专利名称：：多价人-牛轮状病毒疫苗的制作方法多价人-牛轮状病毒疫苗本申请是申请日为1999年7月27日、申请号为99810311.X、发明名称为"多价人-牛轮状病毒疫苗"的发明专利申请的分案申请。
背景技术：
：轮状病毒是婴幼儿急性脱水腹泻的一个主要原因。在发展中国家，轮状病毒疾病导致婴幼儿胃肠炎死亡的25%至30%和在美国大约50000至100000的小于5岁的住院儿童。因为这个原因，需要安全有效的疫苗来预防嬰幼儿严重的轮状病毒疾病。开发轮状病毒疫苗的主要策略以"Jermerian"方法为基础，其具利用人和动物轮状病毒的抗原相关性和动物轮状病毒林在人中的减小的毒性。Kapikian等，疫苗，Chanock等编著，冷泉港实验出版社，冷泉港，纽约，pp.151-159(1987)。使用该方法已经开发出了几种候选的活口服轮状病毒疫苗，其中从非人宿主得到的抗原相关的活病毒被用作抗其人病毒对应物的免疫接种疫苗。已经用来对人接种的动物轮状病毒的例子包括牛轮状病毒林NCDV(RIT4237，Vesikari等，Lancet，2:870-811(1983))，牛轮状病毒林WC3(Clark等，美国儿童疾病杂志(Am.J.Dis.Child.)，140:350-356(1986))和猕猴轮状病毒(RRV)林薩U18006(美国专利4571385，Kapikian等，疫苗85，Lerner等，冷泉港实验出版社，冷泉港，纽约，pp.357-367(1985))。证明了不同一价牛和一价猿猴轮状病毒疫苗之间的保护效力是不同的(Vesikari，肠胃道病毒感染(Kapikian编著，MarelDekker，Inc.，pp.419-442(1994);Kapikian,出处同上，pp.443-470(1994))。而且，在人中产生令人满意的免疫应答要求高浓度的牛轮状病毒(107-108噬斑形成单位(pfu))(Vesikari等，儿科传染病(Ped.Inf.Dis.)4:622-625(1985);Bernstein等，传染病杂志(J.Infect.Dis.)162:1055-1062(1990))。这些组合物的不同效应可能部分归因于2至5个月大的婴儿的目标人群在接种之后特征性产生同型免疫应答的事实(Kapikian等，药物生物学实验进展(Adv.Exp.Med.Biol.),327:59—69(1992);Bernstein等，感染病杂志(J.Infect.Dis.),162:1055-1062(1990);Green等，感染病杂志(J.Infect.Dis.)，161:667-679(1990);和Vesikari，疫苗11:255-261(1993))。临床相关人轮状病毒是A群轮状病毒的成员。这些病毒都有共同的VP6介导的群抗原，一种位于病毒中间壳上的蛋白。而且，血清型特异性取决于位于病毒外壳(通常也称之为病毒壳体)上的VP4(蛋白酶敏感的或P型)和VP7(糖蛋白或G型)蛋白质的存在，这两种蛋白质独立地诱导中和抗体，Kapikian等，病毒学，Fields,ed*pps.1353-1404(1995)。通过中和试验将感染人的A群轮状病毒分类为10种不同的VP7血清型。氨基酸序列分析表明每一种血清型中两个主要可变区中氨基酸同一性很高(85-100%);但是不同血清型的病毒抹之间的氨基酸同一性显著降低(Green等，病毒学(Virol.)，168:429-433(1989);Green等，Virol.,161:153-159(1987);和Green等，病毒学杂志(J.Virol.)，62:1819-1823(1988))。证实了通过病毒中和试验或VP7的序列分析测定的轮状病毒相关性之间的一致性。因此，参考病毒抹通常可以在临床研究中用作其血清型中的轮状病毒抹的代表。为了实现抗每一流行病学和临床上重要的4种G血清型(VP7)(标记为1,2，3和4)的保护，通过产生重排列轮状病毒来改进Jennerian方法。通过用动物源的轮状病毒(即猕猴或牛轮状病毒)和人轮状病毒株共感染组织培养细胞来构建重排列的轮状病毒抹。通过使共感染的子代与一组抗动物病毒抹的VP7的单克隆抗体接触来选择共感染期间产生的包含编码来自人病毒抹的VP7的单一人轮状病毒基因和10个保留的来自动物病毒抹的轮状病毒基因的重排列病毒(参见，例如，美国专利4571385;Midthun等，临床微生物杂志(J.Clin.Microbiol.)24:822-826(1986);和Midthun等，J.Virol，53:949-954(1985))。对包含来自人病毒抹的VP7基因的人x猕猴轮状病毒重排列和人x牛重排列的研究证明动物轮状病毒亲本的VP4中和蛋白在用这些人x动物轮状病毒重排列接种的嬰儿中免疫应答占优势。这可能反映出在子宫内从母体转移给嬰儿的抗体中没有动物轮状病毒VP4抗体。不过，对通过母体产生的VP7抗体部分减弱的人轮状病毒VP7的免疫应答足以提供保护作用，因此，VP7抗体形成改进的Jennerian方法的基础(Flores等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)27:512-518(1989);Perez-Schzel等，临床徵生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)28:553-558(1990):Flores等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)31:2439-2445(1993);Christy等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)168:1598-1599(1993);Clark等，疫苗(Vaccine)8:327-332(1990);Treanor等，Pediatr.Infect.Dis,J.14:301-307(1995);Madore等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)166:235-243(1992);和Clark等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)161:1099-1104(1990"。用携带单一人轮状病毒基因，即编码VP7的基因，的单一猕猴轮状病毒重排列的研究中，发现这样一种重排列的保护性免疫应答在小于6个月的嬰儿中特征性同型(Green等，流行病学杂志(J.Inf.Dis.)161:667-679(1990))。该发现为抗轮状病毒疾病的免疫中VP7-相关的免疫性的重要性提供了进一步的证据。使用一价和四价人x猕猴轮状病毒重排列疫苗的一般性实验证明在接种后3-4天大约1/3的嬰幼儿发生暂时低水平发热事件。Bernstein等，JAMA273:1191-1196(1995);Flores等，Lancet336:330-334(1995);Perez-Schael等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)28:553-558(1990)'Flores等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.),31:2439-2445(1993);Halsey等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)158:1261-1267(1988);Taniguichi等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)29:483—487(1991);Simasathien等，儿矛牛传染病(Pediatr.Infect.Dis.)J.13:590-596(1994);Madore等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)166:235—243(1992);和Joe画u等，L獄et350:1205—1209(1997)。用牛轮状病毒抹NCDV和WC3(VP7血清型6)对人的研究结果表明这些特殊的牛轮状病毒抹似乎不引起发烧或其它反应。应该注意血清型6VP7存在于在人轮状病毒疾病中重要的人轮状病毒上这一点是未知的。并且也没有发现牛轮状病毒当对人施用时和猕猴轮状病毒一样是免疫原性的.牛轮状病毒抹NCDV(RIT4237疫苗)对婆儿和幼儿评价不少于5次效力试验。在这些试验中，以1078至1083組织培养感染剂量5。(TCIDs。)的剂量范闺施用牛RIT4237疫苗，通常剂量超过108°TCID5o。在剂量-反应研究中，Vesikari等，Ped.Infect.Dis.,4:622-625(1995)，发现当以1063TCID5。的剂量施用疫苗时4至6月龄的嬰儿中15%(2/13)产生了同型抗体应答；当以1072TCID5。的剂量施用时是71%(10/14)，和当以10^TCID5。的剂量施用时是100%.