流行性感冒病毒疫苗及其用图
【专利说明】[0001 ] 流行性感冒病毒疫苗及其用途
[0002] 本发明涉及医学领域。此处提供了多种流行性感冒血球凝集素主干域多肽，提供 多种血球凝集素主干域多肽的方法，包括这些多肽的组合物，包括这些多肽的疫苗及其使 用方法，特别是在流行性感冒的检测、预防和/或治疗中的使用。
[0003] 罝量
[0004] 流行性感冒病毒是主要的人病原体，引起呼吸系统疾病(通常称为"流行性感冒" 或"流感"），其严重性范围为从亚临床感染至可导致死亡的原发性病毒性肺炎。感染的临床 影响随着流行性感冒株的毒力和宿主的暴露、病史、年龄、以及免疫状态而变化。全世界每 年估计大约10亿的人经受流行性感冒病毒感染，导致3-5百万例严重疾病以及估计300,000 至500，000例流行性感冒相关死亡。这些感染大多数可能归因于携带H1或H3血球凝集素亚 型的甲型流行性感冒病毒，较少程度由乙型流行性感冒病毒促成，并且因此所有三种的代 表包括在季节性疫苗中。当前免疫实践依赖于流行的流行性感冒病毒的早期鉴别以允许及 时生产有效的季节性流行性感冒疫苗。除了在预测将在下一季中占主导的毒株方面的固有 困难之外，抗病毒耐受性以及免疫逃逸也在当前疫苗在防止发病率和死亡率上的失败中发 挥作用。除此外，由起源于动物贮器的高毒力病毒株引起大流行并且重配而增加人与人传 播的可能性构成了对全球健康的显著且现实的威胁。
[0005] 甲型流行性感冒病毒广泛分布于自然中并且可感染多种鸟类以及哺乳动物。流行 性感冒病毒是属于正粘病毒科的包膜RNA病毒。其基因组由八个单链RNA区段组成，这些区 段编码11种不同的蛋白、一种核蛋白（NP)、三种聚合酶蛋白（PA、PB1、以及PB2)、两种基质蛋 白（Ml以及M2)、三种非结构性蛋白（NS1、NS2、以及PB1-F2)、以及两种外膜糖蛋白：血球凝集 素(HA)以及神经氨酸酶(NA)。这些病毒是基于HA以及NA蛋白的抗原结构的区别而分类的， 其不同组合表示独特的病毒亚型，这些亚型进一步被分类为特异的流行性感冒病毒株。尽 管所有已知的亚型都可以在鸟类中发现，当前流行的人甲型流行性感冒亚型是H1N1以及 H3N2。系统发育分析已证实血球凝集素细分为两个主要的组:尤其在系统发育组1中的H1、 H2、H5以及H9亚型，以及尤其系统发育组2中的H3、H4以及H7亚型。
[0006] 乙型流行性感冒病毒株是严格地针对人的。乙型流行性感冒病毒株内的HA中的抗 原变化小于甲型株内观察到的那些。乙型流行性感冒病毒的两个遗传上和抗原性上不同的 谱系在人中流行，如由B/山形/16/88(也称为B/山形）以及B/维多利亚/2/87(B/维多利亚） 谱系（弗格森(Ferguson)等人，2003)代表的。尽管由乙型流行性感冒病毒引起的疾病的光 谱通常比由甲型流行性感冒病毒引起的更加温和，仍频繁观察到需要住院治疗的严重疾病 具有乙型流行性感冒感染。
[0007]已知中和该流行性感冒病毒的抗体主要针对血球凝集素(HA)。血球凝集素或HA是 一种三聚体糖蛋白，其被锚定到病毒衣并且具有双功能：它负责结合到细胞表面受体唾液 酸并且摄取之后它介导病毒和内涵体膜的融合，导致在该细胞的胞液中释放病毒RNAAA包 括大的头部域以及较小的主干域。附接至该病毒膜是通过连接至该主干域的C-末端锚定序 列介导的。该蛋白在指定的环中被翻译后切割以产生两种多肽，即HA1和HA2(全长序列被称 为HAO)。膜远端头部区主要源自于HA1，并且膜近端主干区主要来自HA2(图1)。
