专利名称：：番荔枝内酯化合物v在制备治疗抗癌药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种抗癌药物的新用途，具体地说是以番荔枝种子为原料提取的一种番荔枝内酯化合物v的新用途，该化合物v在制备治疗肺癌、乳腺癌及肝癌药物中的应用。二
背景技术：
：癌症是危害人类健康的大敌。我国每年新发癌症病例约有160万人，每年死于癌症的约有130万人，全国因癌症而死亡的人数逐年上升，我国为肺癌、乳腺癌、肝癌等癌症的高发区域，癌症死亡率居高不下。目前尚无有效的药物治愈大多数癌症患者。化疗药物对癌症虽有一定疗效，但毒副作用大，中成药对癌症的疗效普遍较低，疗效均不理想。本发明人经过十几年艰苦研究了番荔枝(AnnonasquamosaLinn)种子的抗癌有效物质，从中提取出多种抗癌活性化合物，经抗癌实验研究表明，对人肝癌细胞、人胃癌细胞、人食管癌细胞和动物移植性肿瘤(如Si犯、H22和Heps)均有显著的体内外抗癌治疗效果，并己申请获得3项抗癌产品发明专利证书(专利号分别为ZL02148474.0、ZL02148475.9、ZL03112707.X)。在上述研究的基础上，本发明人继续提取分离、筛选番荔枝种子的抗癌有效化学成分，即番荔枝内酯化合物V，具有特别显著抗癌活性。三
发明内容1、发明目的本发明的目的是涉及一种番荔枝内酯化合物V的新用途，具体是涉及其番荔枝内酯化合物V在制备治疗抗癌药物中的应用。2、技术方案本发明从番荔枝(AnnonasquamosaLinn)种子提取分离到一种抗癌物质番荔枝内酯化合物V。先用乙醇、石油醚、氯仿等有机溶剂从番荔枝种子中提取番荔枝内酯；再将番荔枝内酯经硅胶柱层析，氯仿-甲醇，石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，得到一种番荔枝内酯化合物V，其含量为质量分数的50%90%。番荔枝种子粗粉用浓度为95%97%的乙醇回流提取；乙醇提取液常压浓縮后，依次用石油醚(206(TC)、水饱和乙酸乙酯、氯仿萃取；萃取液浓縮干燥后经多次硅胶柱层析，硅胶粒度为ioo300目，与萃取物的质量比为io:i20:i;以体积比为ioo:090:io的氯仿-甲醇梯度洗脱，将收集到的番荔枝内酯物质浓縮干燥。再经多次硅胶柱层析，硅胶粒度为ioo300目，与番荔枝内酯物质的质量比为io:i50:i;以体积比为ioo:o90:io的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，用薄层层析检査，以碘化铋钾试剂显色；将收集到的番荔枝内酯化合物v浓缩干燥，其含量为质量分数的50%90%。番荔枝内酯化合物V对肺癌、乳腺癌、肝癌细胞的生长有明显的抑制作用，其抗癌活性百倍高于化疗药5-氟脲嘧啶(5-FU)。番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性肺癌的生长抑制作用不同剂量15pg/kg、30|ag/kg和60pg/kg的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性肺癌的生长(PO.Ol)，其抑瘤率分别为63.01%、70.04%、77.81%。番荔枝内酯化合物V抗肺癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶的百倍以上。番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性乳腺癌的生长抑制作用不同剂量15pg/kg、3(Hig^cg和60pg/kg的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性乳腺癌的生长(PO.Ol)，其抑瘤率分别为41.18%、65.44%、78.68%。番荔枝内酯化合物V抗乳腺癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶的百倍以上。番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性肝癌的生长抑制作用不同剂量15ng/kg、30pg/kg和60pg/kg的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性肝癌的生长(PO.Ol)，其抑瘤率分别为49.70%、64.24%、78.18%。