聚乙二醇化的AβFAB的制作方法

专利名称：聚乙二醇化的AβFAB的制作方法
聚乙二醇化的APFAB本发明涉及结合淀粉样蛋白β (Αβ )肽且共价结合一个或多个聚乙二醇(PEG)分 子的抗体片段。环状的Αβ肽由前体蛋白质淀粉样蛋白前体蛋白质(APP)切割产生的39-43个氨 基酸(大部分为40或42个氨基酸)组成。Αβ从可溶形式向具有高β折叠含量的不可 溶形式的转换以及其在脑中作为神经炎斑点和脑血管斑点的沉积似乎与许多病症和疾病 (包括阿尔茨海默氏病、唐氏综合症和脑淀粉样血管病(CAA))相关。预防和/或逆转Αβ 的沉积可治疗与Αβ肽相关的病症。影响A β沉积的治疗剂包括针对A β肽的抗体，例如在WO 2001/62801、 W02004/071408 和 Tamura, Y.，等，Neurobiol. of Dis. (2005)20 :541_545 中讨论的人源化 抗体和片段。尽管许多抗体及其衍生物可用于诊断和治疗，但对于特定应用而言常常无法获得 理想的抗体药物代谢动力学。旨在治疗与Aβ肽相关的多种病症和疾病的治疗性抗体通常 为具有完整Fc区的免疫球蛋白。Fc区负责延长血浆中抗体的半衰期。然而，由于这种延长 阻止了有效清除与靶肽结合的抗体，导致抗原抗体复合体在血浆循环中延时存在，因此该 延长可能是不利的。随后施用抗体导致血浆中不想要复合体的进一步积累。抗体的Fc部 分可能具有某些不必要的效应子作用，因此需要进行修饰以去除这种作用。此外，Fc部分 向整体治疗添加了显著的大小，所述治疗常产生与递送路径、递送装置和扩大制备过程相 关的问题。已在体内研究了包括Fab在内的无Fc部分的抗体片段以测定是否此类片段可能 为潜在的治疗法。然而，研究提示由于清除率快和半衰期短，所以限制了涉及如Fab的片段 的治疗有效性。因此，需要有活性的治疗性抗Αβ肽抗体分子，所述抗体分子具有这样的药 物代谢动力学和药物动力学，其允许改善给药方案而避免由血浆中复合体的形成产生和潜 在的效应子作用的潜在副作用。本发明克服了与可能靶向Αβ肽的治疗性抗体或抗体片段相关的许多问题。本发 明的化合物包括结合Αβ且共价结合一个或多个聚乙二醇(PEG)分子的抗体片段。这些化 合物可在细菌或酵母细胞系统中产生，所述细菌或酵母细胞系统消除了与哺乳动物细胞系 中产生抗体相关的多种问题，例如成本问题、纯化问题和污染内源产生的抗原问题。此外， 本发明的化合物可经皮下施用并具有理想的药物代谢动力学(PK)和药物动力学(PD)谱， 同时保持抗体片段对Aβ亲和力和选择性。非常无法预测且意外地，申请人还发现共价结合PEG分子至抗体片段的互补决定 区(CDR)未改变抗体片段对A β的活性、亲和力或选择性。本发明提供包含抗体片段的分子，所述抗体片段在第13-28位氨基酸之间特异性 结合人A β肽，其中抗体片段共价结合PEG分子。优选地，抗体片段为Fab片段。在一个实施方案中，本发明提供包含抗体片段的分子，所述抗体片段具有重 链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有以下氨基酸序列的CDR区 CFRLl SSSQSLIYSDGNAYLH (SEQ ID NO :6)、CDRL2 :KVSNRFS (SEQ ID NO 7)禾口 CDRL3 TQSTHSPffT (SEQ IDNO 8)且其中所述重链可变区包含具有以下氨基酸序列的⑶R区 CDRHl :GYTFSRYSMS(SEQ ID NO :9)、CDRH2 :QINIRGCNTYYPDTVKG(SEQ ID NO: 10)或 QINIRGNNTYYPDTVKG (SEQ ID NO :11)禾口 CDRH3 :GDF (SEQ ID NO : 12)。优选地，此类分子具有 共价结合抗体片段重链可变区或轻链可变区的PEG分子。更优选地，此类分子具有共价结 合CDR的PEG分子。甚至更优选地，此类分子具有共价结合CDR内半胱氨酸残基的PEG分 子。最优选地，此类分子具有共价结合抗体片段重链可变区⑶RH2 :QINIRGCNTYYPDTVKG(SEQ ID NO 10)的 PEG 分子。在另一实施方案中，本发明提供包含抗体片段的分子，所述抗体片段具有轻链可 变区SEQ ID NO :1和重链可变区SEQ ID NO :2。优选地，此类分子具有共价结合抗体片段 的重链可变区或轻链可变区的PEG分子。更优选地，此类分子具有共价结合抗体片段重链 可变区的CDR的PEG分子。甚至更优选地，此类分子具有共价结合抗体片段的重链可变区 的CDR内半胱氨酸残基的PEG分子。最优选地，此类分子具有共价结合重链可变区SEQ ID NO 2的第56位氨基酸处的半胱氨酸的PEG分子。在另一实施方案中，本发明提供包含Fab片段或ScFv片段的分子，其中Fab片段 或ScFv片段共价结合PEG分子并具有轻链可变区SEQ IDNO 1和重链可变区SEQ ID NO :2。 优选地，此类分子具有共价结合重链可变区SEQ ID NO :2的第56位氨基酸处的半胱氨酸的 PEG分子。同样优选地，在此类分子中PEG的分子量约为0. 5kD至30kD，更优选为20kD。在另一实施方案中，本发明提供包含具有轻链可变区SEQ ID NO :1和重链可变区 SEQ ID NO 2的抗体片段的分子，其中所述抗体片段在重链可变区SEQ ID NO 2的第56位 处共价结合20kD的PEG分子。优选地，在此类分子中PEG分子经马来酰亚胺键进行共价结
