鲨鱼软骨骨髓萃取组成物的制作方法

专利名称：鲨鱼软骨骨髓萃取组成物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种鲨鱼软骨萃取物，特别涉及一种鲨鱼软骨骨髓萃取组成物。
背景技术：
1983年，Lee和Langer 二位博士于科学期刊上发表鲨鱼软骨含有抑制癌细胞增生的新血管增生抑制剂(angiogenesis inhibitor)后，全世界随即涌起一阵堇鱼软骨热潮。Lee和Langer是以2M的胍(guanidine)萃取鲨鱼鳍(fm)的可溶成分，使之与动物肺瘤直接接触，可以有效抑制肿瘤的新血管增生，通过切断肿瘤细胞的营养成分供应，从而间接消灭癌细胞。类似描述鲨鱼软骨抗癌功效的报告接踵而出有以鲨鱼软骨萃取的蛋白质，于血管注射以抑制肺瘤细胞的增生；扫除活性氧分子(Reactive oxygen species)成为抗氧化剂；植入老鼠而抑制肺瘤细胞；抑制发炎反应；口服也可抑制新血管增生。 一时间，鲨鱼软骨摇身一变，仿佛成了治疗癌症的新星，世界各地无数厂商、学校、医院全力研究。虽然有对口服后的功效存疑的意见，美国NIH仍于1987年开始进行人体试验，目前已进行到phase III的测试。
而现有的对于鲨鱼软骨的处理， 一般仅将鲨鱼软骨打碎或研磨至粉状，因此所获取的产品不仅于气味上残留有浓烈的鱼腥味，于颜色则呈现对消费者不具吸引力的灰色或黑色，且无法萃取出其中的有效成分。
为解决上述问题，本发明的发明人已提出一解决方案。首先，利用压碎裂、清洗、漂除杂质、去除腥味以及加热杀菌五步骤，来达到将豈鱼软骨处理从而获得无腥味且色泽纯白透明的萃取物的目的。此技术内容已公开于发明人的台湾发明专利公告号第467731号的"一种鲨鱼软骨的制造方法"专利案中。
随后，发明人以上述方法为基础，再提出一发明专利申请案(台湾发明专利申请号第97117281号)，其中公开了利用酵素溶解、水解、均质化、沉淀以及分离等步骤来处理鲨鱼软骨骨髓的方法，从而获得高纯度的鲨鱼软骨骨髓萃取物，而本发明即是利用上述方法所获得的最终的新颖萃取物。

发明内容
本发明的主要目的在于提供一种以硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate)为主要活性成分的莖鱼软骨骨髓萃取组成物，具有抗黑色素瘤、中和胃酸以及促进血液循环等功效。
为达上述目的，本发明提供一种鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，其分子量介于21至100千道耳顿(KiloDaltons)，且含有重量百分比为50-60wt。/。的硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate)。
上述组成物优选包括以下成分
辟b酸软骨素，其重量百分比为56.3wt%;
总碳水化合物，其重量百分比为23.7wt%;
粗脂肪，其重量百分比为0.3wt%;
灰份，其重量百分比为11.8wt%;
水分，其重量百分比为7.7wt%;以及
钠，其重量百分比为0.2wt%。
本发明的有益效果是口服鲨鱼软骨骨髓萃取组成物可明显抑制癌细胞增生和转移，延长注射癌细胞老鼠的寿命；对于抑制胃酸过度分泌以及保护消化系统功能方面的测试也有显著的功效；还具有促进血液循坏的功效。


图1为本发明的豈鱼软骨骨髓萃取组成物的SDS/PAGE分析图；图2为实验组与对照组老鼠死亡累积数目与时间的线性关系图；图3为实验后实验组与对照组的存活老鼠的红血球与白血球含量比较图；图4A与4B为实验组与对照组老鼠的血液生化数值比较图；图5为实验组与对照组老鼠的解剖相片图；图6A为猪胃液体外实验中pH值与时间的关系图；图6B为猪胃液中和实验中pH值与时间的关系图；图7A为服用本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取物前的微血管照相图；图7B为服用本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取物后的微血管照相图；图8A为服用本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取物前的头皮微血管的超音波多普勒仪血流速测试结果；图8B为服用本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取物后的头皮微血管的超音波多普勒仪血流速测试结果；
