抗Muc17抗体的制作方法

专利名称：：抗Muc17抗体的制作方法
技术领域：
：本申请要求基于日本专利申请2007-176319(2007年7月4曰申请)的优先权，将其内容作为参照引入本说明书。本发明涉及抗癌剂及癌症的i貪断方法。
背景技术：
：Mucl7是属于膜型粘蛋白家族的新型粘蛋白，正常组织中的表达限于小肠、大肠[非专利文献l]。胞外域的大部分，包含富含丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸的59mer的共有序列串联重复，一般认为通过4妻受了糖链修饰的粘蛋白结构参与细胞防御。另外，细胞外具有SEA结构域，预测通过切割存在分泌型Muc17[非专利文献l]。另外，有报道指出，不含跨膜结构域的分泌型Mucl7以剪接变体形式存在[非专利文献2]。关于在癌中的表达，已经确认在胰腺癌细胞4朱AsPc-1、大肠癌林NCI-H498、Caco-2、LS174T中，Mucl7基因以RNA水平进行表达。另外，制作针对相当于串联重复序列的Pro-Thr-Thr-Ala-Glu—Gly—Thr—Ser—Met—Pro—Thr—Ser—Thr—Pro—Ser—Glu(序列号38)的多克隆抗体，通过临床胰腺癌组织的免疫染色，确认Mucl7以蛋白水平进行表达[非专利文献2]。本说明书中引用的参考文献如下所示。这些文献中记载的内容全部作为参照引入本说明书。申请人认为这些文献中的任意一篇都不构成本发明的现有技术。非专利文献l:J.R.Gum，Jr.，S.C.Crawley,J.W.Hicks，D.E.Szymkowski，andY.S.Kim，MUC17,anovelmembrane-tetheredmucin.Biochem.Biophys.Res.Commun.，291(2002)466-75.非专利文豸失2:N.Nioniaux，W.M.Junker,A.P.Singh,A.M.Jones,andS.K.Batra，CharacterizationofhumanmucinMUC17.Completecodingsequenceandorganization.J.Biol,Chem.,281(2006)23676-85.
发明内容本发明的目的在于提供一种新型抗体及使用其的抗癌剂以及癌症的i貪断方法。本发明人等获得了一种针对Mucl7胞外近膜区的单克隆抗体，发现此抗体显示ADCC活性，具有通过与毒素缀合而产生的抗肿瘤效果。本发明4是供一种与Mucin17(Mucl7)结合的抗体。优选本发明的抗体不与分泌型Mucl7结合。另外，优选本发明的抗体与序列号3的肽(4176-4390)结合、且与序列号4的肽(4244-4390)及序列号5的肽(4115-4243)不结合。在优选方案中，本发明的抗体具有ADCC活性。另外优选本发明的抗体为嵌合抗体或人源化抗体。另外优选本发明的抗体为低岩藻糖基化抗体。在其它的优选方案中，本发明的抗体识别与具有重链可变区和轻链可变区的抗体(MQ155)识别的抗原决定部位相同的抗原决定部位，所述重链可变区具有序列号23所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有序列号25所示的氨基酸序列。另外，本发明提供一种含有上述本发明的抗体的抗癌剂，优选针对胰腺癌的抗癌剂。另外，本发明提供一种癌症的诊断方法，其特征在于使用上述本发明的抗体，优选使用不与分泌型Mucl7结合的抗体。图l表示正常组织及癌细胞抹中的Mucl7mRNA量。图2表示通过ELISA对嵌合抗Mucl7抗体的结合活性进行的评价。图3表示利用流式细胞仪对嵌合抗Mucl7抗体的结合活性进行的评价。图4表示由对胰腺癌细胞抹的抗Mucl7抗体产生的ADCC活性。图5表示由使用Hum-ZAP的抗Mucl7抗体产生的抗肿瘤效果。图6表示抗Mucl7抗体的抗原决定部位解析。具体实施方式Mucl7Mucl7(AccessionNo.NM—001040105)是包含4，493氨基酸的1型膜蛋白质。编码Mucl7的基因序列如序列号l所示，Mucl7的氨基酸序列如序列号2所示。Mucl7属于膜型的粘蛋白家族，胞外域的大部分包含富含丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸的59mer的串联重复序列的重复单元，被糖链修饰。另外，由具有SEA结构域(4182Glu-4287Asn)预测出蛋白质断裂，一般认为一部分可能以分泌蛋白形式存在。另夕卜，有报道指出存在分泌型的剪接变体(1Met-4241Arg为同一序列)(非专利文献2)。抗Mucl7抗体本发明的抗Mucl7抗体只要与Mucl7结合即可，无论其来源(小鼠、大鼠、人、等)、种类(单克隆抗体、多克隆抗体)及形状(改变抗体、低分子化抗体、修饰抗体、等)等如何。本发明中使用的抗Mucl7抗体优选特异性地与Mucl7结合。另外，本发明中使用的抗Mucl7抗体优选为单克隆抗体。本发明的抗Muc17抗体优选识别并结合Muc17蛋白质的胞外域。Muc17蛋白质的胞外域相当于序列号1的氨基酸序列中的第1-4389个。更优选本发明的Mucl7抗体为与Mucl7蛋白质的胞外域结合、且与分泌型Mucl7不结合的抗体。分泌型Mucl7相当于在序列号2的氨基酸序列中的第l-4241个。本发明的优选方案中，抗Mucl7抗体为与包含序列号3的氨基酸序列的肽(4176-4390)结合、与包含序列号4的氨基酸序列的肽(4244-4390)及包含序列号5的氨基酸序列的肽(4115-4243)不结合的抗体。抗体是否与目标的肽结合可以通过公知的方法测定(AntibodiesALaboratoryManual.EdHarlow，DavidLane，ColdSpringHarborLaboratory,1988)。例如，可以使用ELISA(酶联免疫吸附测定法)、EIA(酶免疫测定法)、RIA(放射免疫测定法)或者荧光免疫法等。更具体而言，可以通过下述实施例记载的方法确认抗体是否与目标的肽结合。作为本发明的抗Muc17抗体的具体例，例如可以举出以下抗体。(1)包含重链可变区的抗体(MQ128),所述重《连可变区具有包含序列号6所示的氨基酸序列的CDR1、包含序列号7所示的氨基酸序列的CDR2及包含序列号8所示的氨基酸序列的CDR3;(2)包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区具有包含序列号9所示的氨基酸序列的CDR1、包含序列号10所示的氨基酸序列的CDR2及包含序列号11所示的氨基酸序列的CDR3;(3)包含(1)的重链可变区和(2)的轻链可变区的抗体；(4)包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含序列号19所示的氨基酸序列；(5)包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含序列号21所示的氨基酸序列；(6)包含(4)的重链可变区和(5)的轻链可变区的抗体；(7)包含重链可变区的抗体(MQ155),所述重链可变区具有包含序列号12所示的氨基酸序列的CDR1、包含序列号13所示的氨基酸序列的CDR2及包含序列号14所示的氨基酸序列的CDR3;(8)包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区具有包含序列号15所示的氨基酸序列的CDR1、包含序列号16所示的氨基酸序列的6CDR2及包含序列号17所示的氨基酸序列的CDR3;(9)包含(7)的重链可变区和(8)的轻链可变区的抗体；(10)包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含序列号23所示的氨基酸序列；(11)包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含序列号25所示的氨基酸序列；(12)包含(10)的重链可变区和(11)的轻链可变区的抗体；(13)识别与(1)至(12)任一项所述的抗体识别的抗原决定部位相同的抗原决定部位的抗体。被检抗体与某抗体共有抗原决定部位，可以通过两者对相同抗原决定部位的竟争来确认。抗体间的竟争可以通过交叉阻断测定(cross-blockingassay)等检测。例如竟争ELISA测定优选为交叉阻断测定(cross-blockingassay)。具体而言，在交叉阻断测定中，在候选竟争抗体存在下或不存在下将涂布在微量滴定板的孔上的Mucl7蛋白质预培养后，添加本发明的抗Mucl7抗体。与孔中的Muc17蛋白质结合的本发明的抗Muc17抗体的量，与对相同抗原决定部位的结合发生竟争的候选竟争抗体(被检抗体)的结合能间接相关。即，被冲全抗体对同一抗原决定部位的亲和性越大，本发明的抗Mucl7抗体对涂布了Mucl7蛋白质的孔的结合量越低，被检抗体对涂布了Mucl7蛋白质的孔的结合量越高与孔结合的抗体量可以通过预先标记抗体而容易地测定d例如，生物素标记的抗体，可以通过使用亲和素过氧化物酶缀合物和适当的基质进行测定。将利用过氧化物酶等酶标记的交叉阻断测定特别地称为竟争ELISA测定。抗体可以用能够4全测或者测定的其它标记物进行标记。具体而言，公知的有放射标记或者荧光标记等。进而，当被检抗体具有来自与本发明抗Muc17抗体不同的种的恒定区时，与孔结合的抗体的量也可以通过识别此抗体的恒定区的标记抗体进行测定。或者，为来自相同种的抗体，但类别不同时，通过识别各类别的抗体，可以测定与孔结合的抗体的量。7如果与在不存在候选竟争抗体的条件下实施的对照试验中得到的结合活性相比，候选抗体能够以至少20%、优选至少20-50%、更优选至少50%阻断抗Mucl7抗体结合，则该候选竟争抗体是结合与本发明抗MUC17抗体实质相同的抗原决定部位的抗体、或者是对向相同的抗原决定部位的结合产生竟争的抗体。