I=I O在另一实施方案中，本发明提供包含在第13-28位氨基酸间特异结合人A β肽的 抗体片段的分子，其中所述抗体片段共价结合PEG分子并具有轻链可变区SEQ ID NO 1和 重链可变区SEQ ID NO :3。优选地，此类分子具有共价结合抗体片段绞链区的PEG分子。更 优选地，所述PEG经马来酰亚胺键共价结合绞链区。本发明还包括包含抗体片段的分子，所述抗体片段优选为人源化抗体片段，其中 PEG分子共价结合抗体片段，所述抗体片段产生具有允许每周给药方案的药物代谢动力学 和药物动力学的活性治疗分子，同时将可能是由血浆中复合体形成造成的潜在副作用最小 化且保留或改善抗体片段对Aβ的活性、亲和力和选择性。本发明还包括治疗、预防或逆转与Αβ肽相关的病症和疾病的方法，所述病症和 疾病包括临床前和临床(pre-clinical and clinical)阿尔茨海默氏病、唐氏综合症和临 床前和临床脑淀粉样血管病(CAA)认知缺陷、中风、脑溢血和一般性精神衰弱。这些方法包 含向受试者施用有效量的此处描述和要求保护的分子。本发明提供包含在第13-28位氨基酸间特异结合Αβ肽的抗体片段的分子，其中 所述抗体片段共价结合PEG分子。我们已发现PEG分子共价连接结合A β的抗体片段未负 面地改变抗体片段对Αβ的活性、亲和力或选择性。更令人惊奇地，我们发现具有高达20kD 分子量的PEG分子共价连接结合A β的抗体片段的CDR也未负面地改变抗体片段对A β肽 的活性、亲和力或选择性。这些抗体片段可经皮下施用且具有用于支持可变通给药方案的 治疗用途的改善的PK/PD谱。此外，这些抗体片段可在细菌或酵母细胞系统中产生，所述细
4菌或酵母细胞系统消除了与在哺乳动物细胞中制备全长抗体相关的多种问题。本发明的聚 乙二醇化抗体片段提供了在预防和治疗上预防和治疗人中与Aβ肽相关的病症的可能性。天然存在的全长抗体为包含四条肽链的免疫球蛋白分子，所述四条肽链为通过 二硫键互相连接的两条重(H)链(全长时约为50-70kDa)和两条轻(L)链(全长时约为 25kDa)。每一条链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的约100-110个或更多个氨基酸的 可变区。每一条链的羧基端部分定义主要负责效应子作用的恒定区。轻链分为κ或λ且特征为具有特定的恒定区。每一条轻链包含N端轻链可变区 (此处为“LCVR”)和包含一个结构域CL的轻链恒定区。重链分为Y、μ、α、δ或ε，且 分别将抗体的同种型定义为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，并且这些中的几种可进一步分为亚 类(同种型)例如IgGp IgG2、IgG3、IgG4, IgA1和IgA2。每一种重链类型的特征在于特定的 恒定区。每一重链包含N端重链可变区(此处为“HCVR”)和重链恒定区。对IgG、IgD和 IgA而言，重链恒定区包含3个结构域(CH1、CH2和CH3)；而对IgM和IgE而言，重链恒定区 包含4个结构域(CHI、CH2、CH3和CH4)。HCVR区和LCVR区可进一步细分为高变区，命名为互补决定区(“⑶R”)，其上散 布更保守的命名为框架区(“FR”)的区域。每一个HCVR和LCVR由三个⑶R和四个FR组 成，自氨基端向羧基端按如下顺序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。此处重链的 3 个 CDR 称为“CDRHl、CDRH2 和 CDRH3” 并且轻链的 3 个 CDR 称为“CDRLl、CDRL2 和 CDRL3，，。 CDR包含与抗原形成特异性相互作用的大部分残基。HCVR和LCVR区内的CDR氨基酸残基 的编号及位置与众所周知的Kabat编号规定一致。每一条轻_重链对的可变区形成抗体的抗原结合位点。如此处所用，“抗原结合 部分”或“抗原结合区”或“抗原结合结构域”或“抗原结合位点”可相互取代地指代抗体分 子的部分，其包含与抗原相互作用且赋予抗体对抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基。该 抗体部分包括维持抗原结合残基正常构象所必需的“框架”氨基酸残基。优选地，本发明抗 体的框架区为人起源或基本为人起源(至少为80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或 99%人起源)且遵循Kabat编号。或者，抗原结合区可来自人序列。如此处所用，术语“抗体片段”指保留特异结合抗原(例如Αβ )能力的抗体的一个 或多个片段。包含在术语抗体的“抗体片段”中的分子的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、 CL和CHl结构域组成的单价片段；(ii)F(ab' )2片段，包含在绞链区由二硫键连接的两个 Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CHl结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单个臂的VL和 VH 结构域组成的 Fv 片段，和(v)dAb 片段(Ward，等，(1989)Nature341 544-546)，其由 VH 结构域组成。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同基因编码，但可使用重组方法 通过合成接头(该接头使它们形成单条蛋白质链，其中VL区和VH区配对以形成单价分子) 将它们连接起来(称为单链Fv(scFv)；参阅，例如Bird等(1988) Science242 :423_426 和 Huston 等(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA85 :5879_5883)。此类单链抗体也旨在包含于 术语“抗体片段”中。术语“抗体片段”也包含单链抗体的其他形式，例如双体(diabody)。 双体是二价双特异性结合蛋白质，其中VH和VL结构域表达于单条多肽链上，但使用的接头 太短以至于无法在同一条链的两个结构域之间形成配对，因此迫使该结构域与另一条链的 互补结构域配对并形成两个抗原结合位点(参阅，例如HolIiger，P.，等(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :6444_6448 ；Pol jak, R. J.，等(1994) Structure 2 1121-1123)。
