专利名称：：新型苯乙烯基色酮类化合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于生物医药领域，具体涉及一种苯乙烯基色酮类化合物及其制备方法和用途。
背景技术：
：目前，具有2-苯乙烯色酮(2-styrylchromone)结构的天然产物只从海洋的藻类生物C720^o//7aewmtoy/on'中获得，分另ll是Hormothamnione及6-Desmethoxyhormothamnione,文献报道这两种天然产物皆具有抗癌活性(结构如下)，但为微量成分。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>Hormothamnione(R=OMe);6-Desmethoxyhormothamnione(R=H)从陆生高等植物中分离得到的2-苯乙烯色酮类化合物未见报道，本专利首次公开了其在悬铃木属植物中的发现，且来源较丰富。肿瘤和细菌及真菌感染为现代临床常见病，发病率呈逐年上升趋势，本发明为临床提供价格低廉、安全有效的抗肿瘤和抗感染药物、药物中间体或保健品，具有很好的开发前景。
发明内容本发明的目的是提供一种具有药用价值的新型苯乙烯基色酮类化合物。本发明的另一目的是提供一种上述化合物的制备方法。本发明还有一个目的是提供一种上述化合物的用途。本发明的目的可以通过以下措施达到一种2-苯乙烯基色酮类化合物，具有如下式(I)结构，.OH其中，H3C,化合物1:R,为W化合物2:R,为OH，H，R2为OH;H2C-/=CHR2为"/[3_曱基-2-丁烯基(异戊烯基)];H2C-/CH化合物3:R,为H/\。H[3-曱基-3-丁烯-2-醇-l-基]，R2为OH;H3CH2C-/C——CH化合物4:R,为OH，112为/\H[3-曱基-3-丁烯-2-醇-l-基]。本发明的四个化合物，其结构由紫外，红外，质谱，核磁共振谱综合解析确定，化合物的核^t共振谱数据如下表74位置碳谱氢谱碳谱氢谱碳谱氢谱碳谱氢谱2162.8一162.7—164.3-162.6—3106.86.29(1H)106.86.28(1H)108.16.23(1H)106.76.26(1H)4181.6—181.9—183.2—182.0—5158.4一159.1-160.9-159.4—6110.7一98.26.28(1H)110.1-98.16-25(lH)7161.8一161.7一164.1一162.3—893.16.51(1H)106.0一95.26.5"1H)103.8—9154.9一154.2-157.0-154.9—10103.7一103.9—105.4—104.1—11116.46.91(1H)116.76.94(1H)117.76.90(1H)116.66.94(1H)12137.07.57(1H)136.87.50(1H)138.17.64(1H)137.07.56(1H)13126.0—125.9一127.9—125.9—14'18129.87.58咖129.67.53咖130.77.60(2H)129.67.51(2H)15,17115.86.83咖116.06.86咖116.96.93咖115.96.85咖5<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本发明的化合物是从悬铃木属植物的树皮中分离出的，来源包括悬铃木属的植物，主要包括我国'引种的一球悬铃木(尸/atowwsocc/^wtoto)、二球悬铃木(P/atow^s1acmyb//"Willd)或三球悬铃木(P7a咖wson'e她"s)。本发明还公开了该类苯乙烯基色酮的制备方法以有机溶剂提取悬铃木树皮的粗粉，回收溶剂，得总浸膏，总浸膏用乙醇溶解制成饱和溶液，加水至析出大量沉淀，滤去沉淀，滤液浓缩后上大孔树脂进行洗脱，再经色谱分离得到苯乙烯色酮类的各新化合物。具体方法为取悬铃木CP7a^加ceae)属植物悬铃木的自然脱落的干燥树皮，粉碎，用有机溶剂提取，将提取液制成饱和溶液，加水，至醇浓度30%~60%，析出沉淀，分离上清液，将上清液浓缩至适量体积(如浸膏)，得提取物；将提取物用大孔树脂进行柱层析，以30%~40%、50%、70%、卯％乙醇洗脱，收集50°/。~70%的乙醇洗脱液，减压浓缩，得含苯乙烯色酮的总浸膏。对总浸膏分别经硅胶柱、ds反相中压柱、葡聚糖凝胶LH-20柱、SephadexLH-20、制备柱色谱等反复分离以及重结晶等手^R，即得新化合物l-4。原料可以是一球悬铃木、二球悬铃木、三球悬铃木等悬铃木属行道树的自然脱落的树皮。提取用的有机溶剂可以是乙醇、曱醇、丙酮等。其中乙醇的浓度为75%~95%(v/v)。大孔树脂可以是D101等非极性树脂。细胞实验表明，化合物1-4对体外生长的人肿瘤细胞抹HepG2、SMMC-7721、Hela、KB、K-562、Jurkat、MDA-MB-231、U937均有较好的生长抑制作用。抑菌实验表明化合物l-4对金黄色葡萄球菌、藤黄色八叠球菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌和石膏样毛廯菌均有一定的生长抑制作用。