[0008] 季节性流行性感冒疫苗必须每年更新的原因是该病毒的大的可变性。在血球凝集 素分子中，此变化具体地显现在头部域，其中抗原漂移和移位导致大量的不同变体。由于这 也是免疫显性的区域，大部分中和抗体是针对此域并且通过干扰受体结合起作用。该头部 域的免疫显性和大的变化的组合也解释了用具体株进行感染为什么不会导致对其他株的 免疫:通过第一次感染引发的抗体仅识别有限数目的与原发性感染的病毒紧密相关的毒 株。
[0009] 近来，已描述了缺少所有或基本上所有流行性感冒血球凝集素球状头部域的流行 性感冒血球凝集素主干域多肽，并且将其用于产生对该主干域多肽的一个或多个保守表位 的免疫应答。认为该主干域多肽的表位比球状头部域的高免疫原性区域具有较小免疫原 性，因此在该主干域多肽中缺少球状头部域可能允许发展针对该主干域多肽的一个或多个 表位的免疫应答(斯蒂尔(steel)等人，2010)。斯蒂尔（Steel)等人因此通过使A/波多黎各/ 8/1934(Η1Ν1)以及A/香港/1968(H3N2)株的来自HA-级序列的HA1的氨基酸残基53至276缺 失并且将其用短的柔性连接序列GGGG替代而建立了新的分子。用H3HK68构建体对小鼠进行 疫苗接种不会引发与组1HA具有交叉反应性的抗血清。此外，如示于PCT/EP 2012/073706， 这些主干域多肽是高度不稳定的并且不会采取如通过缺少抗体结合(显示结合到该主干区 中的保守表位)证明的正确构象。
[0010] 此外，博姆玛坎蒂(Bommakan t i)等人(2010)描述了基于HA2的多肽，其包括HA2的 氨基酸残基1-172、7_氨基酸接头(GSAGSAG)、HA1的氨基酸残基7-46、6_氨基酸接头GSAGSA， 随后为HA1的残基290-321，在HA1中具有突变V297T、I300E、Y302T以及C305T。该设计是基于 H3HA的序列(A/香港/1968)。该多肽仅提供针对H3亚型(A/Phil/2/82)内的另一个流行性感 冒病毒株的交叉保护，而不提供针对H1亚型（A/PR/8/34)的交叉保护。在博姆玛坎蒂 (Bommakanti)等人（2012)的一篇更近的论文中，描述了来自H1N1A/波多黎各/8/1934 (H1HA0HA6)的基于HA的主干域序列。在此多肽中，残基55至302的等价物已经缺失，并且已 经进行 了突变 13111'、￥3141'、1316103195、？4060、？4091'、以及1^4160。基于!13的多肽和基于 HA的多肽两者都表达于大肠杆菌，并且因此缺少作为天然存在的HA蛋白的部分的聚醣。当 表达于大肠杆菌中时，该多肽主要作为高分子量聚集体和小单体部分回收。以两个表观解 离常数即9和0.2μΜ，该多肽结合CR6261。作者们显示用佐以100yg的CpG7909的20yg的蛋白 免疫(两次，4周间隔）之后，小鼠可幸存于用同源H1N1A/波多黎各/8/1934病毒的1LD90进行 的激发。作者们也描述了循环置换的多肽可比得上以上针对A/香港/1/1968衍生的多肽所 述的那些。这些多肽是源自于来自H1N1A/波多黎各/8/1934、Η1Ν1Α/北卡罗来纳州/20/99或 H1N1A/加利福尼亚/07/2009的HA，并且在H1N1A/波多黎各/8/1934(即相同亚型内）的小鼠 的温和激发(1LD90)模型中可提供部分保护。当在中和测定中测试时，来自用这些多肽免疫 的豚鼠的血清未展现可检测水平的中和。