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更进一步，抗体或其抗体片段可为通过抗体或抗体片段与一种或多种其他蛋白质 或肽共价或非共价结合形成的更大免疫粘着分子的一部分。此类免疫粘着分子的实例包 括使用链霉抗生物素蛋白核心区以产生四聚体scFv分子(Kipriyanov，S. Μ.，等(1995) Human Antibodies andHybridomas 6 :93_101)，和使用半胱氨酸残基、标记肽和C端多组氨 酸标签以产生二价和生物素化的scFv分子(Kipriyanov, S. Μ.，等(1994)Mol. Immunol. 31 1047-1058)。可使用常规技术如整个抗体的木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化分别从整个抗体中 制备抗体片段，例如Fab和F(ab' )2片段。此外，如本领域中众所周知，可使用标准重组 DNA技术获得抗体、抗体片段和免疫粘着分子。抗体、抗体片段和免疫粘着分子可为糖基化 或非糖基化的且仍落在本发明的范围内。优选地，抗体片段为Fab片段。术语“人源化抗体”指部分或全部由来自人抗体种系的氨基酸序列或重排序列组 成的抗体，其通过改变具有非人CDR的抗体序列获得。可变区的框架区可由对应的人框 架区取代。人框架区包括基因组框架区以及包含一个或多个氨基酸取代的那些区域。具 体而言，此类取代包括其中由来自非人CDR的天然框架相应位置的氨基酸取代人框架中 特定位置的氨基酸的突变。例如，具有小鼠CDR的人源化抗体可包含用相应的小鼠框架 氨基酸取代特定的人框架氨基酸的一处或多处取代。其他描述参与人源化可能使用的小 鼠抗体的方法的参考是例如Queen等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 =2869,1991 ；美国专 利号 5,693, 761 ；美国专利号 4,816, 397 ；美国专利号 5，225，539 ；在 Levitt, Μ.，J. Mol. Biol. 168 595-620,1983中描述的计算机程序ABMOD和ENCAD ；人源化可基本上按Winter 及其同事的方法进行(Jones 等，Nature, 321 -.522-525,1986 ；Riechmann 等，Nature, 332 323-327，1988 Verhoeyen 等，Science, 239 1534-1536，1988)。优选地，本发明的抗体为人 源化抗体片段。更优选地，本发明的抗体是人源化抗体fab片段。本发明还包括共价结合一个或多个PEG分子的抗体片段。希望术语“聚乙二醇” 和“PEG”可相互取代使用且指代本领域中公知的聚乙二醇或其衍生物(参阅，例如美国专 利号5，445，090 ；5，900，461 ；5，932，462 ；6，436，386 ；6，448，369 ；6，437，025 ；6，448，369 ； 6，495，659 ；6, 515，100和6，514，491)。优选地，PEG共价结合抗体片段的一个或多个赖氨 酸或半胱氨酸残基。更优选地，PEG共价结合抗体片段重链可变区中的一个或多个赖氨酸 或半胱氨酸残基。甚至更优选地，PEG共价结合抗体片段CDR内的一个或多个赖氨酸或半胱 氨酸残基。最优选地，PEG结合所述重链可变区SEQ ID NO :2的第56位氨基酸的半胱氨酸 残基。或者，PEG分子可经连接抗体片段绞链区的接头或间隔分子结合到抗体片段上。向 绞链区添加接头和间隔分子是本领域众所周知的。此外，PEG可通过本领域公知的技术共 价结合到抗体片段的被修饰非天然氨基酸上。在其一般形式中，“PEG”为具有末端羟基的线性聚合物且具有分子式HO CH2CH2-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OH,其中η从约为8至约为4000。端基氢可由保护基团如烷基或 链烷醇基团(M-PEG取代。优选地，PEG具有至少一个羟基，更优选地其为末端羟基。优选 激活该羟基以与肽反应。使用多种化学修饰来制备具有功能性基团(例如活性碳酸盐、活 性酯、醛、tresylate或使用适合于偶联给定靶分子的PEG丙醛)的活性PEG衍生物。活性 PEG衍生物随后共价结合多肽药物的反应性基团。有许多用于本发明的PEG形式。本领域 中存在大量PEG衍生物且均适合在本发明中使用。共价结合本发明抗体片段的PEG分子不 旨在局限于具体类型或大小。PEG分子量优选从约0. 5千道尔顿(kD)至约IOOkD,更优选
6地从约5kD至约30kD，最优选地从约IkD到约20kD。PEG可为线性的或分支的，且本发明的 抗Αβ肽抗体片段可具有1、2、3、4、5或6个与肽结合的PEG分子。最优选为一个PEG分子 抗体片段；然而，当每个肽分子存在多于一个PEG分子时，优选为不多于六个。本发明还涵 盖PEG分子的两端均适合与两个或多个抗A β肽抗体片段分子共同交联。将PEG分子结合 到蛋白质、抗体及其片段的方法在本领域是众所周知的。如此处所用的术语“KD”旨在指特定抗体_抗原相互作用的解离常数。根据方程 式KD = k。ff/k。n(以M测定)计算。如此处所用术语“k。n”旨在指结合速率常数，或前者或 复合体形成反应的反应比速(specific reactionrate)，以单位=M4SecT1测定。如此处所 用术语“k。ff”旨在指抗体从抗体/抗原复合体上解离的解离速率常数或反应比速，以单位 sec—1测定。如此处所用的术语“特异结合”指其中特异结合对中的一个成员不显著地结合 除它特异结合的一个或多个配偶体之外的其他分子的情况。该术语也适用于例如本发 明抗体的抗原结合结构域对于由许多抗原携带的特定表位是特异的，在这种情况下带有 抗原结合结构域的特异性抗体将能够结合带有该表位的多种抗原。因此，本发明的分子 特异结合Αβ肽，而不特异结合ΑΡΡ。此外，本发明的分子在线性、非线性或包含氨基酸 HHQKLVFFAEDVGSNK (13-28) (SEQ ID NO 4)的构象 A β 表位间特异地结合。参考本发明的分子，术语“活性”包括但不限于表位/抗原亲和力和特异性、在体 内或体外中和或拮抗Αβ肽活性的能力、IC5tl、抗体的体内稳定性和抗体的免疫特性。本领 域中抗体识别的其他可识别的生物学特性或特征包括例如交叉反应性、(即通常与靶肽的 非人同源物、或与其他蛋白质或组织的交叉反应性)、和在哺乳动物细胞中保持蛋白质高表 达水平的能力。可使用包括但不限于ELISA、竞争性ELISA、Biacore或KinExA表面等离 子共振分析、不受限的体外或体内中和试验、受体结合、细胞因子或生长因子产生和/或分 泌、信号转导和对于来自包括人、灵长类或任何其他来源的不同来源的组织切片的免疫组 织化学在内的领域认可的技术观察、测定或评估前文提到的特性或特征。