专利名称：一种祖师麻总香豆素提取物的制备方法和含量测定方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，主要涉及一种祖师麻总香豆素提取物的制备方法 和含量测定方法。
背景技术：
祖师麻为瑞香科(Thymelaeaceae)瑞香属植物黄瑞香(Daphne giraldiiNitsche)的根皮和茎皮，具有祛风通络、祛瘀止痛之功效，常用于治疗关节风湿痛 等症。民间用于治疗头痛、牙痛、风湿性关节炎、跌打损伤、胃痛、肝区痛及支气管炎等症，俗 称“打的满地上爬，离不开祖师麻”。现代药学研究表明祖师麻含有多种化学成分，如香豆 素类(瑞香素和瑞香苷等)、二萜类(瑞香毒素，12-羟基瑞香毒素，黄瑞香甲素，黄瑞香乙 素、黄瑞香丙素等)、木质素类((士)_ 丁香树脂醇，(-)_松脂酚，(-)_ 二氢芝麻素，(-)_落 叶松树脂醇等)、黄酮类、蒽醌类及留醇类等化学成分。其中，香豆素类成分具有较好的镇 痛、抗急性炎症和抗佐剂性关节炎作用，可广泛用于缓解和治疗各类疼痛、风湿类风湿性关 节炎、关节扭伤挫伤等疾病。中国发明专利申请CN1883618A公开了一种祖师麻有效部位及其制备方法与应 用，该祖师麻有效部位含有药物有效成分祖师麻甲素(即瑞香素)、西瑞香素和瑞香辛，总 香豆素含量为50% 90%。但该专利申请中制备的提取物中杂质含量高且多为黄酮类化 合物，在单用分光光度法测定香豆素类化合物含量时，由于黄酮类化合物在总香豆素测定 的波长下是有吸收的，导致香豆素类化合物的含量检测不准确，有效成分香豆素类化合物 实际含量偏低。
发明内容
因此，本发明的目的在于提供一种祖师麻总香豆素提取物的制备方法，该制备方 法的提取工艺经过进一步优化，制得的祖师麻总香豆素提取物组成明确，杂质含量低，有效 成分含量更高，药效更强，从而降低了服用剂量，减少了副作用。用于实现本发明上述目的的技术方案如下一种祖师麻总香豆素提取物的制备方法，其中包括以下步骤(1)以祖师麻药材为原料，水或 C5低级醇水溶液为溶剂进行提取，制得浸膏；(2)将浸膏与固体稀释剂混合，加入有机溶剂进行提取，回收溶剂得到固体提取 物；或者将浸膏加水悬浮，加入有机溶剂进行萃取，回收溶剂得到固体提取物；(3)将固体提取物加水悬浮，采用大孔吸附树脂层析，首先以水或Q C5低级醇 水溶液为流动相淋洗除杂质，然后以Ci c5低级醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(4)前半部分洗脱液回收溶剂得到固体，即一部分祖师麻总香豆素提取物；后半 部分洗脱液回收溶剂得到的固体加水混悬，再用有机溶剂萃取，有机层回收溶剂得到固体， 即另一部分祖师麻总香豆素提取物。在上述制备方法的步骤(1)中，提取的方法优选为回流或渗漉A (5低级醇水溶液的低级醇浓度可以为0 95% (体积/体积)，优选为30 70% (体积/体积)。在上述制备方法的步骤(2)中，有机溶剂优选为醋酸乙酯、正丁醇和/或水饱和正 丁醇。优选地，上述制备方法的步骤(2)为将浸膏与固体稀释剂混合，加入有机溶剂进行提 取，回收溶剂得到固体提取物；其中，固体稀释剂可以选自淀粉、微粉硅胶、硅藻土、高岭土、 活性炭和白陶土中的一种或多种。在上述制备方法的步骤(3)中，大孔吸附树脂可以选自苯乙烯、苯乙烯-丙烯酸 酯、二苯乙烯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯型树脂中的一种或多种，例如D101、D201、DA201、 HPD300、HPD400、HPD800、FL-l、FL-2和/或AB-8树脂，优选为苯乙烯型或苯乙烯-丙烯酸 酯型大孔吸附树脂；淋洗除杂质使用的低级醇水溶液的低级醇浓度可以为0 50% (体积 /体积)，优选为0 20% (体积/体积)；洗脱树脂使用的低级醇水溶液的低级醇浓度可 以为20 90 % (体积/体积)，优选为20 50 % (体积/体积)。在上述制备方法的步骤(4)中，后半部分洗脱液萃取采用的有机溶剂优选为醋酸 乙酯和/或正丁醇。本发明还提供了上述制备方法制备的祖师麻总香豆素提取物。其中，按提取物总 重量计，所述总香豆素的含量不低于50% (重量)，例如50% 90% (重量)。具体来说， 所述总香豆素提取物包含瑞香素、祖师麻乙素、瑞香素-8-0-葡萄糖苷和7-0H-香豆素中的 一种或多种。优选地，按提取物总重量计，所述总香豆素提取物包含瑞香素0% 50% (重 量)，祖师麻乙素0% 50% (重量)，瑞香素-8-0-葡萄糖苷0% 50% (重量)，7-0H-香 豆素0% 30% (重量)。本发明还提供了上述祖师麻总香豆素提取物的含量测定方法，其中包括以下步 骤(1)瑞香素、祖师麻乙素、瑞香素-8-0-葡萄糖苷及7-0H-香豆素的HPLC含量测 定精密称取祖师麻总香豆素提取物50mg，置于50mL量瓶中，加50 % (体积/体积) 甲醇水溶液适量使其溶解并稀释至刻度，摇勻，精密吸取2mL置于10mL量瓶中，加50 % (体 积/体积)甲醇水溶液稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；分别以瑞香素、祖师麻乙素、 瑞香素-8-0-葡萄糖苷及7-0H-香豆素的甲醇溶液为对照品溶液；色谱柱用十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂，体积比为25 75的甲醇-0.5%醋酸水溶液为流动相；检测波长为 327nm ；(2)祖师麻总香豆素的含量测定分别将上述供试品溶液及祖师麻乙素对照品溶液稀释至适当体积，按照紫外_可 见分光光度法，在310nm波长处测定吸收度，计算。