[0011]因此仍存在对安全且有效的通用疫苗的需要，该疫苗刺激产生稳固的广泛中和抗 体应答，并且提供针对当前和未来流行性感冒病毒株(季节性和大流行两者)的广泛集合的 保护，具体而言提供针对系统发育组1和/或组2内一个或多个甲型流行性感冒病毒亚型的 保护，以有效预防和治疗流行性感冒。
[0012] 挺塗
[0013] 此处提供了多种流行性感冒血球凝集素主干域多肽，提供多种主干域多肽的方 法，包括这些多肽的组合物，包括这些多肽的疫苗及其使用方法。
[0014] 在第一方面，本发明提供了新的免疫原性多肽，这些多肽包括流行性感冒血球凝 集素主干域并且缺少球状头部，称为流行性感冒血球凝集素(HA)主干域多肽。当给予至受 试者(具体而言人类受试者)时，这些多肽能够诱导免疫应答。在不存在优势表位(存在于膜 远端头部域中）的情况下，本发明的多肽将膜近端主干域HA分子的保守表位呈现给免疫系 统。为此，构成该头部域的ΗΑ0蛋白的一级序列的部分被去除，并且剩下的氨基酸序列直接 地或在一些实施例中通过引入短的柔性连接序列（'接头'）再连接以恢复氨基酸链的连续 性。所得到的序列通过引入特定突变被进一步修饰，这些特定突变稳定了该ΗΑ0分子的剩下 部分的天然3-维结构。这些免疫原性多肽不包括流行性感冒病毒的全长HA1和/或HA2。
[0015] 根据本发明，这些多肽是基于H1亚型的甲型流行性感冒病毒的HA。
[0016] 本发明提供多种流行性感冒血球凝集素主干域多肽，这些多肽包括(a)流行性感 冒血球凝集素 HA1域，该HA1域包括HA1N-末端主干区段，该HA1N-末端主干区段通过具有0-50个氨基酸残基的连接序列共价连接至HA1C-末端主干区段，以及(b)流行性感冒血球凝集 素 HA2域，其中这些血球凝集素主干域多肽对在HA1和HA2之间的接合点处的蛋白酶切割具 有抗性，并且其中相比于野生型流行性感冒HA2域，连接HA2的A螺旋和螺旋CD的氨基酸序列 中的一个或多个氨基酸已经突变。
[0017] 在某些实施例中，本发明的多肽包括SEQ IDN0:1的位置337、340、352或353、或该 H1亚型的其他流行性感冒病毒中的等价位置上的一个或多个突变。突变意指特定位置上的 氨基酸已被不存在于野生型流行性感冒HA(即，该主干多肽所基于的流行性感冒病毒的HA) 中的对应位置上的另一个氨基酸取代。
[0018]在某些实施例中，本发明的多肽进一步包括将螺旋A的C-末端残基连接至螺旋CD 的N-末端残基的HA2氨基酸序列中的一个或多个突变，如图1中指出的。
[0019] 在某些实施例中，该HA1N-末端主干区段包括HA1的氨基酸1-x，并且该HA1C-末端 主干区段包括HA1的氨基酸y-端（即HA1的C-末端氨基酸）。因此，在某些实施例中，该HA1区 段中的缺失包括从在位置χ+1处的氨基酸直至在位置y-Ι处的氨基酸并且包括在位置y-Ι处 的氨基酸的氨基酸序列。在某些实施例中，这些多肽不包括信号序列。在某些实施例中，该 HA1N-末端区段因此包括HA1的氨基酸p-x，其中p是该成熟HA分子的第一个氨基酸（例如在 SEQ ID N0:1的情况下p = 18)。技术人员将能够制备此处所述的不具有信号肽(例如SEQ ID NO: 1的氨基酸1-17)的多肽。
[0020]在某些实施例中，本发明的多肽包含HA的细胞内序列以及跨膜域。在其他实施例 中，本发明的多肽不包括HA的细胞内序列以及跨膜域。在某些实施例中，该细胞内序列以及 跨膜序列，例如从该HA2域的位置519、520、521、522、523、524、525、526、527、526、528、529、 或530(或等价位置)至该HA2域的C-末端的氨基酸序列已被去除。