此处可互相取代使用的术语“个体”、“受试者”和“患者”指哺乳动物，优选为人。 在特定实施方案中，受试者特征还在于患有将从Αβ肽活性下降中受益的疾病或障碍或病 症。如此处所用，表述“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互相取代 使用并包括单独的细胞或细胞培养物，其为本发明任何分离的多核苷酸或包含编码HCVR、 LCVR或本发明单克隆抗体的序列的任何一个或多个重组载体的接受者。宿主细胞包括单 个宿主细胞的后代。由于自然的、意外的或有目的性的突变和/或改变，后代可能在形态或 总DNA补体上与原始亲本细胞不完全一致。宿主细胞包括用表达本发明的抗体片段或其轻 链或重链的重组载体或多核苷酸转化的、转导的或感染的细胞。包含本发明重组载体的宿 主细胞无论是否稳定整合入宿主染色体，也可称为“重组宿主细胞”。用于产生本发明宿主 细胞的优选细胞为CHO细胞(例如ATCC CRL-9096) ,NSO细胞、SP2/0细胞、COS细胞(ATCC 例如，CRL-1650、CRL-1651)和HeLa(ATCC CCL-2)。本发明中使用的另外的宿主细胞包括植 物细胞、酵母细胞、其他哺乳动物细胞和原核细胞。更优选地，本发明中使用的细胞为酵母 或原核细胞。术语“涉及Αβ肽的病症或疾病”或“与具有Αβ活性的疾病相关的病症”意指包括所有与以下相关的病症、病症和疾病1)脑中β淀粉样蛋白斑的发展，2)Αβ异常形式的 合成，3)Αβ独特毒性形式的形成，或4)异常的Αβ合成速率、降解速率或清除速率。已知 或推测如阿尔茨海默氏病、唐氏综合症、脑淀粉样血管病、某些血管性痴呆和轻度认知缺损 的病症和疾病与Αβ具有这样的关系。本发明提供包含在第13-28位氨基酸间特异结合Αβ肽的抗体片段的分子，其中 所述抗体片段共价结合到PEG分子上。该抗体片段优选为人源化抗体片段，如Fab片段和 /或scFv片段。最优选地，该抗体片段为Fab片段。本发明的分子特异结合Αβ肽允许所 述分子待用于治疗与Αβ肽相关的疾病和病症，即从抑制Αβ肽的生物活性中受益的病症、 疾病或病症。在本发明的一个实施方案中，抗体片段具有重链可变区和轻链可变区，其中轻 链可变区包含具有以下氨基酸序列的CDR区CDRLl :SSSQSLIYSDGNAYLH(SEQ ID NO: 6)、CDRL2 KVSNRFS(SEQ IDNO 7)和 CDRL3 =TQSTHSPffT(SEQ ID NO :8)，禾口 / 或其中重 链可变区包含具有以下氨基酸序列的CDR区CDRH1 :GYTFSRYSMS(SEQ IDNO 9)、CDRH2 QINIRGCNTYYPDTVKG(SEQ ID NO 10)或 QINIRGNNTYYPDTVKG(SEQ ID NO: 11)，和 CDRH3 ⑶F(SEQ IDNO 12)。优选地，本发明抗体片段的六个⑶R共同存在。包含本发明⑶R的 组合物通常为抗体重链或轻链序列或其基本部分，其中CDR位于与Kabat编号一致的位置 上。在框架区内提供由以下化学式呈现的作为连续序列的每条重链和轻链的三个CDR区 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。当以有序状态与CDR排列为连续序列时，重链或轻链 FRU FR2、FR3和FR4结合形成抗体片段的完整框架区。优选地，本发明抗体的框架区为人 起源或基本为人起源(即超过约80、82、85、87、90、92、95、97% )。优选地，本发明的抗体片段包含LCVR和HCVR，所述LCVR包含以下序列的肽DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCSSSQSLIYSDGNAYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSG SGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCTQSTHSPffTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO 1),所述HCVR包含具有选自以下序列的序列的肽EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFSRYSMSffVRQAPGKGLEffVGQINIRGCNTYYPDTVKGRFT ISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAYYYCTTGDFffGQGTLYTYSS (SEQ ID NO 2)EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFSRYSMSffVRQAPGKGLEffVGQINIRGNNTYYPDTVKGRFT ISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAYYYCTTGDFffGQGTLYTYSS(SEQ ID NO 3)；或者，抗体片段包含LCVR (包含具有由SEQ ID NO 1组成的序列的肽)和HCVR (包 含具有选自SEQ ID NO :2或SEQ ID NO :3的序列的肽)，其中所述HCVR和LCVR共同存在于 抗体片段中。本领域技术人员将理解本发明的抗体片段不局限于HCVR和LCVR的特异性序 列，而且还包括这些序列的变体，所述变体当在本发明的分子中存在时，其保持或改善抗原 结合能力和亲本抗体的至少一种其他功能特性，例如表位特异性、与亲本抗体竞争结合A β 肽的能力、结合A β肽的IC50和/或Kd或k。ff值。在本发明的另一实施方案中，所有可变区或部分可变区受限于由SEQID NO 1显 示的特殊LCVR序列和在SEQ ID NO :2或SEQ ID NO :3中显示的HCVR，并且进一步的特征在 于其在体内或体外拮抗或中和至少一种Aβ肽活性。