番荔枝内酯化合物V抗肝癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶的百倍以上。3、有益效果本发明一种番蔡枝内酯化合物V是从番荔枝种子中提取得到的抗癌活性物质。动物体内抗癌实验结果显示，番荔枝内酯化合物V对肺癌、乳腺癌、肝癌细胞的生长均有非常高的抗癌活性，其体内抗癌活性百倍高于化疗药5-氟脲嘧啶(5-Fu)。这为提高抗癌临床疗效提供了非常有前景的高效预选药物。具体实施例方式实施例1:番荔枝内酯化合物V的提取制备方法番荔枝种子20kg，粉碎成粗粉，用浓度为95%的乙醇回流提取3次，乙醇提取液常压浓縮后得1.2kg。依次用10倍量石油醚(2060°C)、水饱和乙酸乙酯、氯仿萃取3次，合并萃取液浓縮干燥后得610g。经多次硅胶柱层析，硅胶粒度为ioo300目，与萃取物的质量比为io:120:i;以体积比为ioo:o90:io的氯仿-甲醇梯度洗脱，收集到的番荔枝内酯物质浓縮干燥得230g。再经多次硅胶柱层析，硅胶粒度为100300目，与番荔枝内酯物质的质量比为io:i50:i;以体积比为ioo:090:10的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，收集到的流分浓縮干燥得到蜡状固体38g，即为番荔枝内酯V。实施例2:番荔枝内酯化合物V对移植性肺癌的抑制作用1、实验动物和瘤株雄性健康C57BL/6小鼠，体重18—22g，鼠龄6_8周，购自本校动物实验中心；小鼠Lewis肺癌瘤株购自江苏省肿瘤研究所动物实验中心。2、造模与实验方法C57BL/6小鼠60只，按比例随机留10只为阴性对照组，其余50只进行造模。制备Lewis肺癌荷瘤小鼠，剥离生长旺盛期的瘤组织，选取生长良好的肿块1.5mn^左右，按肿瘤(g):生理盐水(ml)为1:3比例匀浆，调细胞数为2X106/ml。选取健康小鼠，在无菌条件下每只小鼠右侧腋窝皮下接种0.2ml。整个接种过程须在无菌罩内以无菌操作进行，lh内完成接种。接种后随机分为5组，每组10只，分别为肿瘤模型对照组、15pg/kg、30pg/kg和60ng/kg试验组、5-fu阳性对照组，另加阴性对照组，共6组。接种瘤细胞24h后，试验组腹腔注射番荔枝内酯V，剂量分别为15|ag/kg、30pg/kg和60pg/kg，阴性对照组和肿瘤模型对照组等体积注射药物溶媒，5-FU对照组以生理盐水为溶剂，剂量为20mg/kg，各组动物均按0.2ml在腹腔注射，连续给药10d。末次给药后次日，进行如下观察完整剥离瘤块,并称重计算肿瘤抑制率，肿瘤抑制率=(对照组肿瘤重量一治疗组肿瘤重量)/对照组肿瘤重量><100%。3、实验结果番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性肺癌的生长抑制作用不同剂量的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性肺癌的生长(PO.01)。番荔枝内酯化合物V的剂量极小，其抗肺癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，见表l。表1番蒸枝内酯V对小鼠移植性肺癌Lewis作用结果剂量动物数(开始/结束)瘤重(x±s)抑瘤率(％)P值NS10/103.92±0.195-FU20mg/kg10/101.36±0.2065.31%<0.01番荔枝内酯V15pg/kg10/101.45±0.1763.01%<0.0130|ig/kg10/101.16±0.2170.04%<0.0160pg/kg10/100.87±0.1577.81%<0.01实施例3:番蕴枝内酯化合物V对移植性乳腺癌的抑制作用2、实验动物和瘤株雌性健康TA2小鼠，体重18—22g，鼠龄6—8周，购自本校动物实验中心；小鼠乳腺癌细胞株MA-891购自江苏省肿瘤研究所动物实验中心。2、造模与实验方法TA2小鼠60只，按比例随机留IO只为阴性对照组，其余50只进行造模。取体外培养的对数生长期MA-891小鼠乳腺癌细胞，细胞浓度调整为lX107/ml。无菌条件下，将MA-891小鼠乳腺癌细胞接种于TA2小鼠右腋部皮下，接种量为0.2ml/只(细胞数为2X10V只)。整个接种过程须在无菌罩内以无菌操作进行，lh内完成接种。接种后随机分为5组，每组10只，分别为肿瘤模型对照组、15pg/kg、30)ag/kg和60pg/kg试验组、5-fia阳性对照组，另加阴性对照组，共6组。