本发明中，抗原决定部位可以为任意的抗原决定部位，可以举出立体抗原决定部位、线状抗原决定部位等。细胞毒性作为本发明的抗体的优选方案，可以举出具有细胞毒性的抗体。作为本发明中的细胞毒性，例如可以举出依赖抗体的细胞介导细胞毒性(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity:ADCC)、补体依赖'l"生纟田月包毒'l"生(complement—dependentcytotoxicity:CDC)等。本发明中，所谓CDC活性，是指由补体体系导致的细胞毒性。另一方面，所谓ADCC活性，是指在靶细胞的细胞表面抗原上附着特异性抗体时，存在Fcy受体的细力包(免疫细胞等)通过Fcy受体与其Fc部分结合，对靶细胞赋予毒性的活性。本发明中，可以通过乂/^知方法测定抗体是否具有ADCC活性、或者是否具有CDC活小生(例V,CurrentprotocolsinImmunology,Chapter7.Immunologicstudiesinhumans，Editor,JohnE，Coliganetal.,JohnWiley&Sons,Inc.,(1993)等)。具体而言，首先，配制效应细力包、补体;;容液、i巴细月包。(1)效应细力包的配制从CBA/N小鼠等中摘出脾脏，在RPMI1640培养基(Invitrogen公司制)中分离脾脏细胞。用含有10%胎牛血清(FBS、HyClone公司制)的相同培养基清洗后，将细胞浓度配制成5x106/1111,由此可以配制效应细月包。(2)补体溶液的配制可以将BabyRabbitComplement(CEDARLANE公司制)用含有10。/。FBS的培养基(Invitrogen公司制)稀释10倍，配制补体溶液。(3)靶细胞的配制将表达Mucl7蛋白质的细胞与0.2mCi的51Cr-铬酸钠(GEHealthcareBiosciences公司制)一起在含有10%FBS的DMEM培养基中于37。C下培养1小时，由此可以将该靶细胞进行放射性标记。作为表达Muc17蛋白质的细胞，可以使用用编码Muc17蛋白质的基因转化的细胞、癌细胞(胰腺癌细胞、大肠癌细胞等)等。放射性标记后，将细胞用含有10。/。FBS的RPMI1640培养基清洗3次，将细胞浓度配制成2xl()S/m1,可以配制该靶细胞。ADCC活性、或者CDC活性可以根据下述方法测定。测定ADCC活性时，在96孑LU底培养板(Becton,DickinsonandCompany制)中加入耙细胞和抗Mucl7抗体各50p1,在冰上使其反应15分钟。然后，加入100iil效应细胞，在二氧化碳培养箱内培养4小时。使抗体的最终浓度为0或10叫/ml。培养后，回收100nl的上清液，用y计数器(COBRAIIAUTO-GAMMA、MODELD5005、PackardInstrumentCompany公司制)测定放射活性。使用所得的值根据计算式(A-C)/(B-C)x100,计算细胞毒性(％)。A表示各试样的放射活性(cpm),B表示力口入l%NP—40(nacalaitesque,^司制)的i式才羊的力丈射活性(cpm),C表示只含靶细胞的试样的放射活性(cpm)。另一方面，测定CDC活性时，在96孔平底培养板(Becton,DickinsonandCompany命j)中力口入草巴纟田月包^^元Mucl7^元体各50ji1,在冰上使其反应15分钟。然后，加入100^补体溶液，在二氧化碳培养箱内培养4小时。抗体的最终浓度为0或3(ig/ml。培养后，回收100(il的上清液，用y计数器测定放射活性。可以与ADCC活性测定相同地计算细胞毒性。糖链^奮饰抗体作为本发明的抗体的优选方案，可以举出被糖链修饰的抗体。已知通过修饰抗体的糖链能够增强抗体的细胞毒性。作为被糖链修饰的抗体的例子，例如，可以举出经糖基化修饰的抗体(WO99/54342等)、糖链中附加的岩藻糖缺失的抗体(WO00/61739、WO02/31140、WO2006/067847、WO2006/067913等)、具有含有截开型GlcNAc的糖链的抗体(WO02/79255等)等。作为本发明的优选糖链修饰抗体，可以举出岩藻糖缺失的抗体。的N-糖基结合糖链、和与抗体分子的丝氨酸或苏氨酸的侧链羟基结合的O-糖基结合糖链，本发明中，岩藻糖是否存在与N-糖基结合糖链相关。本发明中，所谓岩藻糖缺失的抗体，是指组合物中的抗体的N-糖基结合糖链中，20%以上、优选50%以上、较优选70%以上、更优选90%以上的N-糖基结合糖链中岩藻糖缺失。岩藻糖缺失的抗体可以通过本领域技术人员公知的方法制作，例如，可以通过在不具有附着a-1,6核心岩藻糖(a-1,6corefucose)的能力或此能力低的宿主细胞中使抗体表达，进行制造。不具有附着岩藻糖的能力或此能力低的宿主细胞没有特殊的限定，例如，可以举出大鼠骨髓瘤YB2/3HL.P2,Gil.16Ag.20细胞(简称YB2/0细胞)(以ATCCCRL1662保存)、FTVIII敲除CHO细胞(WO02/31140)、Lecl3细胞(WO03/035835)、岩藻^f唐转运蛋白缺失细胞(WO2006/067847、WO2006/067913)等。糖链的解析可以采用本领域技术人员公知的方法进行。例如，使N-糖苷酶F(Roche)等作用于抗体，使糖链与抗体分离。然后，通过使用纤维素柱体的固相提取(ShimizuY.etal.,CarbohydrateResearch332(2001),381-388)进行除盐后，浓缩干固，用2-氨基p比口定进4亍荧光才示"i己(KondoA.etal.,AgriculturalandBiologicalChemistry54:8(1990),2169-2170)。通过4吏用纤维素柱体的固相提取将所得的PA化糖链脱去试剂后，离心浓缩，形成纯化PA化糖链。然后，进行利用ODS柱的反相HPLC分析，由此可以测定。另外，也可以在配制PA化糖链后，将利用ODS柱的反相HPLC分析及利用胺柱的正相HPLC分析组合进行二维作图，由此进行测定。嵌合抗体及人源化抗体作为本发明的抗体的其它优选方案，可以举出嵌合抗体或人源化抗体。嵌合抗体是指来源不同的区域之间相互连接的抗体。一般的C区域构成。例如，包含小鼠抗体的重链、轻链的可变区、和人抗体的重链、轻链的恒定区的抗体，为小鼠-人异种嵌合抗体。区i或(CDR:complementaritydeterminingregion)、禾口来自人#元体的构架区(FR:frameworkregion)及来自人抗体的C区构成。由于人源化抗体在人体内的抗原性低，所以作为本发明的治疗剂的有效成分有用。人源化抗体也称作重构(reshaped)人抗体。具体而言，将人以外的动物、例如小鼠抗体的CDR移植到人抗体中的人源化抗体等是公知的。用于得到人源化抗体的一般的基因重组方法也是已知的。具体而言，作为用于将小鼠抗体的CDR移植到人的FR中的方法，例如公知重叠延伸PCR(OverlapExtensionPCR)。在重叠延伸PCR中，将编码应移植的小鼠抗体CDR的碱基序列附着在用于合成人抗体FR的引物上。针对4个FR分别准备引物。一般情况下，在将小鼠CDR向人FR的移植中，选择与小鼠FR同源性高的人FR有利于维持CDR功能。即，一般情况下优选利用下述人FR，该人FR包含与应移植的小鼠CDR邻接的FR的氨基酸序列同源性高的氨基酸序列。另外，连结的碱基序列被设计成框内相互连接。利用各个引物，分别地合成人FR。结果得到了编码小鼠CDR的DNA附着在各FR上的产物。各产物的编码小鼠CDR的碱基序列被设计成相互重叠。接下来，以人抗体基因作为模板合成产物，使该产物的重叠CDR部分相互退火，进行互补链合成反应。利用此反应，人FR通过小鼠CDR的序列连结。最终，3个CDR和4个FR连结的V区基因，通过在5，末端和3，末端退火且附着适当的限制酶识别序列的引物，将其全长扩增。将如上所述得到的DNA和编码人抗体C区的DNA插入表达载体中使其框内ii融合，由此可以制作人型抗体表达用载体。将该重组载体导入宿主，建立重组细胞后，培养该重组细胞，通过使编码该人源化抗体的DNA表达，在该培养细胞的培养物中产生该人源化抗体(参见欧州专利公开EP239400、国际公开W096/02576)。定性或者定量地测定、评价如上所述制作的人源化抗体与抗原的结合活性，由此能够适当地选择出在通过CDR连结时该CDR形成良好的抗原结合部位的人抗体FR。根据需要，也可以取代FR的氨基酸残基使重构人抗体的CDR形成适当的抗原结合部位。例如，应用在将小鼠CDR向人FR中移植时使用的PCR法，能够向FR中导入氨基酸序列的突变。具体而言，能够向使FR退火的引物中导入部分的碱取代氨基酸的突变型抗体与抗原的结合活性采用上述方法进行测定、评价，由此能够选择具有所期望的性质的突变FR序列(Sato，K.etal.，CancerRes,1993，53，851-856)。二价抗体、低分子化抗体、修饰抗体本发明的抗Mucl7抗体只要与Mucl7蛋白质结合即可，不仅包括以IgG为代表的二价抗体，也包括一价抗体、或以IgM为代表的多价抗体。本发明的多价抗体中包括具有全部相同的抗原结合部位的多价抗体、或、具有部分或全部不同的抗原结合部位的多价抗体。另外，本发明的抗体不限于全长分子的抗体，只要与Mucl7蛋白质结合即可，也可以为低分子化抗体或其修饰物。低分子化抗体包括全长抗体(wholeantibody、例如wholeIgG等)的部分缺失的抗体片段。只要具有与Mucl7抗原的结合能力即可，允许抗体分子部分缺失。本发明的抗体片段优选含有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)中的任一个、或两者。VH或VL的氨基酸序列可以包括取代、缺失、添加及/或者插入。并且只要具有与Muc17抗原的结合能力即可，也可以使VH及VL中的任一个或两者的一部分缺失。另外，可变区也可以嵌合化或人源化。作为抗体片段的具体例，例如，可以举出Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv等。