
4. 如权利要求l-3中任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物的活性 成分由下列成分组成a平均粒径小于100pm的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕及制乳香药粉；b冰片药粉；c由降香和檀香提取的挥发油；d人参用乙醇提取后的醇提液经浓縮后的醇提浸膏；e提取成分c后的降香和檀香药渣的水提液、赤芍和炒酸枣仁加水煎煮后的水提液以及提取成分d后的人参药渣的水提液过滤、混匀后浓縮成的水提浸膏。
5. 如权利要求l-3中任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物剂型为 胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、软胶囊剂或滴丸剂。
6. 如权利要求l-3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物在制备降低血 液粘度的药物中的应用。
7. 如权利要求l-3中任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物在制备降低组织中活性氧化物质水平药物中的应用。
8. 如权利要求l-3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物在制备降低组织中P53mRNA水平的药物中的应用。
9、 如权利要求l-3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物在制备抑制细 胞凋亡的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物在制备保护损伤的血管内皮的药物中的应用，本发明中药组合物通过对损伤的血管内皮保护和损伤修复，减少组织细胞的凋亡等NEI(神经-内分泌-免疫)网络的综合途径来发挥该中药组合物的作用。
文档编号A61P3/00GK101590123SQ20081005515
公开日2009年12月2日 申请日期2008年5月27日 优先权日2008年5月27日
发明者安军永, 李向军, 超 王, 郑立发 申请人:河北以岭医药研究院有限公司