在本发明的祖师麻总香豆素提取物的制备方法中，除采用一些常规方法外，还采 用了一些较为重要的先进工艺步骤来降低杂质黄酮类化合物的含量，以提高总香豆素的含 量。其中包括(1)采用固液萃取法或液液萃取法可以极大地富集有效成分(即香豆素类成 分)，同时提高提取率和有效成分的含量，同时更加具有针对性地去除了二萜类毒性成分。 其中，固液萃取法中使用的固体稀释剂具有多孔性，对杂质的吸附力较强，同时还能吸附色 素；增加了提取物与有机溶剂的接触面，可以同时采用加热或渗漉的方法进行提取，从而有 效避免了萃取过程中的乳化和沉淀阻塞出液口等问题，进一步提高了提取效率。(2)通过树脂吸附工艺不仅进一步去除了二萜类等毒性成分，同时极大地提高了总香豆素类成分的含 量；特别是对树脂处理后的不同洗脱液采用不用的处理方法，在进一步提高了总香豆素的 含量同时，有效地降低了黄酮类化合物杂质的含量。(3)相应地，本发明的祖师麻总香豆素 提取物的含量测定方法将HPLC法与分光光度法结合，克服了原来仅使用分光光度法特异 性差、准确性低、杂质干扰严重的缺陷。(4)与此同时，从药理作用的整体作用强度来看，本 发明制备的提取物的药效明显更强，给药剂量明显降低。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明， 而不用于限定本发明的范围。实施例1取祖师麻药材1. 0kg,以20% (体积/体积)乙醇水溶液回流提取3次，滤过，合 并滤液回收乙醇，拌入淀粉中，用水饱和正丁醇回流提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于 D201树脂，以水洗去杂质，再用20% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，前半部 分回收乙醇，固体备用；后半部分回收乙醇，固体物质加水悬浮，用醋酸乙酯萃取，有机层回 收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，干燥，得到祖师麻总香豆素有 效部位。按照高效液相色谱法进行测定精密称取祖师麻总香豆素有效部位提取物50mg，置于50mL量瓶中，加50% (体积 /体积)甲醇水溶液适量使之溶解并稀释至刻度，摇勻，精密吸取2mL置于10mL量瓶中，加 50% (体积/体积)甲醇水溶液稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；分别以祖师麻甲素、祖 师麻乙素、瑞香素-8-0-葡萄糖苷及7-0H-香豆素的甲醇溶液为对照品溶液；色谱柱用十八 烷基硅烷键合硅胶为填充剂，25 75 (体积/体积)的甲醇-0. 5%醋酸水溶液为流动相； 检测波长为327nm。按提取物总重量计，祖师麻甲素3. 8% (重量)，祖师麻乙素40. 6% (重量)，瑞香 素-8-0-葡萄糖苷18. 4% (重量)及7-0H-香豆素2. 4% (重量)。按照紫外分光光度法进行测定分别将上述供试品溶液及祖师麻乙素对照品溶液稀释至适当体积，按照紫外_可 见分光光度法，在310nm波长处测定吸收度，计算。按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为73. 6% (重量)。实施例2取祖师麻药材1. Okg,以30% (体积/体积)乙醇水溶液渗漉提取，渗漉液减压 回收乙醇，拌入微粉硅胶中，用乙酸乙酯渗漉提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于D201树 脂，以10% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用30% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱， 收集洗脱液，前半部分60°C减压回收乙醇，固体物质备用；后半部分60°C减压回收乙醇，固 体物质加水悬浮，用正丁醇萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到 的固体物质，真空干燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻 素5. 2% (重量)，祖师麻乙素28. 6% (重量)，瑞香素-8-0-葡萄糖苷20. 4% (重量)及7-0H-香豆素3. 0% (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为65. 5% (重量)。