另夕卜，作为低分子^1^元体的具体例，伊H口，可以举出Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv、scFv(单链Fv)、双链抗体(Diabody)、sc(Fv)2(单链(Fv)2)等。上述抗体的多聚体(例如，二聚体、三聚体、四聚体、聚合物)也包含在本发明的低分子化抗体中。抗体的片段可以通过用酶处理抗体使抗体片段生成而获得。作为产生抗体片段的酶，例如公知木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、或者纤溶酶等。或者，可以构筑编码上述抗体片段的基因，将其导入表达载体后，使其在适当的宿主细胞中表达(例如，参见Co,M.S.etal.,J,Immunol,(1994)152,2968—2976、Better,M.&Honvitz,A.H.MethodsinEnzymology(1989)178,476-496、Plueckthun,A.&Skerra,A.MethodsinEnzymology(1989)178，476-496、Lamoyi,E.,MethodsinEnzymology(1989)121，652-663、Rousseaux,J.etal.，MethodsinEnzymology(1989)121,663-669、Bird,R.E.etal.,TIBTECH(1991)9,132-137)。双链抗体是指通过基因融合构筑的二价(bivalent)的抗体片段(HolligerPetal.，Pro"Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)、EP404，097号、W093/U161号等)。双链抗体是由2条多肽链构成的二聚体。通常，构成二聚体的多肽链分别在相同的链中VL及VH通过连接体结合。一般情况下，双链抗体中的连接体在VL和VH不能相互结合的部位很短。具体而言，构成连接体的氨基酸残基例如为5个残基左右。因此，在同一多肽链上编码的VL和VH,不能形成单链可变区片段，与其它单链可变区片段形成二聚体。结果双链抗体具有2个抗原结合部位。scFv通过将抗体的H链V区和L链V区连结而得到。scFv中，H链V区和L链V区通过连接体、优选通过肽连接体连结(Huston,J.S.etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,1988，85，5879-5883.)。scFv中的H链V区及L链V区虽然在本说明书中记载为抗体，但也可以来自任意的抗体。连结V区的肽连接体，没有特殊的限制。例如可以使用包含3至25个残基左右的任意的单链肽作为连接体。13sc(Fv)子化抗体(Hudsonetal、JImmunol.Methods1999;231:177-189)。sc(Fv)2可以通过例如将scFv用连接体连4妄来制作。并且，本发明的抗体也可以以与聚乙二醇(PEG)或细胞毒性物质等各种分子结合的抗体修饰物的形式使用。上述抗体修饰物可以通过对本发明的抗体实施化学修饰而得到。抗体的修饰方法在本领域中已经确立。作为与本发明的抗体结合的细胞毒性物质，可以举出毒素、放射性物质、化疗剂(chemotherapeuticagents)等。细胞毒性物质包括在生物体内变为活性的细胞毒性物质的前体药物。前体药物的活性4匕可以为酶转^f匕(enzymaticconversion)，也可以为非酶寿争4b(non-enzymaticconversion)。本发明中,所谓毒素,是指来自微生物、动物或者植物的显示细胞毒性的多种蛋白质或多肽等。另外，本发明中所谓放射性物质是指含有放射性同位素的物质。放射性同位素没有特殊的限定，可以使用任意的放射性同位素。另外，本发明中所谓化疗剂是指除上述毒素、放射性物质以外的具有细胞毒性的物质。化疗剂包括细胞因子、抗肿瘤剂、酶等。并且，本发明的抗体也可以为双特异性抗体(bispecificantibody)。所谓双特异性抗体，是指在同一抗体分子内具有识别不同抗原决定部位的可变区的抗体，该抗原决定部位可以存在于不同的分子中、也可以存在于同一分子中。即，在本发明中，双特异性抗体可以具有识别Mucl7蛋白质上的不同抗原决定部位的抗原结合部位。上述双特异性抗体中，相对于l分子的Muc17,可以结合2分子的抗体分子。结果能够期待更强的细胞毒性。本发明中的"抗体"也包i舌上述抗体。另外，在本发明中，也可以包含识别Mucl7以外的抗原的双特异性抗体。例如，可以包含识别与Mucl7不同的抗原的双特异性抗体，所述抗原是与Mucl7相同地在靶癌细胞的细胞表面特异性表达的抗原。用于制造双特异性抗体的方法是公知的。例如，使识别抗原不同的2种抗体结合，可以制作双特异性抗体。结合的抗体可以分别为具有H链和L链的1/2分子、也可以为仅具有H链的1/4分子。或者，也可以使产生不同的单克隆抗体的杂交瘤融合，制作产生双特异性抗体的融合细胞。并且，可以利用基因工程学方法制作双特异性抗体。抗体的制造方法
技术领域：
：本发明的抗Muc17抗体可以采用公知的方法获得。作为本发明的抗Mucl7抗体，特别优选来自哺乳动物的单克隆抗体。来自哺乳动物的单克隆抗体，包括由杂交瘤产生的单克隆抗体、以及由宿主产生的单克隆抗体等，所述宿主采用基因工程学方法用含有抗体基因的表达载体进行了转化。产生单克隆抗体的杂交瘤可以使用公知技术、例如如下所示地制作。首先，使用Mucl7蛋白质作为敏化抗原，按照通常的免疫方法将其免疫。采用通常的细胞融合法使从免疫动物中得到的免疫细胞与公知的亲细胞融合，得到杂交瘤。进而，利用通常的筛选法，从此杂交瘤中筛选产生目标抗体的细胞，由此可以选择出产生抗Muc17抗体的杂交瘤。具体而言，单克隆抗体的制作例如可以如下所示进行。首先，通过表达Mucl7基因，可以得到Mucl7蛋白质，用作获得抗体的敏化抗原。人Muc17基因的石咸基序列被以GenBank注册号NM—001040105(序列号l)等公开。即，将编码Mucl7的基因序列插入公知的表达载体中，转化适当的宿主细胞后，可以采用公知的方法从此宿主细胞中或培养上清液中纯化目标人Mucl7蛋白质。另外，纯化的天然的Muc17蛋白质也可以同样地使用。可以通过组合或者单独使用1次或者多次通常的离子层析或亲和层析等多种层析法进行生成。另外，也可以如本发明中所用，将融合蛋白质用作免疫原，所述融合蛋白质是将Muc17蛋白质的所期望的部分多肽与不同的多肽融合得到的。为了制备为免疫原的融合蛋白质，例如可以使用抗体的Fc片段或肽15标记等。表达融合蛋白质的载体，可以通过使编码所期望的二种或者二种以上的多肽片段的基因框内融合，并如上所述地将该融合基因插入表达载体中，进行制作。融合蛋白质的制作方法记载于MolecularCloning2nded.(Sambrook,J.etal.,MolecularCloning2nded.,9.47-9.58,ColdSpringHarborLab.Press，1989)。如上所示纯化的Mucl7蛋白质可以用作对哺乳动物进行免疫时使用的敏化抗原。另外，Mucl7的部分肽也可以用作敏化抗原。例如，可以将如下所述的肽用作敏化抗原。通过化学合成由人Mucl7的氨基酸序列获得的肽；通过将人Mucl7基因的一部分参入表达载体使其表达而获得的肽；通过用蛋白质分解酶分解人Mucl7蛋白质而获得的肽。作为部分肽使用的Muc17的区域及大小没有限定。优选区域可以选自构成Muc17的胞外域的氨基酸序列(序列号2的氨基酸序列中第1-4389)。构成形成敏化抗原的肽的氨基的数量优选至少3以上、例如5以上、或者6以上。更具体而言，可以将8~50、优选1030残基的肽用作敏化抗原。用该敏化抗原免疫的哺乳动物没有特殊的限定。为了通过细胞融合法得到单克隆抗体，考虑到与细胞融合中使用的亲细胞的相容性，优选选择免疫动物。一般情况下，作为免疫动物优选啮齿动物。具体而言，可以将小鼠、大鼠、仓鼠、或者家兔用作免疫动物。此外，也可以将猴等用作免疫动物。上述动物可以-接照^^知的方法通过^:化抗原免疫。例如，作为一般的方法，可以通过腹腔内或皮下注射敏化抗原对哺乳动物进行免疫。具体而言，每隔4至21日向哺乳动物多次给与该敏化抗原。敏化抗原可以用PBS(Phosphate-BufferedSaline)或生理盐水等以适当的稀释倍率稀释，用于免疫。并且，可以与佐剂一起给与敏化抗原。例如可以与弗式完全佐剂(Freund，scompleteadjuvant)混合、乳化，形成敏化抗原。另外，用敏化抗原免疫时可以使用适当的载体。特别是分子量小的部分肽用作敏化抗原的情况下，优选使该敏化抗原肽与白蛋白、匙孑L血蓝蛋白(keyholelimpethemocyanin)等载体蛋白质结合进行免疫。如上所述将哺乳动物免疫，确认血清中的所期望的抗体量升高后，从哺乳动物中采取免疫细胞，进行细胞融合。作为免疫细胞，特别优选使用脾细胞。作为与上述免疫细胞融合的细胞，使用哺乳动物的骨髓瘤细胞。骨髓瘤细胞优选具备用于筛选的适当的选择标记。所谓选择标记，是指在特定的培养条件下能够生存(或者不能生存)的特性。选择标记中公知有次黄嘌呤-鸟噤呤转磷酸核糖激酶缺失(以下简称HGPRT缺失)、或者胸苷激酶缺失(以下简称TK缺失)等。HGPRT或TK缺失的细胞，具有次黄。票呤-氨基蝶呤-胸苷敏感性(以下简称HAT敏感性)。HAT敏感性的细胞在HAT选择培养基中不能进行DNA合成，而死亡，但如果与正常的细胞融合，则可以利用正常细胞的补救途径(salvagepathway)继续DNA的合成，因此在HAT选择培养基中也可以增殖。HGPRT缺失的细胞可以用含有6-巯基鸟噪呤、8-氮鸟嘌呤(以下简称为8AG)的培养基进行选择，而TK缺失的细胞可以用含有5，-溴脱氧尿苷的培养基进行选择。正常的细胞因将这些嘧啶类似物参入DNA中而死亡，但是缺失这些酶的细胞由于不参入上述嘧啶类似物，所以能够在选择培养基中生存。