[0021 ]本发明的多肽不包括全长HA1。
[0022] 在某些实施例中，这些多肽是糖基化的。
[0023] 在某些实施例中，这些免疫原性多肽实质上比ΗΑ0小，优选地缺少所有或基本上所 有的HA球状头部。优选地，这些免疫原性多肽长度上不超过360,优选地不超过350、340、 330、320、310、305、300、295、290、285、280、275、或270个氨基酸。在某些实施例中，这些免疫 原性多肽长度上是从约250至约350,优选地从约260至约340,优选地从约270至约330,优选 地从约270至约330个氨基酸。
[0024]在某些实施例中，相比于HA1和HA2域所基于的HA的氨基酸序列，这些多肽进一步 在该HA1和/或HA2域中包括一个或多个另外的突变。
[0025] 本发明的多肽包括组1交叉中和抗体CR6261(如披露于W02008/028946)和/或抗体 CR9114(如描述于W0 2013/007770)的保守主干域表位，该抗体CR9114是能够结合到并且中 和组1和组2甲型流行性感冒病毒两者、连同乙型流行性感冒病毒的一种抗体。因此本发明 的另一个方面是提供多种HA主干域多肽，其中所述多肽稳定地呈现抗体CR6261和/或 CR9114的表位，如通过所述一个抗体或多个抗体结合至所述多肽表明的。在一个实施例中， 这些多肽不结合到CR8020以及CR8057(描述于W02010/130636)，它们是仅结合到H3流行性 感冒病毒的单克隆抗体。此处提供的流行性感冒血球凝集素主干域多肽适合用于能够针对 多个甲型和/或乙型流行性感冒病毒株发生免疫应答的免疫原性组合物(例如疫苗）中。在 一个实施例中，这些流行性感冒血球凝集素主干域多肽能够针对系统发育组1和/或组2的 甲型流行性感冒病毒株发生免疫应答，特别是针对系统发育组1和组2两者的流行性感冒病 毒株。在一个实施例中，这些多肽能够针对同源流行性感冒病毒株发生免疫应答。在一个实 施例中，这些多肽能够针对相同和/或不同亚型的异源流行性感冒病毒株发生免疫应答。在 另一个实施例中，这些多肽能够对系统发育组1和组2两者的流行性感冒病毒株以及乙型流 行性感冒病毒株发生免疫应答。
[0026] 根据本发明的多肽可用于例如孤立型治疗和/或预防和/或诊断由流行性感冒病 毒、特别是系统发育组1或2甲型流行性感冒病毒和/或乙型流行性感冒病毒引起的一种疾 病或病况，或与其他预防和/或治疗性处理诸如(现存的或未来的）疫苗、抗病毒剂和/或单 克隆抗体组合。
[0027] 在另一个方面，本发明提供编码这些流行性感冒HA主干域多肽的核酸分子。在又 另一个方面，本发明提供包括编码这些免疫原性多肽的核酸的载体。
[0028] 在另一个方面，本发明提供在受试者中诱导免疫应答的方法，该方法包括向该受 试者给予根据本发明的多肽和/或核酸分子。
[0029] 在另一个方面，本发明提供包括根据本发明的多肽和/或核酸分子的免疫原性组 合物。此处提供的免疫原性组合物可以处于任何允许将这些组合物给予至受试者例如小 鼠、白鼬或人的形式。在特定实施例中，这些免疫原性组合物适合于人给药。这些多肽、核酸 分子以及组合物可用于预防和/或治疗流行性感冒病毒疾病的方法中和/或用于诊断目的。 这些组合物可进一步包括药学上可接受的载体或赋形剂。在某些实施例中，此处描述的组 合物包括佐剂或与佐剂组合给予。