实施例3取祖师麻药材1.0kg，以40% (体积/体积)乙醇水溶液回流提取，提取液减压回 收乙醇，拌入硅藻土中，用正丁醇渗漉提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于D101树脂，以 20% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用40% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收 集洗脱液，前半部分回收乙醇，固体物质备用；后半部分回收乙醇，固体物质加水悬浮，用醋 酸乙酯萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，真空干 燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素10. 5% (重量)，祖师麻乙素14. 6% (重量)，瑞 香素-8-0-葡萄糖苷48. 6% (重量)及7-0H-香豆素4. 4% (重量)。 按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为87. 4% (重量)。实施例4取祖师麻药材1.0kg，以50% (体积/体积)乙醇水溶液渗漉提取，渗漉液减压回 收乙醇，拌入活性炭中，用醋酸乙酯回流提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于FL-2树脂， 以30% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用50% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱， 收集洗脱液，前半部分60°C减压回收乙醇，固体物质备用；后半部分60°C减压回收乙醇，固 体物质加水悬浮，用正丁醇萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到 的固体物质，真空干燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素14.2% (重量)，祖师麻乙素32. 3% (重量)，瑞 香素-8-0-葡萄糖苷20. 1 % (重量)及7-0H-香豆素8. 5 % (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为90. 6% (重量)。实施例5取祖师麻药材1.0kg，以60% (体积/体积)乙醇水溶液回流提取，提取液减压回 收乙醇，拌入高岭土中，用正丁醇回流提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于AB-8树脂，以 40% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用60% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收 集洗脱液，前半部分回收乙醇，固体物质备用；后半部分回收乙醇，固体物质加水悬浮，用乙 酸乙酯萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，真空干 燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素41. 7% (重量)，祖师麻乙素5. 6% (重量)，瑞香 素-8-0-葡萄糖苷5. 1 % (重量)及7-0H-香豆素20. 5 % (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为85. 4% (重量)。
实施例6取祖师麻药材1.0kg，以70% (体积/体积)乙醇水溶液渗漉提取，渗漉液减压回 收乙醇，拌入白陶土中，用醋酸乙酯回流提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于AB-8和D101 复合树脂，以50% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用70% (体积/体积)乙醇水 溶液洗脱，收集洗脱液，前半部分60°C减压回收乙醇，固体物质备用；后半部分60°C减压回 收乙醇，固体物质加水悬浮，用正丁醇萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液 处理后得到的固体物质，真空干燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素47. 8% (重量)，祖师麻乙素3. 5% (重量)，瑞香 素-8-0-葡萄糖苷3. 8% (重量)及7-0H-香豆素28. 5% (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为93. 5% (重量)。