本发明抗体进一步的特征在于其特异 结合人A β肽但不结合人ΑΡΡ，所述抗体中所有可变区或部分可变区受限于由此处的LCVRSEQID NO :1，禾口 HCVR SEQ ID NO :2 或 SEQ ID NO 3 中显示的特殊序列。在本发明的一个方面中，PEG(或其衍生物)共价结合抗体片段的一个或多个赖氨 酸、半胱氨酸或非天然修饰的氨基酸残基。优选地，PEG分子共价结合抗体片段的重链可变 区或轻链可变区。更优选地，此类分子具有共价结合到抗体片段重链可变区的CDR上的PEG 分子。最优选地，此类分子具有共价结合重链可变区SEQ ID NO :2的第56位氨基酸处的半 胱氨酸的PEG分子。或者，PEG分子可经针对抗体片段绞链区的接头或间隔分子结合到抗 A β肽Fab抗体片段上。在本发明的另一方面中，PEG分子共价结合本发明抗体的一个或多个改造的赖氨 酸、半胱氨酸或非天然修饰的氨基酸残基，以取代抗体分子上存在的糖基化而不显著影响 抗体片段对Αβ的亲和力和选择性。优选地，PEG分子在抗体片段的重链可变区或轻链可 变区上取代糖基化信号。更优选地，PEG分子在抗体片段重链可变区的CDR上取代糖基化 信号。最优选地，PEG分子在重链可变区SEQ ID NO :2的第56位处取代糖基化信号。在本发明中共价结合到抗体上的PEG分子不旨在局限于特定的类型或大小。PEG 分子量优选从约0. 5kD至约IOOkD,更优选地从约0. 5kD至约30kD，最优选地从约IkD到约 20kD。或者PEG分子量可选自约0. 5kD、约lkD、约5kD、约IOkD和约20kD。PEG可为线性 的或分支的，且本发明的聚乙二醇化的抗Αβ肽抗体可具多于一个结合到肽上的PEG分子。 优选地，每一聚乙二醇化的抗A β肽抗体具有一个PEG分子。更优选地，本发明的抗体分子包含具有轻链可变区SEQ ID NO :1和重链可变区SEQ ID NO :2的抗体片段，其中所述抗体片段在重链可变区SEQ ID NO :2的第56位处共价结合 到20kD的PEG分子上。本发明抗体结合的抗原性Αβ肽表位是包含氨基酸HHQKLVFFAEDVGSNK(SEQ ID NO 4)的线性、非线性或构象表位。结合所述表位的抗体与它们结合的APP相比特异且优 先结合Αβ肽。本发明的单克隆抗体结合Αβ肽比它结合人APP高出至少2、5、10、20、30、 40、50、60、70、80、90或100倍(例如更高亲和力或更高特异性)；更优选地比它结合APP高 出至少150、200、250、300、350、400、450、500、550或600倍，甚至更优选地它在高于如ELISA 试验、竞争性ELISA试验或Biacore或KinExA试验中的Kd值测定的背景水平的水平上不 结合APP。本发明的抗体片段结合氨基酸HQKLVFFAEDVGSNK(SEQ ID NO 5)间的表位比 不包含氨基酸 HQKLVFFAEDVGSNK(SEQ ID NO 5)的表位高出至少 2、5、10、20、30、40、50、 60、70、80、90或100倍(例如更高亲和力或更高特异性)。更优选地，比不包含氨基酸 HQKLVFFAEDVGSNK (SEQ ID NO 5)的表位高出至少 150、200、250、300、350、400、450、500、550 或600倍，甚至更优选地它在高于如ELISA试验、竞争性ELISA试验测定的背景水平的水平 上，或Biacore或KinExA试验中的Kd值不结合不包含氨基酸HQKLVFFAEDVGSNK (SEQ ID NO: 5)的表位。在优选的实施方案中，本发明提供抗体片段，所述抗体片段对Αβ肽具有强 亲和力，即结合A β肽或其包含序列HQKLVFFAEDVGSNK (SEQID NO 5)的部分[即与 HQKLVFFAEDVGSNK多肽接触的抗体]，具有通过KinExA方法测定的对人A β肽低于约 200ρΜ、100ρΜ、50ρΜ、40ρΜ或30ρΜ，优选地为低于20ρΜ的结合亲和力(Kd)。或者，对人Αβ 肽的结合亲和力(Kd)介于0. 1ρΜ-200ρΜ之间。可按下文中实施例或本领域可得的其他方法中描述的进行测定抗体亲和力。本发明抗体的给药途径可为口服、肠胃外、通过吸入或局部。优选地，本发明抗体 可整合入适合肠胃外给药的药物组合物中。如此处所用的术语肠胃外包括静脉内、肌内、皮 下、直肠、阴道、腹膜内施用。优选通过静脉内或腹膜内或皮下注射的外周全身给药。更优 选地，本发明抗体的给药途径是经皮下注射。用于此类注射的合适载体在本领域是显而易 见的。本发明的抗体片段在血浆中较相应的抗Αβ肽全长抗体具有更短的半衰期，且较 相应的抗Αβ肽全长抗体能更快地被从血浆中清除。或者，本发明的抗体较相应的非共价 结合PEG分子的抗A β肽Fab片段具有更长的血浆半衰期，且较相应的非共价结合PEG分 子的抗Αβ肽Fab片段能更慢地被从血浆中清除(实施例1、2和3)。参考如此处所用的抗 体的术语“相应的”指具有相同LCVR和HCVR的抗体。例如，参考具有SEQ ID NO :1的LCVR 和由SEQ ID NO 2组成的HCVR的抗体Fab片段的相应全长抗体将具有相同的SEQ ID NO 1的LCVR和由SEQ ID NO 2组成的HCVR，及完整的Fc结构域。在另一方面，本发明涉及当表达时编码抗体的重组多核苷酸包含SEQID NO 1的 LCVR和由SEQ ID Ν0:2组成的HCVR。由于密码子简并性，其他多核苷酸序列可容易被取代 成这些序列。本发明特别优选的多核苷酸编码当表达时包含SEQ ID Ν0:6-8的轻链⑶R， 和SEQ ID NO :9、10或11和12的重链CDR，或SEQ ID NO =I-SEQ ID NO :3的任何可变区的 抗体。编码SEQ ID NO 1的LCVR和SEQ ID NO 2的HCVR的多核苷酸序列的实例分别示于 SEQ ID NO 13 (LCVR)和 SEQ ID NO 14 (HCVR)中。多核苷酸通常还将包括有效连接到人源化免疫球蛋白编码序列上的表达控制多 核苷酸，其包含天然结合的或异源的启动子区。优选地，表达控制序列将为在能够转化或转 染真核细胞的载体中的真核启动子系统，但也可使用用于原核细胞的控制序列。一旦将载 体整合进合适的宿主细胞系中，宿主细胞在适合表达核苷酸序列的条件下繁殖，并且如期 望的，可接着收集和纯化轻链、重链、轻/重链二聚体或完整抗体、结合片段或其他免疫球 蛋白形式。