另外一个称为G418耐性的选择标记，由于存在新霉素耐性基因而赋予对2-脱氧链霉胺(2-deoxystreptamine)类抗生素(庆大霉素类似物)的耐性。7>知有多种适合细胞融合的骨髓瘤细胞。例如，可以使用P3(P3x63Ag8.653)(J.Immunol.(1979)123，1548-1550)、P3x63Ag8U.1(CurrentTopicsinMicrobiologyandImmunology(1978)81,1-7)，NS國l(Kohler,G.andMilstein，C.Eur.J.Immunol.(1976)6,511-519),MPC-11(Margulies,D.H.etal.，Cell(1976)8,405-415),SP2/0(Shulman,M.etal.，Nature(1978)276，269-270)，FO(deSt.Groth,S.F.etal.,J.Immunol.Methods(1980)35,1-21),S194(Trowbridge,I.S.J.Exp.Med.(1978)148，313-323),R210(Galfre，G.etal.，Nature(1979)277，131-133)等之类的骨髓瘤细胞。上述免疫细胞和骨髓瘤细胞的细胞融合可以按照公知的方法、例^口Kohler和Milstein等的方法(Kohler.G.andMilstein，C.、MethodsEnzymol.(1981)73，3-46)等进行。更具体而言，例如可以在细胞融合促进剂的存在下在通常的营养培养液中进行上述细胞融合。作为融合促进剂，例如可以使用聚乙二醇(PEG)、仙台病毒(HVJ)等。进而，根据期望也可以加入二曱基亚砜等辅助剂来提高融合效率。免疫细胞和骨髓瘤细胞的使用比例可以任意设定。例如，优选使免疫细胞为骨髓瘤细胞的1至10倍。作为上述细胞融合中使用的培养液，例如，可以使用适用于上述骨髓瘤细胞抹的增殖的RPMI1640培养液、MEM培养液、以及此类细胞培养中使用的常用培养液。并且，可以向培养液中加入胎牛血清(FCS)等血清补液(serumsupplement)。细胞融合是将规定量的上述免疫细胞和骨髓瘤细胞在上述培养液中充分混合，混合预先加热至37。C左右的PEG溶液，由此形成为目标的融合细胞(杂交瘤)。细胞融合法中，例如可以以通常30至60%(w/v)的浓度添加平均分子量1000至6000左右的PEG。接下来，添加上述举出的适当的培养液，离心，除去上清，重复上述操作，由此除去在杂交瘤的培育中不优选的细胞融合剂等。如上所述得到的杂交瘤，可以利用适合细胞融合中使用的骨髓瘤具有的选4奪标记的选4奪培养液进行选择。例如HGPRT或TK缺失的细胞可以通过在HAT培养液(含有次黄嘌呤、氨基蝶呤及胸苷的培养液)中培养来进行选择。即，将HAT敏感性的骨髓瘤细胞用于细胞融合时，在HAT培养液中，可以选择性地使成功地与正常细胞进行细胞融合的细胞增殖。使用上述HAT培养液的培养继续进行足以使目标杂交瘤以外的细胞(非融合细胞)死亡的时间。具体而言，一般情况下，通过数日至数周的培养，可以选择出目标杂交瘤。接下来，通过实施常用的有限稀释法，可以进行产生目标抗体的杂交瘤的筛选及单克隆。或者，也可以按照国际公开W003/104453所述的方法制作识别Muc17的抗体。目标抗体的筛选及单克隆优选采用基于公知的抗原抗体反应的筛选方法实施。例如，使抗原与用聚苯乙烯等制成的小球或市售96孔微量滴定板等载体结合，与杂交瘤的培养上清液反应。接着，清洗载体后，使酶标记的二次抗体等反应。如果培养上清液中含有与敏化抗原反应的目标抗体，则二次抗体通过此抗体与载体结合。最终通过检测与载体结合的二次抗体，能够确定在培养上清液中是否存在目标抗体。可以通过有限稀释法等克隆产生具有抗原结合能力的所期望的抗体的杂交瘤。此时，作为抗原，可以优选使用用于免疫的蛋白质以及实质相同的Mucl7蛋白质。例如包含Mucl7的胞外域、或者构成该区域的部分氨基酸序列的寡肽可以作为抗原使用。另外，除了用抗原对人以外的动物进行免疫由此得到上述杂交瘤的方法之外，也可以用抗原将人淋巴细胞敏化得到目标抗体。具体而言，首先在体外将人淋巴细胞用Mucl7蛋白质敏化。然后，使免疫敏化的淋巴细胞与适当的融合配偶体(fusionpartner)融合。融合配偶体可以使用例如来自人的具有永久分裂能力的骨髓瘤细胞(参见特公平l-59878号公报)。利用此方法得到的抗Mucl7抗体，是对Mucl7蛋白质具有结合活性的人抗体。并且，通过向具有人抗体基因的全部基因谱的转基因动物给与作为抗原的Muc17蛋白质也可以得到抗Muc17人抗体。通过与适当的融合配偶体细胞融合或用EB病毒(Epstein-Barrvirus)感染等处理，可以使免疫动物的抗体生成细胞无限增殖化。可以从如上所述得到的无限增殖化细胞中分离出针对Muc17蛋白质的人抗体(参见国际公开W094/25585、W093/12227、W092/03918、W094/02602)。并且，通过对无限增殖化细胞进行克隆，也能够克隆产生具有目标反应特异性的抗体的细胞。将转基因动物作为免疫动物使用时，该动物的免疫系统将人Mucl7识别为异物。所以，能够容易地得到针对人Mucl7的人抗体。如上所述制作的产生单克隆抗体的杂交瘤可以在常用的培养液中传代培养。另外，该杂交瘤也可以在液氮中长期保存。另外，也已知有使用人抗体库，通过淘选得到人抗体的技术。例如，将人抗体的V区作为单链抗体(scFv),通过噬菌体展示法使其在噬菌体的表面表达，能够选择与抗原结合的噬菌体。通过对选择的噬菌体的基因进行解析，可以确定编码与抗原结合的人抗体的V区的DNA序列。确定与抗原结合的scFv的DNA序列后，使该V区序列与所期望的人抗体C区的序列框内融合，然后，插入适当的表达载体，由此可以制作表达载体。通过将该表达栽体导入如上述举出的优选的表达细胞中，使编码该人抗体的基因表达，由此可以获取该人抗体。上述方法已经7>知(国际公开W092/01047，WO92/20791,W093/06213，W093/11236,W093/19172，W095/01438,W095/15388)。将该杂交瘤按照通常的方法进行培养，可以从其培养上清液中得到目标单克隆抗体。或者也可以将杂交瘤给与与其具有相容性的哺乳动物使其增殖，从其腹水中得到单克隆抗体。前者的方法适于得到高纯度的抗体。重组抗体本发明的抗体也可以是能够利用由抗体生成细胞克隆得到的抗体基因制成的重组抗体。通过将克隆的抗体基因参入适当的载体、导入宿主，可以使抗体进行表达。用于抗体基因的分离、向载体的导入、以及宿主细胞转化的方法已经确立(例如，参见Vandamme,A.M.etal.，Eur.J.Biochem.(1990)192,767-775)。例如，可以由产生抗Mucl7抗体的杂交瘤细力包，得到编码抗Mucl7抗体的可变区(V区)的cDNA。为此，通常情况下首先乂人杂交瘤中冲是取总RNA。作为用于从细胞中提取mRNA的方法，例如，可以采用胍超离心法(Chirgwin，J.M.etal.,Biochemistry(1979)2018,5294-5299)、AGPC法(Chomczynski，P.etal.，Anal.Biochem.(1987)162，156—159)等。提取得到的mRNA可以使用mRNAPurificationKit(GEHealthcareBiosciences制)等进行纯化。或者，市场上也销售用于从细胞中直接提取总mRNA的试剂盒，如QuickPrepmRNAPurificationKit(GEHealthcareBiosciences制)等。使用如上所述的试剂盒，也能够从杂交瘤中得到总mRNA。使用逆转录酶由所得的mRNA可以合成编石马^t体V区的cDNA。cDNA可以利用AMVReverseTranscriptaseFirst-strandcDNASynthesisKit(生化学工业社制)等合成。另夕卜，为了cDNA的合成及扩增，可以采用5，-AmpliFINDERRACEKit(Clontech制)及使用PCR的5，-RACE法(Frohman,MA.etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1988)85,8998-9002、Belyavsky,A.etal.，NucleicAcidsRes.(1989)17，2919-2932)。进而，在上述cDNA的合成过程中，可以在cDNA的两末端导入下述的适当的限制酶切位点。从所得的PCR产物中纯化目标cDNA片段，然后，与载体DNA连结。如上所述地制作重组载体，导入大肠菌等中，选择菌落后，由形成了该菌落的大肠菌可以配制所期望的重组载体。接下来，可以通过公知方法、例如双脱氧核糖核酸链终止法等确认该重组载体是否具有目标cDNA的碱基序列。为了得到编码可变区的基因，也可以采用使用可变区基因扩增用引物的PCR法。首先，以提取得到的mRNA作为模板合成cDNA,得到cDNA库。为了方便，在cDNA库的合成中使用市售的试剂盒。实际上，只从少数的细胞中得到的mRNA极其微量，因此将其直接纯化时收率低。所以，通常情况下在添加明确知道不含抗体基因的载体RNA后进行纯化。或者，在能够提取一定量的RNA的情况下，即使仅为抗体生成细胞的RNA也可以高效地提取。例如从10以上、或者30以上、优选50以上的抗体生成细胞中提取RNA时，有时不需要添加载体RNA。21以所得的cDNA库为模板，通过PCR法扩增抗体基因。用于通过PCR法扩增抗体基因的引物是公知的。例如，根据论文(J.Mol.Biol.(1991)222,581-597)等么、开的内容，可以"i殳计出乂、抗'体基因扩增用引物。上述引物随免疫球蛋白的亚类不同而具有不同的碱基序列。所以，以亚类不明的cDNA库作为模板时，进行PCR法需要考虑到所有的可能性。具体而言，例如为了获取编码人IgG的基因时，可以利用能够扩增编码yl~y5作为重链、K链和X链作为轻链的基因的引物。