实施例7取祖师麻药材1.0kg，以80% (体积/体积)乙醇水溶液回流提取，提取液减压回 收乙醇，拌入硅藻土 白陶土(重量比=1 1)中，用正丁醇回流提取，回收溶剂，固体物 质加水吸附于D101和D201复合树脂，以20% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用 90% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，前半部分回收乙醇，固体物质备用；后半 部分回收乙醇，固体物质加水悬浮，用乙酸乙酯萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部 分洗脱液处理后得到的固体物质，真空干燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素15.2% (重量)，祖师麻乙素10. (重量)，瑞 香素-8-0-葡萄糖苷8. 6% (重量)及7-0H-香豆素10. 6% (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为67. 6% (重量)。实施例8取祖师麻药材1.0kg，以40% (体积/体积)乙醇水溶液渗漉提取，提取液减压回 收乙醇，拌入高岭土中，用醋酸乙酯渗漉提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于AB-8和D201 复合树脂，以20% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用40% (体积/体积)乙醇水 溶液洗脱，收集洗脱液，前半部分回收乙醇，固体物质备用；后半部分回收乙醇，固体物质加 水悬浮，用正丁醇萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物 质，真空干燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素6. 8% (重量)，祖师麻乙素25. 2% (重量)，瑞香 素-8-0-葡萄糖苷38. 5% (重量)及7-0H-香豆素5. 6% (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为85. 2% (重量)。实施例9取祖师麻药材1.0kg，以50% (体积/体积)乙醇水溶液回流提取，提取液减压回 收乙醇，拌入硅藻土中，用水饱和正丁醇回流提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于FL-1树脂，以水洗去杂质，再用30% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，前半部分60°C 减压回收乙醇，固体物质备用；后半部分60°C减压回收乙醇，固体物质加水悬浮，用正丁醇 萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，真空干燥，得 到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素3. 6% (重量)，祖师麻乙素48. 2% (重量)，瑞香 素-8-0-葡萄糖苷20. 4% (重量)及7-0H-香豆素2. 8% (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为82. 6% (重量)。实施例10取祖师麻药材1.0kg，以60% (体积/体积)乙醇水溶液渗漉提取，提取液减压回 收乙醇，拌入高岭土中，用醋酸乙酯渗漉提取，回收溶剂，固体物质加水吸附于AB-8树脂， 以10% (体积/体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用50% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱， 收集洗脱液，前半部分回收乙醇，固体物质备用；后半部分回收乙醇，固体物质加水悬浮，用 正丁醇萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，真空干 燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素14. 3% (重量)，祖师麻乙素20. 6% (重量)，瑞 香素-8-0-葡萄糖苷25. 2% (重量)及7-0H-香豆素5. 7% (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为90. 2% (重量)。实施例11取祖师麻药材1. 0kg,以20% (体积/体积)乙醇水溶液回流提取3次，滤过，合 并滤液回收乙醇，用水饱和正丁醇萃取，回收溶剂，固体物质加水吸附于AB-8与D201复合 树脂，以水洗去杂质，再用30% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，前半部分回 收乙醇，固体备用；后半部分回收乙醇，固体物质加水悬浮，用醋酸乙酯萃取，有机层回收溶 剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，干燥，得到祖师麻总香豆素有效部 位。按照高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素10.8% (重量)，祖师麻乙素30. 5% (重量)，瑞 香素-8-0-葡萄糖苷25. 2% (重量)及7-0H-香豆素1. 