[0030] 在另一个方面，本发明提供用作疫苗的多肽、核酸和/或免疫原性组合物。本发明 具体而言涉及在预防和/或治疗由系统发育组1和/或2的甲型流行性感冒病毒亚型和/或乙 型流行性感冒病毒引起的一种疾病或病况中用作疫苗的免疫原性多肽、核酸和/或免疫原 性组合物。
[0031] 根据本发明的多肽的不同实施例以及用途将从以下本发明的详细描述中变得清 晰。
[0032] 附图简要说明
[0033] 里1显示了如以天然三聚体存在的处于融合前状态的HA单体的模型。HA1是以浅灰 色示出，HA2是以深灰色示出。指明了螺旋A(CR6261的表位的重要部分）以及螺旋CD(三聚体 接口的部分），还指明了连接这些二级结构元素的环。也指明了HA1的C-末端以及HA2的N-末 端。融合肽位于HA2的N-末端。
[0034] 图2.使用生物膜层干涉技术将本发明的可溶多肽结合至单克隆抗体CR6261以及 CR9114。顶图显示暴露于变化浓度的本发明的可溶多肽的固定化单克隆抗体的个体结合曲 线，底图显示用以估计Kd的稳态分析。A:sl27HlSEQ ID NOJeddSeBASEQ ID N0:67<X: s74H9SEQ ID N0:65〇D：s6E12SEQ ID N0:69〇E：s55G7SEQ ID N0:68〇
[0035] 图3.在不存在和存在CR8020、CR6261以及CR9114的Fab片段的情况下，本发明的可 溶多肽的尺寸排阻色谱。对于本发明的所有可溶多肽，对CR6261和CR9114Fab片段观察到复 合体形成，但对CR8020Fab片段未观察到。A:sl27HlSEQ ID NOiejdSeBASEQ ID N0:67。 C：s74H9SEQ ID N0:65〇D：s6E12SEQ ID N0:69〇E：s55G7SEQ ID N0:68〇
[0036] 图4.本发明的多肽s74H9SEQ IDN0:65和s86B4SEQIDN0:67在致死的流行性感 冒Η1N1A/NL/60 2/09激发模型中的保护效力的评价。A :顶行：阴性（PBS)和阳性对照 (CR6261)组的存活率、平均体重改变以及临床中值得分。底行：用s74H9或s86B4免疫的实验 组的存活率、平均体重改变以及临床中值得分。出于比较的原因，还显示了阴性对照PBS组。 B:s74H9(SEQ ID N0:65)和s86B4(SEQ ID N0:67)的免疫原性。顶行：左图和中图：免疫诱导 能够识别同源抗原（s74H9左图，s86B4中图）连同来自H1N1A/布里斯班/59/07的全长HA(右 图）的抗体，如通过ELISA确定的。底行:在竞争ELISA中诱导的抗体能够与CR9114竞争结合 到来自H1N1A/布里斯班/59/07的全长HA(左图）。出于比较的原因，在独立的图中指明了未 标记的CR9114(即自我竞争)和非结合单克隆抗体CR8020(两者都从5μg/ml起始浓度连续稀 释）的克争水平。
[0037] 图5.本发明的多肽sl27Hl(SEQ ID NO:66)在致死的流行性感冒H1N1A/波多黎各 (Puerto Rico)/8/1934激发模型中的保护效力的评价。A:顶行：阴性(PBS)和阳性对照 (CR6261)组的存活率、平均体重改变以及临床中值得分。底行：用s 127H1 (SEQ ID N0:35)免 疫的实验组的存活率、平均体重改变以及临床中值得分。出于比较的原因，还显示了阴性对 照PBS组。