图9A为服用本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取物前的生殖器微血管的超音波多普勒仪血流速测试结果；
图9B为服用本发明的豈鱼软骨骨髓萃取物后的生殖器微血管的超音波多普勒仪血流速测试结果；
图10A为服用本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取物前的乳房微血管的超音波多普勒仪血流速测试结果；
图10B为服用本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取物后的乳房微血管的超音波多普勒仪血流速测试结果。
具体实施例方式
以下结合附图，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。
本发明提供一种鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，其分子量介于21至100千道耳顿(Kilo Daltons),含有重量百分比为50-60wt%的硫酸软骨素(ChondroitinSulfate),且该组成物每一百克所含的热量为300至350千卡路里。
上述组成物中，硫酸软骨素的重量百分比优选为56.3wt%,且该组成物包括如下所列的其它成分
总碳水化合物，其重量百分比为23.7wt%;
粗脂肪，其重量百分比为0.3wt%;
灰份，其重量百分比为11.8wt%;
水分，其重量百分比为7.7wt%;以及
钠，其重量百分比为0.2wt%。
此外，上述组成物是白色细致粉末，且其每一百克所含的热量为323千卡路里。
以下是以实施例验证本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物的功效。实施例1
本实验以鲨鱼软骨萃取物(SDS)喂食老鼠，并观察黑色素皮肤癌(melanoma)在老鼠腹腔的生长情况，用来评估其抗癌作用。其步骤与方法如下所述一、黑色素癌细胞的增生与纯化
黑色素癌细胞抹(B16)以含有2.5%胎牛血清(Fetus Bovine Serum)的
5Dulbelcco，s Modified Eagle Medium (DMEM),在37°C ， 5°/。 C02培养箱，培养至 90%的丰度(confluency),以1ml的1:10胰蛋白(trypsin; Gibco)将其消化5 min 后，再取出细胞并计算细胞数目。
二、 老鼠腹腔癌肿瘤的诱发
80只四周岁的BALB/C老鼠(台湾大学医学院动物实验中心)分成两组， 对照组喂食正常饲料，实验组则添加5%鲨鱼软骨骨髓萃取组成物。二周后，在 老鼠腹腔打入2.5xl(^黑色素癌细胞，14日后开始计算老鼠的死亡只数。死亡老 鼠加以解剖，将肺瘤组织分离后，取出脏器，加以比较、照相。死亡只数超过 半数以后，剩余的老鼠则以断颈处理，并抽血作血球分析及血液生化分析。老 鼠血液加入肝素(Heparin)之后，进行血球分析及血液生化分析。血球以Sysmex SE卯OO cell counter (Japan)分析，血液生化以Hitachi 7150分析。结果以 Kaleidagraph作分4斤、统计、画图。
三、 结果分析
1、 鲨鱼软骨可溶性成分SDS PAGE分析
如图l所示，鲨鱼软骨经过均质后，离心取上层液进行SDS PAGE分析， 其主要成分分布于21-100 kDalton。
2、 摄食鲨鱼软骨骨髓萃取组成物明显延长腹水癌老鼠寿命。 四十只实验组老鼠喂食添加有5%豈鱼软骨骨髓萃取组成物的饲料，两組对
照组老鼠(各四十只)喂食一般饲料，喂食2周后，在腹腔施打2.5x106melanoma cells。经2-3周后，由于melanoma在腹腔内部大量增生，形成肿瘤组织，转移 并挤压内脏，造成老鼠脏器萎缩、变黑最后窒息死亡。记录每日死亡只数，统 计之后画图比较。如图2所示，以到达半数死亡所需日数为准，摄食5%鲨鱼软 骨骨髓萃取组成物的实验组为19.5日，对照组平均为17.8日，显示有明显的差 异。注射melanoma 24日之后，各组死亡数目均超过半数，存活的老鼠则以断 颈处理，并抽血作血球分析及血液生化分析。在血球分析方面，如图3所示， 白血球和红iu求含量并无显著差异。血液生化方面，如图4A所示，血红素(HGB)、 血容比(HCT)、红血球平均体积(MCV)、平均血球血红素量(MCH)以及红血球 血红素平均浓度(MCHC)等值并无显著差异；然而，如图4B所示，谷氨酸草乙 酸转氨酶/天冬氨酸转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase/aspartate aminotransferase、 GOT /AST)以及谷氨酸丙酮酸转氨酶/丙氨酸转氨酶(glutamic pyruvic transaminase/alanine aminotransferase、 GPT/ALT)的j直贝'J均有显著差异。