5% (重量)。按照紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为75. 5% (重量)。实施例12取祖师麻药材1.0kg，以30% (体积/体积)乙醇水溶液渗漉提取，渗漉液减压回 收乙醇，用乙酸乙酯萃取，回收溶剂，固体物质加水吸附于HPD-300树脂，以10% (体积/体 积)乙醇水溶液洗去杂质，再用40% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，前半部 分60°C减压回收乙醇，固体物质备用；后半部分60°C减压回收乙醇，固体物质加水悬浮，用 正丁醇萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，真空干燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素8. 5% (重量)，祖师麻乙素28. 2% (重量)，瑞香 素-8-0-葡萄糖苷22. 1 % (重量)及7-0H-香豆素4. 3 % (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为76. 5% (重量)。实施例13取祖师麻药材1.0kg，以70% (体积/体积)乙醇水溶液渗漉提取，渗漉液减压回 收乙醇，用醋酸乙酯萃取，回收溶剂，固体物质加水吸附于HPD-400树脂，以20% (体积/体 积)乙醇水溶液洗去杂质，再用50% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，前半部 分60°C减压回收乙醇，固体物质备用；后半部分60°C减压回收乙醇，固体物质加水悬浮，用 正丁醇萃取，有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，真空干 燥，得到祖师麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素25. 2% (重量)，祖师麻乙素10. (重量)，瑞 香素-8-0-葡萄糖苷8. 6% (重量)及7-0H-香豆素10. 6% (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为68. 6% (重量)。实施例14取祖师麻药材1.0kg，以80% (体积/体积)乙醇水溶液回流提取，提取液减压回 收乙醇，用水饱和正丁醇萃取，回收溶剂，固体物质加水吸附于HPD-800树脂，以30% (体积 /体积)乙醇水溶液洗去杂质，再用60% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，前 半部分回收乙醇，固体物质备用；后半部分回收乙醇，固体物质加水悬浮，用乙酸乙酯萃取， 有机层回收溶剂得到固体，合并两部分洗脱液处理后得到的固体物质，真空干燥，得到祖师 麻总香豆素有效部位。按照上述高效液相色谱法进行测定按提取物总重量计，祖师麻甲素30. 8% (重量)，祖师麻乙素10.2% (重量)，瑞 香素-8-0-葡萄糖苷10. 5% (重量)及7-0H-香豆素15. 3% (重量)。按照上述紫外分光光度法进行测定按提取物总重量计，祖师麻总香豆素的含量为78. 2% (重量)。表1祖师麻总香豆素提取物中的成分 由上表可见，紫外分光光度法测得的总香豆素含量与HPLC法测得的4个已知成分 含量之和只相差7. 4 24. 4% (重量/重量)，这部分包括了未知的香豆素类成分、黄酮类 成分和其它在这一波长下有吸收的杂质。这一结果说明，本发明制备的提取物中黄酮类及 其他杂质的含量大大降低。药效学试验本发明对所得到的祖师麻总香豆素提取物进行了如下的药效学试验(1)对小鼠水浴甩尾的影响 与对照组比较**p < 0. 01 **p < 0. 01(2)对小鼠光热甩尾的影响 与对照组比较**p < 0. 01 ***p < 0. 001(3)对小鼠醋酸扭体的影响 与对照组比较 **p < 0. 01 ***p < 0. 001
(4)对小鼠耳肿的影响 与对照组比较*p < 0. 05 ***p < 0. 001(5)祖师麻总香豆素对大鼠棉球肉芽肿的影响(叉±5D ) 与对照组比较*P < 0. 05 **P < 0. 01 ***p < 0. 001(6)祖师麻总香豆素对大鼠角叉菜胶足肿的影响 以上实验表明祖师麻总香豆素有效部位具有更加显著的抗炎、镇痛作用。
权利要求