因此，测得了产生最佳免疫原性的牛轮状病毒抹的剂量是108°TCIDs。范围.在猕猴轮状病毒和牛轮状病毒在人中的感染性和免疫原性的直接比较中，给6-8月龄的儿童施用1()S噬斑形成单位(pfu)猕猴轮状病毒(RRV疫苗)或1083pfu的RIT4237(Vesikari等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)153:832-839(1986))。RRV疫苗在81%接种者中诱导了同型中和抗体反应，而剂量大2000倍的牛RIT4237疫苗只在45%接种者中诱导了同型中和抗体，统计学差异明显。用WC3牛轮状病毒抹也进行了效力试验。在这些试验中，以10"至1073pfu剂量范围对嬰儿和幼儿施用WC3病毒抹(Clark等，美国儿童疾病杂志(Am.J.Dis.Child)140:350-356(1986))。尽管没有提供显著免疫原性需要的剂量数据，但是Clark等注意到WC3抹似乎具有类似于RIT4237那些的安全特性，但是比使用牛RIT4237的剂量小至少5倍的剂量是有免疫原性的，尽管这种免疫原性仍然需要比猕猴轮状病毒疫苗的剂量大得多的剂量。已使用WC3轮状病毒抹作为产生携带各种人轮状病毒抹的重排列的亲本抹之一(Clark等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)(增刊)174:73-80(1996))。在一个效力试验中，以三次剂量方案对嬰儿和嬰幼儿施用1073pfu的WC3和人轮状病毒VP7血清型l的一价重排列(Treanor等，Ped.Inf.Dis.J.14:301-307(1995))。关于这项试验没有报道免疫原性数据。在另一项效力研究中，使用了一种四价制剂，其含有牛轮状病毒WC3和人轮状病毒VP7血清型1，2或3的三种人VP7重排列，以及作为第四种成分的携带带有从牛轮状病毒WC3衍生的保留基因的人轮状病毒VP4蛋白质的人x牛重排列。以1(f。pfu的剂量使用三种VP7重排列的每一种，同时以5xl06°pfu的剂量施用VP4重排列(Clark等，Arch，Virol(增刊)12:187-198(1996);Clark等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)(增刊)174:73—80(1996);Vesikari等，Arch.Virol(增刊)12:177-186(1996))。也没有报道该项试验的免疫原性数据，但是这些研究表明为了特征性产生和用猕猴轮状病毒或人x猕猴重排列获得的保护应答相似的保护应答需要107至1083pfu的剂量(Clark等，Arch.Virol(增刊)12:187-198(1996);Vesikari等，Arch.Virol(增刊)12:177-186(1996))。该剂量比猕猴轮状病毒和人,猴轮状病毒重排列疫苗组合物需要的剂量高10-100倍。已经开发出了多价轮状病毒疫苗组合物。特别地，将代表人血清型1,2和4的三种人x猕猴轮状病毒重排列与猕猴轮状病毒抹(RRV)组合(后者具有人血清型3的中和特异性)，形成四价疫苗组合物(Perez-Schael等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)28:553-558(1990);Flores等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.),31:2439-2445(1993))。和使用一价猕猴轮状病毒一样，发现接种的婴儿中15%至33%对人x猕猴重排列轮状病毒疫苗组合物产生暂时低水平发热症状(Perez-Schael等，出处同上文)。这种暂时发热事件或症状尽管一般情况下父母和临床试验健康护理人员认为是可接受的，但是在某些情况下可能是不允许的，例如可能具有低水平的被动获得的对轮状病毒的母体抗体的早产儿等等。尽管美国食品和药品管理局最近批准的以动物轮状病毒为基础的轮状病毒疫苗组合物提供了人抗轮状病毒感染的重要水平的保护作用:但是期望具有高感染性并且产生极低的或者不产生发热反应的多价疫苗组合物，尤其是对于某些临床情况尤其如此。本发明出人意料地满足这些和其它相关的需要。发明概述本发明提供一种人x牛重排列轮状病毒(humanxbovinereassortantrotaviruses)的免疫原性组合物'在多价组合物中以足以诱导对现在和将来临床上重要的人轮状病毒的各血清型的免疫应答的量提供所述人x牛重排列，其以不引起人宿主的暂时低水平发烧的克服本领域先前实践局限性的足够的感染性的剂量。所述免疫原性组合物的其它成分可以包括生理可接受载体和任选地增强宿主免疫应答的佐剂。在一些实施方案中，从人亲本轮状病毒抹，例如从血清型1,血清型2,血清型3,血清型4，血清型5,血清型9的人轮状病毒，或者从血清型10的牛亲本轮状病毒抹产生人x牛重排列轮状病毒VP7抗原。从牛轮状病毒抹产生编码其它轮状病毒蛋白质的保留基因。在优选的实施方案中使用牛轮状病毒UK-Compton抹.提供对于VP7血清型1,2,3和4的盖度(coverage)的特别优选的免疫原性组合物包括分别包括人x牛轮状病毒重排列DxUK，DS-lxUK，PxUK和ST3xUK的四价组合物。在另一个实施方案中，可以包括另外的相应于人轮状病毒VP7血清型5和/或9的人x牛轮状病毒重排列，或者与人轮状病毒VP7血清型IO起交叉反应的牛x牛重排列，或者包含人轮状病毒VP4血清型1A的人x牛重排列轮状病毒来提供具有更宽使用范围的免疫原性组合物。特别令人感兴趣的是包括轮状病毒重排列DxUK,DS-lxUK，PxUK，ST-3xUK和Wa(VP4)xUK抹的五价组合物；包括上述五价组合物加VP7，血清型9xUK抹的六价组合物，和包括上述六价组合物加VP7血清型5xUK抹的七价组合物或者上述七价组合物加VP7血清型10xUK抹。另外的轮状病毒抹当它们被识别在人体内产生明显的疾病时则也可以制备成牛轮状病毒重排列并且加入到本发明的免疫原性组合物中。本发明的免疫原性组合物一般以小于大约10"噬斑形成单位的各轮状病毒VP7或VP4血清型重排列的剂量配制。特别优选的是该剂量在大约105至小于大约106噬斑形成单位之间。在另一个实施方案中，本发明提供剌激免疫系统产生对于人轮状病毒抗原的免疫原性应答并且很少或不伴随暂时低水平发烧的方法，这些方法包括对个体施用免疫原性足够量的多价人x牛重排列轮状病毒组合物，其包括至少4种VP7血清型的人轮状病毒。在优选的实施方案中，包含该组合物的人x牛重排列轮状病毒包括人轮状病毒血清型1x牛轮状病毒抹UK，人轮状病毒血清型2x牛轮状病毒抹UK,人轮状病毒血清型3x牛轮状病毒抹UK和人轮状病毒血清型4x牛轮状病毒抹UK。所述多价组合物还可以包括但不限于，即血清型5和/或血清型9的人x牛重排列轮状病毒，或者具有人轮状病毒VP7血清型10特异性的牛x牛重排列轮状病毒，或者人轮状病毒血清型VP4Ax牛轮状病毒UK重排列等等。此外，当另外的轮状病毒血清型被认识在人疾病中重要时，它们也可以被加入到本发明的免疫原性组合物中并且在刺激免疫系统产生对目前认识的和新认识的临床上重要的轮状病毒的免疫原性应答的方法中使用。具体实施方案的描述本发明提供对人使用的免疫原性轮状病毒组合物。通过联合一价重排列人x动物轮状病毒来制备这里描述的组合物，以在诱导轮状病毒特异性抗体应答而没有伴随暂时低水平发热反应的制剂中提供一种各临床上最相关血清型的A群人轮状病毒。因此本发明的免疫原性组合物具体包括重排列人x牛轮状病毒和生理可接受载体的组合以形成多价组合物。在具体的实施方案中，所述多价免疫原性组合物包括在世界上最普遍的临床上相关的血清型的人轮状病毒的四种重排列人x牛轮状病毒的组合以形成四价组合物。以免疫原性足够量对需要抗轮状病毒的免疫保护的个体，例如嬰儿，儿童或成人施用所述免疫原性组合物。当这样的个体接着用野生型人轮状病毒抹感染时，所述组合物诱发至少部分保护抗严重的轮状病毒疾病症状，例如严重腹泻和脱水免疫应答的产生。因为所述免疫原性组合物的重排列病毒感染宿主的消化道，一些轻度的疾病可能会作为接种结果发生，但是本发明的免疫原性组合物一般不引起接种者临床上相关的发烧或反应。接种后，有可检测水平的宿主产生的血清抗体，其能中和组成所述免疫原性组合物的轮状病毒的血清型。特别地，本发明的多价免疫原性组合物对大多数以不同方式流行的临床上相关的A组人轮状病毒产生免疫应答。本发明的教导不限于目前，如果不是全部的，识别的临床上相关的那些人轮状病毒血清型，而是还包括将来显出临床相关性的那些人轮状病毒血清型。是本发明的多价免疫原性组合物的一个成分的重排列轮状病毒是分离的形式并且一般是纯化的形式。分离是指从其制备的其它细胞或病毒产物例如野生型病毒和细胞培养物或其它体系的其它异源成分分离的重排列轮状病毒。一般情况下，通过用适应组织培养的动物例如牛，猕猴等轮状病毒和适应组织培养的人轮状病毒在培养物中共传染哺乳动物细胞来制备轮状病毒重排列。一般情况下，非洲绿猴肾(AGMK)细胞被用作共感染的宿主细胞。