[0038] B:sl27Hl(SEQ ID N0:35)的免疫原性。顶行:免疫诱导能够识别同源抗原S127H1 (SEQ ID N0:35)(左图）连同来自H1N1A/布里斯班/59/07的全长HA(右图）的抗体，如通过 ELISA确定的。底行:在竞争ELISA中诱导的抗体能够与CR9114竞争结合到来自H1N1A/布里 斯班/59/07的全长HA(左图）。出于比较的原因，在独立的图中指明了未标记的CR9114(即自 我竞争)和非结合单克隆抗体CR8020(两者都从5μg/ml起始浓度连续稀释）的竞争水平。
[0039] 图6.在显示与CR6261的改善结合的集合1序列中的指明位置处的氨基酸观察到的 和期望的出现频率。值被表示为占显示改善的CR6261结合的集合1序列的总数目的百分比。 期望值被计算为100%除以包括在该集合中的每个位置处的可变氨基酸的数目。
[0040] .在来自集合1的改善的CR6261结合物中的氨基酸组合的出现频率。根据在左 边指明的位置处氨基酸的存在对与CR6261具有改善的结合的序列进行分组，并且每个组合 的频度被计算为占显示改善的CR6261结合的集合1序列的总数目的百分比。对更优势的组 合进行加框。A.对融合肽区域中组合序列的分析B.对B-环区域的分析。
[0041 ]图8.在显示与CR6261的改善结合的集合2序列中的指明位置处的氨基酸观察到的 和期望的出现频率。值被表示为占显示改善的CR6261结合的集合2序列的总数目的百分比。 期望值被计算为100%除以包括在该集合中的每个位置处的可变氨基酸的数目。
[0042]图9.在来自集合2的改善的CR6261结合物中的氨基酸组合的出现频率。根据在左 边指明的位置处氨基酸的存在对与CR6261具有改善的结合的序列进行分组，并且每个组合 的频度被计算为占显示改善的CR6261结合的集合2序列的总数目的百分比。对更优势的组 合进行加框。在位置402处的变化未包括在该分析中，因为所有改善的结合序列在此位置包 含Met，而对于位置352仅考虑了包含Phe或Tyr的序列。A.对融合肽区域中组合序列的分析 B.对B-环区域的分析。
[0043]
[0044] 以下给出如本发明中所用的术语的定义。
[0045] 根据本发明的氨基酸可以是二十种天然存在(或'标准'氨基酸）的任一种或其变 体，比如例如D-脯氨酸(脯氨酸的D-对映体)或在蛋白质中未天然发现的任何变体，比如例 如正亮氨酸。这些标准氨基酸可以基于其性质分成若干群组。重要因素是电荷、亲水性或疏 水性、尺寸以及官能团。这些性质对于蛋白质结构和蛋白质-蛋白质相互作用来说是重要 的。一些氨基酸具有特殊的性质，例如可以与其他半胱氨酸残基形成共价二硫键(或二硫桥 键)的半胱氨酸，形成到多肽主链的环的脯氨酸，以及比其他氨基酸更灵活的甘氨酸。表2展 示这些标准氨基酸的缩写和性质。
[0046] 术语"氨基酸序列一致性"是指一对对齐的氨基酸序列之间的一致性或相似性程 度，通常表示为百分比。百分比同一性是以下候选序列中的氨基酸残基百分比，该候选序列 与在比对序列并且引入缺口（如果必要的话，以实现最大序列同源性百分比）之后该肽中的 对应氨基酸残基是相同的（即，比对中在给出位置处的氨基酸残基是相同的残基)或相似的 (即，比对中在给出位置处的氨基酸取代是保守性取代，如以下讨论的）。序列同源性包括序 列一致性以及相似性的百分比是使用本领域中熟知的序列比对技术确定的，诸如通过目测 以及数学计算，或更优选地，该比较是通过使用计算机程序比较序列信息进行的。一种示例 性的优选计算机程序是遗传学计算机组(GCG;麦迪逊(Madison)，威斯康星州(Wis.))威斯 康星州程序包版本10.0程序，'GAP'（德弗罗(Devereux)等人(1984))。