6在人体血液生化分析中，GOT/AST及GPT/ALT同时增加可判定肝脏功能受损。 由于本品是老鼠的正常范围无法得知，因此难以GOT/AST及GPT/ALT的差异 来判定肝脏是否受损，以及其相对受损程度。
3、 死亡老鼠肺瘤组织及脏器的比较。
对于死亡的老鼠，经解剖之后，比较其肺瘤组织及脏器(心脏、肾脏、脾 脏、肝脏)大小及色泽，我们无法以肉眼区别肿瘤组织及脏器大小及色泽。
4、 皮下注射melanoma的比较。
喂食鲨鱼软骨的实验组老鼠在注射肿瘤细胞实验中，有较长的存活，由于 无法以解剖之后比较其肿瘤组织大小，我们决定以腹部皮下注射肺瘤细胞比较 其肿瘤组织增生的差异。老鼠喂食含有5%鲨鱼软骨骨髓萃取组成物饲料及正常 饲料，经12日后，在腹部皮下施打105 melanoma cells,经过二周后以断颈处理， 解剖、照相、并比较肿瘤的大小。如图5所示，喂食正常铜料老鼠的解剖结果 可以发现，肺瘤组织除明显较大以外，还有转移进入腹腔的情况发生。相比而 言，实验组中的癌肿瘤明显较小，且无明显转移现象。因此可知，摄食本发明 的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物可抑制皮下黑色素癌细胞增长效果并抑制肿瘤转 移。
综合上述实验结果，口服鲨鱼软骨骨髓萃取组成物可明显抑制癌细胞增生 和转移，延长注射癌细胞老鼠的寿命。虽然大部份的文献是以注射或是手术的 技术将鲨鱼软骨萃取物和肿瘤组织直接接触以彰显其作为新血管形成抑制剂 (angiogenesis inhibitor)的效果，以摄食的方式，经过肠胃道消化吸收，仍然可以 测出其抗癌的效杲。
实施例2
以离乳三个月蓝瑞斯和蓝屿迷你猪混种猪为实验动物。如图6A所示，于空 腹时抽取胃液所测得的pH值为2.2;而将所抽取的胃液在体外与篁鱼软骨骨髓 萃取物混合后，其pH值明显上升至3.4。此外，如图6B所示，于活体实验中以 绿茶灌入猪胃中，每隔20分钟抽取胃液，胃液的pH值有下降趋势。经灌入液 状均质的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物后，胃液pH值明显上升，畫鱼软骨有明显延 迟胃液pH值因喝绿茶而降低的作用。
因此可见，鲨鱼软骨骨髓萃取组成物对胃液有中和作用，对于抑制胃酸过 度分泌以及保护消化系统功能方面的测试也有显著的功效。
实施例将上述组成物以乳剂涂抹于表皮层开始作用时，会促使人体微细血管扩张 开启生物电流水通道，因而增加血液流速并提升循环代谢，使得人体末梢表皮
层的温度升高以形成热效应。由于人体中水分体液约占总体积70%,因此当表 层热效应产生时，水分及体液会出扰动现象，水分子因动能增加互相撞击、共 振而出现深层热效应。
理论上通常人体必须经由不停的运动方能产生此种深层热效应，而使动能 转变成热能，并消耗体脂肪代谢为糖类运用而排出体外。通过分子共振以及深 层热效应，并辅以不同方式以及不同物质，对于解决人体因血液循环不良所产 生的功能性障碍，都将会产生具体的成效。
图7A与7B所示为微血管的照相图，由图可看出对于微血管血流流速测试 的结果;其中，图7A与7B分别为服用本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物前后 的照片。比较两图可以发现，服用本发明的组成物后，微血管的血液流速可增 力口至三倍。
此外，图8A与8B则为服用上述组成物前后对头皮微血管所进行的超音波 多普勒4义血流速测试，由图可知，J良用上述组成物后，孩史血管血流流速有显著 的提升。
率，以解除因血液供输失衡引起头部不适，强化头皮组织避免污染源伤害，延 緩老化、退化的掉发现象，并得以供应毛嚢充足营养素培育新发。因此，本发 明组成物在复发方面具有显著效能。
图9A与9B所示为服用上述组成物前后对生殖器微血管所进行的超音波多 普勒4义血流速测试，由图可知，服用上述组成物后，该处4敫血管的血流流速有 显著的提升。