用动物和人轮状病毒共感染后，一般通过将共感染培养物的生长产物暴露给对要被人轮状病毒基因置换的动物轮状病毒基因的蛋白质产物特异性的中和抗体来实现期望的重排列的选择(参见U.S.4571385,这里引作参考)。特别地，可以使用多克隆血清或对牛轮状病毒VP7和/或VP4蛋白质特异性的单克隆抗体。几轮噬斑纯化和传代后，表征选择的重排列的血清型和基因型。一般通过噬斑减少中和试验(PRN)或酶免疫测定确定血清型。一般通过病毒基因组的电泳和RNA-RNA杂交来确定基因型。对于多价免疫原性组合物一般选择只具有人VP7或VP4基因的轮状病毒重排列。也可以使用包括多人轮状病毒基因的重排列。就这一点来说，感兴趣的重排列轮状病毒特別是那些编码人轮状病毒VP7和/或人轮状病毒VP4基因产物的。在本发明中，特别优选的轮状病毒重排列是包括编码VP7的人轮状病毒基因和牛轮状病毒源的保留的10个轮状病毒基因的人轮状病毒和牛轮状病毒重排列。牛轮状病毒抹UK(Woode等，兽医科学研究(Res.Vet.Sci.)16:102-105(1974);Bridger和Woode，英格兰兽医杂志(Br.Vet，J.)，131:528-535(1975))是特别优选的，因为其系语和根据本发明证明的其对人的更高水平的感染性。这里证明的UK牛轮状病毒重排列的高感染性水平指需要更低的剂量，因而每剂量的制备成本应该比其他目前已知的牛轮状病毒重排列疫苗低得多。其他动物轮状病毒林也可以用来制备重排列轮状病毒，只要当以小于l(T噬斑形成单位的剂量施用每一种轮状病毒血清型时组合物能在接种者中诱导血清反应并且不产生暂时低水平发热反应。例如在一些实施方案中，所述重排列轮状病毒包括与人VP7血清型10起免疫学交叉反应的动物VP7抗原。这种重排列轮状病毒可以是牛X牛重排列。在另一个实施方案中，使用事先获得的重排列可以产生具体血清型的重排列轮状病毒。例如，为了制备另外的牛UK重排列，可以使用人轮状病毒VP7血清型1D林X牛UK重排列HD/BRV-1(ATCCVR-2069)来产生具有人轮状病毒VP7血清型2，3，4，9和/或牛轮状病毒VP7血清型10的人轮状病毒X牛UK重排列。使用的方法类似于上述那些，除了使用多克隆和对亲本人轮状病毒重排列的VP7血清型特异性的单克隆中和抗体来选择期望的人(和/或牛)轮状病毒VP7血清型的新的重排列。作为本发明的一部分也涉及当分离和鉴定了其他临床相关的人VP4或VP7血清型，通过描述的方法可以制备新发现的血清型的重排列轮状病毒。可以在支持轮状病毒生长的多种细胞培养物中增殖重排列的轮状病毒。用于增殖用于疫苗应用的轮状病毒重排列的优选的细胞培养物包括原代或继代猴非洲绿猴肾细胞(AGMK)，合格的的二倍体猴FehL-2细胞和合格的猴异倍体Vero细胞。一般以感染复数范围是大约0.1-1.0/细胞或更大，用轮状病毒重排列接种细胞并且在适合病毒复制的条件下培养大约3-5天，或者病毒达到适当的滴定度所需要的时间.从感染的细胞培养物收集轮状病毒重排列，一般通过公知的澄清方法，例如离心，从细胞成分中分离，并且可以根据需要使用本领域技术人员公知的方法纯化.在用作为免疫原性組合物的优选的实施方案中，血清型l，血清型2,血清型3和血清型4的人X牛重排列轮状病毒被用作四价疫苗.一般情况下，四种血清型的每一种的人X牛重排列轮状病毒被混合形成同时施用的联合的组合物。通过各轮状病毒重排列的免疫原性确定各轮状病毒血清型的最后比例，尽管不是优选的，也可以以顺序方式施用各人X牛重排列或者它们的组合，以提供有效的疫苗制剂。在其它优选的实施方案中，将血清型l,血清型2，血清型3和血清型4的人X牛重排列轮状病毒和VP7血清型5和/或9的人X牛重排列轮状病毒，VP7血清型10的牛X牛重排列轮状病毒，和/或VP4血清型1A的人X牛重排列轮状病毒联合，得到多价免疫原性组合物。上面描述的另外的重排列轮状病毒可以以任何组合的形式用作六价，七价或八价免疫原性組合物。本发明的人X牛重排列轮状病毒多价免疫原性组合物包含作为活性成分的免疫原有效量的至少4种这里描述的临床上最重要的VP7血清型人轮状病毒的每一种。特别地，以小于106°噬斑形成单位的剂量施用各抗原性不同的人轮状病毒重排列。可以使用生理可接受载体和/或辅剂将所述免疫原性组合物引导到宿主特别是人中。有用的载体包括，例如柠檬酸盐-碳酸氲盐緩冲液，緩沖的水，一般的盐水等等。得到的水溶液可以根据需要包装备用或者根据需要使用技术人员公知的方法冻干。冻干的病毒一般在大约4X:下保存。当要使用时，在施用之前将冻干的制剂与灭菌溶液混合，如上所述。组合物可以含有对于近似的生理条件所要求的药学可接受辅助物质，例如pH调节和緩冲剂等等，例如乙酸钠，乳酸钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙，脱水山梨糖醇一月桂酸酯，三乙醇胺油酸酯，柠檬酸盐-碳酸氨盐等等。当口服施用组合物时，也可能需要提供给个体緩冲溶液以部分中和胃酸和在通过肠道时保护重排列轮状病毒。适合该用途的緩冲溶液包括碳酸氢钠，柠檬酸盐碳酸氲盐等等。用本发明的人X牛重排列轮状病毒组合物免疫时，特别是通过口服途径，宿主的免疫系统通过产生对轮状病毒蛋白质特异性的局部分泌和血清抗体对该组合物响应。作为施用该组合物的一个结果，宿主变得至少部分或者完全对相应于免疫血清型的野生病毒抹引起的人轮状病毒疾病有了免疫力。如果真发生了野生型病毒感染，宿主抵抗发生中等程度的或严重的轮状病毒疾病，特别是肠胃道病毒疾病。对易患或者以其它方式有轮状病毒疾病危险的人，特别是嬰儿，施用含有人x牛重排列轮状病毒的本发明的多^h免疫原性组合物来诱导个体自身免疫应答能力。这样的量定义为免疫原性有效量"。本发明中使用的免疫原性或免疫原性有效量"指在接种者体内产生对疫苗组合物的细胞和/或抗体介导的免疫应答。通常，这样的反应由接种者产生特异性针对包括在本发明的疫苗组合物中的抗原的血清抗体，B细胞，辅助T细胞，抑制T细胞和/或细胞毒性T细胞组成。认为通过轮状病毒群特异性或轮状病毒血清型特异性分析测定的免疫接种后的高于接种前抗体滴定度4倍或更大的升高是显著反应。在该应用中，具体免疫原性组合物中的各人X牛重排列轮状病毒血清型的精确量取决于患者的年龄，健康状况和体重，给药方式，制剂性质等等，但是范围一般是对于每个患者大约104至大约106噬斑形成单位，优选大约105至小于1()e噬斑形成单位(pfu)的各血清型。在所有情况下，用于免疫原性组合物的制剂应该提供一定量的足以诱导个体抗轮状病毒疾病的免疫应答的本发明的各人X牛重排列轮状病毒。优选地，这种免疫应答将有效防止个体的严重的或威胁生命的轮状病毒疾病而不是"反应原性的"。这里所使用的"反应原性的"或反应原性指施用免疫原性组合物之后的那个星期中发生的轻度的暂时发烧。本发明上下文中定义的发烧是成人口腔温度大于或等于38t:，或者儿科接种者直肠温度大于或等于38.1"C。在一些情况下，将本发明的优选的四价人X牛重排列轮状病毒组合物与其他血清型的人轮状病毒或其他感染剂，特别是其他肠胃病毒联合是有利的。例如，本发明的四价人X牛重排列轮状病毒组合物可以进一步包括，例如，血清型5的(Timenetsky等，普通病毒学杂志(J.GeneralVirol.)78:1373—1378(1997))和/或血清型9的(Nakagomi等，微生物学.免疫学(Microbiol.Immunol.)、34:77-82(1990))人X牛重排列轮状病毒，和/或与人轮状病毒血清型10交叉反应的牛X牛重排列轮状病毒和/或VP4血清型1A的人X牛重排列轮状病毒。可以同时(但是一般分开地)或顺序地用另一种可能的胃肠病毒疫苗例如人杯状病毒(例如Norwalk病毒)或相关疫苗给药，可以一次或多次施用根据本发明的免疫原性组合物。对新生儿和嬰儿，可能需要多次施用以激发足够水+的免疫性，特別是在有高水平母体衍生的对轮状病毒特异性的抗体的情况下。在出生头2-4个月开始施用，并且在初次免疫后以一定时间间隔例如1-2个月或更长继续免疫，或者根据需要诱导和保持足够水平的抗人轮状病毒感染的免疫性。类似地，特别易患反复或严重轮状病毒疾病的成人，例如健康护理工作者，曰常护理工作者，儿童家庭成员，老年人等等，可能需要多次免疫以建立和/或保持有效免疫应答。通过测定血清或分泌物中轮状病毒群特异性抗体或血清型特异性中和抗体的量可以监测诱导的免疫性的水平。当需要保持期望水平的免疫性时，用本发明的一种或多种血清型的多价重排列轮状病毒组合物调整剂量或重复接种。为了详细说明而不是限制目的提供下面的实施例。实施例I该实施例描述了从人轮状病毒抹D(VP7:1)，DS-1(VP7:2)，P(VP7:3)和ST(VP7:4)和牛UKCo即ton(UK)轮状病毒衍生的轮状病毒重排列的制备，并且分别评价了各重排列对成人，儿童和嬰儿的安全性:免疫原性和反应原性。