可使用多种众所周知的技术从多种不同多核苷酸(基因组寡核苷酸或cDNA、RNA、 合成寡核苷酸等)和组分(例如V、J、D和C区)形成能够最终表达所期望抗体或抗体片段 的本发明的核酸序列。将合适的基因组序列和合成序列连接起来是制备的常用方法，但也 可利用cDNA序列。可根据众所周知的方法从多种人细胞中分离人恒定区DNA序列，但优选从不凋亡 的B细胞中分离。可从本领域众所周知的多种来源中获得用于多核苷酸序列的合适的来源 细胞和用于免疫球蛋白表达和分泌的宿主细胞。除此处特别描述的人源化抗体或抗体片段外，可利用对本领域技术人员熟知的多 种重组DNA技术容易地设计并制备其他“基本同源的”修饰后抗体。例如，框架区可通过几 个氨基酸替代、末端和中部添加和缺失等而在一级结构水平上与天然序列不同。此外，多种 不同的人框架区可单独或组合用作与本发明人源化抗体的基础。通常，可通过多种众所周 知的技术如定向诱变来容易地完成基因修饰。如前文陈述，当序列已有效连接到(即定位以确保功能)表达控制序列之后多核 苷酸将在宿主中进行表达。这些表达载体通常作为游离基因或作为宿主染色体DNA的整合
10部分在宿主细胞中复制。通常，表达载体将包含选择标记，例如四环素或新霉素以允许检测 那些转化有所期望DNA序列的宿主细胞。这些细胞的表达载体可包括表达控制序列，如复 制起始区、启动子、增强子和必需的加工信息位点例如核糖体结合位点、RNA剪切位点、多腺 苷酸化位点和转录终止序列。优选的表达控制序列是来自免疫球蛋白基因、SV40、腺病毒、 牛乳头状瘤病毒、巨细胞病毒等的启动子。可通过众所周知的方法(其根据细胞类型而有所不同)将包含目的多核苷酸序列 (例如重链和轻链编码序列和表达控制序列)的载体转入宿主细胞。可使用本领域周知的 技术将多种宿主用于表达本发明的抗体。优选的细胞系包括C0S、CH0、SP2/0、NS0(可从如 公共保藏处ATCC，美国典型培养物保藏中心Manassas，VA获得)和酵母细胞系。优选地， 本发明的宿主细胞包含一种或多种包含本发明核酸分子的载体或构建体。本发明的宿主细 胞是已引入本发明载体的细胞，所述载体包含编码本发明的LCVR的多核苷酸和/或编码本 发明的HCVR的多核苷酸。本发明也提供已引入本发明的两个载体的宿主细胞；一个载体包 含编码本发明抗体的LCVR的多核苷酸，一个载体包含编码存在于本发明抗体中的HCVR的 多核苷酸，并且每一载体有效连接启动子序列。细胞类型包括哺乳动物细胞、细菌细胞、植 物细胞和酵母细胞。优选地，细胞为CHO细胞、COS细胞、SP2/0细胞、NSO细胞、酵母细胞或 任何优选细胞类型的衍生物或后代。本发明的完整抗体、其二聚体、各个轻链和重链、或其他免疫球蛋白形式一旦表 达，可根据本领域的标准方法对其进行纯化，所述方法包括硫酸铵沉淀、离子交换、亲和、反 相、疏水性相互作用柱层析、凝胶电泳等。对药物使用而言，优选基本上至少约90%、92%、 94 %或96 %同质性的基本纯免疫球蛋白，且最优选98 %至99 %或更高同质性的基本纯免 疫球蛋白。肽一旦被部分纯化或纯化达到所期望的同质性，就可如此处所示在治疗上或预 防上使用。导致认知缺陷、中风、脑溢血和一般性精神衰弱的许多症状似乎与含Αβ肽的脑 中神经炎和脑血管斑相关。这些病症为临床前和临床阿尔茨海默氏病、唐氏综合症、和临 床前和临床脑淀粉样血管病(CAA)。淀粉样蛋白斑形成自Αβ肽。这些肽通常以与脂蛋 白的复合形式在血液和脑脊液(CSF)中循环。循环形式的Αβ肽由从常见前体蛋白质， 常命名为APP的淀粉样前体蛋白质剪切获得的39-43个氨基酸(主要为40或42个氨基 酸)组成。可溶性AP的一些形式自身具有神经毒性且可决定神经变性和/或认知衰退的 严重性(McLean，C. Α.，等，Ann. Neturol. (1999)46:860-866 ；Lambert，Μ. P.，等(1998)迪 6448-6453 ；Naslund, J.，J. Am. Med. Assoc. (2000) 283 1571)。因此，包含本发明分子的药物组合物可用于治疗或预防这样的病症，其中Αβ肽 的存在引起或促进不期望的病理学效果或Αβ肽活性的降低在哺乳动物优选人中具有治 疗益处，所述病症包括但不限于临床或临床前阿尔茨海默氏病、唐氏综合症、临床或临床前 淀粉样蛋白血管病(CAA)、前驱阿尔茨海默氏病、轻度认知缺损(MCI)和认知缺陷、中风、脑 溢血和一般性精神衰弱，所述病症似乎与含Αβ肽的脑中神经炎和脑血管斑相关。此处涵 盖本发明的分子用于治疗或预防至少一种上述病症(其中Αβ肽活性是有害的或其从生物 活性Αβ肽水平降低中受益)的用途。此外，涵盖本发明分子用于制备治疗至少一种上述 病症的药物中的用途。如此处所用，术语“治疗(treatment) ”、“治疗(treating) ”等指获得所期望的药
11理学和/或生理学效果。所述效果可以是对疾病和/或归属于疾病发展的不利作用的部分 治疗或完全治疗。如此处所用，“治疗(treatment)”包括尤其是向人施用化合物，且包括 (a)抑制疾病，即停滞其发展；或(b)缓解疾病，即导致疾病或病症的复原或缓和其症状或 并发症。可调整给药方案来提供最佳的期望应答(例如，治疗或预防应答)。例如，可快速 浓注施用，可在一段时间内施用几份分次剂量或根据治疗情况的紧急程度所示按比例减少 或增加剂量。可将本发明分子掺入适合于向受试者施用的药物组合物中。本发明分子可按一 次剂量或多剂量单独施用或与可药用载体、稀释剂和/或赋形剂组合施用。设计用于施用 的药物组合物以适合选定的施用方式，并在适当时使用可药用稀释剂、载体和/或赋形剂 如分散剂、缓冲液、表面活性剂、防腐剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂等(例如见此处的实施例 14) ο 按照例如 ReminRton, The Science and Practice of Pharmacy,第 19 版,Gennaro 编 著，Mack Publishing Co.，Easton, PA 1995中的常规技术设计所述组合物，所述文献提供 了从业者公知的制备技术一览表。可使用包括口服、静脉内、腹膜内、皮下、肺部、透皮、肌内、鼻内、口腔、舌下或栓剂 施用在内的标准施用技术向具有如此处所述病理学风险或出现如此处所述病理学的受试 者施用包含本发明分子的药物组合物。