由此结果可知，通过服用本发明的组成物，得以开启生物电流开关以恢复 神经纤维丛讯号畅通，从而排除障碍。此外，还可增加人体基础温度提升新陈 代谢率，通过加快微血管的血液流速来帮助男性生殖器官迅速充血，使女性生 殖器官富有弹性以及增加润滑液的提供。总而言之，可排除生殖泌尿系统以及 代谢系统的功能性障碍，并可抗衰老、退化。
图IOA与10B为服用上述组成物前后对乳房微血管所进行的超音波多普勒 仪血流速测试。如图所示，服用上述组成物后，该处微血管的血流流速有显著 的提升。由此结果可知，通过服用本发明的组成物，可以增加血液循环速度，由此 激发组织分子热效应提升新陈代谢率，可产生类运动效果以改善发育不良现象。 此类运动的效果可增加胸大肌以刺激激素产生，从而协助乳房的第二次发育运 动，使胸部更为挺拔。
综合上述实验结果，本发明的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物有促进血液循环的 功效。
综上所述，根据上文所揭示的内容，本发明确实可达到发明的预期目的，
提供一种以硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate)为主要活性成分，并具有抗黑色素 瘤、中和胃酸以及促进血液循环等功效的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物。
以上说明对本发明而言只是说明性的，而非限制性的，本领域普通技术人 员理解，在不脱离所附权利要求所限定的精神和范围的情况下，可做出许多修 改，变化，或等效，但都将落入本发明的保护范围内。
权利要求
1、一种鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，其特征在于其分子量介于21至100千道耳顿，且含有重量百分比为50-60wt％的硫酸软骨素。
2、 如权利要求1所述的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，其特征在于所述组成物每一百克所含的热量是为300至350千卡路里。
3、 如权利要求1所述的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，其特征在于所述硫酸软骨素的重量百分比为56.3wt°/。，且该组成物还包括以下成分总碳水化合物，其重量百分比为23.7wt%;粗脂肪，其重量百分比为0.3wt%;灰份，其重量百分比为11.8wt%;水分，其重量百分比为7.7wt%;以及钠，其重量百分比为0.2wt%。
4、 如权利要求3所述的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，其特征在于所述组成物每一百克所含的热量是为323千卡路里。
5、 如权利要求1所述的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，其特征在于所述组成物为白色细致粉末。
6、 权利要求l-5所定义的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，在制备抑制癌细胞增生和转移的药物中的应用。
7、 权利要求1-5所定义的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，在制备抑制胃酸过度分泌、保护消化系统功能的药物中的应用。
8、 权利要求1-5所定义的鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，在制备促进血液循环的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种鲨鱼软骨骨髓萃取组成物，其主要活性成分是重量百分比为50-60wt％的硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate)，该组成物的分子量介于21至100千道耳顿(Kilo Daltons)，而每一百克组成物所含的热量介于300至350千卡路里。该鲨鱼软骨骨髓萃取组成物具有抗黑色素瘤、中和胃酸以及促进血液循环等作用。
文档编号A61K35/56GK101669971SQ200810212348
公开日2010年3月17日 申请日期2008年9月10日 优先权日2008年9月10日
发明者陈俊源 申请人:陈俊源