[0047] "保守性取代"是指一类的氨基酸被相同类的另一个氨基酸替代。在具体的实施例 中，保守性取代不改变多肽的结构或功能，或两者。用于保守性取代目的的氨基酸类别包括 疏水的（例如Met，Ala，Val，Leu)、中性亲水(例如Cys，Ser，Thr)、酸性(例如Asp，Glu)、碱性 (例如4811，6111，!^8，1^8,4作）、构象打断者（例如617，？1'〇)以及芳香族的（例如1'印，171·， Phe) 〇
[0048] 如此处使用的，术语"疾病"以及"障碍"可互换地使用，以指代受试者中的病况。在 一些实施例中，该病况是病毒感染，特别是流行性感冒病毒感染。在特定实施例中，术语"疾 病"是指由于病毒在细胞或受试者中的存在、或通过该病毒对细胞或受试者的侵染导致的 病理状态。在某些实施例中，该病况是受试者中的疾病，其严重性通过给予免疫原性组合物 来诱导该受试者中的免疫应答而被降低。
[0049]如此处使用的，在向受试者给予治疗的背景下术语"有效量"是指具有一个或多个 预防和/或治疗效果的治疗的量。在某些实施例中，在向受试者给予治疗的背景下术语"有 效量"是指足够实现如下的治疗量:流行性感冒病毒感染、与其相关的疾病或症状的严重性 的降低或改善，诸如但不限于流行性感冒病毒感染、与其相关的疾病或症状的持续时间减 少，对流行性感冒病毒感染、与其相关的疾病或症状的进展的预防，对流行性感冒病毒感 染、与其相关的疾病或症状的发展或发作或复发的预防，流行性感冒病毒从一个受试者传 播至另一个受试者的情况的预防或减少，受试者住院和/或住院时间长短的减少，患有流行 性感冒病毒感染或与其相关的疾病的受试者的存活率的增加，流行性感冒病毒感染或与其 相关的疾病的消除，流行性感冒病毒复制的抑制或减少，流行性感冒病毒滴度的减少;和/ 或另一种治疗的一个或多个预防或治疗作用的增强和/或改善。在某些实施例中，该有效量 不导致免受流行性感冒病毒疾病的完全保护，但比较于未治疗的受试者导致更低的滴度或 减少数目的流行性感冒病毒。流行性感冒病毒的滴度、数目或总负担上的减少的益处包括 但不限于该感染的严重症状更少，该感染的症状更少，并且与该感染关联的疾病的时间长 短上减少。
[0050] 如在此所用，术语"宿主"意欲指已经引入了载体(诸如克隆载体或表达载体)的生 物体或细胞。生物体或细胞可以是原核或真核的。优选地，宿主包括被分离的宿主细胞，例 如培养物中的宿主细胞。术语"宿主细胞"仅意味着这些细胞被修饰以（过度)_表达本发明 的多肽。应理解，术语宿主意欲不仅指具体主题生物体或细胞，而且还指此类生物体或细胞 的子代。因为某些修饰可以由于或者突变或者环境影响而在后代中发生，所以此类子代可 以实际上与亲本生物体或细胞不相同，但仍包括在如在此所用的术语"宿主"的范围内。
[0051] 如在此所用，术语"包括（included)"或"包括着（including)"被视为后面有措辞 "无限制"。
[0052] 如此处使用的，术语"感染"意指通过病毒在细胞或受试者中的扩增和/或存在进 行的侵染。在一个实施例中，感染是"活性"感染，即其中病毒在细胞或受试者中复制的一种 感染。这样的感染是通过该病毒从最初被该病毒感染的细胞、组织、和/或器官传播至其他 细胞、组织、和/或器官来表征。感染也可以是潜伏感染，即其中该病毒未复制的一种感染。 在某些实施例中，感染是指由于病毒在细胞或受试者中的存在、或通过该病毒对细胞或受 试者的侵染导致的病理状态