动物急性毒性实验表明，这类化合物小鼠LD50实验剂量大于1.0g/kg未见动物死亡，因此，化合物l-4可作为较为安全的预防或治疗肿瘤或感染的潜在新药，也可作为保健食品，包括作为前体药物或药物合成中间体。本发明为肿瘤和感染的治疗提供安全有效的潜在候选药物，具有很好的开发前景。图1是化合物1的'H-NMR图谱；图2是化合物1的13C-NMR图谱；图3是化合物1的HMBC图谱；图4是化合物1的HSQC图谱；图5是化合物2的'H-NMR图谱；图6是化合物2的13C-NMR图谱；图7是化合物2的HMBC图镨；图8是化合物2的HSQC图谱；图9是化合物3的'H-NMR图谱；图10是化合物3的13C-NMR图谱；图11是化合物3的HMBC图谱；图12是化合物3的HSQC图谱；图13是化合物4的'H-NMR图谱；图14是化合物4的13C-NMR图谱；图15是化合物4的HMBC图谱；图16是化合物4的HSQC图谱。具体实施方式实施例1取二球悬铃木(尸/a/am^acen/o"a)的自然脱落的干燥树皮5公斤，粉碎，用95%乙醇回流提取3-5次，合并提取液，回收乙醇并浓缩至溶液刚出现混浊，加入等体积的水沉淀，过滤，取滤液浓缩至浸膏(约50g)，将浸膏加于已处理好的D101大孔吸附树脂柱上，依次用30%、50%、70%、90%的乙醇洗脱，收集70°/。的乙醇洗脱液得活性部位约10g,将该活性部位用半制备液相色谱分离，收集70%曱醇洗脱的部位(约4g)，将该4g样品用65%的曱醇洗脱，得化合物1(300mg)，化合物2(70mg),化合物3(35mg),化合物4(35mg)。实施例2取一球悬铃木(P/ato"wsocc/cfe"to//)的自然脱落的干燥树皮10公斤，粉碎，用75%乙醇回流提取3-5次，合并提取液，回收乙醇并浓缩成浸膏，加入95。/。乙醇制成饱和溶液，加入适量水至醇浓度约40%~50%,过滤，取滤液浓缩至浸膏(约120g)，将浸膏混悬于少量的40%的乙醇中，加于已处理好的D101大孔吸附树脂柱上，依次用40%、50%、70%、90%的乙醇洗脱，收集70%的乙醇洗脱液得活性部位约25g，将该活性部位用半制备液相色谱分离，用曱醇水洗脱，收集70%曱醇洗脱的部位(约8g),将该8g样品用65%的甲醇洗脱，收集不同的流分，重结晶，得化合物1(700mg)，化合物2(130mg)，化合物3(60mg)，化合物4(50mg)。药效实验1、细胞毒实验HepG2(人肝癌细胞株)HeLa(人宫颈癌细胞林)KB(人鼻咽癌细胞抹)K-562(人红白血病细胞4朱)Jurkat(人T淋巴瘤细胞抹)SMMC-7721(人肝癌细胞抹)MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)U937(人单核白血病细胞)化合物1-4分别用DMSO溶解，用含10%小牛血清1640培养液稀释为5个浓度。将HepG2、Hela、KB、K-562、Jurkat、SMMC-7721、MDA-MB-231、U937细胞分别以5000-10000个/孔的密度接种于96孔板；24小时后，当细胞密度达到70~80%时，加药于接种好的人肿瘤细胞的96孔板上，化合物1-4的终浓度为0.5，2，5，20，50jig/ml，每种细胞设置3个平行样，以紫杉醇和白桦酸为对照组，对照组每种细^i殳置3个平行样，以经DMSO处理的细胞为对阴性照组。混匀后置于37。C、5。/。C02培养箱中继续培养24h;于结束前4h每孔加入20pL浓度为5mg/mlMTT,继续培养4h后离心，吸去上清液，每孔加入二曱基亚石风200)iL溶解液，孩史型混合器振荡10~15min，充分溶解，用酶联免疫;f企测仪于570nm波长处测定光密度OD值，按抑制率计算公式计算抑制癌细胞的百分率。计算生长抑制率各孔数值减去空白孔组平均值后，同组同浓度的各个孔取平均值，计算肺瘤细胞存活率(％)，公式如下(用药组OD值/对照组OD值)xioo%肿瘤细胞生长抑制率(％)=(1-用药组OD值/对照组OD值)xi00%数据以^±S表示，组间比较用t检验。以药物浓度的对数为横坐标，以细胞抑制率为纵坐标绘制半对数曲线，用SPSS软件进行直线回归，计算抑制50%细胞生长的药物浓度(IC50)。a、MTT检测结果显示随着药物作用剂量增加，细胞活力逐渐下降，化合物1-4处理后细胞活力下降到DMSO对照组的1/3到1/4,对于不同的细胞系，其细胞毒作用的有效剂量也不同。从本实验结果看来，化合物l的细胞毒作用的有效剂量在0.5-10jig/ml。ICso值除Jurkat细胞抹外，其余均小于10,化合物对细胞抹的最大抑制率均达到95%以上。化合物1对所选用的癌细胞抹的相应的ICso值见表2。