从牛UKCompton(UK)病毒抹和从人轮状病毒抹D(VP7血清型l，ATCCVR-970)，DS-1(VP7血清型2;Wyatt等，透视病毒学(Perspect.Virol.)10:121-145(1978))和P(VP7血清型3，Wyatt等，科学207:189-171(1983))和ST3(VP7血清型4;Banatvala等，美国兽医协会杂志(J.Am.Vet.Med.Assoc.)173:527-530(1978))衍生代表VP7血清型1,2，3和4的人X牛重排列轮状病毒抹。从腹泻住院儿童的大便回收人4&状病毒抹D，DS-1和P;病毒抹D和DS-1在无菌小牛中增殖和传代(Wyatt等，1978,上文；和Midthun等，1985,病毒杂志(J，Virol.)53:949-954),然后只在组织培养基中培养，而病毒抹P只在AGMK组织培养基中培养。从无症状新生儿的大便中分离人轮状病毒抹ST3并且在AGMK细胞中传代。从患有腹玛的没有喂初乳的牛的粪便在原代牛肾细胞中分离牛UKCo即ton轮状病毒抹(Woode等，Res.Vet.Sci.)16:102-105(1974))。Flewett等，在RegionalVirusLaboratory,东伯明翰医院(EastBirminghamHospital)，伯听翰，英国进行了该病毒在原代牛肾细胞中的进一步传代并且送给NationInstitutesofHealth,Bethesdat,MD。在NIH,病毒在原代牛胚肾细胞，原代AGMK细胞和在二倍体猴BDS-FRhL细胞中连续传代。种子集合包含在AGMK细胞中噬斑纯化的病毒并且在原代牛肾细胞培养物中传代。描述过携带从人轮状病毒D,DS-1,P或ST3抹衍生的一个VP7编码基因和从牛UK抹衍生的保留10个基因(lotBR-3,克隆22)的各人X牛轮状病毒重排列(Midthund等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)24:822-826(1986)和Midthund等，病毒杂志(J，Virol.)53:949-954(1985),美国专利号4571385，所有这些文献在这里引作参考)。分别制备在这些临床试验中使用的DxUK，DS-lxUK，PxUK和ST3xUK疫苗悬浮液，即lotHDBRV-l，克隆47-1-1(ACTTVR-2069和ACTTVR-2617),1058pfu/ml;lotHDS1BRV—1,克隆66-1-1(ACTTVR-2616)，1053pfu/ml;lotHPBRV-2,克隆22-1-l(ACTTVR-2611)，1053;和lotST3BRV—1,克隆52—1—1(ACTTVR-2612),1058pfu/ml，并且成功测定了安全性证明免除了根据技术人员公知的美国食品和药品管理局的标准的偶发因素。以随机的安慰剂对照的方式进行所有的儿科研究和用DxUK人x牛重排列轮状病毒对成人的一项研究来评价各候选轮状病毒疫苗抹的安全性和免疫原性。依次在18-45岁成人，6-60月龄的儿童，最后对1.5-5.9月龄的嬰儿评价各人x牛重排列轮状病毒的安全性。在JohnHopkins大学，免疫研究中心，Baltimore,MD或者在VaccineClinic,Vanderbilt大学，Nashville,TN进行各项研究。Halsey等，传染病杂志(J.Infect.Dis.)158:1261-1267(1988)描述了对于轮状病毒疫苗试验的成人和儿科受试者的选择的标准。首先对成人评价各轮状病毒重排列的未稀释的剂量。接着，对6-60月龄儿童评价各重排列的1:10稀释液和接着的PxUK的未稀释荆量(1053Pfu)。对这些儿童证实了各重排列的安全性之后，接着也对小于6个月的嬰儿评价了DxUK和DS-lxUK的1:10剂量和未稀释剂量。因为似乎需要未稀释剂量的这些重排列来感染大多数要幼儿，在未稀释的情况下对小于6个月的嬰儿施用了PxUK或ST3xUK重排列。最初，对血清中有低水平的VP7血清型1特异性中和抗体的5名健康成人志愿者评价了10"pfu的DxUK重排列轮状病毒抹的安全性。用于对成人研究的临床程序是先前Halsey等，出处同上文，描述过的那些，有几处除外。筒要地说，在给与各轮状病毒之前和之后所有的受试者都禁食至少1小时。各成人志愿者饮用含有2克碳酸氢钠的120毫升蒸馏水，1分钟后饮用悬浮于30亳升緩冲液中的1毫升未稀释候选疫苗或31毫升安慰剂(没有疫苗的緩冲溶液)。每天记录两次口腔温度并且在20分钟内再次检查升高的温度。施用轮状病毒后收集大便样品7天并且记录大便的稠度和次数并且在接种后每天也记录症状，记录7天。儿科研究的大部分程序也和Halsey等，出处同上文，描述过的那些相同，有几处除外。简要地说，在施用轮状病毒或安慰剂之前或之后至少2星期，按照时间安排给出适合儿童年龄的常规儿童期免疫。禁食1小时后，各儿科受试者随机接受轮状病毒或安慰剂，比例是2:1。各儿童饮用混合有0.4克碳酸氢钠的10亳升嬰儿制剂(Similac;RossLaboratories,Columbus,OH)，然后饮用1亳升轮状病毒重排列或安慰剂(緩冲制剂或Eagle，s极限必需培养基)。为了提高免疫原性，在接受第一剂量之后4-12星期对接受了1058pfu的DxUK轮状病毒重排列的小于6个月的嬰儿提供第二剂量的该病毒。在DxUK和DS-lxUK重排列的研究中，每天记录一次两次直肠温度和如果有症状的话，每天记录症状。父母每天收集大便样品并且记录他们的孩子每天排泄的大便在次数和稠度。PxUK和ST-3xUK儿科研究程序类似，只是稍有改变。口服轮状病毒之后7天内如果他们腹泻，或者发生明显的呕吐或发烧，则认为研究的受试者有餘状病毒样病"(即可能是由轮状病毒引起的病)。腹泻定义为48小时内三次或多次不成形的大便。发烧定义为在10-20分钟内证实成人口腔温度大于等于37.8*C,儿科受试者直肠温度大于等于38.ix:。在施用轮状病毒之前和之后4-6星期从各研究参与者收集血样用于测定轮状病毒特异性抗体和血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平；后者用来确定疫苗是否副作用地影响肝功能。对成人，在施用轮状病毒之后1星期还收集另外的血样用于测定ALT水平。根据Midthun等，临床微生物杂志(J.Clin.Microbiol.)27:2799-2804(1989)和Hoshino等，临床微生物杂志(J.Clin.Microbiol.)21:425-430(1985)所述，使用猕猴轮状病毒作为群特异性抗原，通过ELISA对接种前和接种后血清测定轮状病毒特异性IgA和IgG抗体，其中所述文献在这里引作参考。根据Midthun等，临床微生物杂志(J.Clin.Microbiol.)27:2799-2804(1989)所述通过噬斑减少中和(PRN)抗体试验也检测了成对血清。PRN试验中4吏用的轮状病毒包括Wa(血清型l)，DS-l(血清型2)，P(血清型3)和ST3或VA70(血清型4)人轮状病毒抹加；DxUK，DS-lxUK，PxUK,和ST3xUK重排列病毒抹和UK(Compton)牛轮状病毒抹。通过ELISAIgA或ELISAIgG测定或PRN抗体测定测得的与接种前血清相比接种后血清中抗体滴定度升高四倍或更多被认为是明显应答。将冷冻大便样品解冻并且在小牛肉浸渍肉汤中制备成10%的大便悬浮液。将该大便悬浮液接种到猴MA104细胞培养试管中并且在37*C下在滚筒中温育7天。将来自细胞培养的上清液盲传到新鲜的猴MA104细胞培养试管中并且在37。C下温育7天。在-20X:下保存10%的大便悬浮液和来自各套培养物的上清液，直到后来将它们解冻并且用于通过ELISA的轮状病毒测定。通过聚合酶链反应来确定排泄出的轮状病毒的血清型而将接种后收集的选择的轮状病毒阳性大便样品血清分型(Gouvea等，临床微生物杂志(J.Clin.Microbiol.)28:276-282(1990)和Gouvea等，临床微生物杂志(J.Clin.Microbiol.)32:1333-1337(1994)，各文献在此引作参考)。对研究受试者的腹泻大便检查了卵和寄生虫，对它们检测了沙门氏菌，志贺氏菌，弯曲杆菌，气单胞菌，耶尔森氏菌，肠病毒，腺病毒和轮状病毒。通过电子显微镜也对腹泻大便检查了轮状病毒和其它病毒顆粒。为了检查与间发性疾病相关的偶发因素，从在研究PxUK和ST3xUK重排列的7天观察期内发烧或有呼吸综合症的研究受试者收集鼻化验标本或鼻冲洗出的标本，并且在细胞培养物中测定这些样品的呼吸病毒。使用two-tailedFisher'sexact检验比较各年龄组中的这些组和每一项研究中接种者和安慰剂受者发生疾病的比例和血清反应的比例。表1给出了一次口服各VP7-血清型-特异性人xUK牛轮状病毒重排列之后大便中检测出轮状病毒或者血清抗体滴定度提高4倍或更大的成人，儿童和婴儿的百分比。在来自成人接种者，喂给未稀释的PxUK重排列的小于6个月的嬰儿，或者安慰剂受试者的大便的细胞培养物没有回收到轮状病毒。只有小比例的(i)给与DxUK,DS-lxUK,PxUK重排列的1:10稀释物的6-60个月龄的儿童或者(ii)施用未稀释的DxUK，DS-lxUK抹的小于6个月的嬰儿排泄出轮状病毒。