接种瘤细胞24h后，试验组腹腔注射番荔枝内酯V，剂量分别为15pg/kg、3(Vg/kg和60pg/kg，阴性对照组和肿瘤模型对照组等体积注射药物溶媒，5-FU对照组以生理盐水为溶剂，剂量为20mg/kg，各组动物均按0.21111在腹腔注射，连续给药10d。末次给药后次日，进行如下观察完整剥离瘤块,并称重计算肿瘤抑制率，肿瘤抑制率=(对照组肿瘤重量一治疗组肿瘤重量)/对照组肿瘤重量><100%。3、实验结果番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性乳腺癌的生长抑制作用不同剂量的番荔枝内酯化合物V均能显著抑制小鼠移植性乳腺癌的生长(PO.Ol)。番荔枝内酯化合物V的剂量极小，其抗乳腺癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，见表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>实施例4:番荔枝内酯化合物V对移植性肝癌的抑制作用3、实验动物和瘤株雄性健康昆明种小鼠，体重18—22g，鼠龄6—8周，来自本校动物实验中心；昆明鼠传代腹水型鼠肝癌HepS瘤株均购自江苏省肿瘤研究所动物实验中心。小鼠在南京中医药大学动物实验中心的动物实验房饲养，温度2125'C，湿度为45%55%。2、造模与实验方法昆明种雄性小鼠60只，按比例随机留IO只为阴性对照组，其余50只进行造模。无菌抽取接种HepS瘤种8天的小鼠的腹水，以生理盐水稀释10倍，0.02%伊红染色,滴加到细胞计数板上计数后，调细胞浓度至lX107/ml，迅速地分别将50只小鼠右腋皮肤消毒，每鼠接种0.2111111叩8肿瘤细胞悬液于皮下。整个接种过程须在无菌罩内以无菌操作进行，lh内完成接种。接种后随机分为5组，每组10只，分别为肿瘤模型对照组、15pg/kg、30pg/kg和60ng/kg试验组、5-fo阳性对照组，另加阴性对照组，共6组。接种瘤细胞24h后，试验组腹腔注射番荔枝内酯化合物V，剂量分别为15pg/kg、30|ig/kg和60pg/kg，阴性对照组和肿瘤模型对照组等体积注射药物溶媒，5-FU对照组以生理盐水为溶剂，剂量为20mg/kg，各组动物均按0.2ml在腹腔注射，连续给药8d。末次给药后次日，进行如下观察完整剥离瘤块,并称重计算肿瘤抑制率，肿瘤抑制率=(对照组肿瘤重量一治疗组肿瘤重量)/对照组肿瘤重量x100。/。。3、实验结果番荔枝内酯化合物V对小鼠移植性肝癌HepS的生长抑制作用不同剂量的番荔枝内酯V均能显著抑制小鼠移植性肝癌HepS的生长(PO.Ol)。番荔枝内酯V的剂量极小，其抗肝癌活性是化疗药5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，见表3。表3番荔枝内酯V对小鼠移植性肝癌HepS作用结果<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>权利要求1、一种番荔枝内酯化合物V在制备治疗抗癌药物中的应用。2、根据权利要求l所述的应用，其特征在于番荔枝内酯化合物V在制备治疗肺癌药物中的应用。3、根据权利要求l所述的应用，其特征在于番荔枝内酯化合物V在制备治疗乳腺癌药物中的应用。4、根据权利要求l所述的应用，其特征在于番荔枝内酯化合物V在制备治疗肝癌药物中的应用。5、根据权利要求2、3或4所述的应用，其特征在于番荔枝内酯化合物V在体内对肺癌，乳腺癌或肝癌细胞有明显的抑制作用，其抗癌活性高于化疗药物5-氟脲嘧啶。全文摘要本发明涉及一种番荔枝内酯化合物V的新用途，具体地说是涉及化合物V在制备治疗抗癌药物中的应用。先用乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂从番荔枝种子粗粉中提取番荔枝内酯；再将番荔枝内酯经硅胶柱层析，氯仿-甲醇，石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇洗脱，得到一种番荔枝内酯化合物V，其含量为质量分数的50％～90％。经动物体内抗癌药理实验，其内酯化合物V对肺癌、乳腺癌、肝癌细胞的生长有明显的抑制作用，其抗癌活性百倍高于化疗药5-氟脲嘧啶，可用于抗癌药物的制备。文档编号A61K31/365GK101342202SQ20081012458公开日2009年1月14日申请日期2008年8月26日优先权日2008年8月26日发明者章永红申请人:南京中医药大学