优选地，可通过皮下施用向具有如此处所述病理学 风险或出现如此处所述病理学的受试者施用本发明的分子。本发明的药物组合物优选为“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明分子。“治 疗有效量”指在剂量和必需的时间周期上获得所期望治疗结果的有效量。分子的治疗有效 量可根据如个体的疾病病症、年龄、性别和体重等因素以及分子在个体中诱导所期望应答 的能力而有所变化。治疗有效量还是其中治疗有益作用大于分子的任何毒害作用或不利作 用的量。“预防有效量”指在剂量和必需的时间周期上获得所期望的预防结果的有效量。通 常，由于在受试者患病之前或早期使用预防剂量，预防有效量将少于治疗有效量。治疗有效量或预防有效量是必需给予受试者治疗益处的活性物质的至少最小剂 量但低于中毒剂量。换言之，治疗有效量的本发明分子在哺乳动物优选为人中降低Aβ肽 活性(例如结合Αβ肽)的量，其中Αβ肽的存在引起或促进不想要的病理效应或Αβ肽 的降低在哺乳动物优选人中引起有益的疗效。本发明分子的给药途径可以是口服、肠胃外、通过吸入、或局部给药。优选地，可将 本发明的抗体掺入到适合肠胃外给药的药物组合物中。如此处所用的术语肠胃外包括静脉 内、肌内、皮下、直肠、阴道、或腹膜内施用。优选通过静脉内或腹膜内或皮下注射的外周全 身给药。最优选皮下注射。用于此类注射的合适载体在本领域中是显而易见的。药物组合物通常必须为无菌且在生产和所提供的容器(例如包括密封的管或注 射器)中贮存的条件下是稳定的。因此，药物组合物可在制成后进行无菌过滤，或另在微生 物(方面)上制成可接受的。静脉输注的典型组合物可以具有多达250-1000ml液体的体 积(例如无菌的林格氏溶液、生理盐水、葡萄糖溶液和Hank’ s溶液)和治疗有效剂量(例 如1至100mg/ml或更多)的治疗剂，以递送下文列出的典型剂量。剂量可基于疾病的类型 和严重性而变化。如在医学领域众所周知的，用于任何一名受试者的剂量取决于许多因素， 所述因素包括患者的大小、体表面积、年龄、待施用的特定化合物、性别、给药时间和途径、 一般健康和同时施用的其他药物。例如，典型剂量可在0. 001至IOOOmg范围内；然而，特别
12是考虑到上文提到的因素时，可考虑低于或高于该示例性范围的剂量。每日肠胃外剂量方 案可以为每天从约0. lmg/kg至约100mg/kg总体重，优选为从约0. 3mg/kg至约10mg/kg且 更优选为从约lmg/kg至lmg/kg，甚至更优选为从约0. 5至10mg/kg体重。可通过周期评估 来监测进程。对于在几天或更长时间的重复施用，根据情况重复治疗直至产生期望的疾病 症状的抑制。然而，其他剂量方案也是有用的，并不由此未排除在外。根据从业人员希望获 得的药物代谢动力学衰减模式(pattern of pharmacokineticdecay)，可通过分子的单次 快速浓注施用、多次浓注施用或连续输注施用来递送所期望的剂量。本发明分子的这些建议用量受许多治疗上的考虑。选择合适剂量和时间安排上的 关键因素是所获得的结果。在该上下文中考虑的因素包括治疗的具体病症、治疗的具体哺 乳动物、个别患者的临床情况、病症的原因、抗体递送位点、抗体的具体类型、施用方法、施 用时间安排和医疗从业人员公知的其他因素。本发明的治疗剂可冷冻或冻干用于贮存并且在使用之前在合适的无菌载体中重 构。冻干和重构可能会导致抗体活性不同程度的损失。可能需要调整剂量来补偿。以下实施例旨在说明而非不限制本发明。下文的实施例使用命名为“266” (m266) 的鼠类单克隆抗体(其最初通过用人Αβ肽第13-28位残基组成的肽免疫制备)和命名为 266(m266-Fab)的鼠类单克隆抗体的Fab片段。确认抗体与该肽可以进行免疫反应。前面已 经描述过m266的制备。为将PEG分子共价结合到m266-Fab上，可在重链可变的CDR2 (N56C) 中引入半胱氨酸残基将Fab突变且以下文显示的方式将其聚乙二醇化(实施例4)。如此处 实施例描述在鼠类系统中进行的实验，鼠类单克隆抗体的使用是令人满意的。然而，在旨在 用于人的本发明的治疗方法中，优选本发明抗体的人源化形式或其片段。在下文的实施例 中涉及的IAl-Fab是包含SEQ ID NO 1的LCVR和SEQ ID NO 2的HCVR的人源化抗体Fab 片段。实施例1PDAPP 小鼠中 m266_Fab PEG 皮下 PK/PD 研究使用幼小的(3个月大)转基因PDAPP小鼠以研究抗体和抗体-Αβ复合体的 药物代谢动力学/药物动力学血浆反应。研究了几种抗体，包括小鼠Fab(m266-Fab)、 m266-Fab+5KD PEG、m266_Fab+10KD PEG、m266_Fab+20KD PEG 和完整的全长 m266IgG 抗 体。用lmg/kg的抗体通过皮下注射PDAPP+/-小鼠，随后在以下时间点分离血浆服药后 1、4、8、24、48、96、168和240小时。由于这部分的快速翻转，所以在额外早的时间点对接受 m266-Fab抗体的动物进行分析。用于m266_Fab的时间点如下服药后1、4、8、12、16、24和 48小时。在每个时间点对每种抗体分析了总共5只动物。通过用连接到ICC注射器上的 23号针头进行心脏穿刺获得全血，所述ICC注射器先前已经用0. 5M EDTA冲洗过。在分离 过程中将血样在冰上进行温育，并随后在4°C，冷冻微量离心机中以14，000转/分钟离心 15分钟。将所得血浆样品等分并储存在-80°C。Α.用于Fab PK分析的方法学使用抗原捕获ELISA测定血浆Fab的浓度。简言之，在4°C用A β -BSA缀合物过夜 包被平板或在37°C包被1小时，然后用Pierce酪蛋白缓冲液进行封闭。向平板中加入标准 样品、对照样品和研究样品，然后在室温下温育1小时。山羊抗小鼠HRP用于检测并用OPD 底物对比色反应进行显色。平板在A493的吸光度处进行读数，参考A700。从标准曲线测定来自血浆样品的免疫反应性的浓度，使用4/5-参数算法从小鼠血浆中m266 Fab的已知量 制备所述标准曲线。m266 Fab的测定范围是0. 05到0. 5 μ g/mL。聚乙二醇化的Fab的范 围是 0. 