在大多数情况下，在第二细胞培养传代之后只有一个或两个大便样品检测到轮状病毒。相反，更经常地且较长期地是从婴儿和幼儿的大便中回收到ST3xUK病毒(通常经3天或3天以上回收的大便，尤其是在接种后5-7天内)。在接种后第30天从一名23个月龄的儿童的大便分离到ST3xUK病毒并且通过PCR证实。从9名ST3xUK轮状病毒重排列受试者的大便回收到的病毒的定量测定表明排泄出的病毒的最大量是每毫升10%大便悬浮液中有4.7xl(^噬斑形成单位(pfu)。通过来自IO名疫苗接受者的10%的大便悬浮液(9/9)或大便组织培养传代(1/1)的PCR测定证实所有10名接种者都排泄出ST3xUK轮状病毒重排列。但是，这些接种者中有3名还排泄出野生型轮状病毒VP7血清型1人轮状病毒抹(一名嬰儿)或VP7血清型3抹(一名儿童和一名嬰儿)。对没有轮状病毒样病的三名儿科患者的数据没有进行血清分析。与嬰儿相比，对成人和较大儿童(他们可能以前感染过野生型轮状病毒)检测对轮状病毒的血清反应的次数少(表1)。在分別喂有DxUK，DS-lxUK或ST3xUK重排列的成人的23%,18%和15%中检测到血清反应，但是在接种PxUK重排列的成人中没有发现一人有血清反应。在接受1:10稀释液的6-60个月龄的儿童中，对33%的DxUK受试者，40%的DS-lxUK受试者和57%的ST3xUK受试者检测到血清反应。10"pfu剂量的PxUK重排列对6和60个月龄之间的儿童没有激发任何抗体反应，但是高10倍剂量的该组合物中中等程度免疫原性的，在口服该重排列的该年龄组中的11名儿童中有5名(45%)检测到了抗体反应。表1施用单一剂量的人VP7血清型-特异性-牛UK轮状病毒重排列疫苗之后婴儿，儿童和成人的病毒反应和血清反应排泄轮状通过指定的检测的抗体增加四倍或更多的百分数感染的受病毒的受噬斑减少中和试验EUSA给定剂量受试老试者的百试者百分疫苗抹人轮状病任何测试年龄組疫苗抹(log10pfu)No..分比比毒亲本IgAIgG嬰儿1.5-5.9个月龄DxUK4.8863385050633863DxUK5.82050153030403550DS-lxUK4.3863038NT385063DS-lxUK、5.3118218820181882PxUK5.31080107010101080ST3xUK5.81493"64929t254492儿童，6-60月龄DxUK4.8933112233111133DS-1xUK4.310401040NT404040PxUK4.31010100NT000PxUK5.31145036NT92745ST3xUK4.8863**6343m435757成人，18-45岁DxUK5.8132308815823DSlxUK5.3111809NT91818PxUK5.3120NYNTNT0018ST3逼5.82015000101015注pfu-噬斑形成单位；NT^没有测定。感染定义为通过ELISAIgA或IgG测定或者噬斑减少中和测定测定的血清轮状病毒特异性抗体增加4倍或更大的病毒排出的证据，来在噬斑减少中和测定中使用的轮状病毒疫苗和人轮状病毒林是DxUK和Wa;DS-lxUK和DS-1;PxUK和P;和ST3xUK和ST3抹.卞没有测定来自一名要儿和两名儿童的血清样品。**排泄轮状病毒重排列并且有通过PCR分析的大便中有野生型轮状病毒的证据的一名儿童和两名嬰儿。抗体反应分析不包括这三名接种者的血清学结果.在喂给轮状病毒的小于6个月龄的嬰儿中，与接受1:10或未稀释剂量的衍生自D(50-63%)，DS-1(82%)或P(63-80%)人轮状病毒抹的人x牛UK重排列的那些受试者相比，接受未稀释剂量的衍生自ST3人轮状病毒抹的人x牛UK重排列的受试者更经常(93%)检查到血清学反应(免疫原性的一个量度)。这些对于剂量来说的差异是统计学上不明显的，总之，在除了其中通过IgAELISA最经常地检测到抗体反应的DxUK疫苗组之外的所有疫苗组中，与通过ELISAIgA或IgG测定(使用猕猴轮状病毒作为群特异性抗原)相比，通过噬斑减少中和(PRN)测定(使用同源重排列病毒作为抗原)更经常地检测到抗体反应。对于这些重排列中的三个，接种嬰儿的接种后血清中的中和抗体比抗人轮状病毒亲代抹更经常地针对抗重排列轮状病毒，提示牛轮状病毒的VP4中和作用抗原是优势免疫的。对喂给1053pfu的DS-lxUK并且产生抗UK牛轮状病毒亲代抹(没有给出数据)或DS-lxUK重排列的中和抗体分别显著增加55%和82%比例而他们中没有一人产生抗DS-1人轮状病毒亲代抹中和抗体的显著增加的ll名嬰儿的接种后血清的PRN试验的结果中这一点尤其明显。但是，VP7和VP4反应的绝对解离不是通例，因为接受单一剂量的1型(D)人x牛轮状病毒重排列的嬰儿接种者在50%的情况下对人轮状病毒血清学1亲代产生了VP7-特异性中和抗体应答。另外，对于人轮状病毒3型(10%)和4型(8%)也观察到同型VP7中和抗体反应，以较低的频率。应该注意，和在对于下文四价制剂的实施例II一样，当以两个月的时间间隔施用三个依次剂量的重排列时，人x牛轮状病毒重排列的免疫原性要大得多。因此，该扩大的免疫方案诱导了对于各重排列的人轮状病毒亲代抹的VP7-特异性中和抗体反应，在血清型2，3和4的情况下，明显超过单一剂量重排列之后观察到的反应。具体地说，32%的婴儿接种者对血清型2反应，33%的嬰儿接种者对血清型3反应，42%的婴儿接种者对血清型4反应。对于血清型1没有注意到改进，在这种情况下给予单一剂量的该重排列之后免疫原性已经很高了。没有证据证明安慰剂受试者的大便中排泄轮状病毒，也没有证据证明该组中有轮状病毒血清反应，除了一名6个月龄的安慰剂受试者ELISAIgG抗体的滴定度增大了4倍，但是在其他测定中没有其他血清学反应。每一种轮状病毒重排列表现出安全性和好的耐受性，这一点通过成人不存在肠胃疾病来证明，每一个疫苗组和年龄组中的儿科接种者和安慰剂受试者之间轮状病毒样病"的比例没有统计学明显的增加也证明这一点(表2)。只有三名成人志愿者(接受PxUK或ST3xUK疫苗)有一些符合轮状病毒样病"标准的症状(发烧)，但是这些有病的接种者中没有一人有轮状病毒感染的证据。施用轮状病毒之后发烧的所有三个成人伴随有呼吸疾病并且排泄出呼吸病毒，这通过鼻化验样品的组织培养分析来检测。一名患有窦炎，咳嗽和鼻溢的PxUK受试者有对流感A病毒阳性培养物；另一名PxUK受试者有对呼吸合胞体病毒(RSV)的阳性培养物；一名ST3xUK受试者有咳嗽，鼻溢和嘶哑声。这些志愿者的伴随呼吸疾病，回收到呼吸病原体以及没有轮状病毒感染的证据表明这些发烧可能是由于间发性呼吸道感染。对儿科患者的四种轮状病毒疫苗候选物的大多数研究中也发生间发性疾病。与咳嗽相关的呕吐和与中耳炎相关的发烧或呼吸症状是常见的。尽管间发性疾病的背景很高，但是每一个疫苗组中6-60个月龄儿童和小于6个月龄的儿童中轮状病毒样病"(发烧，腹泻或呕吐)的比例在统计学上没有明显不同于安慰剂受试者(表2)。总之，接种后7天内48名接受重排列轮状病毒的6-60个月龄儿童中有8名，27名接受安慰剂的人中有3名有轮状病毒样病"。这些轮状病毒样病人中只有两名与轮状病毒感染相关。口服DS-lxUK重排列之后发病的两名病人都是病状温和并且自限的在第2天一名儿童发烧(最高38.5X:);另一名儿童在第2天和第3天呕吐三次。表2.口服人VP7血清型-特异性牛UK轮状病毒重排列疫苗或安慰剂之后成人和舉儿的^病皋<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>注轮状病毒样病定义为如分中定义的存在发烧，腹泻或呕吐。*结养以接种后4-6天收集的血样中测定的ALT水平为基础。从喂给ST3xUK的两名6-60个月龄的儿童分离到柯萨奇病毒B5或艾柯病毒和巨细胞病毒。还从相同研究中三名安慰剂受试者分离到腺病毒或副流感3型病毒。在小于6月龄的研究受试者中，在口服第一剂量的轮状病毒重排列之后7天内71名疫苗受试者中有23人，36名安慰剂受试者中有8人经历轮状病毒样病"。没有呼吸综合症或中耳炎的嬰儿发烧(范围38.2t!-38.3t:)比有呼吸综合症或中耳炎的嬰儿发烧(范围38.4。C-40"C)低。大多数(8/12)呕吐婆儿只呕吐一次或两次；没有人因为呕吐而影响进食或者导致脱水。表3给出了要儿(分类为感染的接种者，未感染的接种者或安慰剂受试者)中货状病毒样病"和呼吸道疾病或中耳炎婴儿的比例。感染的接种者是接种后有轮状病毒感染证据的疫苗受试者；未感染的接种者是接种后没有轮状病毒感染证据的疫苗受试者。对于每一疫苗组感染的接种者之中没有一致模式的症状，感染的接种者和未感染的接种者或安慰剂受试者发病比例之间没有明显差异。提示观察到的症状是间发性疾病的表现，如下所详述。在有轮状病毒样病的小于6个月龄的接种者当中，14名是疫苗反应者。其中三名疫苗反应者具有轻度的有一个或两个症状的轮状病毒样病;两名只是发烧；三名发烧并伴随呼吸疾病或中耳炎；9名呕吐一次或多次(最多6次)并且其中三名咳嗽后呕吐。三名疫苗反应者在喂给1058pfu的ST3xUK之后有中等至严重的轮状病毒样病"，但是他们也有间发性呼吸病毒感染。