一种祖师麻总香豆素提取物的制备方法，其中包括以下步骤(1)以祖师麻药材为原料，水或C1～C5低级醇水溶液为溶剂进行提取，制得浸膏；(2)将浸膏与固体稀释剂混合，加入有机溶剂进行提取，回收溶剂得到固体提取物，或者将浸膏加水悬浮，加入有机溶剂萃取，回收溶剂得到固体提取物；(3)将固体提取物加水悬浮，采用大孔吸附树脂层析，首先以水或C1～C5低级醇水溶液为流动相淋洗除杂质，然后以C1～C5低级醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(4)前半部分洗脱液回收溶剂得到固体，即一部分祖师麻总香豆素提取物；后半部分洗脱液回收溶剂得到的固体加水混悬，再用有机溶剂萃取，有机层回收溶剂得到固体，即另一部分祖师麻总香豆素提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中提取的方法为回流或 渗漉。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中(； (5低级醇 水溶液的低级醇浓度为0 95% (体积/体积)，优选为30 70% (体积/体积)。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中有机溶 剂为醋酸乙酯、正丁醇和/或水饱和正丁醇。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)为将浸膏 与固体稀释剂混合，加入有机溶剂进行提取，回收溶剂得到固体提取物。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中固体稀 释剂选自淀粉、微粉硅胶、硅藻土、高岭土、活性炭和白陶土中的一种或多种。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中大孔吸 附树脂选自苯乙烯、苯乙烯-丙烯酸酯、二苯乙烯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯型树脂中的一 种或多种，例如 D101、D201、HPD300、HPD400、HPD800、FL_1、FL-2 和 / 或 AB-8 树脂，优选为 苯乙烯型或苯乙烯_丙烯酸酯型大孔吸附树脂。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中淋洗除 杂质使用的低级醇水溶液的低级醇浓度为0 50% (体积/体积)，优选为0 20% (体 积/体积)。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中洗脱树 脂使用的低级醇水溶液的低级醇浓度为20 90% (体积/体积)，优选为20 50% (体 积/体积)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)后半部 分洗脱液萃取采用的有机溶剂为醋酸乙酯和/或正丁醇。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的制备方法制备的祖师麻总香豆素提取物。
12.根据权利要求11所述的祖师麻总香豆素提取物，其特征在于，按提取物总重量计， 所述总香豆素的含量不低于50% (重量)，例如50% 90% (重量)。
13.根据权利要求11或12所述的祖师麻总香豆素提取物，其特征在于，所述总香豆素 提取物包含瑞香素、祖师麻乙素、瑞香素-8-0-葡萄糖苷和7-0H-香豆素中的一种或多种。
14.根据权利要求13所述的祖师麻总香豆素提取物，其特征在于，按提取物总重量计， 所述总香豆素提取物包含瑞香素0% 50% (重量)，祖师麻乙素0% 50% (重量)，瑞 香素-8-0-葡萄糖苷0% 50% (重量)，7-0H-香豆素0% 30% (重量)。
15.根据权利要求11至14中任一项所述的祖师麻总香豆素提取物的含量测定方法，其 中包括以下步骤(1)瑞香素、祖师麻乙素、瑞香素-8-0-葡萄糖苷及7-0H-香豆素的HPLC含量测定 精密称取祖师麻总香豆素提取物50mg，置于50mL量瓶中，加50% (体积/体积)甲醇水溶液适量使其溶解并稀释至刻度，摇勻，精密吸取2mL置于10mL量瓶中，加50% (体积 /体积)甲醇水溶液稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；分别以瑞香素、祖师麻乙素、瑞香 素-8-0-葡萄糖苷及7-0H-香豆素的甲醇溶液为对照品溶液；色谱柱用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂，体积比为25 75的甲醇-0.5%醋酸水溶液为流动相；检测波长为327nm;(2)祖师麻总香豆素的含量测定分别将上述供试品溶液及祖师麻乙素对照品溶液稀释至适当体积，按照紫外_可见分 光光度法，在310nm波长处测定吸收度，计算。
全文摘要
本发明提供一种祖师麻总香豆素提取物的制备方法和含量测定方法，该制备方法包括以祖师麻药材为原料，水和/或C1～C5低级醇水溶液为溶剂进行提取，制得浸膏；将浸膏与固体稀释剂混合，加入有机溶剂进行提取，回收溶剂得到固体提取物，或者将浸膏加水悬浮，加入有机溶剂萃取，回收溶剂得到固体提取物；将固体提取物加水悬浮，采用大孔吸附树脂层析，首先以水或C1～C5低级醇水溶液为流动相淋洗除杂质，然后以含低级醇水溶液洗脱，收集洗脱液；前半部分洗脱液回收溶液得到固体，即一部分祖师麻总香豆素提取物；后半部分洗脱液回收溶剂得到的固体再加水混悬，用有机溶剂萃取，有机层回收溶剂得到固体，即另一部分祖师麻总香豆素提取物。
文档编号A61K135/00GK101856435SQ20091006838
公开日2010年10月13日 申请日期2009年4月7日 优先权日2009年4月7日
发明者侯文彬, 刘静, 张新鑫, 王圣明, 申秀萍, 胡金芳, 韩峰, 马莉, 高静 申请人:天津药物研究院