为了扩增IgG的可变区基因，一般情况下3，侧的引物利用在与铰链区相当的部分退火的引物。另一方面，5，侧的引物可以利用适合各亚类的引物。由重链和轻链的各亚类的基因扩增用引物产生的PCR产物，分别形成独立的基因库。利用上述合成的基因库，能够重构包含重链和轻链的组合的免疫球蛋白。以重构的免疫球蛋白对MUC17的结合活性作为指标，能够筛选出目标抗体。更优选本发明的抗体与Mucl7的结合具有特异性。与Mucl7结合的抗体，例如可以如下所示地进行筛选。(1)步骤使包含V区的抗体与Mucl7接触，所述V区被由杂交瘤得到的cDNA编码；(2)步骤检测Mucl7和抗体的结合；及(3)步骤选择与Mucl7结合的抗体。检测抗体和Mucl7的结合的方法是公知的。具体而言，使受试抗体与固定在载体上的Mucl7反应，然后，^吏识别抗体的标记抗体反应。在清洗后，如果检测出载体上的标记抗体，则能够证明该受试抗体与Mucl7结合。标记可以使用过氧化物酶或p-半乳糖苷酶等酶活性蛋白质、或者FITC等荧光物质。为了评价抗体的结合活性，也可以利用表达Mucl7的细胞的固定标本。作为以结合活性为指标的抗体的筛选方法，也可以采用利用噬菌体载体的淘选法。如上所述作为重链和轻链的亚类的基因库获取抗体基因时，利用噬菌体载体的筛选方法是有利的。编码重链和轻链的可变区的基因，通过用适当的连接体序列连结可以形成单链Fv(scFv)。如果将编码scFv的基因插入噬菌体载体，则能够得到在表面表达scFv的噬菌体。使此噬菌体与目标抗原接触，回收与抗原结合的噬菌体时，能够回收编码具有目标结合活性的scFv的DNA。通过根据需要重复此操作，能够将具有目标结合活性的scFv浓缩。得到编码目标抗Mucl7抗体的V区的cDNA后，该cDNA一皮识别插入该cDNA两末端的限制酶切位点的限制酶消化。优选的限制酶识别、消化在构成抗体基因的碱基序列中出现的可能性低的碱基序列。进而，为了将消化片段的l个拷贝以准确的方向插入栽体中，优选提供粘端的限制酶。通过将如上所述被消化的编码抗Muc17抗体的V区的cDNA插入适当的表达载体中，可以得到抗体表达栽体。此时，通过使编码抗体恒定区(C区)的基因、和编码上述V区的基因框内融合，能够得到嵌合抗体。此处，所谓嵌合抗体，是指恒定区和可变区的来源生物不同的产品。所以，除小鼠-人等异种嵌合抗体之外，人-人同种嵌合抗体也包含在本发明的嵌合抗体中。预先向具有恒定区的表达载体中插入上述V区基因，也可以构筑嵌合抗体表达载体。具体而言，例如，在保持编码所期望的抗体恒定区(C区)的DNA的表达载体的5，侧，可以配置消化上迷V区基因的限制酶的限制酶识别序列。将两者用相同组合的限制酶消化，使其框内融合，由此构筑嵌合抗体表达载体。为了制造本发明的抗Mucl7抗体，可以将抗体基因参入表达载体使其在表达控制区的控制下进行表达。所谓用于表达抗体的表达控制区，例如包括增强子和启动子。然后，通过用此表达载体转化适当的宿主细胞，可以得到表达编码抗Muc17抗体的DNA的重组细胞。抗体基因表达时，编码抗体重链(H链)及轻链(L链)的DNA可以分别参入不同的表达载体中。通过将参入H^连和I^连的载体在相同宿主细胞中同时转化(co-tmnsfect),可以4吏具有H链和L链的抗体分子表达。或者，也可以将编码H链及L链的DNA参入单一表达载体，使宿主细胞转化(参见国际公开W094/11523)。已经公知多种宿主和表达载体的组合用于将抗体基因暂时分离、导入适当的宿主制作抗体。上述表达体系均可以用于本发明。使用真核细胞作为宿主时，可以使用动物细胞、植物细胞、或者真菌细胞。具体而言，作为可以用于本发明的动物细胞，例如可以使用哺乳类细胞(CHO、COS、骨髓瘤、BHK(babyhamsterkidney)、Hela、Vero等)、两栖动物类细胞(爪蟾卵母细胞(Xenopuslaevisoocytes)等)、昆虫细胞(sf9、sf21、Tn5等)等。或者作为植物细胞，公知有由来自烟草(Nicotianatabacum)等烟草(Nicotiana)属的细胞产生的抗体基因的表达体系。植物细胞的转化可以利用进行了愈伤组织培养的细胞。进而，作为真菌细胞，可以〗吏用酵母(酿酒酵母(Saccharomycesserevisiae)等酵母菌(Saccharomyces)属、曱酉享毕赤酵母(Pichiapastoris)等Pichia属)、丝状真菌(黑曲霉(Aspergillusniger)等曲霉(Aspergillus)属)等。或者，利用原核细胞的抗体基因的表达体系也是公知的。例如，使用细菌细胞时，本发明可以使用大肠杆菌(E.coli)、枯草菌等细菌细胞。使用哺乳类细胞时，可以构筑表达载体，所述表达载体功能性地结合常用的有效启动子、表达的抗体基因、其3，侧下游的polyA信号。例如作为启动子/增强子，可以举出人巨细胞病毒立即早期启动子/土曾强子(humancytomegalovirusimmediateearlypromoter/enhancer)。另外，除此之外作为在本发明的抗体的表达中可以4吏用的启动子/增强子，可以举出病毒启动子/增强子、或者来自人延伸因子la(HEFlot)等哺乳类细胞的启动子/增强子等。作为能够利用启动子/增强子的病毒，具体而言可以给出逆转录病毒、多瘤病毒、腺病毒、猴肾病毒40(SV40)等。使用SV40启动子/增强子时，可以利用Mulligan等的方法(Nature(1979)277，108)。另外，HEFla启动子/增强子按照Mizushima等的方法(NucleicAcidsRes.(1990)18,5322)可以容易地用于目标基因表达。大肠杆菌的情况下，功能性地结合常用的有效启动子、用于抗体分泌的信号序列及表达的抗体基因，可以表达该基因。作为启动子，例如可以举出lacZ启动子、araB启动子。使用lacZ启动子时，可以采用Ward等的方法(Nature(1989)341,544-546;FASEBJ.(1992)6,2422-2427)。或者，araB启动子通过Better等的方法(Science(1988)240，1041-1043)可以用于目标基因的表达。作为用于抗体分泌的信号序列，在大肠菌的周质中产生时可以使用pe旧信号序列(Lei,S.P.etal.,J.Bacteriol.(1987)169，4379)。然后，将在周质中产生的抗体分离后，使用如尿素的盐酸胍之类的蛋白质变性剂，由此改组(重折叠)抗体的结构使其具有所期望的结合活性。作为插入表达载体的复制起源，可以使用来自SV40、多瘤病毒、腺病毒、牛乳头瘤病毒(BPV)等的复制起源。进而，为了在宿主细胞体系中扩增基因拷贝数，可以向表达载体中插入选择标记。具体而言，可以使用氨基糖普转移酶(APH)基因、胸苷激酶(TK)基因、大肠杆菌黄嘌呤鸟。票呤磷酸核糖基转移酶(Ecogpt)基因、二氢叶酸还原酶(dhfr)基因等选择标记。将上述表达载体导入宿主细胞，将转化的宿主细胞在体外或体内培养，产生目标抗体。宿主细胞的培养可以按照公知的方法进行。例如，作为培养液，可以使用DMEM、MEM、RPMI1640、IMDM，也可以并用胎牛血清(FCS)等血清补液。如上所述表达、产生的抗体可以通过单独使用或者适当地组合使用在通常的蛋白质的纯化中采用的公知方法进行纯化。例如，通过对A蛋白柱等亲和柱、色谱柱、过滤、超滤、盐析、透析等进行适当选一奪、组合，可以分离、纯4匕抗体(AntibodiesALaboratoryManual.EdHarlow,DavidLane,ColdSpringHarborLaboratory,251988)。另外，重组型抗体的生成过程中，除了上述宿主细胞之外，也可以使用转基因动物。即，由导入了编码目标抗体的基因的动物可以得到该抗体。例如，抗体基因通过框内插入到编码在乳汁中固有产生的蛋白质的基因的内部，构筑成融合基因。作为乳汁中分泌的蛋白质，例如，可以使用山羊p酪蛋白等。将含有插入了抗体基因的融合基因的DNA片段注入山羊的胚中，将该注入胚导入雌性山羊中。由接受该胚的山羊生出转基因山羊(或其子孙)，从该转基因山羊产生的乳汁中能够作为与乳汁蛋白质的融合蛋白质得到所期望的抗体。另外，为了使由转基因山羊产生的含有所期望抗体的乳汁量增加，可以适当对转基因山羊使用激素(Ebert，K.M.etal.，Bio/Technology(1994)12,699-702)。作为本发明的重组抗体的C区，可以使用来自动物抗体的C区。例如作为小鼠抗体的H链C区，可以使用Cyl、Cy2a、Cy2b、C"、C|i、C5、Cal、Ca2、Ce,作为L链C区可以使用Ck、CX。另夕卜，作为除小鼠抗体以外的动物抗体，可以使用大鼠、家兔、山羊、绵羊、骆驼、猴子等的动物抗体。上述序列是公知的。另外，为了改善抗体或其生成的稳定性，可以对C区进行修饰。药物组合物本发明揭—供一种含有上述抗Mucl7抗体作为有效成分的药物组合物。另外，本发明涉及一种含有上述抗Mucl7抗体作为有效成分的抗癌剂。本发明的抗癌剂，优选给与患有癌症的对象或可能复发的对象。另外，本发明中，除了含有抗Mucl7抗体作为有效成分的抗癌剂之外，还提供了一种包含向治疗对象给与抗Mucl7抗体的步骤的预防或治疗癌症的方法，或在抗癌剂的制造中抗Muc17抗体的应用。利用本发明的抗癌剂治疗的癌症的种类没有特殊的限制，通常、为Mucl7蛋白质表达的癌症，优选为胰腺癌或大肠癌。本发明中，所谓"含有抗Mucl7抗体作为有效成分"，是指含有26抗MUC17抗体作为主要的活性成分，并不限制单克隆抗体的含有率。并且，本发明的药物组合物、或者抗癌剂中，根据需要可以配合多种抗体。例如，通过制成多种抗Mucl7抗体的混合物，可能能够增强对Mucl7表达细胞的细胞毒性。或者，除抗Mucl7抗体之外，通过配合识别其它肺瘤相关抗原的抗体，也可以提高治疗效果。另夕卜，也可以为含有抗Mucl7抗体和识别抗人IgG抗体等抗Mucl7抗体的抗体的药物组合物。优选毒素、放射性物质、化疗剂等细胞毒性物质与识别抗人IgG抗体等抗Muc17抗体的抗体结合。