从洗鼻标本分离到了腺病毒和巨细胞病毒。另外，从高烧3天(最高4(TC)的一个儿童的大便回收到合适的轮状病毒重排列，但是该儿童也有鼻溢，咳嗽和中耳炎5天。该儿童住院并且用万古霉素和头孢菌素根据经验治疗直到没有脓毒病；她平静地恢复健康。从持续2天发烧(最高39.3。C)和中耳炎的一名婴儿的鼻标本培养副流感病毒和腺病毒；该儿童大便中也排泄出合适的轮状病毒重排列。从持续超过3天发烧(最高38.6°C)，腹泻(9次水样大便)和持续3-4天喘息，咳嗽和鼻溢的另一名嬰儿的分离到流感A病毒(但不是轮状病毒)。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>注如果他们排泄出轮状病毒和/或血清轮状病毒-特异性抗体滴定度增加4倍或更大，则认为嬰儿感染了施用的轮状病毒重排列病毒.轮状病毒样病定义为发烧，呕吐或腹泻。RSV-呼吸命胞体病毒；CMV-巨细胞病毒。如表3所示，没有轮状病毒感染证据的22名小于6月龄接种者中9名经历轮状病毒样病"。从接受10"pfu的DS-lxUK之后发烧并且34次拉痢疾性大便的一名嬰儿分离到空肠弯曲杆菌。从接受1058pfu的DxUK之后也发烧并且有中耳炎的另一名嬰儿的腹泻大便分离到嗜水气单胞菌。并且还从接受DxUK重排列的两名嬰儿和一名安慰剂受试者分离到呼吸合胞体病毒，他们都鼻溢，有或没有喘息。没有由于用轮状病毒重排列感染导致的肝损伤的证据。接种后4-6周ALT升高的儿科受试者的比例接种者的比例不比安慰剂受试者更大。只有两名儿科接种者(一名婴儿接种一次ST3xUK，另一名接受第二剂量的DxUK)具有升高的ALT值。该值小于两倍正常值并且当一星期内重复时该值是正常的。接种后4-6周两名安慰剂受试者也有轻度升高的ALT值。喂给DxUK或ST3xUK重排列后，成人志愿者(其中一些报道是酒消费者)偶尔检测到暂时的轻度的ALT值升高。这些志愿者中没有一人有轮状病毒感染证据。四名成人在施用DxUK后一周ALT升高；当三星期后重复时，他们的ALT水平是正常的或者小于两倍正常值(两名志愿者)。两名其他成人在接受ST3xUK重排列后一周ALT升高；施用轮状病毒之后4星期他们的ALT水平是正常的。尽管接受1058pfu的DxUK重排列轮状病毒的20名婴儿中只有10名(50%)在一剂量之后产生了轮状病毒特异性抗体，在之后4-12周用该重排列对14名嬰儿加强免疫在14名嬰儿中的12名(86%)激发抗体滴度增大4倍或更大，包括第一剂量之后产生抗体反应的7名嬰儿。在接受两个剂量的14名嬰儿中，第二剂量的净效果在所有14名接种者中激发抗体并且加强抗轮状病毒重排列中和抗体的水平，使几何平均滴定度从第一剂量后1:66变成第二剂量后的1:336。用DxUK加强免疫后，只有一名轮状病毒重排列受试者排泄出轮状病毒，且这只有一天，之后从该儿童没能收到病毒。14名嬰儿(其中5名在第一剂量后没有感染)中只有两名在第二剂量后经历轮状病毒样病。一名在第一剂量后没有感染轮状病毒重排列的儿童在第二剂量后轻度发烧(最高38.lt:)伴随有鼻溢。另一名儿童在第一剂量后感染重排列病毒，接受第二剂量后呕吐4次。在该组中有一名接种者在加强剂量后具有升高的ALT值，当重复时该值变为正常.实施例II该实施例描述了四价人x牛重排列轮状病毒免疫原性组合物，评价了其对成人，儿童和婴儿的临床安全性和免疫原性。以相等体积混合实施例I中描述的四种人x牛重排列轮状病毒，形成单一的四价疫苗组合物。以安慰剂对照方式进行所有的研究来评价混合的组合物的安全性和免疫原性。根据实施例I的描述进行所有的血清型和微生物学测定。在JohnsHopkins大学免疫研究中心对17名成人(ll名疫苗受试者和6名安慰剂受者)评价单一剂量的未稀释的含有10"-10"PFU每一种重排列的四价人(VP7血清型1,2,3和4)-牛UK轮状病毒疫苗。在给予疫苗或安慰剂之前或之后研究受试者禁食至少1小时。对他们喂给中和胃酸的120毫升緩沖液(碳酸氢钠)，一分钟后给予混合有緩冲液的四价免疫原性组合物或安慰剂。11名成人接种者中有一人报告在接种后2和3天间呕吐一次和腹泻大便三次，4和5天之间发生咽炎和鼻溢。这名志愿者没有轮状病毒感染的证据，通过培养物和电子显微镜检查，他的大便是轮状病毒阴性，并且没有检查到对轮状病毒的血清学反应。腹泻大便的细菌培养物也是阴性。另外10名接种者和6名安慰剂受试者在接种后无症状。疫苗或安慰剂受试者中没有一人在接种后ALT升高，在他们的大便中也没有检查到轮状病毒。对11名接种者(5名通过ELISAIgA测定，4名通过ELISAIgG测定)中的6名(55%)的血清检测了轮状病毒抗体反应。因此，四价疫苗表现出是安全的并且免疫原性的，使得可以在6-60月龄的儿童中进行进一步的评价。在下面的研究中，对20名6-60月龄的嬰儿和儿童喂给緩冲制剂后，在接受个体年龄适宜的常规儿童期免疫之前或之后至少2星期，施用单一剂量的未稀释四价人VP7血清型lxUK，人VP7血清型2xUK,人VP7血清型3xUK和人VP7血清型4xUK轮状病毒重排列疫苗(12名儿童)或安慰剂(8名儿童)。对一名接种者(在接受病毒之后头24小时期间发烧并且在第4天呕吐一次)和对一名安慰剂受试者(在第2天发烧并且在第2-7天和鼻溢咳嗽)观察到货状病毒样病"。另一名接种者在第7天鼻溢。有病的孩子没有一人证明有轮状病毒感染证据。只在一天从两名无症状接种者收集的两个大便标本中检查到轮状病毒。通过其他接种者和安慰剂受试者的电子显微镜或通过大便培养没有检测到轮状病毒，包括是疫苗受试者同胞的4名儿童。没有一名接种者或安慰剂受试者在施用四价轮状病毒制剂之后ALT升高。对12名接种者(4名通过ELISAIgA测定，6名通过ELISAIgG测定)中的6名检测到了轮状病毒抗体反应。12名接种者中一共有7名有轮状病毒感染的证据.因此，该候选疫苗表现出是安全的并且使免疫原性，使得可以靶向接受三剂量疫苗的小于6月龄的婴儿人群。下面对在大约2,4和6月龄时接受他们的常规的儿科免疫的30名嬰儿评价三剂量的未稀释的四价人x牛轮状病毒重排列疫苗或安慰剂的安全性和免疫原性。20名嬰儿随机接受候选轮状病毒疫苗，10名嬰儿接受安慰剂。因为医学原因在第二次接种之前从研究中排除了一名接种者和一名安慰剂受试者。第一剂量后施用第二或第三剂量疫苗或安慰剂，同时进行常规的儿童期免疫(包括全细胞百日咳接种)，20名接种者中有一名，19名接种者中有6名和19名接种者中有6名，和10名安慰剂受试者中有2名，9名安慰剂受试者中有0名，和9名安慰剂受试者中有3名分别报道有发烧。在口服施用四价轮状病毒疫苗之后头48小时内发生的所有的发烧案例，这和多次常规儿科免疫相符，除了三例发热案例，其中两名接种者伴随呼吸疾病，而第三件案例发生在安慰剂受试者中。一名安慰剂受试者报告有腹泻，但是在所有的接种者中则没有腹泻。第二剂量后第7天，一名接种者呕吐了两次，并且有呼吸疾病和结膜炎。另一名孩子在接种后头24小时内由于咳嗽呕吐了一次。只在一名轻度发烧(38.)的接种者的大便样品中检测到了轮状病毒，提示发烧与轮状病毒感染有关。第二剂量后和第三剂量后19名接种者中有4名，第一剂量后10名安慰剂受试者中有1名，第二剂量和第三剂量后9名安慰剂受试者中有1名，有呼吸病症或渗。所有报告的疾病都是轻度的。20名接种者中有5名和20名接种者中有2名，10名安慰剂受试者中有1名和IO名安慰剂受试者中有2名在第一次接种之前和之后ALT稍有提高。第一剂量后20名接种者中有2名，第二剂量后19名接种者中有0名，以及第三剂量后19名接种者中有2名的细胞培养物中测定检测到大便中有轮状病毒。以轮状病毒排出和/或病毒特异性血清抗体反应证据为基础，19名接种者中有12名(63%)在接受第一剂量后，19名接种者中有19名(100%)在接受第三剂量后感染了轮状病毒。(第二次接种后没有收集血清)。在第一剂量后第3，5和7天和第二剂量和第三剂量后第4天只对几名嬰儿在对他们收集的大便中检测到了轮状病毒。具体地说，20名中有3名(15%)在接受第一剂量疫苗后，19名中有1名(11%)在接受第三剂量后排泄出了轮状病毒。由于在第一剂量之前和之后ALT水平升高而从研究中排除的两名嬰儿(一名接种者和一名安慰剂受试者)中没有一人有任何轮状病毒感染证据。在接受了三剂量疫苗的19名接种者中，在第一和/或第三剂量疫苗之后通过下面测试检测到抗体反应ELISAIgA(50%),ELISAIgG(6396),抗UK牛抹的噬斑減少中和测定(100%)或人轮状病毒1型(Wa，32%),2型(DS-1，32%),3型(P，32%),或4型(VA70，32%)(表4)。表4在大约2，4和6月龄接种的嬰儿中接受三剂量大约4xl05PFU四价(UK)轮状病毒为基础的疫苗或安慰剂的个体的血清学反应<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>a第一和/或第三剂量疫苗之后*轮状病毒群特异性反应**VP7血清型在研究最后，对8.25-9.25月龄的7名安慰剂受试者给与单一剂量的四价轮状病毒疫苗。该疫苗表现出好的耐受性。