075 到 0. 8 μ g/mL。从标准曲线测定来自血浆样品的免疫反应性的浓度，使用4/5-参数算法从小鼠 血浆中m266 Fab的已知量制备所述标准曲线。266 Fab的测定范围是0. 05到0. 5 μ g/mL。 聚乙二醇化Fab的范围是0. 075到0. 8 μ g/mL。结果清晰地证实，添加PEG分子并增加PEG 分子的大小提高了聚乙二醇化Fab相比于非聚乙二醇化m266-Fab(8小时后为350ng/ml) 在血浆中的停滞(对20K聚乙二醇化m266-Fab而言，8小时后为2545ng/ml)。B. m266A β ELISA 测定为了测定在不存在或存在治疗抗体(全长或Fab片段)的情况下血浆Αβ的量，发 展并使用了 ELISA测定。在这些测定法中测定的Αβ肽是全长Αβ 1-40或Αβ 1-42。用PBS 中10 μ g/ml (每孔100 μ 1)的C端捕获抗体(对A β 40平板而言为m2G3或对A β 42平板 而言为 m21F12)在 4°C过夜包被 96 孔 Immulon 4HBX 96 孔 ELISA 板(ThermoLabsystems)。 在过夜温育过程中将测试平板密封以防止蒸发。第二天，去除孔内溶液并用Labsystems 96-孔板洗涤器用PBS (每孔400 μ 1)将孔洗涤3次。加入封闭缓冲液(360 μ 1的牛 奶-PBS)并在37°C温育平板1小时。通过稀释血浆将样品制备成样品稀释液，以产生以下 20%血浆、0. 5M 胍、5mM Tris pH 8. 0、0. 5X 蛋白酶抑制剂混合物、25 μ g/ml m266 和 PBS。 因存在高水平的Αβ肽，所以在某些时间点上可能需要减少用于测定的血浆体积，并且在 这些情况下，用大鼠血浆调整剩余的血浆体积(最终百分比体积维持在20%)。在标准稀 释液(20%大鼠血浆、0. 5Μ胍、5mM Tris pH 8. 0和完全无EDTA的0. 5X蛋白酶抑制剂混合 物(Roche Diagnostics)、25 μ g/ml m266 和 PBS)中产生浓度在 250pg/ml 到 3. 9pg/ml 之 间变化的A β标准物。需要在样品和标准稀释液中掺入25 μ g/ml的完整m266，以中和测 定中不同水平的中心结构域抗体可能产生的任何负干扰。封闭后，用PBS洗涤平板4次。 一式三份来装载样品和标准物(每孔100 μ 1)，封闭平板并在4°C温育过夜。第二天早晨， 用PBS-T(PBS+0. 05% Tween-20)洗涤平板4次，并在室温下将孔与生物素化的第二抗体 m3D6 (在0. 5% BSA/PBS-T中稀释的每孔100 μ 1)温育2小时。用PBS-T洗涤平板4次后， 它们与链霉抗生物素蛋白-多聚HRP(在0. 5% BSA/PBS-T中为1 5000)在室温下温育 1. 5小时。用PBS-T洗涤平板4次并每孔加入100 μ 1的TMB(Sigma)底物。在15、30和60 分钟，650nm处监测比色反应的进行。表1.药物动力学结果用于A β 40 (pg/ml)的平均血浆浓度
时间m266m266Fabm266Fabm266Fab完整(h)Fab+5KD+IOKD+20KDm266PEGPEGPEG
权利要求
包含抗体片段的分子，所述抗体片段在第13 28位氨基酸之间特异结合人Aβ肽，其中所述抗体片段共价结合聚乙二醇分子。
2.权利要求1的分子，其中所述抗体片段为Fab片段。
3.权利要求1或2的分子，其中所述抗体片段包含轻链可变区SEQIDNO :1和重链可 变区 SEQ ID NO :2。
4.权利要求1-3中任一项的分子，其中所述聚乙二醇分子共价结合所述抗体片段的重 链可变区。
5.权利要求4的分子，其中所述聚乙二醇分子共价结合所述抗体片段重链可变区的CDR。
6.权利要求3-5中任一项的分子，其中所述聚乙二醇分子共价结合所述重链可变区 SEQ ID NO 2第56位氨基酸处的半胱氨酸。
7.权利要求1或2的分子，其包含轻链可变区SEQID NO 1和重链可变区SEQ ID NO 3。
8.权利要求7的分子，其中所述聚乙二醇分子共价结合所述抗体片段的绞链区。
9.权利要求1-8中任一项的分子，其中所述聚乙二醇分子具有约0.5kD至约30kD的分子量。
10.权利要求9的分子，其中所述聚乙二醇分子具有约20kD的分子量。
11.由在第13-28位氨基酸之间特异结合人Αβ肽的抗体片段组成的分子，其中所述抗 体片段共价结合聚乙二醇分子。
12.包含具有轻链可变区SEQID NO :1和重链可变区SEQ ID NO :2的抗体片段的分子， 其中所述抗体片段在重链可变区SEQ ID NO 2第56位处共价结合20kD的聚乙二醇分子。
13.组合物，其包含权利要求1-12中任一项的分子。
14.权利要求13的组合物，其还包含可药用载体。
15.治疗或预防与Αβ肽活性相关的病症的方法，所述方法包括向需要其的人受试者 施用有效量的权利要求1-12中任一项的分子。
16.治疗选自临床或临床前阿尔茨海默氏病、唐氏综合症或临床或临床前淀粉样蛋白 血管病(CAA)、认知缺陷、中风、脑溢血和一般性精神衰弱的病症的方法，所述方法包括向人 受试者施用有效量的权利要求1-12中任一项的分子。
17.根据权利要求1-12中任一项的分子用作药物的用途。
18.根据权利要求1-12中任一项的分子在制备用于治疗或预防与Αβ肽活性相关的病 症的药物中的用途。
19.根据权利要求1-12中任一项的分子在制备用于治疗或预防选自临床或临床前阿 尔茨海默氏病、唐氏综合症、临床或临床前淀粉样蛋白血管病(CAA)、认知缺陷、中风、脑溢 血和一般性精神衰弱的病症的药物中的用途。
全文摘要
本发明描述了在预防上和治疗上治疗与Aβ肽活性相关的病症的方法。该方法使用在第13-28位氨基酸之间特异结合人Aβ肽的人源化抗体片段，其中所述抗体片段共价结合聚乙二醇(PEG)分子。
文档编号A61K47/48GK101981053SQ200880002621
公开日2011年2月23日 申请日期2008年1月9日 优先权日2007年1月18日
发明者C-K·乔, J·卢, K·R·贝尔斯, P·C·麦克唐奈, R·B·德马托斯, R·J·汉森, T·F·布摩尔, U·库希波特拉 申请人:伊莱利利公司