本发明的药物组合物、或者抗癌剂可以通过口服、非口服给药中的任一种方式给与患者。优选非口服给药。作为相关的给药方法，具体而言，可以举出注射给药、经鼻给药、经肺给药、经皮给药等。作为注射给药例，例如，可以通过静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射等全身或局部地给与本发明的药物组合物。另夕卜，可以根据患者的年龄、症状选择适当的给药方法。作为给药量，例如，在每一次给药每lkg体重为0.0001mg至1000mg的范围内选择给药量。或者，例如，在每位患者为0.001至100000mg/body的范围内选择给药量。但是，本发明的药物组合物并不限定于上述给药量。本发明的药物组合物可以按照常用方法进行制剂化(例如，Remington'sPharmaceuticalScience,Latestedition,MarkPublishingCompany,Easton，U.S.A)，也可以同时含有药物中允许的载体或添加物。例如可以举出表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、防腐齐'J、稳定剂、緩沖剂、悬浮剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂等。并且，并不限定于此，可以适当地使用其它常用的载体。具体而言，作为载体可以举出轻质无水硅酸、乳糖、结晶纤维素、甘露醇、淀粉、羧甲基纤维素钙、羧曱基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇缩乙醛二乙氨基乙酸酉旨(polyvinylacetaldiethylaminoacetate)、聚乙烯吡口各步克酮、明月交、中链脂肪酸三甘油酯、聚氧乙烯氬化蓖麻油60、白糖、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐类等。另外，本发明提供一种通过使Mucl7表达细胞和抗Mucl7抗体接触来破坏Muc17表达细胞的方法或者抑制细胞增殖的方法。抗Muc17抗体如上所述。抗Mucl7抗体结合的细胞只要是Mucl7表达的细胞即可，没有特别的限制。本发明的优选Mucl7表达细胞为癌细胞。作为优选的癌细胞可以举出胰腺癌细胞或大肠癌细胞等。本发明中，"接触"可以在体外进行，也可以在体内进行。例如，通过向在试验管内培养的Mucl7表达细胞的培养液中添加抗体进行接触。在此情况下，作为添加的抗体的形状，可以适当地使用溶液或者通过冻结干燥等得到的固体等形状。在以水溶液形式添加时，可以是单纯地仅含抗体的水溶液，也可以是含有例如如上所述的表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、防腐剂、稳定剂、緩沖剂、悬浮剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂等的溶液。添加的浓度没有特殊的限制，但作为培养液中的最终浓度，优选为lpg/ml至lg/ml的范围，较优选为lng/ml至lmg/ml，更优选为l(ig/ml至lmg/ml。另外，在本发明中，"接触"在其它方案中还可以如下进行，即，给与将Mucl7表达细胞移植到体内的非人动物、或内在地具有表达Mucl7的癌细胞的动物。给药方法可以通过口服、非口服给药中的任意一种实施。特别优选为通过非口服给与的给药方法，作为相关的给药方法，具体而言，可以举出注射给药、经鼻给药、经肺给药、经皮给药等。作为注射给药的例子，例如，可以通过静脉内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射等全身或局部地给与本发明的药物组合物细胞增殖抑制剂及抗癌剂。另外，可以根据受试动物的年龄、症状选择适当的给药方法。以水溶液形式给药时，可以为单纯地仅含有抗体的水溶液，也可以是例如含有如上所述的表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、防腐剂、稳定剂、緩沖剂、悬浮剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂等的溶液。作为给药量，例如，可以在每次给药每lkg体重0.0001mg至1000mg的范围内选一奪给药量。或者，例如，在每位患者为0.001至100000mg/body的范围内选择给药量。但是，本发明的抗体给药量并不限定于上述给药量。诊断方法进而，本发明纟是供一种^f吏用抗Mucl7抗体的癌症的"^断方法。利用本发明的方法诊断的癌症只要表达Mucl7即可，没有特殊的限制，但优选为胰腺癌或大肠癌。本发明的诊断方法可以在体外进行，也可以在体内进行，4旦优选在体外进行。4吏用本发明的抗Mucl7抗体的癌症的诊断方法，例如，为包含如下步骤的方法。(a)步骤，提供从受试者采取的试样；(b)步骤，检测(a)的试样中所含的Mucl7蛋白质。在本发明中，所谓检测，包括定量的或定性的检测。定性的检测，包括例如是否存在Mucl7蛋白质的测定、Mucl7蛋白质是否存在一定量以上的测定、将Mucl7蛋白质的量与其它试样(例如，对照试样等)比较的测定等。定量的检测，包括例如Mucl7蛋白质的浓度的测定、Mucl7蛋白质的量的测定等。本发明的被检试样只要是可能含有Mucl7蛋白质的试样即可，没有特殊的限制。具体而言，优选从哺乳类等生物的身体采取的试样。更优选试样为从人体采取的试样。作为被检试样的具体例，例如，可以举出血液、间质液(interstitialfluid)、血浆、血管夕卜液、月S脊液、滑液、胸膜液、血清、淋巴液、唾液、尿、组织等。优选的试样是由从生物的身体采取的组织或细胞固定化的标本或者细胞培养液等被检试样得到的试样。Muc17蛋白质的检测可以通过本领域技术人员公知的方法进行，例如，可以通过》文射免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)、荧光免疫测定(FIA)、发光免疫测定(LIA)、免疫沉淀法(IP)、免疫比浊法(TIA)、蛋白质印迹法(WB)、免疫组织化学(IHC)法、免疫扩散法(SRID)等进行。为参考引用本说明书。实施例以下，通过实施例更详细地说明本发明，但本发明并不限定于这些实施例。实施例l.使用Real-timePCR的mucinl7(Mucl7)的mRNA表达解析胰腺癌细胞才朱AsPcl、Panel、Capanl、BxPC3细月包购自ATCC。按照随附资料所示的条件进行培养，回收与lxlO相当的细胞，使用Trizol(InvitrogerH^司)配制totalRNA。乂寸ljag的totalRNA进行DNaseI(Invitrogen公司)处理后，使用SuperscriptIIIFirstStrandSynthesisSystemforRT-PCR(Invitrogen公司)，以oligo(dT)为引物，合成cDNA。对于表l所示的各种正常组织totalRNA,也采用相同的方法合成cDNA。使用上述所得物，通过使用SYBRGreenI的嵌入法(intercalationmethod)进行Real-timePCR。即,以来自相当于3.3ng的totalRNA的cDNA为模板，对含有SYBR(注册商标)PremixExTaq(Takara社)、正义引物(序列号30)、反义引物(序列号31)的20pl反应液进行33次包含95。C下5秒、60。C下30秒的循环。以将预先纯化的PCR产物为模板的样品为基础，制作标准曲线，由此定量值换算样品的cDNA量。如图l所示，Mucl7的mRNA在为胰腺癌抹的AsPcl内显示高值，正常组织中的表达限于小肠内。[表l]表l.Mucl7基因表达解析中使用的组织<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>实施例2.抗Muc17抗体的制作2-1.编码人Mucl7部分序列的cDNA的克隆Mucl7(AccessionNo.NM—001040105)是包含4，493个氨基酸的l型膜蛋白质(序列号1及2)。Mucl7属于膜型的粘蛋白家族，胞外域的大部分包含富含丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸的59mer的串联重复序列的重复单元，被糖链修饰。另外，根据具有SEA结构域(4182Glu-4287Asn)推测蛋白质被切断，一部分可能以分泌蛋白形成存在。另外，有报道指出存在分泌型的剪接变体(1Met-4241Arg为相同序列)(Maniaux等、J.Biol.Chem.(2006)281,23676-23685)。一般认为对Mucl7具有特异性且与分泌型Mucl7不结合的抗体有可能是胰腺癌的新型治疗药，并着手制作抗Muc17抗体。为了制作在Mucl7的胞外域(lMet-4389Ser)中与Mucl7特异性高的针对C末端部分序歹'J(Mucl7ct,4115Thr-4390Leu)的抗体，克隆该序列。即，以AsPcl的cDNA为模板，将包含在5，端添加了EcoRI识别序列、小鼠抗体的信号序列的正义引物(序列号32)、添加了CpoI识别序列的反义引物(序列号33)、10xKOD-Plus緩冲液、2mMdNTPs、25mMMgS04、KOD-Plus(Takara公司制)的反应液进行5次包含在98。C下10秒、72。C下5秒、68。C下4分钟的循环，进行5次包含在98。C下10秒、7(TC下5秒、68。C下4分钟的循环，进行25次包含在98。C下10秒、68。C下4分钟的循环。经PCR反应生成的扩增产物使用pGEM-TEasyVectorSystemI(Promega公司)插入pGEM-Teasy中。序列通过ABI3730DNAAnalyzer进行确认。2-2.可溶型人Mucl7ct/小鼠IgG2aFc融合蛋白的制作克隆到pGEM-Teasy载体中的Muc17ct基因被EcoRI、Cpol消化，克隆到pMCDN—mlgG2aFc中。