表2、化合物的的细胞IC5Q(ng/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>HepG22.462.683.683.57SMMC-77217.767.545.546.34HeLa7.783.664.653.67KB1.551.981.151.58Jurkat15.1210.6913.1211.98K5629.957.324.335.54MDA-MB-2314.343.158.475.33U937<0.5〈0.5〈0.5〈0.5b、Hoechst33258细胞核染色检测细胞毒作用细胞经Hoechst33258染色后焚光显微镜下观察细胞，以经DMSO处理的细胞为阴性对照组，结果显示阴性对照组细胞胞膜完整，胞质丰富核形态饱满表现为弥散均匀的蓝色荧光。而化合物1-4处理的肿瘤细胞组可见核体积缩小荧光染色增强染色质呈致密浓染的块状或颗粒状荧光以及凋亡小体形成呈现典型的凋亡形态特征。实验结果说明化合物l-4对肿瘤细胞有强烈的细胞毒作用，能够引起细胞凋亡。2、抑菌实验采用肉汤培养基37。C培养24小时后观察实验结果，均以无菌生长为该化合物的最低抑菌浓度。实验表明化合物1-4对金黄色葡萄球菌、藤黄色八叠球菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌和石膏样毛廯菌均有一定的生长抑制作用。实验结果见表3表3、化合物1-4的最小抑菌浓度(MIC;单位ng/ml)金黄色葡萄球菌藤黄色八叠球菌绿脓杆菌痢疾杆菌石膏样毛廯菌10.060.250.500.250.1320.060.250.250.130.2530.300.150.600.150.0440.200.100.050.100.053、毒性试验动物急性毒性实验表明，小白鼠灌胃化合物的实验剂量均大于1.0g/kg,未见动物死亡。10权利要求1、一种新型苯乙烯基色酮类化合物，具有如下式(I)结构，其中，化合物1R1为id="icf0002"file="A2009100303080002C2.tif"wi="26"he="14"top="82"left="59"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>R2为OH；化合物2R1为OH，R2为id="icf0003"file="A2009100303080002C3.tif"wi="26"he="14"top="98"left="83"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>化合物3R1为id="icf0004"file="A2009100303080002C4.tif"wi="27"he="14"top="114"left="59"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>R2为OH；化合物4R1为OH，R2为id="icf0005"file="A2009100303080002C5.tif"wi="27"he="14"top="131"left="83"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>2.—种权利要求1所述的苯乙烯基色酮类化合物的制备方法，其特征在于按下列步骤进行a.取悬铃木的干燥树皮，粉碎，用75%~95%乙醇提取，将提取液制成饱和溶液，加水，除去沉淀；b.将上清液浓缩，采用大孔树脂进行柱层析，以30%~40%、50%、70%、90%乙醇洗脱，浓缩；c.对其中70%乙醇洗脱部分经柱色谱进行分离纯化。3、根据权利要求2所述的苯乙烯基色酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的悬铃木为一J求悬铃木(尸/ato"wocc/^fe"to/^)、二5求悬铃木(/7ato"M<3cm》//aWilld)或三球悬铃木(尸7ato"wson'e幽叫。4、根据权利要求2所述的苯乙烯基色酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的柱色谱为硅胶柱、Qs反相中压柱、葡聚糖凝胶LH-20柱或高效液相制备色谱柱。5、权利要求1所述的苯乙烯基色酮类化合物在制备预防或治疗肿瘤、感染方面的应用。6、权利要求1所述的苯乙烯基色酮类化合物在制备保健食品方面的应用。全文摘要本发明公开了一类新型苯乙烯基色酮类化合物及其制备方法和用途，化合物具有如下式(I)结构，其中，化合物1R<sub>1</sub>为3-甲基-2-丁烯基，R<sub>2</sub>为OH；化合物2R<sub>1</sub>为OH，R<sub>2</sub>为3-甲基-2-丁烯基；化合物3R<sub>1</sub>为3-甲基-3-丁烯-2-醇-1-基，R<sub>2</sub>为OH；化合物4R<sub>1</sub>为OH，R<sub>2</sub>为3-甲基-3-丁烯-2-醇-1-基。本发明的苯乙烯基色酮类化合物可应用于预防或治疗肿瘤、感染方面，以及在制备保健食品方面。文档编号A61P31/00GK101525323SQ200910030308公开日2009年9月9日申请日期2009年3月18日优先权日2009年3月18日发明者刘静涵,洋杨,杨春华申请人:杨春华