只有一名婴儿观察到轮状病毒样病，他在第3,4和7天发烧，在第3至7天腹泻。对其它5名接种者观察到呼吸疾病(没有发烧或胃肠炎)。在该较大年龄组对于牛UK轮状病毒为基础的疫苗没有产生明显的发烧现象是相当重要的，因为一价猕猴轮状病毒疫苗已表现出明显地更倾向于对6-8月龄的嬰儿诱导发烧反应，该月龄的婴儿如果不是全部悟况下，则大多数情况下，已失去了被动获得的对轮状病毒的母体抗体。当将对牛UK为基础的四价组合物的血清学反房与在2,4和6月龄接种的以105°pfu各成分施与猕猴轮状病毒为基础的四价疫苗的婴儿诱导的中和抗体反应相比较时(Rennels等，儿科学(Pediatrics)97:7-13(1996)),注意到几个重要的特征。在90%的接种嬰儿中，猕猴轮状病毒为基础的疫苗诱导的中和抗体反应包括对猕猴轮状病毒的反应，所述猕猴轮状病毒是重排列的亲代抹之一。同时，对14%的孩子诱导了对人轮状病毒血清型1的中和抗体反应，对31%的诱导了对人血清型2的中和抗体反应，对29%的诱导了对人血清型3的中和抗体反应，对14%的诱导了对人血清型4的中和抗体反应。因此，与猕猴轮状病毒四价组合物扭比，牛UK轮状病毒为基础的人重排列免疫原性组合物诱导了大得多的对血清型1的中和抗体反应频率(P小于0.005Fisherexact检验)和对血清型4的中和抗体反应频率(P小于0.05Fisherexact检验)。对人轮状病毒血清型2和3病毒抹和对同型动物轮状病毒母抹的反应没有显著差异。从猕猴轮状病毒为基础的疫苗给出的高水平保护效力的因素来看:当与人x猕猴轮状病毒重排列疫苗相比时，认为四价人x牛UK轮状病毒重排列疫苗给出相同的和可能更好的免疫原性是显著性的。在美国进行的多中心效价试验中，证明猕猴轮状病毒疫苗具有抗非常严重轮状病毒腹泻的80%的保护效力和抗轮状病毒引起的脱水的100%的效力(Rennel等，儿矛+学(Pediatrics)97:7-13(1996))。在1997年12月FDA顾问委员会同意其临床特性，1998年8月该疫苗被食品和药品管理局批准。1997年6月美国免疫实施顾问委员会建议该疫苗用于2,4和6月龄嬰儿的常规免疫，等待批准。在1999年5月，在欧洲共同体的15个国家得到批准，牛UK轮状病毒为基础的多价免疫原性组合物对人不表现出诱导暂时的低水平的发烧。在一些临床情况下，牛UK轮状病毒为基础的组合物可能是优选的。因此，本发明的牛UK轮状病毒为基础的多价免疫原性组合物提供了独特的性质，包括(1〉类似于批准的四价猕猴轮状病毒疫苗的感染性和免疫原性；(2)减小的诱导暂时的低水平的发烧的能力；(3)类似于先前描述的牛轮状病毒为基础的疫苗组合物的减毒作用，但是根据要求的较低剂量判断具有明显更大的感染性和免疫原性；和(4)抗原覆盖了严重轮状病毒疾病中主要临床上重要的所有人轮状病毒血清型。实施例III该实施例提供了来自正在进行的将本发明的优选的四价人-牛重排列轮状病毒組合物与批准的四价猕猴-人轮状病毒重排列疫苗ROTASHIELD相比较的临床试验的数据的初步的阶段分析的总结。该分析检测了两种组合物的低水平发烧反应的比例和抗轮状病毒腹泻的保护效力。最近正在进行阶段性两年临床研究来比较本发明的四价人-牛重排列轮状病毒组合物与四价称猴-人轮状病毒重排列疫苗(最近批准在美国和欧洲共同体的15个国家使用的ROTASHIELD)的安全性和抗轮状病毒腹泻的效力。在Finland进行该研究并且包括172名四价人-牛轮状病毒重排列受试者，86名相应的安慰剂对照，161名R0TASHIELD接种者和79名相应的安慰剂受试者。由于计算原因，在两个邻近的小的Finnish城市，Tampere和Lahti进行该研究，因此需要使用两组安慰剂组。当两个研究组中的个体位于相同城市时，也需要两个安慰剂组，因为盛组合物的容器外观不同。为了对每一个组合物招收足够的受试者，可以以80%效率检查到对一种组合物的发热反应的降低的发生率(30%-15%)，在两个城市同时进行该研究(假设安慰剂组之间没有显著的不同，以0.05显著水平和10%信息丟失率进行双尾试验(two-tailedtest))。只是在Tampere随机进行四价人-牛轮状病毒重排.列组合物及其相应的安慰剂试验，而在Lahti和Tampere两处随机进行ROTASHIELD疫苗及其相应的安慰剂试验。对于每一组合物剂量，在接种后7天对研究受试者监测发烧，发烧定义为直肠温度等于或大于381C。在接种后7天内还监测呕吐，疏松大便，过敏和其它全身症状。整个两年研究期保持监测胃肠炎，严重的副作用或住院情况。计划该研究包括两季节(season)的胃肠炎。没有非盲的研究组成员的情况下，在接受第一剂量的各四价重排列组合物或安慰剂之后以发热反应率为基础获得了初步数据。此外，只对各组数据作为整体分析比较了两种组合物，即四价人-牛轮状病毒重排列组合物和ROTASHIELD,的发烧发生率和保护效力。通过将两种组合物配制成包含在鉴定的二倍体猴胎猕猴肺(FRhL)细胞中生长的轮状病毒保持研究组之间的细胞培养底物可比性。随机化分布后，对健康的2月龄嬰儿口服施与四价人-牛轮状病毒重排列组合物(每个成分1053至1()SVfu),ROTASHIELD(每个成分10Spfu)，或者安慰剂，并且两个月之后重复一次。嬰儿的父母每天记录一次或两次直肠温度，并且每天记录症状。收集大便样品并且保持记录排泄出的大便的次数和稠度.表5和表6给出了总结第一剂量的轮状病毒重排列组合物之后7天内发生的发烧的累计比例的可获得的数据和总结轮状病毒胃肠炎的第一季期间保护效力的初步数据并且下面进行了总结。在ROTASHIELD受试者中，在施与第一剂量的重排列组合物之后的那个星期里46.2%发生了低水平暂时发热反应(大于等于38K(100.4。F))(表5)。该频率明显大于其安慰剂组，安慰剂组该比例是11.4%(p小于0.0001)。相反，对于四价人-牛轮状病毒重排列组合物受试者观察到的发烧(大于等于38t:)的比例(15.2%)与其安慰剂组(11.0%)没有明显不同。ROTASHIELD接种者发烧高于38.4"C(101.1°F)的频率仍然是相当大的(20.3%)并且明显大于其安慰剂组(1.3%)(p小于0.0001)。相反，四价人-牛轮状病毒重排列组合物受试者发烧高于38.4i:的频率是1.8%，这与其安慰剂组(0%)没有明显不同。因此，在这两个比较中，ROTASHIELD以明显高于其安慰剂组的明显的概率诱导发烧，而对四价人-牛轮状病毒重排列组合物发热反应与其安慰剂组没有不同并且明显小于对ROTASHIELD所观察到的。总之，不管发烧定义为大于等于38X:或者大于38.4C,在接种后7天内，与四价人-牛轮状病毒重排列组合物相比，ROTASHIELD与明显更多的发烧相关(p小于0.0001)。在Finnish试验中基本上都没有对人x牛重排列组合物的发热反应是研究组中不存在背景疾病的反映。这与背景疾病非常频繁的实施例I和II完全相反。在Finnish研究中，相对不存在背景疾病使得比在较早临床试验中可能的情况更精确地评价发烧的出现或发热反应。也获得了有关抗四价人-牛轮状病毒重排列组合物和ROTASHIELD的轮状病毒腹泻的比较保护效力的初步数据。该数据特别重要，因为对于前者组合物没有观察到发热反应，并且使用比先前使用的牛轮状病毒和人-牛重排列组合物低10-100倍的病毒剂量，可以想到本发明组合物太减毒而不能诱导抗天然存在的轮状病毒疾病的保护作用。另一方面，已特征性地发现人-猕猴轮状病毒重排列疫苗，ROTASHIELD,具有抗严重轮状病毒疾病的80%-100%的保护效力。通过分析监督的第一个季节研究受试者中记录的任何严重程度的轮状病毒胃肠炎总共48例的分布从本发明研究获得对保护效力的估计。通过鉴定胃肠炎研究受试者的粪便中的轮状病毒确定轮状病毒胃肠炎的诊断。筌定通过下面的方法进行(l)标准免疫学方法,ELISA技术，使用轮状病毒群特异性和血清型特异性抗血清(Joensuu等，Lancet350:1205-1209(1997);和Hoshino等，临床微生物学杂志(J.CIin.Microbiol.)21:425-430(1985))，和(2)使用识别轮状病毒群特异性保守序列或轮状病毒血清型特异性保守序列的引物的PCR(Gouvea等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)28:276-282(1990))。以一种方法在第一季节进行保护效力的分析，使得定点研究小组以及临床和研究监视人员对研究组(即四价人-牛轮状病毒重排列组合物，ROTASHIELD,或相应的安慰剂组)的各受试者的安排始终未知，并且他们对研究的其它项目始终未知。该限制应用于该初步分析以允许连续监督和收集数据直到完成第二胃肠炎季节时研究结束。作为结果，通过两年监视完结后继续保持通过疾病的严重程度对疫苗效价的分析。不管怎样，应该测定第一季节期间每一个研究组所有严重程度的轮状病毒胃肠炎的比例并且与无非盲的试验的其他组相比较。第一季节期间两组安慰剂的所有严重程度的轮状病毒胃肠炎病例的比例明显相近，17.7%和17.4%,表明两个研究地点的可比较性和这些地点轮状病毒感染的流行病学的可比较性。