pMCDN—mlgG2aFc来自作为哺乳细胞用表达载体的pMCDN,在小鼠CMV启动子(AccessionNo.U68299)下可以诱导表达，参入新霉素耐性基因、DHFR基因。pMCDN—mlgG2aFc中，小鼠H链IgG2a的铰链以下的Fc序列插入pMCDN载体的EcoRI,Notl识別部位，Mucl7ct和mlgG2aFc序列通过CpoI识别序列连结。序列号34表示的序列表示Mucl7ct—mlgG2aFc的碱基序列，序列号35表示的序列表示Mucl7ct—mlgG2aFc的氨基酸序列。采用电穿孔法将pMCDN/Mucl7ct—mlgG2aFc导入DG44细胞(Invitrogen乂^司)中，用500(ig/mLGeneticin进4亍选才奪，由jt匕石角立Mucl7ct—mlgG2aFc连续表达CHO细胞。大量培养连续表达细胞，由培养上清液纯化Mucl7ct—mlgG2aFc蛋白。将培养上清液填充到HiTraprProteinA(GE社制)柱中，用结合緩冲液(20mM磷酸钠(pH7.0))清洗后，用洗脱緩沖液(0.1M甘氨酸-HC1(pH2.7))洗脱。洗脱液通过直接转移到加入中和緩冲液(1MTris-HC1(pH9.0))的试管中来进行中和。然后，利用Superdex200HR26/60(GE公司)进行凝胶过滤，置换为PBS。纯化蛋白的定量使用DCproteinassay(BIO-RAD公司)，以添加的牛IgG为标准进行换算。2-3.抗Mucl7抗体的制作32使用Balb/c小鼠、或者MRL/MpJUmmCrj-lpr/lpr小鼠(以下、MP、L/lpr小鼠、购自日本CharlesP、iver)作为免疫动物。从6周龄开始免疫，初此免疫时配制Mucl7ct—mlgG2aFc使其为100pg/head，使用弗式完全佐齐'J(FCA、Becton,DickinsonandCompany)乳化，将其皮下给药。2周后，将配制为50吗/head的抗体用弗式不完全佐剂(FIA、Becton，DickinsonandCompany)享W匕，并一寻其通过皮下给药。以后每间隔1周进行2至5次追加免疫。最终免疫的4日后，摘出脾脏细胞，与小鼠骨髓瘤细胞P3-X63Ag8Ul(P3U1,购自ATCC)以2l进行混合，通过緩緩地力口入PEG1500(RocheDiagnostics公司)进行细胞融合。小心地加入RPMI1640培养基(GIBCOBRL公司)，稀释PEG1500，进行离心操作，由此除去PEG1500,然后，悬浮在含有10。/oFBS的RPMI1640中，将其以100(JL/well播种到96孔培养板中。第二天，添加含有10。/。FBS、1xHATmediasupplement(SIGMA公司)、0.5xBM-CondimedHIHybridomacloningsupplement(RocheDiagnostics公司)的RPMI1640(以下称为HAT培养基)使其为100piL/we11。2、3日后，将一半的培养液置换为HAT培养基，7日后使用培养上清液进行筛选。通过将Mucl7ct—mlgG2aFc固相化的ELISA进行筛选。利用有限稀释法将阳性克隆单克隆化。通过将不含Muc17ct序列的对照Fc融合蛋白质固相化的ELISA进行评价，由此确立与Mucl7特异性结合的抗体(MQ016、MQ128、MQ155、MQ169)。抗体的同种型使用Isostrip(Roche公司制)确定，均为IgGlkappa。抗体的纯化如下进行在将FBS(UltralowIgG)(GIBCOBRL公司)用作血清的HAT培养基中培养杂交瘤，与上述相同地使用HiTrapProteinGHP由该杂交瘤的培养上清液纯化抗体。使用PD-10柱(Amersham公司)将洗脱成分的緩沖液置换为PBS后，在4。C下保存。纯化抗体的定量使用DCproteinassay(BIO-RAD公司)，以随附的牛IgG为标准进行换算实施例3.抗Mucl7抗体可变区基因序列的确定针于MQ128及MQ155,确定抗体可变区基因的序列。TotalRNA使用RNeasyPlantMiniKits(QIAGEN公司)从l乂107细胞的杂交瘤中提取。使用ling的TotalRNA,利用SMARTRACEcDNAAmplificationKit(CLONTECH公司)、与小鼠IgGl恒定区序列相补的合成寡核苷酸MHC-IgG1(序列号36)或与小鼠K链恒定区碱基序列相补的合成寡核苷酸kappa(序列号37)，扩增5，末端侧基因片段。逆转录反应在42。C下反应1小时30分种。50(iLPCR溶液包含5^iL的10xAclvantage2PCR緩沖液、5(^L的lOxUniversalPrimerAMix、0.2mMdNTPs(dATP，dGTP,dCTP,dTTP)、1iaL的Advantage2PolymeraseMix(以上，CLONTECH公司制)、2.5^L的逆转录反应产物、10pmole的合成寡核苷酸MHC-IgGl或kappa，该PCR溶液在94。C的初期温度下反应30秒，接下来将在94。C下反应5秒、72。C下反应3分钟的循环重复5次，将在94。C下反应5秒、70。C下反应10秒、72。C下反应3分钟的循环重复5次，进而，将在94。C下反应5秒、68。C下反应10秒、72。C下反应3分钟的循环重复25次。最后，将反应产物在72。C下加热7分钟。各PCR产物使用QIAquickGelExtractionKit(QIAGEN公司制)，从琼脂糖凝胶纯化后，克隆到pGEM-TEasy载体中，确定石咸基序列。MQ128的H链可变区的碱基序列如序列号18所示，氨基酸序列如序列号19所示，L链可变区的i咸基序列如序列号20所示，氨基酸序列如序列号21所示。MQ155的H链可变区的碱基序列如序列号22所示，氨基酸序列如序列号23所示，L链可变区的碱基序列如序列号24所示，氨基酸序列如序列号25所示。实施例4.抗Mucl7小鼠-人嵌合抗体的制作将各抗体的H链及L链可变区序列与人H链及人L链恒定区序列连结。对于H链，使用与可变区的5，末端侧碱基序列相补、且具有Kozak序列、Hindm部位的合成寡核苷酸、及具有NheI部位且与3，末端侧碱基序列相补的合成寡核苷酸，进行PCR。对于L链，使用与可变区的5，末端侧碱基序列相补且具有Kozak序列、BamHI部位的合成寡核香酸、及具有BsiWI部位且与3，末端侧;成基序列相补的合成寡核苷酸，进行PCR。在抗体表达质粒pMCDN-Glk中克隆所得PCR产物。pMCDN—Glk具有如下结构在pMCDN载体中克隆人IgGl恒定区，小鼠H链可变区和人H链(yl链)恒定区通过NheI部位连结。另外，其还具有下述结构插入另外的含有小鼠CMV启动子的表达单元、及人K链恒定区，小鼠L链可变区和人L链(K链)恒定区通过BsiWI部位连结。该质粒在动物细胞内表达新霉素耐性基因、DHFR基因、抗Mucl7小鼠-人嵌合化抗体基因。嵌合化MQ155的H链的碱基序列如序列号26所示，氨基酸序列如序列号27所示，嵌合化MQ155的L链的碱基序列如序列号28所示，氨基酸序列如序列号29所示。通过电穿孔将pMCDN—G1k—MQ128、pMCDN_G1k—MQ155导入DG44细胞中。通过用500pg/mLGeneticin进行选择，确立抗Mucl7嵌合抗体连续表达CHO细胞。然后，使用HiTraprProteinA柱从培养上清液中纯化。使用PD-IO柱将緩冲液置换为PBS,通过DCProteinAssay将纯化抗体(chi.MQ128(DG)、chi.MQ155(DG))定量，在4。C下保存。实施例5.低岩藻糖抗Mucl7小鼠-人嵌合抗体的制作作为增强抗体的ADCC活性的方法，已知有改变抗体的糖链的方法。例如，WO99/54342中公开了通过进行抗体糖基化来改良ADCC活性。另外，WO00/61739中公开了通过抗体的糖链中是否存在岩藻糖来调节ADCC活性。WO02/31140中公开了通过在YB2/0纟田月包中产生抗体，配制具有不含a-1，6核心岩藻糖的糖链的抗体。WO2005/017155中，记载有关于敲除了岩藻糖转运蛋白基因的CHO细胞(CHO—FTKO)的实施例，通过使用同样的方法可能产生具有不含a-1，6核心岩藻糖的糖链的抗体。通过电穿孔法将上述构筑的抗Mucl7小鼠-人嵌合抗体表达质粒导入CHO—FTKO细胞(WO2005/017155)中，用500|ig/mLGeneticin进行选4奪，由此确立抗Muc17嵌合抗体连续表达CHO—FTKO细胞。然后，使用HiTraprProteinA柱从培养上清液中纯化。使用PD35-IO柱将緩沖液置换为PBS,通过DCProteinAssay对纯化抗体(chi.MQ128(FTKO)、chi.MQ155(FTKO))进行定量，在4。C下保存。实施例6.通过ELISA对抗Muc17抗体的结合活性的评价将Mucl7ct—mlgG2aFc蛋白质用包被緩冲液(coatingbuffer)(0.1mol/LNaHCO3(pH9.6),0.02%(w/v)NaN3)稀释成l)ag/mL,加入酶标板(immunoplate)中，在4。C下放置一晚，进行包被(coating)。用稀释緩沖液(50mMTris-HCl(pH8.1)，ImMMgCl2,150mMNaCl，0.05%(v/v)Tween20,0.02%(w/v)NaN3,1%(w/v)BSA)进行阻断处理后，加入抗Mucl7抗体，在室温下放置1小时。用漂洗緩冲液(Rinsebuffer)(0.05%(v/v)Tween20，PBS)清洗后，加入碱性磷酸酶标记的抗人K链抗体(Sigma公司、CAT#A3813),在室温下放置l小时。用漂洗緩沖液清洗后，加入用基质緩冲液(50mMNaHCO3(pH9.8)，10mMMgCl2)稀释成1mg/mL的SIGMA104(Sigma公司)，在室温下使其显色l小时，然后，使用BenchmarkPlus(BIO-RAD公司)测定吸光度(405nm，参照655nm)。