当与其安慰剂组比较时，ROTASHIELD对于所有严重程度的轮状病毒胃肠炎表现出65%的保护效力。对于四价人-牛轮状病毒重排列组合物可比较的估计是70%，保护效力与批准的疫苗接近，考虑到根据疾病的严重程度不能分析效力的事实，该保护效力水平比令人满意的水平更高.非常可能的是人-牛轮状病毒重排列组合物抗严重疾病的保护效力明显大于70%，这是以其中轮状病毒疫苗效力随着疾病的严重程度而增加的先前ROTASHIELD临床试验获得的经验为基础的。对于大多数严重疾病，使用ROTASHIELD特征性地观察到80%-100%的保护效力，而对于所有严重程度的轮状病毒疾病计算出的保护效力只达到48-68%。表5第一剂量的ROTASHIELD或四价人-牛重排列組合物(TBRC)之后7天期间内发生的发烧(直肠)的累计比例(平均和95%置信区间)(CI)<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>1105pfu的每一种成分的四价疫苗21053-1058pfu的每一种成分的四价组合物NS二不明显ROTASHIELD对TBRC组发烧发生率的比较表6初步报告四价人-牛轮状病毒重排列组合物和四价猕猴轮状病毒疫苗(ROTASHIELD)的安全性和免疫原性的II期双盲试验，研究组所有严重程度的第一季节轮状病毒胃肠炎疾病的分布地点研究組受试者发生任何严重程度的保护效力RV胃麻炎受试者的No.No.(%)Lahti和TampereROTASHIEU)16110(6.2)65%(P<0.02)安慰剂7914(17.7)TampereTBRC1729(5.2)70X(P<0.003)安慰射8615(17.4)就免疫原性和保护效力来说，本发明的疫苗表现出四价猕猴轮状病毒制剂的所有的有利性质.类似地，本发明的多价免疫原性组合物共享先前描述的牛轮状病毒制剂表现出的没有明显发热反应的有利性质.但是，其不表现出四价猕猴轮状病毒疫苗有关的暂时低水平发^反应的不利性质或者先前描迷的牛轮状病毒剁刮的有关的他们的低感染，汰的不利性质.微生物保藏信息根据布达佩斯条约，在1998年6月4曰，在美国典型培养物保藏中心，10801UniversityBoulevard,M抑assas,Virginia20110—2209保藏了人轮状病毒抹,且保藏号如下重排列名称ATCC登记号HD3cBRV-l，克隆47-l-l(VP7:1[D])ATCCVR-2617HDS1XBRV-l,克j^6"l-l(VP7;2[DS~1]ATCCVR-2616HPxBRV-l克隆22-1-1(VP7:3P)ATCCVR-2611HST3xBRV-2，克隆52-l-l(VP7:4[ST3〗)ATCCVR-2612IAL28xUK,克隆33-1-1(VP7:5卩AL28])ATCCVR-2613AU32xUK,克隆27-1-1(VP7:9[AU32])ATCCVR-2614KC-1xUK，克隆32-1-1(VP7:10[KXM])ATCCVR-2615尽管为了清楚理解的目的通过详细描述和实施例更详细地描迷了上迷的本发明，但是很明显的是在后面的权利要求书范围内可以进行一些改变和修饰。因此本发明的范围不应该参照上面的描述确定，而应该参照后面的权利要求书及其全部范围的等价物来确定。本申请中引用的所有公开物和专利文献为了所有的目的全文引作参考，其程度就和各公开物或专利文献各自被指出的一样。权利要求1.一种包括至少四种人x牛株重排列轮状病毒和生理可接受载体的多价免疫原性组合物，其中各人x牛重排列轮状病毒包括抗原性不同的人VP7血清型，并且当以小于106.0噬斑形成单位的剂量施用各轮状病毒重排列成分时，其中所述组合物诱导对各抗原性不同的人轮状病毒VP7血清型的免疫原性反应而不引起暂时低水平发热。2.权利要求1的组合物，其中由亲本人轮状病毒提供人x牛轮状病毒的VP7血清型抗原。3.权利要求2的组合物，其中亲本人轮状病毒选自人轮状病毒VP7血清型1，VP7血清型2，VP7血清型3，VP7血清型4，VP7血清型5和VP7血清型9。4.权利要求2的组合物，进一步包括VP7血清型10的牛轮状病毒x牛轮状病毒重排列。5.权利要求1的组合物，其中牛x牛重排列轮状病毒包括来自牛轮状病毒抹KC-1的VP7血清型10抗原。6.权利要求1的组合物，其中除了VP7外的所有轮状病毒蛋白质由其中牛轮状病毒是UK抹的亲本牛轮状病毒提供。7.权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1，VP7血清型2,VP7血清型3和VP7血清型4的人x牛重排列轮状病毒的四价免疫原性组合物。8.权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1,VP7血清型2，VP7血清型3，VP7血清型4和VP7血清型5的人x牛重排列轮状病毒的多价组合物。9.权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1，VP7血清型2，VP7血清型3，VP7血清型4，和VP7血清型9的人x牛重排列轮状病毒的多价组合物。10.权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1，VP7血清型2，VP7血清型3,VP7血清型4,VP7血清型5，和VP4血清型1A的人x牛重排列轮状病毒的多价组合物。11.权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1，VP7血清型2，VP7血清型3，VP7血清型4，VP7血清型9，和VP4血清型1A的人x牛重排列轮状病毒的多价组合物。12.权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1，VP7血清型2，VP7血清型3，VP7血清型4，VP7血清型5,和VP7血清型9的人x牛重排列轮状病毒的多价组合物。13.权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1，VP7血清型2,VP7血清型3，VP7血清型4，VP7血清型5,VP7血清型9，和VP4血清型lA的人x牛重排列轮状病毒的多价组合物。14.权利要求7的组合物，进一步包括VP7血清型10的牛x牛重排列轮状病毒。15.权利要求14的组合物，其中牛x牛重排列轮状病毒包括来自牛轮状病毒抹KC-1的VP7血清型10抗原。16.权利要求7的组合物，其中亲本人轮状病毒是D抹(血清型1)，DS-1抹(血清型2)，P抹(血清型3)和ST3抹(血清型4)。17.权利要求1的组合物，其中所述生理可接受载体是柠檬酸盐緩冲液。18.权利要求1的组合物，进一步包括增强免疫应答的佐剂。19.权利要求1的组合物，其中所述组合物是冻干形式。20.权利要求7的组合物，其中将各人x牛重排列配制成提供103-105噬斑形成单位的剂量。21.权利要求7的组合物，其中将各人x牛重排列配制成提供105-106噬斑形成单位的剂量。22.刺激免疫系统对人轮状病毒VP7血清型抗原产生免疫原性应答而没有明显的暂时低水平发热的方法，包括给药含有各以小于106°噬斑形成单位的剂量施用的至少四种VP7血清型人轮状病毒和生理可接受载体的多价免疫原性组合物。23.权利要求22的方法，其中所述组合物包括四种人x牛重排列轮状病毒。24.权利要求22的方法，其中所述人x牛重排列轮状病毒包括人轮状病毒VP7血清型lx牛轮状病毒抹UK,人轮状病毒VP7血清型2x牛轮状病毒抹UK，人轮状病毒VP7血清型3x牛轮状病毒株UK和人轮状病毒VP7血清型4x牛轮状病毒抹UK。25.权利要求22的方法，其中所述组合物进一步包括增强免疫应答的佐剂。26.权利要求22的方法，其中以103-105噬斑形成单位的剂量给药所述组合物。27.权利要求22的方法，其中以105-106噬斑形成单位的剂量给药所述组合物。28.权利要求22的方法，其中对个体顺序给药各人x牛重排列轮状病毒。29.权利要求22的方法，其中以联合的混合物给药人x牛重排列轮状病毒。30.权利要求22的方法，其中对个体的消化道给药所述组合物。31.权利要求30的方法，其中以液体悬浮剂给药所述组合物。32.权利要求22的方法，其中所述方法包括多次给药所述组合物。33.权利要求32的方法，其中所述方法包括给药三次剂量。全文摘要本发明提供用于防止人轮状病毒疾病而且没有明显的反应原性的疫苗组合物。在多价制剂中联合包括四种临床上最重要的VP7血清型的人轮状病毒的每一种的人x牛重排列轮状病毒，该制剂提供高度感染性和免疫原性而不产生暂时发热症状。还提供了产生免疫原性应答而不产生暂时发热症状的方法。文档编号A61P31/12GK101318016SQ20081009039公开日2008年12月10日申请日期1999年7月27日优先权日1998年7月28日发明者A·H·卡比奇安,R·M·查诺克,星野安孝申请人:由卫生与公众服务部代表的美利坚合众国