如图2所示chi.MQ128、chi.MQ155相对于Mucl7ct—mlgG2aFc显示出浓度依赖性的较强的结合活性。由对照的Fc融合蛋白未显示结合活性可以判定其与Mucl7特异性结合。实施例7.通过流式细胞仪进行抗Mucl7抗体的结合活性的评价通过流式细胞4义评价对胰腺癌细胞抹AsPcl的结合。将以5x105细月包/mL悬浮于FACS緩沖液(1%FBS/PBS)中的细胞分配至Multiscreen—HVFilterPlates(Millipore公司)中，通过离心操作除去上清液。加入稀释至适当浓度的抗Mucl7抗体，在冰上4吏其反应30分钟。用FACS緩冲液将细胞清洗1次，添加FITC标记抗人IgG抗体，在冰上使其反应30分钟。反应后，通过离心除去上清液，悬浮在100pLFACS緩冲液中，用于流式细胞仪。流式细胞仪使用FACSCalibur(Becton，DickinsonandCompany)。用前向散射(forwardscatter)及侧向散射(sidescatter)的柱状图在活细胞群中设门(gate)。如36图3所示，chi.MQ128、chi.MQ155与AsPcl细胞牢固地结合。根据不与未表达Mucl7的HepG2细胞结合，推断是与Mucl7特异性的结合。实验例8.抗Mucl7抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的测定8-1)全长人CD16恒定表达细胞的确立将全长的人CD16(RefS叫ID、NM—000569)克隆到哺乳细胞表达用载体(pMCDN)中(pMCDN/CD16)。通过电穿孔法将pMCDN/CD16导入NK-92细胞(购自ATCC,CRL-2407),用500|ig/mlgeneticin进行选择，确立了连续表达全长人CD16的NK-92细胞抹(CD16-NK92)。CD16-NK92细胞培养时使用a-MEM(AlphaMinimumEssentialMedium)(无核苷酸及脱氧核苷酸，含有L-谷氨酰胺)(Invitrogen公司)，所述a-MEM含有500jig/mlgeneticin、青霉素/链霉素(Invitrogen公司)、0.2mM肌醇(Sigma公司)、O.lmM2—疏基乙酉孚(InvitrogeiK^司)、0.02mM叶酸(Sigma乂/^司)、100U/ml重组人白细胞介素-2(Peprotech^〉司)、10%马血清(Invitrogeiy^司)、10%月台牛血5青(Invitrogen7^司)。8-2)抗Mucl7抗体的ADCC活性的测定向96孔平底培养板的各孔中各力口入50iul的8><104细胞/ml的AsPC-l细胞，在5。/。二氧化碳培养箱中于37。C下培养2天。向各孔中分别加入10iil溶液，所述溶液在含有10%胎牛血清、青霉素/链霉素的RPMI1640培养基(以下，称为培养基。)中加入240(iCi/mlCr51(CodeNo.CJS4、GEHealthcareBiosciences公司)，继续培养l小时。将各孔用30(V1培养基清洗后，添加100)il培养基。然后，加入抗Mucl7抗体或对照的人IgGl抗体(Cat.No.PHP010、Serotec公司)各50iaL。通过从10pg/ml开始以公比为10连续3阶段稀释来调节抗体的最终浓度。接着，各添加50jil以lxl(^细胞/ml悬浮在培养基中的CD16-NK92细胞。该培养板在5%二氧化碳培养箱中于37。C下培养4小时后，用y计数器(1480WIZARD3"、Wallac公司)測定100)lU上清液的放射活性。根据下式确定特异性铬释放率。特异性铬释放率(％)=(A-C)xl00/(B-C)A表示各孔的放射活性(cpm),B表示添加了100i!l的2。/。NonidetP-40溶液(CodeNo.252-23、NacalaiTesque公司)的孔的放射活t.l画/、,T,L人八士一—.Vfr丄-"，八八，t"iit4H"",/—2_:2-ALL,L/"、'r王、cpmj日、j"T》J1且，l恭不《、v力yj丄介丞曰'、j《l>日'、j刀人潛^百'i王、cpm,的平均值。试验进行两次，计算出特异性铬释放率的平均值及标准偏差。测定Chi.MQ128(DG)、chi.MQ155(DG)、chi.MQ128(FTKO)、chi.MQ155(FTKO)的ADCC活性，结果仅chi.MQ155(FTKO)显示ADCC活性(图4)。实施例9.由使用Hum-ZAP的抗Muc17抗体产生的抗肺瘤效果接下来，使用Hum-ZAP对以Mucl7为靶的免疫毒素是否能够显示抗肿瘤效果进行评价。Hum-ZAP是使作为蛋白合成抑制毒素的皂草素与抗人IgG抗体结合的物质，使用AdvancedTargetingSystems社制的H画-ZAP。在前一日，将表达Mucl7的癌细胞抹AsPcl细胞以2000细月包/100pL/孑l^番种到96孑Li咅养才反中，力口入100ng的Hum—ZAP和0、1、10、100ng抗Mucl7嵌合化抗体(chi.MQ155)的混合物。i告养72小时后，力口入10jiL的Ce11CountReagentSF(NacalaiTesquV^司)，2小时后测定450nm的吸光度。如图5所示，单独使用Hum-Zap未呈现增殖抑制，抗Muc17抗体的浓度依赖性地呈现抗肿瘤效果。[实施例IO]抗Mucl7抗体的抗原决定部位解析为了对制作的抗Mucl7抗体的抗原决定部位进行解析，制作Mucl7部分序列和GST的融合蛋白质。进行PCR扩增，在Mucl7基因的4115Thr-4390Leu的区域的上游附加EcoRI识别序列、下游附加Sall识别序列，克隆到pGEX4T-3(TAKARA社)中。将其导入BL21,制作转化体。用LB培养基进行培养，在对数增殖期内添加IPTG使其为lmM，在室温下培养4小时。然后，回收菌体，用B-PER(PIERCE社)溶解，配制包含体级分。用变性緩沖液(8M尿素，300mMNaCl，50mMTris-HC1(pH8.0),5mMDTT)溶解后，置换为重折叠緩冲液(50mMTris-HC1(pH8.0)，300mMNaCl，lmMEDTA,5mMDTT),由此进行重折叠。溶解的GST融合蛋白质使用GlutathioneSepharoseFF柱(GE社)进行亲和纯化。使用PD-10柱(GE社)交换为PBS后，通过DCProteinAssay进行定量。按照相同的方法，制作GST—Mucl7ct—dell(4176Ile-4390Leu)，GST—Muc17ct—del2(4244Ser-4390Leu)，GST—Muc17ct—del3(4115Thr-4243Gly)(图6)。将纯化的GST融合蛋白质以l|ag/mL固定在酶标板上。阻断处理后，添加3pg/mL浓度的抗Mucl7抗体，按照上述方法实施ELISA,进行抗原决定部位解析。虽然显示抗肿瘤效果的MQ155与GST—Mucl7ct、GST—Muc17ct—dell牢固结合，但GST—Mucl7ct—del2、GST—Mucl7ct—del3不显示结合活性(图6)。据此认为MQ155的抗原决定部位位于包围SEA结构域内的切断预测部位的区域。预测Muc17的分泌型以SEA结构域的切割或者剪接变体的形式存在。由于预测MQ155不与分泌型Mucl7结合，所以预测作为治疗用抗体给与时，不会被分泌型捕获，到达癌细胞。一般认为具有上述抗原决定部位的抗体有望成为治疗用抗体。通过同样的解析，判定MQ016的抗原决定部位存在于4115-4243的区域，MQ169的抗原决定部位存在于4244-4390的区域。权利要求1、一种与Mucin17(Muc17)结合的抗体。2、如权利要求l所述的抗体，其特征在于，所述抗体不与分泌型Mucl7结合。3、如权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体与序列号3的肽(4176-4390)结合、且不与序列号4的肽(4244-4390)及序列号5的肽(4115-4243)结合。4、如权利要求13中任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体具有ADCC活性。5、如权利要求14中任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体为嵌合抗体或人源化抗体。6、如权利要求15中任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体为低岩藻糖基化抗体。7、一种抗体，所述抗体识别与具有重链可变区和轻链可变区的抗体识别的抗原决定部位相同的抗原决定部位，所述重链可变区具有序列号23所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有序列号"所示的氨基酸序列。8、一种抗癌剂，含有权利要求17中任一项所述的抗体。9、如权利要求8所述的抗癌剂，其特征在于，所述癌症为胰腺癌。10、一种癌症的诊断方法，其特征在于，使用与Mucl7结合的抗体。11、如权利要求10所述的诊断方法，其特征在于，所述癌症为胰腺癌。12、如权利要求10或11所述的诊断方法，其特征在于，抗体为不与分泌型Mucl7结合的抗体。全文摘要本发明公开了一种与Mucin17(Muc17)结合的抗体。优选本发明的抗体与序列号3的肽结合、且不与序列号4的肽及序列号5的肽结合。本发明还公开了一种抗癌剂、优选为针对胰腺癌的抗癌剂，其中含有本发明的抗体，并且公开了一种癌症的诊断方法，其特征在于使用本发明的抗体，优选使用不与分泌型Muc17结合的抗体。文档编号A61K39/395GK101687924SQ200880023060公开日2010年3月31日申请日期2008年7月3日优先权日2007年7月4日发明者中野清孝申请人:株式会社未来创药研究所